UNIVERSIDAD AUTONOMA JUAN MISAEL SARACHO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS Y FORESTALES

LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA Y CULTIVO IN VITRO

PRACTICA 2: Introducción al Trabajo de Laboratorio

TIEMPO: 1,5 horas

OBJETIVOS:
Comprender protocolos de obtención muestras, preparación cámaras húmedas y las
reglas de asepsia para el trabajo en laboratorio. Familiarizarse con los distintos métodos
de esterilización.
INTRODUCCIÓN
Los resultados del trabajo en condiciones de laboratorio dependen fundamentalmente de
la calidad de las muestras y las medidas de asepsia. Los microorganismos están
dispersos en el ambiente; se encuentran suspendidos en el aire, sobre muebles y pisos y
conviven con el ser humano (piel, pelo, tracto respiratorio, digestivo). Estos
microorganismos pueden contaminar los cultivos puros y medios de cultivo.
Toma de muestras
Para lograr un diagnóstico adecuado, siempre es necesario contar con una muestra
correctamente tomada, lo cual significa que debe estar constituida por la parte de la
planta efectivamente enferma y contener estados de desarrollo apropiados para ejecutar
el diagnostico.
Esterilización. Para la esterilización de materiales y medios de cultivo se tienen los
siguientes métodos:
 Calor húmedo: Autoclave:.
 Filtración: se usa con compuestos termolábiles. Las membranas de 0’22 micras
son amicróbiocas, las de 0’45 permiten el paso de bacterias pero no de hongos ni
levaduras.
 Calor seco: en cabinas y hornos a altas temperaturas.
 Agentes químicos: el material plástico de polietireno viene esterilizado por
agentes químicos. Como el oxido de etileno liquido que no deja residuos.
 Radiaciones UVA y radiaciones gamma: las primeras esterilizan superficies las
segundas se usan para medicamentos o productos que se vayan a envasar.
Incubación en Cámara húmeda

La incubación es un periodo que se le da a la muestra sometida a un ambiente húmedo y

temperatura ambiente, para que evolucione la enfermedad y manifieste síntomas, signos
o ambos.
MATERIALES
• Plato petri
• Papel filtro
• Materiales de vidrio

METODOLOGÍA

Toma de muestras

 Sacar la muestra eligiendo la planta u órgano vegetal donde se observa el problema.-

o Si son cultivos anuales o perennes pequeños, sacar la muestra entera.-
o Si son cultivos grandes y el síntoma está localizado en: flor, rama, fruto, raíz,
hoja, tomar la muestra con 1 o 2 órganos afectados completos.-
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o Lo ideal es que la muestra sea extraída cuando la enfermedad se encuentra en

su fase inicial.-
 Las muestras deben envolverse por separado en papel ( puede ser de dliario), se
colocan en bolsa de polietileno limpias y se mantienen al resguardo del calor y la
sequedad, a aconsejando el uso de una conservadora.-
 Cada muestra debe ir acompañada con una etiqueta con la mayor cantidad de datos.-
 Es importante enviar la Muestra al Laboratorio a la mayor brevedad posible.-

Incubación en Cámara húmeda

El propósito de la cámara húmeda es el de crear condiciones favorables de humedad

para el desarrollo rápido de hongos o bacterias que puedan estar involucradas en la
producción de síntomas de enfermedad.

Preparación de cámaras húmedas con cajas petri, bolsas de polietileno y frasco.

En una caja petri colocar papel filtro, humedecer con agua esteril, introducir parte de la
muestra, previamente desinfectada con hipoclorito de sodio, la mustra no debe estar en
contacto con el papel húmedo. Realizar el mismo procedimiento con la bolsa de
polietileno o en un frasco.

Métodos de esterilización.

 Calor húmedo: Autoclave: 121ºC, 15 Atm, durante 20 minutos. El medio queda libre
de microorganismos y esporas. No se puede usar con medios con elevadas
concentraciones de azucares ya que estos caramelizan.
 Calor seco: en estufa u horno a altas temperaturas. Son ciclos de 170ºC durante 90
minutos. Se usa para material de vidrio.
 Radiaciones UVA: En cabina de flujo laminar, se esterilizan superficies de material e
instrumentos antes de iniciar las actividas de cultivo de hongos o bacterias in vitro.

BIBLIOGRAFÍA

RESULTADOS
Serán las cámaras húmedas preparadas correctamente.
DISCUSION
Complemente la información de la introducción, discuta las dificultades, ventajas y
desventajas de cada medio. Indique como cultivar royas y cenicillas.
BIBLIOGRAFIA
Agrios, G.N. 2007. Fitopatología. LIMUSA, México. 285-288 p.