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INTRODUCCIÓN.

La electroforesis en gel de agarosa es la mas utilizada en la practica para todo aquello


relacionado con la separación de ácidos nucleicos. Mediante el uso de la electroforesis se
puede separar el ADN en alguna muestra que se desee conocer su material genético a partir
de uno ya conocido, esto además nos sirve no solo para determinar la composición, también
para comprar similitudes o algún residuo genético no deseado que pudiese tener.

También podemos determinar el peso molecular de un segmento de AND problema, es una


técnica primordial para el manejo e investigación de ADN. Es posible la visualización a
simple vista de eta técnica gracias a los marcadores que lleva la muestra y que gracias a luz
de gamma ultravioleta es posible determinar interrogantes respectivas del material trabajado.

Es este practica se vera la preparación del medio en el que se desplaza el material genético
que en futuras practicas se analizara, este medio es el gel de agarosa.
MARCO TEÓRICO.

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas


en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños
moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use (Morales I., s.f).

La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un
electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos
al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se
deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se
mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de
Coomassie, o reactivos en particular (Morales I., s.f).

Electroforesis en gel de agarosa.

La electroforesis en gel es una técnica muy utilizada para separar moléculas o fragmentos de
moléculas de ácidos nucleicos. Los materiales más comunes para separar moléculas de ácidos
nucleicos son polímeros como la poliacrilamida o la agarosa. Estos geles se colocan en la
cubeta de electroforesis, sumergidos en un tampón de pH alrededor de 8. De esta forma, las
moléculas de DNA o RNA sometidas a electroforesis se desplazarán al polo positivo ya que
a pH superiores a 5 poseen carga negativa. Los geles se comportan como un tamiz molecular
y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de
DNA de diferente tamaño, van a emigrar de forma distinta en un gel de electroforesis. La
distancia recorrida por cada fragmento de DNA va a ser inversamente proporcional al
logaritmo de su peso molecular. Es importante la utilización de marcadores de tamaño
conocido porque nos permitirán calcular los pesos moleculares de las muestras de DNA
problema (Padilla C., s.f).

La electroforesis de ADN en geles de agarosa o de poliacrilamida. Ambos tienen


características diferentes en cuanto a sus propiedades y modo de preparación, por lo que se
utilizará uno u otro en función de la aplicación y objetivos que persigamos. La electroforesis
en geles de agarosa es el método estándar para separar y purificar fragmentos de ADN cuando
no requerimos un alto poder de resolución. Por su parte, la electroforesis en geles de
poliacrilamida, aunque tiene una mayor limitación en cuanto al tamaño de los fragmentos
que podemos separar (5-600 pb), posee un poder de resolución mucho mayor, permitiendo
la separación de moléculas que difieren en un sólo par de bases. Los geles de poliacrilamida
se corren de forma vertical y tienen la desventaja de ser más complicados en su elaboración
y manipulación (Fierro F., s.f).

Los geles de agarosa tienen un poder de resolución mucho menor que los de poliacrilamida,
porque no permiten separar moléculas de ADN que difieren en tamaño menos de unas 50 pb.
Sin embargo, el rango de tamaños que pueden separarse es mucho mayor en un gel de agarosa
(moléculas desde 50 pb hasta unas 40 kb) dependiendo de la concentración del mismo (0.3-
2% p/v); cuanto más baja es la concentración de agarosa mayor es el tamaño de las moléculas
que pueden separarse, y viceversa. Este rango de tamaños hace a los geles de agarosa ideales
para analizar el producto de digestiones con enzimas de restricción, lo que puede combinarse
con otras técnicas como el Southern blot, así como para analizar los productos de una
reacción de PCR. Los geles de agarosa convencionales se corren en una cámara de
electroforesis horizontal, con un campo eléctrico uniforme y constante (Fierro F., s.f).

La electroforesis en gel de agarosa tiene un límite superior de unas 40-50 kb en el tamaño de


las moléculas de ADN que puede separar. Por lo tanto, no es posible separar el producto de
digestiones con enzimas de restricción de corte infrecuente, como NotI o SfiI, y menos aún
separar cromosomas enteros (los cromosomas de eucariotas inferiores tienen tamaños de
entre 0.2 y 12 Mb). Reducir la concentración de agarosa hasta un 0.1 o 0.2% puede
incrementar el límite de separación hasta los 750 pb, sin embargo estos geles son
extremadamente frágiles y muy difíciles de manipular (Fierro F., s.f).
Fierro F. (s.f). Electroforesis de ADN. Recuperado el 29 de octubre del 2018 de,
https://micrositios.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/electroforesis.pdf

Padilla C., Diez J., Martínez E. (s.f). Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa.
Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico. Recuperado el 29 de
octubre de 2018 de,

https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/17%20ELECTROFORESIS%20ACS%20NUCLEICOS%20GELES%20AGARO
SA.pdf

Morales I. (s.f). ELECTROFORESIS. Recuperado el 29 de octubre de 2018 de,

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf