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EL CICLO DE LOS ÁCIDOS TRICARBOXÍLICOS

CÍCLO DEL ÁCIDO CÍTRICO


CICLO DE KREBS

 al igual que las rotondas el ciclo de  punto central del sistema metabólico
los ácidos tricarboxílicos facilita
el flujo de tráfico
Acetil-CoA

GTP 2CO2

Imagen de dominio público. Roundabout Großwallstadt, 8 e-


N 49.87308 E 9.151507, Bavaria, Germany, aerial photograph

La mayoría de las moléculas combustibles entran en el ciclo como


acetil-CoA
 Es el punto de convergencia de importantes vías catabólicas :
Oxidación de ácidos grasos
Oxidación de carbohidratos
Oxidación de aminoácidos

 Fuente de moléculas precursores de diversas biomoléculas


importantes

 Vía que puede ser catabólica y anabólica según los requerimientos


del organismo : vía anfibólica

 Por ser el centro metabólico de la célula, la entrada y velocidad del


ciclo están controladas en varios puntos

El ciclo del ácido cítrico aporta electrones de alta energía, ATP y CO2

La función del ciclo es la producción de electrones de alta energía


a partir de combustibles carbonados
El ciclo del ácido cítrico oxida unidades de dos carbonos

Oxalacetato

NADH NADH
Dos átomos de carbono en
forma de acetil-CoA entran en
el ciclo y dos átomos de
CO2
carbono dejan el ciclo en la
FADH2 forma de CO2

NADH
GTP
CO2
En las cuatro reacciones de oxido-reducción se transfieren tres pares de electrones al NAD y un par al
FAD (oxidación en cadena respiratoria rendirá 9 ATPs). En el ciclo formación de una molécula de GTP
Imagen de dominio público. Narayanese, WikiUserPedia, YassineMrabet, TotoBaggins - en:Image:Citric_acid_cycle_with_aconitate_2.svg
8 pasos El oxalacetato se regenera al
catalizados por final del ciclo.
un total de 8
enzimas
Basta una molécula de oxalacetato
- Citrato sintasa para llevar a cabo la oxidación de un
- Aconitasa número ilimitado de moléculas de
- Iso-citrato
deshirogenasa
acetilo (siempre y cuando no se
- α cetoglutarato consuma por reacciones laterales) .
deshidrogenasa
- Succinil-Coenzima A
sintetasa EL ciclo opera solamente en
- Succinato condiciones aeróbicas
deshidrogenasa porque requiere el
- Fumarasa suministro de NAD+ y FAD
- Malato deshidrogenasa
¿Dónde ocurre?

CICLO DE KREBS EN LA MITOCONDRIA

Dominio Público. Animal mitochondrion diagram en.svg by Mariana Ruiz (LadyofHats) Author Aibdescalzo
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Animal_mitochondrion_diagram_es.svg
Dominio Público. L. Howard
http://remf.dartmouth.edu/imagesindex.html http://remf.dartmouth.edu/images/mammalia
nLungTEM/source/8.html

1948 E.P. Kennedy y A. L Lehninger


Descubren que las mitocondrial aisladas, obtenidas de homogeneizados de hígado de rata en
una medio tamponado de fosfatos que contenía nucléotidos de adenina (ADP, ATP), Mg++,
catalizaban la oxidación del piruvato y todos los intermediarios del ciclo de los ácidos
tricarboxilicos a expensas del O2 molecular.
La descarboxilación oxidativa del piruvato para formar acetil-CoA
es el nexo de unión ente la glicólisis y el ciclo de Krebs
Piruvato
CO2 En condiciones aerobias,
2e- el piruvato es transportado
al interior de la mitocondria
Acetil-CoA mediante un transportador
específico

GTP 2CO2

8 e-

Complejo Piruvato Deshidrogenasa

Piruvato Acetil-CoA
Complejo multienzimático Piruvato Deshidrogenasa (CPD)
responsable de la descarboxilación oxidativa del piruvato:

Descarboxilación Oxidación Transferencia al CoA

Piruvato Acetil-CoA
Estas etapas de reacción deben estar acopladas para conservar la
energía libre derivada de la descarboxilación y permitir la formación
de NADH y acetil-CoA

Es una etapa clave e irreversible en el metabolismo de la glucosa,


que conecta la glicólisis con el ciclo de Krebs.
El CPD está formado por 3 enzimas diferentes y 5 cofactores.

Enzima(de la bacteria E. coli) No /complejo Cofactores


E1 : piruvato deshidrogenasa 24 TPP
E2 : dihidrolipoil transacetilasa 24 Lipoato, CoA
E3 : dihidrolipoil deshidrogenasa 12 FAD, NAD

+ 2 enzimas adicionales implicadas en su regulación (en eucariotas principalmente)

Mw= 4-10 millones de Daltons

Nota: ver Figuras 17.5, 17.7, 17.8 del Libro de Bioquímica,


de Lubert Stryer, Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko
(Séptima Edición se encuentra en la Biblioteca de Facultad)
Complejo multienzimático Piruvato Deshidrogenasa
utiliza 5 cofactores orgánicos diferentes (coenzimas)
Tiamina pirofosfato (TPP) Lipoamida (grupo prostético)

FAD
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Lipoic-acid-2D-skeletal.png
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Thiamine_diphosphate.png

SH

NAD http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb
/e/ef/Flavin_adenine_dinucleotide.png/1143px- grupo b -mercaptoetilamino
Flavin_adenine_dinucleotide.png

vitamina ácido
pantoténico

CoA

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:NAD_oxidation_reduction.svg http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Coenzym_A.svg adenosina-3’- fosfato


Los procesos catalíticos de complejos multi-enzimáticos son muy eficientes
 en el complejo la distancia a la que los sustratos deben difundir entre los sitios activos está
reducida al mínimo, de esta forma se aumenta la velocidad
 se reducen las reacciones colaterales pues los productos intermedios permanecen unidos

Nota: por mayor información


ver Figura 17.9 del Libro de Bioquímica,
de Lubert Stryer, Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko
(Séptima Edición, se encuentra en la Biblioteca de Facultad) Dominio Público http://commons.wikimedia.org/wiki/File:PDH_schema.png
La formación de acetil-CoA tiene lugar en cinco etapas

Cofactor Ubicación Función

Tiamina pirofosfato (TPP) Unido a E1 Descarboxila el


piruvato y produce un
carbanión hidroxietil-
TPP.
Ácido lipoico Unido de manera Acepta el carbanión
covalente a una Lisina hidroxietil de TPP
específica de E2 como grupo acetilo.
Coenzima A (CoA) Sustrato para E2 Acepta el grupo
acetilo de acetil-
dihidrolipoamida.
Flavina adenina dinucleótido (FAD) Unido a E3 Reducido por la
dihidrolipoamida.
Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) Sustrato para E3 Reducido por FADH2.
Acetil-CoA: compuesto de alta energía

Acetil-CoA=Acetil Coenzima A,=Acetil-SCoA


Producto común de la Capaz de conservar una
descomposición de porción de la energía libre
carbohidratos, de oxidación de un
ácidos grasos, combustible metabólico
y aminoácidos

Grupo acetilo
unido por enlace tioéster

Dominio público_http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Acetyl-CoA-2D.svg
El AGo’para la hidrólisis de su enlace tioéster
es de -31,5 KJ/mol
(1 kJ/mol más exergónica que la hidrólisis de ATP)
1. La citrato sintasa produce citrato a partir de
acetil-CoA y oxalacetato

citrato
sintasa
Acetil-CoA Oxalacetato Citrato

• Condensación (C4+C2) para generar un ácido tricarboxílico (C6)


(por eso el nombre del ciclo).

• La hidrólisis del enlace tioéster del intermediario hace que la


reacción sea exergónica
Mecanismo: intermediario citril-CoA, molécula de alta energía

Dominio público.
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Citrate_Synthase_Mechanism_Drew_Beck_revised_OH.png

La hidrólisis del tioéster citril-CoA


proporciona la energía
necesaria para la síntesis de citrato

Nota: por mayor información


ver Figura 17.10 y 17.11 del Libro de Bioquímica,
de Lubert Stryer, Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko
(Séptima Edición, se encuentra en la Biblioteca de Facultad)
Mecanismo de la citrato sintasa evita que se produzcan reacciones no deseadas

Dominio Público. http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Citrate_synthase.png

Proteína unida a Oxalacetato

Cinética secuencial: primero se une el oxalacetato, luego el acetil-CoA.

El cambio inducido por la unión del oxalacetato genera el sitio de unión de la acetil-CoA.
Constituye un ejemplo de modelo inducido de unión de sustrato (induced fit model).
El ajuste inducido evita las reacciones colaterales no deseadas
La estrategia de los dos próximos pasos del ciclo de Krebs implican
reestructurar el citrato a un isómero que se oxide con mayor facilidad
para luego oxidarlo.

La aconitasa isomeriza
el citrato
un alcohol terciario de difícil oxidación a
Isocitrato
un alcohol secundario de fácil oxidación.
Citrato Isocitrato

2. El citrato se isomeriza a isocitrato por la aconitasa

Aconitasa Aconitasa
deshidratación hidratación
hidratación

Citrato cis-Aconitato Isocitrato


Citrate and the Fe-S cluster in the active site of
aconitase: dashed yellow lines show
interactions between the substrate and nearby
residues

La aconitasa es una ferro-sulfo proteína


contiene un centro hierro-azufre que actúa
como centro de fijación de sustratos y centro
catalítico, facilitando las reacciones de
deshidratación y rehidratación del sustrato
3. El isocitrato se oxida y descarboxila hasta a-cetoglutarato por la
isocitrato deshidrogenasa

Isocitrato
deshidrogenasa

Isocitrato α-cetoglutarato
Pasos:

-La enzima oxida el isocitrato al β-cetoácido intermedio


oxalsuccinato con la reducción acoplada de NAD+ a NADH.

- Luego el oxalsuccinato se descarboxila obteniéndose


α-cetoglutarato .

Es la primer etapa del Ciclo de Krebs en la que la oxidación se


acopla a la producción de NADH y en el que se genera CO2
4. El alfa-cetoglutarato se oxida y descarboxila a succinil-CoA por
acción del complejo multienzimático α-cetoglutarato deshidrogenasa

Complejo
α-cetoglutarato
deshidrogenasa
α-cetoglutarato Succinil-CoA

El complejo de la a-cetoglutarato deshidrogenasa es muy parecido al complejo


piruvato deshidrogenasa, tanto en estructura como en función.
5. Conversión del succinil-CoA en succinato por la
succinil-CoA sintetasa con generación de GTP

Succinil-CoA
sintetasa
Succinil-CoA Succinato

Esta enzima convierte la succinil-Coenzima A a succinato.


La energía libre de la unión tioéster del succinil-CoA que se rompe no se
pierde pues se genera un compuesto con alto potencial de transferencia de
energía el GTP o ATP

Nucleósido difosfoquinasa
Mecanismo: la succinil Co-A sintasa transforma los tipos de energía bioquímica

Dominio Público
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Succinyl_CoA_Synthetase_Mechanism_Revised.png

La energía de la molécula tioéster se transforma en


potencial de transferencia del grupo fosforilo.

La formación acoplada de GTP (o ATP) a expensas


de la energía liberada de la rotura del succinil-CoA es otro
ejemplo de
fosforilación a nivel del sustrato
Las reacciones restantes del ciclo contribuyen a oxidar el
succinato a oxalacetato para regenerarlo y recomenzar el ciclo

oxidación hidratación oxidación


Succinato Fumarato Malato Oxalacetato

Transformación de un grupo metileno (CH2) en un grupo carbonilo (C=O)


No sólo se regenera el oxalacetato, también se acumula FADH2 y NADH.

La formación de oxalacetato permite que un nuevo ciclo comience


6. El succinato se oxida fumarato mediante la
succinato deshidrogenasa

Succinato
deshidrogenasa

Succinato Fumarato

El aceptor de hidrógeno es el FAD en vez


del NAD+ porque el cambio de energía
libre es insuficiente para reducir el NAD+.
En eucariotas, la succinato
Esta enzima cataliza la oxidación de la deshidrogenasa se encuentra unida a la
única unión central del succinato a un membrana mitocondrial interna, contiene
doble enlace trans con lo que se obtiene tres centros hierro-azufre diferentes y una
fumarato y se reduce el FAD a FADH2. molécula de FAD unida covalentemente.
7. Hidratación del fumarato y producción de malato por
acción de la fumarasa

Fumarasa

Fumarato L-Malato

La fumarasa cataliza una adición estereoespecífica en trans del un H+ y un OH-.


El grupo OH- se añade solamente a un lado del doble enlace del fumarato,
por lo cual se forma el isómero L-del malato
8. El malato se oxida a oxalacetato mediante la
malato deshidrogenasa

Malato
deshidrogenasa
L-Malato Oxalacetato

Mediante oxidación del grupo alcohol secundario del malato a la


correspondiente cetona esta enzima vuelve a formar oxalacetato, con
la reducción simultánea de un tercer NAD+ a NADH.

AG’o notablemente positivo, la oxidación del malato resulta posible por la utilización de sus
productos, oxalacetato por la citrato sintasa y NADH por la cadena de transporte de electrones
Balance del Ciclo de Krebs
produce electrones con alto potencial de transferencia, GTP y CO2
Acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2H2O

2CO2 + 3NADH + FADH2 + GTP+ 2H+ +CoA


La oxidación de éstos por parte del O2 mediante la cadena de
transportes de electrones y la fosforilación oxidativa completa la
descomposición del combustible metabólico,
lo que conduce a la síntesis de ATP (9 moléculas)

La energía de las oxidaciones del ciclo


se conserva con eficiencia
Nota: por mayor información
ver Tabla 17.2 del Libro de Bioquímica,
de Lubert Stryer, Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko
(Séptima Edición, se encuentra en la Biblioteca de Facultad)
Regulación del ciclo de Krebs:
a nivel de la piruvato deshidrogenasa

Regulación alostérica:

• Se inhibe por altas concentraciones de los productos de reacción:

- acetil-CoA inhibe a E2
- NADH inhibe a E3

Concentraciones elevadas de acetil-CoA y NADH informan al enzima

que las necesidades energéticas de la células han sido atendidas

o que los ácidos grasos se están degradando para producir acetil Co-A y
NADH.

De esta forma se ahorra glucosa ya que la mayor parte del piruvato procede
de la glucosa a través de la glicólisis.
• Regulación por modificación covalente

Quinasa
PDH PDH
activa inactiva
Fosfatasa

Una quinasa específica (PDK) fosforila y desactiva la piruvato deshidrogenasa (E1 de PDH).

Una fosfatasa (PDP) la activa al eliminar el grupo fosforilo (E1 de PDH).


Esta quinasa y la fosfatasa son también enzimas muy reguladas:
-el ADP y el piruvato inhiben a la quinasa PDK
- el Ca++ activa la fosfatasa PDP (la misma señal que inicia la contracción muscular)
- regulada hormonal :
en el hígado, la adrenalina, provoca aumento Ca++ que activa la fosfatasa
en el hígado y tejido adiposo dónde hay síntesis de ácidos grasos, la insulina que
indica el estado alimentado, estimula la fosfatasa, aumentando la conversión de piruvato en
acetil-CoA (precursor de los ác-grasos). En estos tejidos el complejo PDH se activa para canalizar
la glucosa hacia piruvato y después acetil-CoA, finalizando en la síntesis de ácidos grasos.
Respuesta del complejo piruvato deshidrogenasa a la carga energética

CARGA ENERGÉTICA ELEVADA : reposo CARGA ENERGÉTICA BAJA: ejercicio


relaciones elevadas relaciones bajas
NADH/NAD+ NADH/NAD+
acetil CoA/CoA acetil CoA/CoA
ATP/ADP ATP/ADP

Piruvato Piruvato

Acetil-CoA Acetil-CoA

Krebs Krebs
El ciclo de Krebs está controlado en varios puntos

Puntos de control: en las 2 primeras enzimas que generan electrones


de alta energía

• Isocitrato deshidrogenasa

- Activadores: ADP (alostérico)

- Inhibidores : ATP (alostérico), NADPH (competitivo, y ejemplo de


inhibición por acumulación de producto de la reacción que cataliza, el
NADH desplaza al sustrato NAD).

• α-cetoglutarato deshidrogenasa

- Inhibidores: succinil-CoA, NADH (otro ejemplo de inhibición por los


productos de la reacción que cataliza), se inhibe también por una carga
energética alta (altos niveles ATP).
La velocidad del ciclo se ajusta para satisfacer las necesidades
celulares de ATP.
En muchas bacterias un punto de control adicional a nivel de la entrada
al ciclo de Krebs :

• Citrato sintasa

- Activadores: ADP

- Inhibidores: ATP (alostérico, aumenta la Km para el acetil-CoA)


Los defectos en el ciclo de Krebs contribuyen al desarrollo del cáncer

En ciertos canceres mutaciones en las enzimas

Succinato deshidrogenasa
Fumarasa
Piruvato deshidrogenasa quinasa

Si se ven afectadas sus actividades, disminuidas, las células cancerosas en la


glicólisis aeróbica metabolizan preferentemente la glucosa a lactato incluso en
presencia de oxígeno.

El cáncer puede ser considerara también una enfermedad metabólica.


El ciclo de Krebs es una fuente de precursores
biosintéticos (vía anfibólica)

Glucosa Piruvato

Otros
aminoácidos,
purinas, Acetil-CoA
pirimidinas
Oxalacetato

Citrato
Aspartato
Ácidos grasos,
esteroles

Purinas

Succinil- alfa-cetoglutarato
CoA
otros
Porfirinas, aminoácidos
Glutamato
Hemo, clorofila
Las reacciones anapleróticas reponen los
intermediarios del ciclo de Krebs
Reacciones anapleróticas (rellenar) reacciones de síntesis o reposición
de componentes de una vía metabólica

Desde A Reacción Notas


Esta reacción es catalizada por la piruvato
carboxilasa, una enzima activada por Acetil-CoA,
piruvato + CO2 + H2O + indicando una falta
Piruvato oxalacetato
ATP oxalacetato + ADP + Pi + 2H+ de oxalacetato.El Piruvato puede también ser
convertido en L-malato, otro intermediario,
mediante una vía similar.
Esta reacción es reversible pudiendo formar
oxalacetato a partir de aspartato en una
Aspartato oxalacetato -
reacción de transaminación, vía aspartato
aminotransferasa.

α- glutamato + NAD+ + H2O NH4+ + α- Esta reacción está catalizada por la glutamato
Glutamato
cetoglutarato cetoglutarato + NADH + H+. deshidrogenasa.

Cuando se oxidan ácidos grasos de cadena


β-
impar, se forma una molécula de succinil-CoA
oxidación deácidos succinil-CoA -
por cada ácido graso. La enzima final es
grasos
la metilmalonil-CoA mutasa.

Dominio Público_ Reacciones_anapler%C3%B3ticas


Imagen de dominio público. http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ciclo_de_Krebs-es.svg
El ciclo del glioxilato permite a las plantas y bacterias crecer en acetato

La mayor parte de los organismos NO pueden producir glucosa a partir de acetil-CoA

Pero en las plantas y algunos microorganismos, existe una ruta metabólica que
permite la conversión del acetil-CoA generado a partir de las reservas de grasa en glucosa.

El oxalacetato es capaz de generar


glucosa mediante gluconeogénesis

Dominio público
http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Glyoxylatepath.svg