Arus balik KROMATOGRAFI KIMIA ANALITIK

Kromatografi arus balik dalam kimia analitik

(Laporan Teknis IUPAC)

Abstrak : Kromatografi Melawan Waktu (CCC) adalah istilah umum yang mencakup semua bentuk
kromatografi cair-cair yang menggunakan fase diam cair bebas-pegang yang diadakan di tempat oleh
medan gaya sentrifugal sentrifugal atau kompleks sederhana. Sistem cair biphasic digunakan dengan
satu fase cair menjadi fase diam dan yang lainnya adalah fase gerak. Meskipun dimulai hampir 30
tahun yang lalu, CCC tidak memiliki kolom yang dapat diandalkan. Ini berubah sekarang, dan
sentrifugal yang baru dirancang muncul di pasar membuat kolom CCC yang sangat baik. Ulasan ini
berfokus pada keuntungan dari fase diam cair dan membahas teori kromatografi CCC. Perbedaan
utama dengan kromatografi cair klasik (LC) adalah volume variabel dari fase diam. Ada dua cara
berbeda untuk mendapatkan fase diam cair menggunakan gaya sentrifugal, cara hidrostatik dan cara
hidrodinamik. Dua jenis kolom CCC ini dijelaskan dan dibandingkan. Aplikasi CCC yang dilaporkan
dalam kimia analitik dan perbandingan dengan metode pemisahan dan pengayaan lainnya
menunjukkan bahwa teknik ini dapat berhasil digunakan dalam analisis tanaman dan produk alami
lainnya, untuk pemisahan biokimia dan farmasi, untuk pemisahan alkaloid dari ramuan medis, dalam
analisis makanan, dll. Berdasarkan penelitian selama dua dekade terakhir, rekomendasi juga
diberikan untuk penerapan CCC dalam analisis penelusuran organik dan dalam kimia radioanalitik.

PENDAHULUAN Kromatografi tandingan saat ini (CCC) adalah teknik kromatografi cair (LC) yang
menggunakan dua fase cairan yang tidak dapat dicairkan tanpa dukungan yang kuat. Sebagai teknik
LC, CCC menggunakan banyak istilah yang sudah didefinisikan untuk kromatografi [1]. Artikel ini akan
memberikan dasar-dasar teknik CCC dan secara singkat menggambarkan kolom kromatografi khusus
yang mampu mempertahankan fase cair statis menggunakan medan sentrifugal. Suatu pendekatan
cepat untuk memilih sistem pelarut yang dapat digunakan dalam CCC diberikan. Aplikasi CCC akan
disajikan untuk menunjukkan minat dan keaslian teknik dalam kimia analitik.

DESKRIPSI TEKNIK CHROMATOGRAPHY COUNTERCURRENT Dapat dikatakan bahwa nama teknik,

kromatografi berlawanan arah, tidak tepat karena dua fase cair tidak mengalir berlawanan satu
sama lain. CCC adalah teknik LC dengan fase stasioner cairan bebas-pendukung [2]. Penemu teknik,
Yoichiro Ito, menamakannya setelah metode partisi berlawanan Craig yang juga menggunakan
partisi antara dua fase cair untuk memisahkan zat terlarut [3]. Penamaan teknik dan akronim CCC
yang nyaman diadopsi oleh para penggunanya dan tidak dapat diubah sekarang karena banyaknya
publikasi yang mengartikannya [3-9], meskipun LC bebas-dukungan mungkin menjadi nama
alternatif.

Tantangan utama CCC adalah mendapatkan fase stasioner cair bebas-dukungan yang stabil. Kolom
CCC tidak bisa berupa tabung sederhana dengan frit pada ujungnya seperti pada teknik LC lainnya.
Dalam semua "kolom" CCC modern, bidang sentrifugal digunakan untuk menahan fase diam cair di
tempat sementara fase cairan cair didorong melaluinya. Bidang sentrifugal menyiratkan bagian yang
berputar, rotor, roda gigi, kumparan, segel berputar, motor, dan pengatur kecepatan. Namun,
seluruh mesin CCC hanyalah kolom kromatografi.
Keuntungan dari fase fasa stasioner cair bebas-dukungan Di CCC, fase baik bisa menjadi fase gerak.
Faktanya, fase gerak dapat diubah selama berlari jika komponen sampel yang disuntik ditahan
terlalu lama di kolom. Setidaknya dua pelarut yang tidak dapat bercampur, misalnya, air dan oktan-
1-ol, heptana, atau kloroform diperlukan. Sistem fase khas untuk pemisahan organik dapat
mencakup sebanyak tiga, empat, atau lebih pelarut. Diagram fase dapat membantu seorang oporter
merancang sistem cairan biphasic yang paling cocok untuk aplikasi tertentu. Kemungkinan unik
Kelemahan utama dari fase diam cair adalah bahwa itu adalah cairan. Tidak ada masalah dalam
menjaga fase diam yang solid di dalam kolom. Namun, sulit untuk menjaga fase diam cair saat cairan
lain, fase gerak, didorong melaluinya. Medan gravitasi bumi digunakan dalam mesin Craig dan
perangkat CCC droplet sederhana. Namun, bidang rendah ini membutuhkan laju aliran fase
semburan rendah, sehingga eksperimen berlangsung selama berhari-hari. Medan yang lebih kuat
diperlukan, dan semua kolom CCC modern memiliki bagian yang berputar, rotor, roda gigi, dll. Untuk
menciptakan medan sentrifugal yang kuat dan efisien untuk secara efektif menahan volume besar
fase diam stasioner cair terhadap aliran fase gerak. Pilihan besar kombinasi pelarut untuk membuat
sistem cairan biphasic dapat menjadi keuntungan (yaitu, lebih banyak pilihan) tetapi juga kerugian —
ini bisa menghabiskan waktu untuk membuat pilihan yang tepat, khususnya jika Anda tidak tahu cara
memilih. Harus selalu diingat bahwa setiap perubahan komposisi yang dibuat dalam satu fase cair
dapat menyebabkan perubahan dalam fase cair lainnya, yang membuat elusi gradien dalam CCC
kurang lugas daripada di LC klasik. Di CCC, ketersediaan fase stasioner untuk komponen terpisah
ditentukan oleh proses difusi dalam cairan dan efisiensi pencampuran fase (diatur oleh parameter
desain kolom, kondisi hidrodinamika operasional, dan sifat fisikokimia dari sistem cairan dua fase).
CCC memberikan kemampuan unik untuk pencampuran fase dinamis dari sistem cairan dua fase
selama proses kromatografi. Penggunaan silika sebagai bahan tulang punggung untuk fase diam
dalam kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) membatasi pH fase gerak ke kisaran 2–8. Fase gerak
yang bersifat asam dapat membelah bagian berikatan organik; yang dasar bisa melarutkan silika,
meskipun fase stasioner HPLC modern dan mahal dapat bekerja dengan fase pH 1 dan / atau pH 10
[10]. Sebaliknya, jika pelarut yang digunakan untuk membuat sistem cairan biphasic tidak sensitif
terhadap pH, tidak ada masalah pH tambahan karena material yang paling sering digunakan dalam
kolom CCC adalah Teflon. Interaksi fase zat terlarut yang kuat dapat merugikan untuk bahan biologis
di HPLC. Sebaliknya, pembagian cair-cair adalah satu-satunya interaksi yang bertanggung jawab
untuk retensi zat terlarut di CCC, dan partisi ini dapat sangat lembut untuk molekul dan melestarikan
aktivitas biologis.

Larutan dapat menggunakan volume fase stasioner yang sangat tinggi. CCC secara definitif
merupakan teknik pemisahan preparatif yang sangat baik [11] sebagai keuntungan penting dari sifat
cair dari fase diam adalah kemampuan memuat. Bahan yang disuntikkan dapat larut dalam seluruh
volume fase stasioner. Adsorpsi cairan-cair isoterm menyajikan kisaran linier yang lebih besar
dibandingkan dengan isoterm padat liqid-padat. Overload stasioner-fase kurang masalah di CCC
daripada di HPLC biasa karena volume tinggi fase stasioner-sering setinggi 90% dari total volume
kolom. Namun demikian, fitur CCC ini dapat berguna untuk kimia analitik jika teknik ini diterapkan
untuk menyiapkan bahan referensi standar.
 BERTHOLD dkk

Mekanisme sederhana Rasio partisi cair-cair (KD) dari zat terlarut dalam sistem cairan biphasic yang
digunakan untuk melakukan pemisahan CCC adalah satu-satunya parameter dalam persamaan
retensi VR = VM + KD VS (1) di mana VM dan VS adalah ponsel- dan volume fase stasioner, masing-
masing, di dalam aparatur CCC. VM sesuai dengan volume penahan di HPLC [3]. Rasio partisi KD atau
koefisien partisi dari zat terlarut (jika hanya satu zat terlarut yang terlibat) adalah rasio dari
konsentrasi zat terlarut dalam fase stasioner atas konsentrasi zat terlarut dalam fase gerak. Sebagai
contoh, untuk zat terlarut yang tidak dapat terionkan, jika fase diam adalah oktan-1-ol dan fase
gerak adalah air, KD adalah oktan-1-ol / partisi air co-efisien [12]. Karena tidak ada dukungan yang
kuat, volume kolom VC adalah VC = VM + VS (2) Volume kolom selalu diketahui, baik yang diberikan
oleh pabrik atau diukur. Persamaan 1 dapat ditulis sebagai VR = VC + (KD - 1) VS (3) menunjukkan
bahwa, di samping partisi zat terlarut antara dua fase cair, VS adalah satu-satunya parameter yang
bekerja pada retensi zat terlarut.

Teori kromatografi Parameter kromatografi Sebagian besar persamaan klasik yang digunakan untuk
LC dapat diterapkan di CCC. Mereka secara singkat ingat di sini, menunjukkan kekhususan fase diam
cair. Persamaan 1 atau 3 memberikan volume retensi zat terlarut. Semua parameter LC dapat
digunakan dalam CCC yang mengekspresikan nilainya menggunakan VS, volume fase diam cair
[1,11]. Faktor retensi diekspresikan sebagai k = (VR - VM) / VM = KD VS / VM (4) Faktor pemisahan
digunakan untuk membandingkan faktor retensi dari dua puncak yang berbeda, 1 dan 2 α = k2 / k1 =
KD2 / KD1 (5) Resolusi puncak mengukur kualitas pemisahan. Hal ini dinyatakan sebagai rasio dari
perbedaan volume penampakan puncak atas rata-rata lebar puncak, wb, pada basis RS = (VR2 - VR1)
/ [1/2 (wb1 + wb2)] (6) Efisiensi kromatografi dapat dinyatakan menggunakan N, nomor pelat
teoritis sebagai N = 16 (VR / wb) 2 (7) Menggabungkan persamaan, dapat ditentukan bahwa
persamaan resolusi puncak dalam CCC adalah (8)

Rumus :
Persamaan 8 berlaku untuk semua teknik kromatografi. Ini tidak digunakan secara umum karena
volume fase mobile dan fase stasioner adalah konstan. Ini akan menunjukkan bahwa ini tidak benar
di CCC di mana VM dan VS tidak konstan dan harus ditentukan untuk semua kromatogram. Volume
fase stasioner variabel Fitur unik CCC adalah volume fase diam tidak konstan. Ini jelas karena sifat
cair dari fase diam. Nomenklatur IUPAC untuk kromatografi mendefinisikan rasio fase, β, sebagai
volume fase gerak, VM, dibagi dengan volume fase stasioner, VS [1]. Dalam semua teknik
kromatografi, kecuali CCC, volume ini dan parameter β adalah konstanta. Lebih lanjut, volume VM
dan VS tidak selalu dihubungkan dengan persamaan. 2 karena mereka berada di CCC. Untuk alasan
ini, penting untuk memperkenalkan SF, rasio retensi volume fase stasioner atau fraksi fase stasioner,
yang didefinisikan sebagai rasio volume fase stasioner cair di atas volume kolom

SF = VS / VC

Parameter SF mengekspresikan rasio volume kolom CCC yang ditempati oleh fase stasiun. Sebagai
parameter tanpa dimensi, SF memungkinkan perbandingan kapasitas retensi fase stasioner dari
berbagai aparatur CCC. SF sering dinyatakan sebagai persentase. Persamaan 10 adalah persamaan. 8
penulisan ulang menggunakan fraksi fase stasioner SF

Rumus :

Gambar 1 dan Persamaan. 10 menggambarkan pentingnya SF di CCC. Semua Gambar. 1

kromatogram dilakukan dengan sampel yang sama, dipisahkan dengan kolom CCC yang sama dan
komposisi fase fasa yang sama. Jumlah fase diam cair hadir di kolom CCC adalah satu-satunya
parameter yang berubah. Jika jumlah fase stasioner yang dipertahankan dalam kolom CCC menurun,
resolusi puncak kromatografi menurun, menghasilkan kromatogram yang berbeda secara dramatis
pada Gambar. 1. Persamaan 8 menunjukkan bahwa volume fase stasioner harus dimaksimalkan
untuk meningkatkan resolusi puncak. Persamaan 1 atau 3 menyatakan volume retensi zat terlarut
yang juga sangat bergantung pada VS, volume fase diam. Tentu saja, jika tidak ada fase diam yang
dipertahankan di kolom CCC, semua zat terlarut akan mengelusi volume VR = VM yang juga akan
menjadi VC, volume kolom. Hal ini dapat dilihat pada Gambar. 1. Ketika faktor SF menurun, ada lebih
sedikit fase diam di dalam kolom. Akibatnya, ada lebih banyak volume fase-ponsel (Persamaan 2).
Solute dengan konstanta partisi, KD, lebih rendah dari unity, solutes 1 hingga 6 pada Gambar. 1,
elute dengan volume retensi yang meningkat (Persamaan 3). Larutkan dengan KD> 1 elute dengan
volume penajaman menurun (zat terlarut 8-10 dan persamaan 3 juga). Solute 7, dengan KD = 1, tidak
sensitif terhadap SF atau VS (eq. 3). Ini mengelusi volume kolom dalam semua kasus (Gambar 1, VC =
120 mL, garis putus-putus vertikal) [2].
Gambar grafik

KOLOM CCC Dari berbagai desain kolom yang digunakan untuk mempertahankan fase diam cair [5-
9], hanya dua yang memiliki potensi untuk pengembangan komersial berkelanjutan. Mereka disebut
hidrostatik dan konfigurasi hidrodinamik.

Kolom Hidrostatik CCC Kolom CCC hidrostatik pertama menggunakan gravitasi untuk menjaga fase
diam cair; mereka disebut kolom droplet CCC (DCCC). Mereka membutuhkan waktu elusi yang
sangat panjang (berhari-hari). Kolom DCCC tidak lagi digunakan saat ini. Kolom CCC hidrostatik
modern dikenal dan dipasarkan dengan nama kromatografi partisi sentrifugal (CPC) [7]. Dua
karakteristik utama mereka adalah: (1) mereka memiliki satu sumbu rotasi yang menghasilkan
medan sentrifugal yang konstan dan (2) mereka melingkupi volume geometris, tabung, saluran, atau
lokasi yang berulang dengan sendirinya melalui tabung penghubung yang membentuk pola (Gambar
2A) . Dapat dilihat bahwa ada cukup banyak saluran penghubung yang hanya mengandung fase
bulan.

Gambar

Desain ini mengurangi waktu kontak untuk pertukaran zat terlarut dengan fase diam. Ini juga
membangun tekanan hidrostatik kecil yang menjelaskan penurunan tekanan signifikan yang
diperlukan untuk mengoperasikan sentrifugal hidrostatik. Semua sentrifugasi hidrostatik
mengandung dua segel putar; satu di bagian atas dan yang lainnya di bagian bawah. Mereka tenang
untuk beroperasi.
Dalam sistem CCC toroidal (helix CCC) yang dioperasikan di bawah gaya sentrifugal, dimensi koil
direduksi menjadi yang sesuai untuk pemisahan analitis. Koil dipasang di sekeliling pinggiran
mangkuk sentrifugal sehingga medan gaya sentrifugal aksi radial yang stabil mempertahankan fase
diam di satu sisi kumparan seperti pada sistem hidrostatik dasar yang dijelaskan di atas.

Kolom hidrodinamik CCC Sentrifugal hidrodinamika yang digunakan dalam kolom CCC memiliki dua
sumbu rotasi, sumbu utama dan satu planaryary yang menghasilkan medan gaya sentrifugal
variabel. Bisa ada sejumlah sumbu planet tetapi yang paling umum adalah sumbu tunggal, ganda,
dan triple. Setiap sumbu planet memiliki kumparan atau spool yang dipasang di atasnya yang berisi
gulungan-gulungan tuba Teflon yang kontinyu. Dalam kolom hidrodinamik, penting untuk
mengetahui rasio jari-jari spool, r, di atas radius rotor, R. Rasio ini secara tradisional disebut β [3-6].
Karena β didefinisikan dalam LC sebagai rasio fase VS / VM sehingga rasio beta CCC harus dicatat β r
= r / R (lihat Gambar 3).

Gambar

Tabungnya dapat dihubungkan dari bagian luar centrifuge, melilit putaran kumparan, dan kembali ke
luar lagi tanpa segel silau — karenanya, dari sudut pandang kromatografi itu setara dengan satu
kolom panjang yang panjang dan kontinyu. Medan gaya variabel menghasilkan zona pencampuran
dan pengendapan di seluruh panjang kolom melingkar seperti ditunjukkan pada Gambar. 2B. Ada
kontak terus-menerus antara dua fase cair di seluruh kolom tanpa penumpukan tekanan yang
signifikan. Sentrifugal hidrodinamika bekerja dengan tekanan fase-seluler yang rendah tetapi dapat
menghasilkan derau dari rakitan roda gigi, yang dapat dikurangi dalam sentrifugal yang dirancang
dengan baik. Kolom ini sering disebut kolom CCC kecepatan tinggi (HSCCC) karena kolom ini dapat
beroperasi jauh lebih cepat daripada kolom Craig, DCCC, dan berbasis gravitasi. Tabel 1
membandingkan fitur dari dua jenis kolom CCC. Tidak mungkin untuk mengatakan bahwa satu jenis
jelas lebih unggul dari yang lain. Situasi terbaik adalah memiliki kedua jenis kolom CCC untuk
mencakup semua kemungkinan kasus. Studi sedang mengembangkan sentrifugal CCC berskala besar
berdasarkan kedua jenis yang mampu menghasilkan massa material murni yang signifikan
(preparative CCC) [13–15]. Sentrifugal seperti ini dapat digunakan untuk menghasilkan bahan
referensi standar untuk tujuan analisis dan untuk memurnikan pereaksi analitis.
Tabel

Ada yang disebut sumbu silang yang merupakan kolom CCC hidrodinamik yang berisi dua gulungan
tabung melingkar yang dipasang di rotor sedemikian rupa sehingga sumbu rotasi kumparan berada
pada sudut yang tepat dari sumbu utama rotasi.

Gerak cairan dalam kolom CCC Kolom CCC Hidrostatik atau BPK Seperti digambarkan pada Gambar.
2, gerakan cair dalam dua jenis kolom CCC sangat berbeda. Hal ini relatif mudah dimengerti bahwa
fase diam cair akan disimpan secara fisik di saluran-saluran kolom hidrostatik. Jika laju alir fase
bergerak dihentikan, kedua fase cair tetap berada di tempatnya (dengan demikian istilah
hidrostatik). Cara fase bergerak bergerak melalui fase diam tergantung pada kerapatan relatifnya.
Pada Gambar 2A, fase bergerak hitam adalah cairan yang lebih ringan (fase atas dalam tabung
reaksi). Diilustrasikan memasuki saluran melalui ujung bawah dan meninggalkan di ujung atas-ini
disebut modus menaik di mana fase gerak naik melalui fase stasioner yang lebih padat. Fasa cair
yang lebih padat atau lebih rendah dapat digunakan sebagai fase gerak. Dalam hal ini, itu akan
masuk dalam saluran dari ujung atas dan pergi melalui ujung bawah — ini dikenal sebagai mode
menurun di mana fase densitas seluler turun melalui fase diam yang lebih ringan yang
dipertahankan [7]. Pada Gambar. 2A, fase gerak ditunjukkan putus menjadi tetesan. Dalam
prakteknya, fase gerak mengalir melalui fase diam, membengkok ke arah rotasi karena efek Coriolis,
dan menghasilkan semprotan atau tetesan pencampuran ketika kaskade menyentuh dinding kamar
atau antarmuka cair. Kolom hidrodinamik CCC atau HSCCC Sampai saat ini, alasan mengapa fase
diam cair dipertahankan dalam kolom hidrodinamik tidak sepenuhnya diketahui. Dalam memutar
kumparan atau gulungan dengan tabung digulung, heliks tabung menghasilkan gaya, yang disebut
kekuatan sekrup Archimedean, yang mendorong cairan yang terkandung ke salah satu ujung tabung
yang disebut kepala, ujung tekanan yang lebih tinggi. Ujung tabung yang lain disebut ekor — ujung
bawah bertekanan rendah. Ketika dua cairan tak bercampur hadir dalam tabung atau kolom
melingkar berputar, cairan yang lebih berat akan bergerak menuju ujung ekor kumparan, menggeser
cairan yang lebih ringan ke arah ujung kepala. Intensitas dan arah gaya sekrup Archimedean
tergantung pada kecepatan rotasi dan arah dan pitch heliks dari tabung melingkar [14]. Seperti
ditunjukkan oleh Gambar. 2B, ketika fase cair hitam lebih terang dimasukkan melalui ekor kumparan
berputar, ia akan melalui cairan padat dalam suksesi pencampuran dan zona pengendapan sampai
ke kepala. Fase yang lebih ringan bergerak ke arah ekor-ke-kepala melalui fase padat. Jika fase padat
adalah fase gerak, itu harus memasuki kolom CCC melalui kepala. Ini disebut arah head-to-tail
melalui fase yang lebih ringan. Jika laju aliran fase bergerak dihentikan sementara rotor masih
berputar, gaya sekrup Archimedean akan memindahkan fase cair lebih ringan ke arah ujung kepala
kumparan dan fasa yang lebih berat ke ujung ekor kumparan. Ini adalah gerakan masing-masing fase
yang membuat proses menjadi hidrodinamik. Fase diam diadakan dalam kesetimbangan terhadap
aliran fase gerak. Meningkatkan aliran ini dan fase stasioner lebih banyak dipindahkan dari kolom,
menghasilkan volume retensi fase stasioner lebih rendah (SF lebih rendah).

SISTEM PELARUT Tiga kriteria Banyak sistem pelarut dua fase dengan spektrum polaritas yang luas
atau mengandung reagen pengekstraksi dapat diterapkan untuk memisahkan zat organik,
bioorganik, dan anorganik. Entah fase cair atau organik dari sistem fasa dua fase dapat digunakan
sebagai fase gerak. Banyak contoh sistem pelarut yang digunakan dalam CCC dapat ditemukan
dalam literatur [5,15,16]. Secara umum, sistem pelarut yang dikenal dari pemurnian CCC preparatif
juga dapat digunakan pada skala analitis. Sistem untuk pemisahan anorganik sangat berbeda dari
pemisahan organik, seperti pada kebanyakan kasus yang pertama mengandung reagen pengompleks
atau ekstraksi (ligan) [17]. Ada tiga kriteria penting untuk memilih sistem cairan dua fase. Pertama
dan tentu saja, ini harus membentuk dua fase yang tidak dapat dipisahkan. Kedua, fase yang dipilih
menjadi fase diam harus dipertahankan oleh kolom CCC. Ketiga, sampel harus dipisahkan oleh
sistem cairan dua fase yang dipilih.

Dua fase yang tidak dapat dicampur Ada campuran pelarut yang tak terhitung jumlahnya yang
membentuk dua fase yang tidak dapat dipisahkan. Ketika sifat dari zat organik yang dipisahkan
diketahui, seseorang dapat menemukan sistem pelarut yang sesuai dengan mencari literatur untuk
sistem pelarut yang telah berhasil diterapkan pada senyawa yang serupa [2–10]. Dalam hal sistem
dua fasa berair berair, fasa organik terdiri dari satu pelarut atau campuran pelarut yang berbeda.
Berbagai sistem pelarut tidak berair / tidak berair (misalnya, heptana / asetonitril) telah digunakan
untuk pemisahan senyawa nonpolar dan / atau senyawa yang tidak stabil dalam larutan berair.
Pemisahan makromolekul dan partikel sel dapat dilakukan dengan berbagai sistem fasa polimer
berair / berair. Di antara berbagai sistem fase polimer yang tersedia, dua jenis berikut adalah yang
paling serbaguna untuk melakukan CCC. Sistem poli (etilen oksida) (PEO) / kalium fosfat
menyediakan sarana yang mudah untuk menyesuaikan koefisien partisi makromolekul dengan
mengubah massa molekul PEO yang dipilih dan / atau mengubah pH dan / atau konsentrasi dari
buffer fosfat. The PEO 6000 / Dextran 500 sistem menyediakan lingkungan fisiologis, cocok untuk
pemisahan sel mamalia dengan mengoptimalkan osmolaritas dan pH dengan elektrolit [6]. Untuk
prakonsentrasi dan pemisahan spesies anorganik, fase diam yang mengandung reagen pengekstraksi
dari berbagai jenis (pertukaran kation, pertukaran anion, dan netral) dalam pelarut organik biasanya
digunakan [2,18-25]. Komponen fase-bergerak tidak boleh mengganggu analisis selanjutnya. Larutan
asam anorganik dan garamnya paling sering digunakan. Fase gerak juga dapat mengandung agen
pengompleks spesifik, yang dapat mengikat satu atau beberapa elemen di bawah pemisahan.

Retensi signifikan dari fase diam cair Parameter yang bertanggung jawab untuk retensi signifikan dari
fase diam cair diukur dengan parameter SF (eq. 9) tergantung pada kolom CCC itu sendiri oleh
lubang tubing yang digunakan untuk membuat kumparan (s), kumparan diameter, dan rasio β (lihat
Gambar 3). Ini juga tergantung pada parameter eksperimental: kecepatan rotasi dan laju alir fase
gerak [14]. Sifat fisikokimia dari sistem cairan dua fase juga bertanggung jawab kritis terhadap
penyimpanan fase-fase cair yang baik. Perbedaan densitas fase cair, viskositas fase-gerak, dan
tegangan antar muka adalah tiga parameter sistem cairan utama yang bekerja pada rasio SF [23].
Sebagai contoh, sistem dua fase berair (ATPS) yang dibuat dengan PEO, potasium fosfat, dan air
sangat sulit untuk dipertahankan dalam kolom hidrodinamik karena tegangan antar muka yang
sangat rendah, viskositas tinggi pada fase atas PEO, dan perbedaan densitas rendah. Adalah mungkin
untuk bekerja dengan ATPS menggunakan kolom hidrostatik. Selain itu, penambahan ekstraksi
reagen dan garam mineral ke sistem dua fase (dalam kasus pemisahan anorganik) dapat sangat
mempengaruhi sifat fisikokimia sistem cair dan, akibatnya, perilaku hidrodinamik dan nilai SF.

Metode unik menggunakan sifat cair dari fase stasioner Tiga kegunaan unik dari sifat cair dari fase
diam di CCC disajikan di bawah ini. Dalam ketiga kasus ini, metode dikembangkan karena zat terlarut
dipertahankan terlalu lama dalam fase diam. Cara-cara melakukan pemisahan kromatografi tidak
akan mungkin dengan teknik kromatografi lainnya bekerja dengan fase diam yang solid. Metode
dual-mode Gambar 4 menunjukkan cara langsung untuk menjelaskan metode dual-mode. Selama
langkah A, chro- matograph CCC digunakan karena akan menjadi pemisahan klasik. Solute 1 dan 2
elute karena mereka memiliki rasio partisi yang rendah. Larutan 3 dan 4, dengan rasio partisi tinggi,
memiliki afinitas tinggi untuk fase diam. Mereka bergerak sangat lambat di dalam "kolom" CCC.
Menggunakan keuntungan dari fase diam cair, peran fase diaktifkan setelah satu kolom volume, VC,
fase gerak telah melewati kolom. Selama langkah B (Gambar 4), fase gerak baru adalah cairan yang
sebelumnya fase diam, dan dipompa ke arah yang berlawanan. Solute 4, yang bergerak paling
lambat dalam langkah A (Gambar 4), adalah yang paling dekat dengan apa yang sekarang menjadi
outlet kolom. Larutan 3 dan 4 memiliki afinitas tinggi untuk apa yang sekarang fase bulan. Solute 4
adalah yang pertama meninggalkan kolom diikuti oleh zat terlarut 3 (Gbr. 4, kromatogram bawah).
Urutan elusi zat terlarut adalah 1, 2, 4, dan 3. Metode dual-mode sangat berbeda dari metode back-
flush yang digunakan dalam kromatografi gas multidimensional (GC) atau LC di mana arah mengalir
fase gerak diubah. Ini menurunkan faktor resolusi puncak zat terlarut yang terpisah sebagian dalam
kolom. Selama langkah B dari metode dual-mode CCC, itu adalah fase diam sebelumnya yang
bergerak mundur. Ini meningkatkan resolusi puncak faktor zat terlarut di dalam kolom.

Gambar fig. 4

CCC Bersamaan CCC Bersamaan adalah solusi lain untuk memaksa zat terlarut yang sangat ditahan
untuk mengeluarkan dari kolom [24]. Dalam CCC bersamaan, dua pompa digunakan. Fase diam cair
perlahan didorong dalam arah yang sama dengan fase gerak. Paling sering, laju aliran fase
"stasioner" kurang dari 1% dari laju alir fase gerak. Metode ini digunakan untuk mengukur konstanta
partisi oktan-1-ol-air yang sangat besar menggunakan fase gerak berair dan fase diam oktan-1-ol
bergerak lambat. Konstanta KDo / w diekspresikan sebagai [2] KD = (tR Faq - VM, aq) / (VS, oct - tR
Foct) (11) Dalam persamaan. 11, VM, aq adalah volume fase berair yang terkandung dalam "kolom"
CCC dan VS, ok adalah volume fase oktan-1-ol "stasioner", Faq dan Foct, masing-masing, laju aliran
dari fase berair dan oktan-1-ol, dengan Foct << Faq, dan tR adalah waktu retensi zat terlarut. Metode
ekstrusi elusi Cara lain untuk memulihkan zat terlarut yang memiliki afinitas kuat untuk fase diam
cair adalah dengan mengekstraksi seluruh isi kolom setelah centrifuge berhenti setelah elusi satu
kolom volume. Telah ditemukan bahwa bagian utama dari pelebaran band terjadi ketika zat terlarut
meninggalkan kolom dalam fase gerak. Di dalam kolom, di mana dua fase cair bersentuhan satu
sama lain, puncaknya tipis. Ekstrusi dua fase yang terkandung dalam kolom mempertahankan
puncak tipis dan menghasilkan faktor resolusi puncak yang sangat tinggi [25]. Tabel 2
membandingkan volume retensi dari enam senyawa campuran yang dipisahkan dalam delapan
kemungkinan cara CCC dengan sistem cairan biphasic yang sama dan kolom CCC. Penggunaan klasik
dari CCC dalam mode fase terbalik (RP) (cairan apolar sebagai fase diam) memisahkan pada awal
semua enam senyawa yang membutuhkan volume besar fase gerak untuk mengelusi senyawa 6. Ide
pertama untuk menghemat waktu dan pelarut adalah bekerja menggunakan mode fase normal (NP)
dengan cairan polar yang digunakan sebagai fase diam. Dalam konfigurasi cair ini, rasio partisi K'D
masih merupakan rasio konsentrasi zat terlarut dalam fase diam pada fase bergerak. Jadi K'D (fase
normal) adalah kebalikan dari KD (fase yang telah dibuktikan) dan urutan elusi dibalik. Tabel 2
menunjukkan bahwa metode terbaik untuk memilih akan tergantung pada senyawa mana yang
paling diinginkan. Semua metode menggunakan pelarut 4–10 kali lebih sedikit daripada metode
klasik.

Tabel.2

Kondisi pemisahan yang optimal Hal ini menunjukkan bahwa kondisi terbaik untuk pemisahan
optimal adalah retensi yang baik dari fase stasioner (Gambar 1) dan solute memiliki rasio partisi KD
antara 0,5 dan 2 [26]. Mengubah komposisi sistem liq-uid mengubah rasio partisi terlarut dan
karenanya selektivitas kromatografi dan resolusi puncak. Keaslian CCC adalah bahwa dalam banyak
kasus kedua komposisi fase bergerak dan fase stasioner saling terkait. Mengubah satu mengubah
komposisi yang lain. Diagram fase-biner sering digunakan untuk memprediksi komposisi dua fase
[2,7,9]. Larutan terlarut yang tinggi selalu dapat dielusi menggunakan sifat cair dari fase diam. Dalam
beberapa kasus terbatas, gradien langkah juga dapat digunakan [16]. Untuk pemisahan organik, dua
sistem fase cair yang diperoleh dengan sistem pelarut kuaterner yang dibuat dengan mencampur
heptana, etil asetat, metanol, dan air ditemukan sangat berguna di CCC. Campuran dapat berubah
dari sangat apolar (sistem heptana / metanol) menjadi sangat polar (etil asetat / sistem air) dengan
kemungkinan modulasi yang luas menambahkan lebih banyak atau lebih sedikit pelarut polar
(metanol) atau apolar (heptana) [27,28]. Partisi senyawa anorganik, serta yang organik, tergantung
pada sifat-sifat sistem yang digunakan, koefisien partisi zat yang akan dipisahkan, dan parameter
operasi sentrifugal planet seperti rotasi dan kecepatan revolusi, arah dan kecepatan ponsel -fase
memompa, diameter internal kolom, dan volume sampel. Karena ion anorganik biasanya diekstraksi
sebagai senyawa kompleks mereka, proses kompleksasi, laju dan laju perpindahan massa adalah
salah satu faktor utama yang menentukan efisiensi pemisahan. Kinetika sangat penting karena
pemisahan CCC dapat menjadi proses nonquilibrium.

APLIKASI CCC memainkan peran yang semakin penting dalam ilmu pemisahan. Semua komponen
dalam larutan sampel yang disuntikkan ke dalam kolom dapat dipulihkan, dan adsorpsi dan
pencemaran yang irreversible dari sampel hampir dapat dihilangkan. Sampel mentah dapat
disuntikkan langsung ke kolom, yang menyederhanakan persiapan sampel. Sekarang CCC berhasil
digunakan untuk pemisahan zat organik dan anorganik dari campuran yang rumit.

Zat organik CCC telah menjadi metode pilihan dalam kimia produk alami dan telah memungkinkan
pemisahan sejumlah produk alami yang menarik secara biologis yang sulit atau tidak mungkin untuk
dipisahkan dengan teknik lain [2,16,30]. Ekstrak kasar tanaman atau organisme lain sering terlalu
rumit untuk analisis langsung dengan HPLC. Bahan-bahan tertentu mungkin ireversibel mengikat ke
bahan pengepakan atau dapat memasang filter kolom inlet, dan karenanya mengurangi umur kolom.
Pembatasan tersebut tidak berlaku untuk CCC analitis, yang merupakan metode menarik untuk
pengayaan dan pemisahan berbagai analit. Teknik ini juga digunakan untuk pemisahan biokimia dan
farmasi. CCC sangat cocok untuk pemisahan alkaloid dari ramuan medis menggunakan sistem
pelarut sederhana, untuk analisis total hormon sampel alami [31], dan untuk skrining senyawa
bioaktif baru dalam ekstrak mentah dan sampel kompleks lainnya [32]. CCC juga telah disarankan
sebagai alternatif untuk metode gumpalan goyang untuk mengukur koefisien partisi cair-cair sebagai
cara untuk mengkarakterisasi sifat lipofilik-hidrofilik dari suatu senyawa [33]. Di bawah ini, beberapa
metode menarik dijelaskan secara singkat yang telah berhasil digunakan dalam analisis berbagai
sampel atau yang dapat diterapkan untuk tujuan analitis tanpa modifikasi prosedur dan peralatan
yang serius. Analisis tanaman dan berbagai produk alami Berbagai jenis hidrodinamika (HSCCC,
kumparan silang sumbu) dan sentrifugal hidrostatik (toroidal coil) dapat digunakan untuk pemisahan
dan konsentrasi berbagai senyawa dari tanaman dan berbagai produk alami. Kuantitas senyawa yang
terpisah dapat berkisar dari jumlah jejak hingga gram. 1. Sentrifugal coil sentrifugal Sentrifugal
kumparan toroidal telah berhasil diterapkan pada pemisahan dan pemurnian hormon tanaman,
yaitu, auxins indole, giberelin, sitokinin, dan asam absisat. Indole auksin dipisahkan oleh heksana-etil
asetat-metanol-air (rasio volume 0,6: 1,4: 1,0: 1,0) atau kloroform-asetat-asam-air (2: 2: 1) dalam
kolom dengan total kapasitas 18 mL. Sistem pelarut terakhir sangat berguna untuk pemisahan asam
absisat dari asam indol-3-asetat. Giberelin (GA3, GA4, dan GA7) dipisahkan satu sama lain dalam
buffer eter-metanol-fosfat (pH 7) (3: 1: 2). Metode CCC cocok untuk pemisahan empat sitokinin
dalam buffer etil asetat-metanol-fosfat (pH 7) (3: 1: 3) [2,4,5]. Sebuah centrifuge planet koil toroidal
untuk pemisahan skala analitik digunakan untuk pemurnian asam absisat (ABA) yang diperoleh dari
ekstrak tanaman mentah dan tekadnya dalam beberapa jaringan tanaman menggunakan HPLC dan
GC-MS [34]. Hasil isolasi 3-oxo-∆5-steroid isomerase (KSI) dari E. coli lisat mentah diterbitkan [35].
Pemisahan dilakukan pada ca. 3 mg KIA berlabel 15N menggunakan sistem pemolesan polimer
berdasarkan PEO 3350. Metode ini menghilangkan hilangnya sampel dan denaturasi yang
disebabkan oleh dukungan padat dan menghasilkan protein murni baik dalam pemisahan preparatif
maupun analitik. 2. Sentrifugal hidrodinamik berkecepatan tinggi (HSCCC) Banyak aplikasi dalam
analisis dan persiapan produk alami oleh CCC telah dilaporkan [1,36–38]. Pemisahan produk alami
polifenol seperti flavonoid sulit karena senyawa ini cenderung menunjukkan "tailing puncak" dalam
RP-HPLC, serta adsorpsi ireversibel pada silika gel. Kesulitan-kesulitan tersebut tidak ada di CCC dan
merupakan alasan mengapa CCC telah diakui sebagai teknik yang paling bernilai untuk isolasi
polifenol [39]. Flavonoid dan hydroxyanthraquinone dapat dengan mudah dipisahkan oleh CCC
dengan selektivitas tinggi [40]. Zhang telah mempublikasikan hasil pemisahan alkaloid (dari
Stephania tetrandra S. Moore) menggunakan sistem n-hexane-etil asetat-metanol-air pada rasio
volume yang berbeda, hidroksi-anthraquinones (dari rimpang Rheum palmatum L.) menggunakan
sistem heksana-etil asetat-metanol-air (9: 1: 5: 5) dan flavonoid (dari buckthorn Hippophae
rhamnoides laut) menggunakan sistem kloroform-metanol-air (4: 3: 2) oleh CCC; kapasitas total
kolom adalah 43 mL, kecepatan revolusi maksimum centrifuge adalah 2000 rpm [40]. Dengan
meningkatkan laju aliran fase gerak dalam pemisahan analitik ini, waktu pemisahan untuk campuran
sampel mentah dipersingkat menjadi dalam 15 menit, yang cukup sebanding dengan HPLC analitis.
Miligram dan bahkan jumlah gram zat dapat diisolasi dengan teknik CCC. Ini memungkinkan untuk
menghasilkan bahan referensi standar untuk setiap studi analitis. Untuk pemisahan yang lebih
efisien dari senyawa-senyawa yang memiliki kisaran polaritas yang luas, fasa-fasa yang lebih rendah
dan atas dari sistem pelarut digunakan sebagai fase gerak berturut-turut. Metode ini mencapai
pemisahan lengkap dari lima komponen yang ada dalam campuran sampel 1 mg. Fraksi puncak dari
masing-masing senyawa menjadi sasaran analisis spektrometri massa untuk konfirmasi struktur
senyawa [41]. Gambar 5 menunjukkan kromatogram berlawanan dari lima senyawa utama dalam
ekstrak kasar rimpang Rheum palmatum L. Tiga puncak (1, 2, dan 3) dielusi dengan fase atas dalam
mode TN diikuti oleh dua puncak (A dan B) yang dielusi dengan fase bawah dalam mode RP. Hasilnya
menunjukkan bahwa puncak A, B, 1, 2, dan 3 masing-masing sesuai dengan chrysophanol, emodin,
physcion, aloe-emodin, dan rhein. CCC digunakan untuk seleksi sistematis dan optimalisasi sistem
pelarut dua fase untuk memisahkan alkaloid dari Coptis chinensis Franch menggunakan sistem
larutan kloroform-metanol-HCl (0,3–0,1 mol / L) pada rasio volume yang berbeda [42] . Satu
pemisahan run menghasilkan empat alkaloid murni, termasuk palmatine, berberin, epiberberine,
dan coptisine dari ekstrak alkaloid mentah. Aplikasi analitis CCC berhasil ditunjukkan untuk
pemisahan jumlah mikrogram flavonoid dari ekstrak etanol mentah sea buckthorn dalam kumparan
multilayer dengan kapasitas total 8 mL menggunakan sistem pelarut dua fase yang terdiri dari
kloroform-metanol-air (4 : 3: 2) [43]. Lima puncak, termasuk isorhamnetin dan quercetin,
terselesaikan dengan baik dan dielusi dalam 8 menit. Campuran buatan dari tiga (50 µg masing-
masing) coumarin tanaman umum (herniarin, scopoletin, dan umbelliferone) dan satu flavanone
(hisperetin) dipisahkan dengan kolom CCC hidrodinamik yang terhubung ke detektor array
fotodioda. Fase yang lebih rendah dari kloroform-metanol-air (rasio volume 13: 7: 8) sistem
digunakan sebagai fase gerak, dan resolusi puncak awal dari empat senyawa dicapai dalam waktu
kurang dari 30 menit [44,45]. Beberapa flavonoid, termasuk 7-O-glucosylbaicalein, baicalein, dan
chrysin, dipisahkan dari ekstrak etil asetat dari biji Oroxylum indicum (obat herbal) menggunakan
kolom volume total 27-50 mL oleh sistem pelarut dua fase kloroform. –Methanol – water (8: 10: 5)
[46] dan hexane – ethyl acetate – methanol – water pada berbagai rasio volume [47]. Semua
konstituen ini diidentifikasi dan dideteksi oleh spektroskopi NMR dan ionisasi elektrospray /
spektrometri massa (ESI / MS) setelah elusi isokratik atau elusi-langkah. Pemisahan fraksi flavonoid
dari biji Oroxylum di- dicum (Bignoniaceae) dicapai dalam 6-20 menit menggunakan kolom koil 4,6
mL (0,76 mm i.d. tubing) [48]. Hasil isolasi dan pemurnian tanshinone IIA, tanshinone I,
dihydrotanshinone I, dan cryptotanshinone menggunakan HSCCC diterbitkan.
Gambar fig.5

arasi hydroxyanthraquinones dari obat-obatan Cina tradisional Rheum officinale Baill (Dahuang) dan
Polygonum cuspidatum Sieb. Et Zucc (Huzhang) [50,51]. Kolom hidrodinamik CCC dapat digunakan
untuk pemisahan hormon tanaman indole [31,52], tanaman alkaloid [31], dan s-triazine herbisida
[53,54] dan untuk isolasi produk alami bioaktif [55]. Pembagian skala analitik yang efisien
ditunjukkan untuk pemisahan hormon tanaman indole dengan kumparan multilayer dalam
sentrifugal dengan kapasitas total hingga 10 mL dalam heksana-etil asetat – metanol – air (rasio
volume 1: 1: 1: 1) [ 31,56]. Sistem heksana-etil asetat-metanol-air pada rasio volume yang berbeda
digunakan untuk pemisahan indol oleh HSCCC dalam kolom 40 mL [57]. Empat hormon tanaman
indole sepenuhnya terselesaikan tetapi hanya dalam 90 menit, yang lambat untuk aplikasi analitik
rutin. Namun, harus disebutkan bahwa ligan bioaktif sering sangat mirip dalam struktur, dan sangat
sulit untuk mendapatkan ligan individu dalam bentuk murni untuk evaluasi farmakologis. Pemisahan
lengkap bioaktif lignan schisanhenol dan asetatnya dalam kolom kumparan multilayer menggunakan
sistem n-heksana-etanol-air (6: 5: 5) [62] adalah contoh yang menunjukkan bahwa HSCCC dapat
menjadi metode pelengkap untuk HPLC. bahkan jika pemisahannya tidak cepat. Pemisahan
campuran buatan vincamine [58], alkaloid utama Vinca minor (Apocynaceae) dan vincine (11-
methoxyvincamine), dilakukan pada centrifuge dengan kolom multilayer (0,85 mm id) menggunakan
heksana-etanol-air (6: 5: 5) sistem. Perbandingan pemisahan dengan hasil yang diperoleh oleh RP-
HPLC menunjukkan bahwa kedua metode memberikan resolusi puncak dasar yang baik, tetapi
mungkin untuk mendapatkan puncak tambahan dari isomer vincine, yang tidak diselesaikan oleh
HPLC. CCC digunakan dalam analisis rasa untuk pemisahan zat labil, seperti senyawa aroma atau
prekursor masing-masing (poliol dan glikokonjugat), dari campuran alam yang kompleks [59].
Aplikasi dari kolom CCC hidrodinamik kumparan multilayer untuk analisis prekursor rasa reaktif dari
Rosa damascena bunga dilaporkan [60]. Keserbagunaan, penyelesaian kekuatan CCC, dan
kemampuan analitisnya telah ditunjukkan dengan beberapa sistem sentrifugal planet kecepatan
tinggi analitik yang baru dikembangkan. Interfacing CCC dengan spektrometri massa disarankan oleh
Oko pada 1980-an. Ini menyediakan metodologi analitik yang mengintegrasikan keuntungan dari
CCC dengan batas deteksi rendah dan kemampuan identifikasi specometri massa [61-64].
Kemampuan termospray MS / CCC ditunjukkan dalam mengidentifikasi dan mengalien lignan bioaktif
dan struktural yang dikenal dari ekstrak mentah Schisandra rubiflora (Rhed et Wils), obat herbal
tradisional Cina untuk pengobatan hepatitis [65]. Pemisahan campuran auxin indole oleh HSCCC [63]
dicapai dalam waktu 20 menit dengan sangat baik pelat teoritis CCC. Efisiensi pemisahan terbaik
untuk indole-3-acetamide, asam indole-3-acetic, dan asam indole-3-butyric diperoleh pada coil
multilayer kecil yang nyaman untuk studi analitis (kolom 0,3 mm dan kapasitas 3-6 mL , diputar pada
3500 rpm), menggunakan sistem heksana-etil asetat-metanol-air (1: 1: 1: 1). CCC / MS diterapkan
juga untuk penentuan alkaloid, asam triterpenoic, mycinamicins, colistins, dll. [62]. Peralatan CCC
CCC juga berhasil menggunakan forarasi hydroxyanthraquinones dari obat tradisional Cina Rheum
officinale Baill (Dahuang) dan Polygonum cuspidatum Sieb. Et Zucc (Huzhang) [50,51]. CCC
hidrodinamik kolom dapat digunakan untuk pemisahan hormon tanaman indole [31,52], tanaman
alkaloid [31], dan s-triazine herbisida [53,54] dan untuk isolasi produk alami bioaktif [55]. Pembagian
efisien timbangan analitik ditunjukkan untuk pemisahan hormon tanaman indole dengan kumparan
multilayer dalam sentrifugal dengan kapasitas total hingga 10 mL dalam heksana-etil asetat -
metanol - air (rasio volume 1: 1: 1: 1) [ 31,56]. Sistem hexane-ethyl acetate-methanol-water pada
rasio volume yang berbeda digunakan untuk pemisahan indole oleh HSCCC dalam 40 mL kolom [57].
Keempat hormon tanaman indole benar-benar teratasi tetapi hanya dalam 90 menit, yang lambat
untuk aplikasi analitik rutin. Namun, harus disebutkan bahwa ligan bioaktif sering sangat mirip dalam
struktur, dan sangat sulit untuk mendapatkan ligan individu dalam bentuk murni mereka untuk
evaluasi farmakologis. Pemisahan lengkap bioaktif lignan schisanhenol dan asetat dalam kolom
kumparan multilayer menggunakan sistem n-hexane-etanol-air (6: 5: 5) [62] adalah contoh yang
menunjukkan bahwa HSCCC dapat menjadi metode pelengkap untuk HPLC. bahkan jika
pemisahannya tidak cepat. Pemisahan campuran buatan vincamine [58], alkaloid utama Vinca minor
(Apocynaceae) dan vincine (11-methoxyvincamine), dilakukan pada centrifuge dengan kolom
multilayer (0,85 mm id) menggunakan hexane-ethanol-water sistem (6: 5: 5). . Perbandingan
pemisahan dengan hasil yang diperoleh oleh RP-HPLC menunjukkan bahwa kedua metode
memberikan resolusi dasar puncak yang baik, tetapi dimungkinkan untuk mendapatkan puncak
tambahan dari isomer vincine, yang tidak diselesaikan oleh HPLC. CCC digunakan dalam analisis rasa
untuk pemisahan zat labil, seperti senyawa aromatik atau prekursor masing-masing (poliol dan
glikokonjugat), dari campuran alam yang kompleks [59]. Aplikasi kolom kolom hidrodinamik CCC
multilayer untuk analisis prekursor rasa reaktif dari Rosa damascena bunga dilaporkan [60].
Keserbagunaan, resolusi kekuatan CCC, dan kemampuan analitis telah ditunjukkan oleh beberapa
sistem sentrifugal planet analitik kecepatan tinggi yang baru dikembangkan. Antarmuka CCC dengan
spektrometri massa disarankan oleh Oko pada tahun 1980-an. Ini menyediakan metodologi analitik
yang mengintegrasikan keuntungan dari CCC dengan batas deteksi rendah dan kapabilitas
identifikasi spesium massa [61-64]. Kemampuan termospray MS / CCC ditunjukkan dalam
mengidentifikasi dan mengasingkan lignin bioaktif dan struktural yang diketahui dari ekstrak mentah
Schisandra rubiflora (Rhed et Wils), obat herbal tradisional Cina untuk pengobatan hepatitis [65].
Pemisahan campuran auxin indole oleh HSCCC [63] dicapai dalam waktu 20 menit dengan pelat
teoritis CCC yang sangat baik. Efisiensi pemisahan terbaik untuk indole-3-acetamide, asam indole-3-
asetat, dan asam indole-3-butyric diperoleh dalam koil multilayer kecil yang nyaman untuk studi
analitis (kolom 0,3 mm dan 3-6 mL kapasitas, diputar pada 3500 rpm), menggunakan sistem hexane-
ethyl acetate-methanol-water (1: 1: 1: 1). CCC / MS juga diterapkan untuk penentuan alkaloid, asam
triterpenoic, mycinamicins, colistins, dll. [62] Peralatan analitis CCC dapat langsung terhubung ke frit
electron ionization (EI), ionisasi kimia (CI), dan atom cepat membombardir MS (FAB / MS) tanpa
pompa HPLC tambahan [62]. CCC-frit / MS dapat menjadi alat yang berguna untuk penyelidikan
produk alami (terutama untuk pemisahan zat penting biologis) dan juga dapat berhasil diterapkan
pada karakterisasi struktural produk alami. Kemampuan dan kekuatan penyelesaian CCC dalam
pemisahan beberapa campuran produk alami (eritromisin dan dehidrasi) dikombinasikan dengan ESI
/ MS telah dibuktikan [66]. Penerapan sistem CCC / ESI / MS diilustrasikan dengan pemisahan dan
deteksi senyawa biologis penting. Lima herbisida polar dipisahkan dan dikarakterisasi menggunakan
kombinasi CCC / ESI / MS online [67]. Sistem pelarut biphasic isokratik standar dari n-hexane-etil
asetat-metanol-air digunakan. Kromatografi digabungkan menjadi spektrometer massa tiga
kuadrupole melalui ESI / MS, memungkinkan spektrum massa untuk diperoleh dalam mode ion
negatif masing-masing senyawa. Batas deteksi dilaporkan untuk seri senyawa ini bersama dengan
perwakilan ion negatif dan kalibrasi data ESI / MS untuk pemisahan. CCC dapat berhasil terhubung
langsung ke major tanpa ESI / MS.

modifikasi pada antarmuka HPLC / MS konvensional. Metode CCC / ESI / MS dan APCI / MS on-line
juga digunakan untuk identifikasi flavonoid menggunakan sistem heksana-etil asetat-metanol-air
[68]. Analisis makanan CCC memiliki potensi untuk memainkan peran penting dalam analisis
makanan karena memungkinkan analisis sampel mentah dan kompleks. Salah satu keuntungan
utama CCC adalah ia dapat memisahkan zat-zat dari volume besar sampel semacam itu, yang
penting untuk analisis makanan. Potensi ini belum diakui di bidang pengujian makanan. Akhirnya,
menggabungkan pemisahan CCC dengan metode identifikasi dan pendeteksian analitik lainnya,
seperti spektrometri massa, elektroforesis kapiler, atau HPLC, secara potensial berguna untuk
analisis toksin pada makanan [69]. Salah satu penyakit yang paling sering adalah gastroenteritis yang
dihasilkan dari makanan yang terkontaminasi dengan Enterotoxin Staphylococcal A (SEA) yang
diproduksi oleh bakteri Staphylococcus auras. CCC dievaluasi untuk pemisahan SEA dari susu [70].
Sampel susu yang mengandung SEA dipisahkan pada kolom kumparan toroidal dengan kapasitas
total 13 mL. Sistem fase polimer, terdiri dari PEO 1000 dan dipotassium fosfat, digunakan sebagai
fase diam. CCC digunakan untuk pemisahan SEA baik alami dan panas denatured yang terkandung
dalam sampel kasar jamur dalam kolom dengan kapasitas total 18 mL [71]. Metode sederhana ini
tidak memerlukan persiapan sampel selain homogenisasi. Metode ini sekitar 10 kali lebih sensitif
daripada metode imunologi seperti western blotting karena sampel yang sangat besar dapat
diterapkan di CCC. CCC diterapkan pada analisis glikoglikolipid yang mengandung phosphocholine
(GGPL-I dan GGPL-III) dari Mycoplasma fermentans, yang dianggap sebagai salah satu
mikroorganisme penyebab rheumatoid arthritis (RA) [72]. Metode CCC adalah alat yang ampuh
untuk pemisahan lipid mikroorganisme dan, yang lebih penting, ia dapat menjadi alat yang berguna
untuk analisis interaksi host-patogen atau, dengan kata lain, interaksi lipid-protein di mikrodomain
lipid. Kolom hidrodinamik CCC digunakan untuk memisahkan monomer, dimer, trimer, dan oligomer
katekin dan / atau epikatekin dari procyanidins apel (tanin kental) [73]. Sifat farmakologi dari
procyanidins (efek menguntungkan pada sistem sirkulasi, anti-alergi dan aktivitas antibiotik, dll)
tergantung pada tingkat polimerisasi mereka, yang membuatnya perlu untuk menetapkan metode
pemisahan yang dapat diandalkan. NP, RP, dan eksklusi-ukuran LC cenderung menyebabkan adsorpsi
yang ireversibel terhadap proksianidin pada bahan pengemasan kolom, sedangkan tidak ada
kerugian yang diamati dengan pemisahan CCC [74]. Selanjutnya, beberapa polifenol yang
berhubungan dengan makanan, seperti oligomer katekin kental (pro-sianidin), asam fenolik, dan
glikosida flavonol yang jelas dipisahkan di bawah kondisi HSCCC yang sama. Pemisahan terbaik
prosianidin dicapai dengan sistem pelarut dua fase yang terdiri dari butan-1-ol- (metil tert-butil eter)
–acetonitrile – 0,1% TFA (2: 4: 3: 8) menggunakan fase bawah sebagai mo- empedu. Keberhasilan
pemisahan CCC katekin, glikosida flavonoid, dan prosianidin yang digunakan dalam analisis polifenol
terkait makanan juga dilaporkan [75]. Campuran uji standar yang terdiri dari 21 produk alami yang
tersedia secara komersial dari signifikansi pertanian digunakan untuk mengukur karakteristik kinerja
CCC dari keluarga sistem pelarut yang terdiri dari heksana-etil asetat-metanol-air. Sebuah metode
CCC elusi-ekstrusi dan pemilihan sistem dapat direkomendasikan untuk analisis berbagai anggur
[76]. Kolom CCC hidrodinamik khusus dengan 1-mm i.d. tabung polytetrafluoroethylene (PTFE)
digunakan untuk analisis ovalbumin yang diperoleh dari berbagai sumber [77]. Fraksi CCC dari
ovalbumin dari putih telur segar dan dari produk komersial yang mengandung albumin alami dan
produk terdeteksinya dideteksi secara spektrofotometri setelah pemisahan menggunakan sistem
berair biphasic yang mengandung PEO 1000 dan K2HPO4. Analisis lingkungan Teknik ini dapat
berguna dalam analisis lingkungan untuk prakonsentrasi jejak bahan organik dari volume besar air
dan sampel berair lainnya. Misalnya, surfaktan nonionik dari alkylphenyl poli (oxyethylene) eter
(APEO) keluarga, digunakan dalam detergen, pembersih, dan bantu proses, berhasil diperkaya dari
air limbah pada peralatan hidrostatik Sanki CPC [78,79]. Faktor konsentrasi 400 dicapai
menggunakan etil asetat sebagai fase ekstraksi stasioner. Kelayakan menggunakan kolom CCC
hidrostatik untuk mengekstrak µg / kg kadar fenol dan pestisida organoklorin (OCP) dari sampel
berair juga telah diteliti [80]. Efek pelarut ekstraksi (fase diam) dan volumenya, laju alir pemuatan
sampel, kekuatan ionik, dan keberadaan bahan humat dalam sampel berair pada ekstraksi 13 fenol
dan 20 OCPs telah diperiksa. Data pemulihan untuk analit-analit yang diekstraksi dari sampel air dan
air limbah yang bocor dilaporkan. Metilena klorida lebih efektif daripada heksana dalam
mengekstraksi fenol tetapi hanya sedikit lebih baik daripada heksana dalam mengekstrak OCP.
Senyawa target terkonsentrasi menjadi volume kecil pelarut (2 mL) dari volume matriks berair yang
relatif besar (> 100 mL).

Ion anorganik Studi selama 15 tahun terakhir telah menunjukkan bahwa teknik ini dapat diterapkan
untuk pemisahan analitik dan radio- lysis dan prakonsentrasi ion anorganik serta pemurnian
anorganik aloral reagen. CCC memiliki potensi dalam analisis jejak dan ultratrace untuk
prakonsentrasi logam sebelum penentuan multielement instrumental oleh spektrometri serapan
atom (AAS), emisi atom plasma induktif cou- (ICP / OES) dan spektrometri massa (ICP / MS). Dalam
alat CCC dengan kolom plastik, kaplet inlet dan outlet, larutan uji hanya bersentuhan dengan Teflon.
Ini meminimalkan risiko kontaminasi sampel. Selain itu, pelarut dan reagen yang digunakan dapat
dimurnikan sebelum pemisahan dan prakonsentrasi di kolom yang sama [81]. Penggunaan hanya
satu kolom juga merupakan keuntungan dalam kasus ekstraksi analit dari solusi sampel yang sangat
kompleks, misalnya, bahan geologi, ketika dua atau lebih sistem ekstraksi diperlukan untuk
memulihkan elemen target. Perlu juga disebutkan bahwa, seperti pemisahan organik atau
bioorganik, CCC memungkinkan seseorang untuk bekerja dengan sampel mentah yang mengandung
partikel koloid atau padat. Karena CCC cen- trifuge adalah sistem tertutup, akan lebih mudah untuk
bekerja dengan cairan radioaktif tanpa risiko radiasi radionuklida. Ini penting untuk studi radiokimia
yang aman. Untuk pemisahan dan prekonsentrasi zat anorganik oleh CCC, berbagai sistem cairan
dua fase digunakan. Karena kemungkinan menggunakan berbagai besar sistem ekstraksi cair-cair
(LLE), CCC dapat diterapkan sebagai prakonsentrasi dan teknik preseparasi untuk berbagai elemen
sebelum penentuan instrumen [22,81-89]. Lantanida dan aktinida Kutu yang dikenakan biaya dari
unsur tanah jarang (REE) sangat sulit dipisahkan karena diameternya hampir sama dan kemampuan
pengompleksannya serupa. Ekstraksi dan pemisahan UTJ dapat membantu memecahkan beberapa
masalah analitis. Selain itu, pemisahan unsur-unsur tersebut dapat menjadi tes yang baik untuk
memperkirakan efisiensi pemisahan teknik apa pun. 1. Hidrostatik CPC sentrifugal Pekerjaan
pertama pada penggunaan kolom hidrostatik (CPC) untuk pemisahan spesies anorganik yang
diterbitkan pada tahun 1988 oleh Araki [90]. Pemisahan dilakukan dengan sistem ekstraksi
berdasarkan bis (2-ethylhexyl) hidrogen fosfat (B2EHP) di toluena. Pemisahan La, Ce, Pr; La, Pr, Nd;
Pr, Nd; Nd, Sm; dan Sm, Eu menggunakan variabel HCl konsentrasi (dari 0,04 hingga 0,15 mol / L)
ditunjukkan. Resolusi puncak dapat ditingkatkan dengan meningkatkan jumlah microcell (dari 1200
hingga 2400) [91]. Belakangan, Araki dkk. [92] mempublikasikan studi mereka tentang perilaku CPC
dari REE yang lebih berat (Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, Lu) dalam penggunaan 0,01 mol / L
B2EHP dalam kloroform pada konsentrat HCl yang berbeda - trations dalam fase gerak dan
temperatur yang berbeda. Waktu pemisahan untuk REE terlalu lama (2-4 jam). Pemisahan CPC
cahaya lantanida berhasil dilakukan dengan menggunakan larutan B2EHP atau tributyl phosphate
(TBP) dengan alkana tidak bercabang sebagai fase stasioner dan larutan HNO3 berair sebagai fase
gerak [93–95]. Beberapa sistem lain digunakan untuk pemisahan Sc, Y, dan REE yang dikenakan tiga
kali [96]. BPK juga digunakan untuk pemisahan skala analitis REE trivalen oleh 0,1 mol / L Cyanex 272
[bis (2,4,4-trimethylpentyl) hidrogen fosfat] dengan heptana sebagai fase diam dan air pada pH yang
sesuai sebagai fase gerak [ 33]. Ini ditunjukkan untuk pertama kalinya bahwa campuran UTJ dapat
dipisahkan secara efisien dalam satu kali dijalankan oleh BPK menggunakan elusi gradien pH.
Pemisahan lantanida yang diisi tiga kali sehari dengan ekstraktan 1-fenil-3-metil-4-benzoil-pirazol-5-
satu (HPMBP) dan 1-fenil-3-metil-4-kaprilil — pyrazol-5-satu (HPMCP) dalam pasangan fase toluene-
air dan faktor-faktor yang mempengaruhi efisiensi pemisahan telah diselidiki [97]. Perbedaan
signifikan yang diamati dalam efisiensi pemisahan dengan HPMBP dan HPMCP, yang berasal dari
perbedaan dalam konstanta tingkat disosiasi antar permukaan kompleks logam dan daerah
antarmuka yang dihasilkan, menunjukkan bahwa pemisahan CPC ion lantanida dibebankan dengan
asilpyrazolones dalam fase toluene-air pasangan didorong terutama oleh proses antarmuka.
Pemisahan NdIII, UIV, dan UVI berhasil dilakukan dalam waktu sekitar 1 jam dengan memilih 30%
larutan TBP di n-dodecane sebagai fase diam dan 0,3 mol / L HNO3-0,05 mol / L hidrazin sebagai fase
gerak [23] . Americium dipisahkan dari lantanida ringan menggunakan larutan oksida 5,8-di-ethyl-7-
hydroxydodecan-6-one (LIX 63) dalam minyak tanah sebagai fase diam [98]. 2. Sentrifugal
hidrodinamika berkecepatan tinggi (HSCCC) Ito [99] REE terpisah menggunakan sistem dua fase fase
B2EHP. Resolusi puncak antara La dan Pr adalah 6,95, dan bahwa antara Pr dan Nd adalah 1,74.
Untuk lebih mendemonstrasikan kemampuan metode, pemisahan satu langkah dari semua 14 RE1E
dilakukan menggunakan gradien eksponensial dari konsentrasi HCl dalam fase gerak [100]. Seluruh
kelompok REE juga dipisahkan dalam sistem di-hexyl-N, N-diethylcarbamoyl methylenephosphonate
(DHDECMP) di cyclohexane-HNO3 [101]. Sayangnya, waktu pemisahan selama 2 jam. REE diperkaya
ke dalam fase stasioner yang terdiri dari larutan natrium fosfat bis (2-etilheksil) dalam toluena dari
volume besar larutan berair, dan kemudian secara kromatografi dielusi oleh fase gerak dengan
gradien pH bertahap [102-106]. Parameter pemisahan (N dan RS) ditemukan secara praktis
independen dari kecepatan revolusi dan laju aliran yang disediakan rasio retensi (SF) dari fase diam
tetap konstan [102]. Pemisahan REE dengan faktor pemisahan (α) serendah 1,86 (Y / Ho) dan 1,51
(Er / Y) hampir sepenuhnya dicapai dalam langkah CCC tunggal dengan resolusi puncak yang baik (RS
= 1,55 untuk Y / Ho dan 1,05 untuk Er / Y [102]). Teknik CCC digunakan praktis untuk prakonsentrasi
dan pemisahan jejak UTJ dari konstituen utama dari berbagai sampel geologi setelah dekomposisi
mereka, untuk penentuan selanjutnya oleh ICP / OES dan MS [88,90]. Tiga sistem ekstraksi
berdasarkan B2EHP, trioctylphosephine oxide (TOPO) dan diphenyl (dibutylcarbamoylmethyl)
phosphine (Ph2Bu2) terbukti dapat diterapkan pada pemisahan kelompok UTJ dari sampel batuan,
bijih, dan mineral yang terlarut (basal) , granit, dolomit, bijih fluorit-barit-hidropatit, syenit, dll.).
Pemisahan satu tahap UTJ dari sebagian besar komponen matriks dicapai (Gbr. 6). Metode yang
diusulkan pemisahan kelompok UTJ oleh CCC karena kesederhanaan mereka, fleksibilitas, dan waktu
pemisahan yang relatif singkat, dapat dengan mudah bersaing dengan metode lain [107.110].
Penentuan konsentrasi isotop Nd dan Sm dalam sampel batuan adalah masalah analitis lain yang
dapat diselesaikan dengan menggunakan CCC [88]. Rasio isotop ini memungkinkan seseorang untuk
menilai usia bebatuan. Kualitas analisis MS tergantung pada kemurnian fraksi elemen yang akan
dianalisis. Karena Nd dan Sm memiliki isotop dengan massa yang sama, Nd harus benar-benar
terpisah dari Sm. Selain itu, pecahan Nd dan Sm yang terputus harus bebas dari beberapa unsur
kontaminan (Ba, Ca, Fe, dan lainnya) yang dapat mengganggu ionisasi pada MS. 1,0 mol / L B2EHP
dalam sistem decane-HCl digunakan untuk pemisahan Nd dan Sm serta untuk isolasi kedua elemen
dari mayoritas konstituen utama bahan geologi

Gambar figur 6-7

Sebuah prosedur untuk seluruh prakonsentrasi kelompok REE dari kalsium klorida kemurnian tinggi
dan penentuan selanjutnya dari elemen ultratrace oleh ICP / MS telah dikembangkan [111]. Suatu
larutan difenil (dibutilkarbamoylmetil) fosfin oksida dalam kloroform (0,5 mol / L) dipilih sebagai
reagen untuk ekstraksi dan prakonsentrasi UTAMA dari larutan 5% CaCl2 encer. Konsentrasi UTJ
dielusi menjadi volume kecil air, dan eluat berair menjadi sasaran pengukuran ICP / MS. Karakteristik
kinerja prosedur telah diperiksa dengan menganalisa yang nyata sampel CaCl2 (merek produk). Hasil
yang diperoleh menunjukkan penerapan CCC untuk analisis ultratrace. Sistem ekstraksi berdasarkan
reagen organophosphorus netral bidentat disarankan untuk diterapkan pada pemisahan kelompok
unsur transplutonium trivalen (TPEs) dari jejak dan jumlah makro REE [112-114]. Konstanta partisi
yang lebih tinggi untuk semua TPE daripada untuk semua UTJ adalah keuntungan utama dari sistem
ini. Pemisahan hanya membutuhkan 17-20 menit dalam kolom 20 mL diputar pada 500 rpm.
Pemisahan elemen secara teokratis dimungkinkan, tetapi pemisahan dengan elusi bertahap lebih
efisien karena cara ini menghasilkan volume eluen yang lebih kecil. Efek konsentrasi ekstraktan, pH
dan laju aliran fase gerak pada efisiensi pemisahan Am dan Eu oleh CCC diselidiki menggunakan
asam dichloro phenyldithiophosphinic di xy-lene sebagai fase diam dan 0,1 mol / L NaClO4 sebagai
fase gerak [115 ]. Hasilnya menunjukkan bahwa faktor pemisahan tumbuh dengan meningkatnya
konsentrasi ekstraktan dan nilai pH fase gerak. Perpisahan timbal balik antara AmIII dan EuIII dapat
dicapai dengan mengoptimalkan kondisi pemisahan, faktor pemisahan, dan efisiensi pemisahan
antara AmIII dan EuIII + dapat mencapai 2,87 dan 0,74, masing-masing. Pemisahan Am dari lantanida
ringan telah dilakukan pada kolom melingkar kecil (10 mL) [116]. Ekstraktan yang memiliki afinitas
tinggi untuk Am, LIX 63 digunakan sebagai fase diam. Puncak dari 241Am dan 152Eu jelas terpisah
satu sama lain. Kuantitas dan komposisi isotop plutonium yang dilepaskan ke lingkungan adalah
perhatian untuk lingkungan dan radiokimia. Hasil analisis ultratrace plutonium dalam tanah dengan
menggunakan pemisahan CCC diikuti dengan penentuan ICP / MS telah dipublikasikan [117]. Efek
matriks (poliatomic interferences) diminimalkan dengan menggunakan langkah preseparasi CCC
dengan larutan tri-oktilamin 20% dalam toluena sebagai fase diam. Unsur-unsur matriks yang
mengganggu, thorium dan ura-nium, dielusi dengan menggunakan 7,5 mol / L HNO3, 10 mol / L HCl,
dan 3 mol / L HNO3, masing-masing. Faktor pemisahan 105 untuk thorium dan 104 untuk uranium.
Plutonium hampir sepenuhnya pulih menggunakan 5 mL 0,025 mol / L asam oksalat-0,15 mol / L
HNO3 [118]. Kemampuan pemisahan kolom CCC hidrodinamik sehubungan dengan aktinida
biasanya ditemukan lebih unggul daripada kolom hidrostatik (CPC) [119]. ZrIV, HfIV, TaV, dan NbV
Group preseparation dari ZrIV, HfIV, TaV, dan NbV diinginkan dalam analisis sampel geologi
komposisi yang berbeda mengandung jumlah jejak elemen-elemen ini. Presonentrasi Zr dan Hf dan
pemisahan mereka dari Fe (komponen makro yang paling sering menjadi sumber interferensi
spektral) memungkinkan untuk mengurangi pengaruh antar elemen dan untuk meningkatkan
sensitivitas penentuan mereka oleh ICP / OES. Prekonsentrasi dan pemisahan Zr dan Hf pada kolom
CCC hidrodinamik dengan kumparan satu lapis (volume 17 mL, kecepatan putaran 450 rpm) dalam
sistem atas dasar campuran dua reagen ekstraksi, B2EHP dan N-benzoyl-N- phenyl- hydroxylamine
(BPHA), dicapai [88]. Pemisahan dilakukan dengan langkah elusi. Pada tahap pertama, Zr dan Hf
terkonsentrasi pada fase diam, sementara Fe dan elemen lainnya dielusi. Kemudian Zr dan Hf dielusi
menggunakan larutan asam oksalat sebagai fase gerak. Sebuah sistem dengan tetraoctyl "ethane-
1,2-diamine" di kloroform dapat diterapkan untuk prakonsentrasi Zr, Hf, Nb, Ta untuk penentuan
mereka dalam sampel geologis [90]. Pada tahap konsentrasi, alkali, alkali-bumi, dan unsur tanah
langka, Fe, Al, Cu, telah dihapus dari kolom. Kemudian Zr, Hf, Nb, dan Ta dipisahkan menjadi 10 mL 2
mol / L HCl. Zn dan Cd dielusi dengan 1 mol / L HNO3 pada tahap regenerasi fase stasioner.
Menggunakan 0,001 mol / L 1-phenyl-3-methyl-4-benzoyl-5-pyrazolone dalam "isobutyl methyl
ketone" sebagai fase diam, pemisahan Zr dan Hf dapat dicapai [90,120]. Pemisahan dilakukan
dengan langkah elusi.

Unsur alkali dan alkali-tanah Sistem 0,01 mol / L kobalt dicarbollide (CD) -nitrobenzena-HNO3 solusi
dan 0,05 mol / L dicyclo- heksano-18-mahkota-6 (DCH18C6) -3% B2EHP-kloroform-HNO3 solusi yang
digunakan untuk pemisahan radionuklida Cs dan Sr [87, 121]. Penerapan fase stasioner atas dasar
CD memungkinkan konsentrasi Cs dan Sr yang akan dicapai. Elusi Cs dan Sr dari fase diam atas dasar
DCH18C6 dan B2EHP menjadi fase gerak, mengandung barium nitrat, PEO, dan asam nitrat, telah
dipelajari. Berbagai varian pemisahan Cs dan Sr dengan mengubah komposisi fase gerak dapat
diperoleh. Elusi kuantitatif dan pemisahan lengkap Cs dan Sr melalui satu eluen atau elusi langkah
adalah mungkin. Prosedur yang terakhir lebih cepat dan memungkinkan pengupasan elemen
menggunakan fase gerak yang lebih sedikit. Nilai jumlah pelat teoritis (N) bervariasi dari 77 hingga
836, yang memadai untuk pemisahan yang dijelaskan. Sistem ekstraksi berdasarkan eter mahkota
diketahui sesuai untuk pemisahan Rb, Ca, Sr, dan Ba [122]. Contoh pemisahan Sr dari elemen lain
pada kolom hidrodinamika dengan kumparan satu-lapis dalam 0,1 mol / L DCH18C6-kloroform – 5,0
mol / L HNO3 sistem fase dilaporkan. Pemisahan selektif Rb juga dapat dicapai dalam sistem berbasis
DCH18C6 tetapi dengan penggunaan picrate (Pi-) sebagai ganti nitrat sebagai Pi– adalah kontra-ion
yang lebih baik untuk kompleks metal-crown ether cationic. Logam kelompok platina Pemisahan PdII
dari PtIII, IrIII, dan RhIII dengan TOPO di heptana menggunakan centrifuge CPC diinspirasikan [123].
Pemisahan Pd dari Pt dicapai dalam 0,5 mol / L TOPO dalam heptana-0,1 mol / L HCl sistem dengan
resolusi puncak 1,54 dan <0,3% puncak tumpang tindih. Sistem yang sama digunakan untuk
pemisahan Pd dari logam kelompok Pt lainnya. Efisiensi pemisahan CPC untuk mendistribusikan
spesies, kompleks ion Pt, dan zat terlarut organik (3-picoline) untuk pasangan heptana-air telah
dibandingkan [124]. Analisis efisiensi kromatografi dalam pemisahan yang melibatkan partisi
kompleks logam jelas mengungkapkan pengaruh ki-kiik pembentukan kompleks dan disosiasi pada
efisiensi kromatografi dan memberikan deskripsi semi-kuantitatif dari parameter kinetik yang
relevan. Berbagai elemen 1. Hidrostatik CPC sentrifugal Sebuah metode telah dikembangkan untuk
saling pemisahan ion logam seperti CuII, MnII, CoII, dan NiII dengan asam di-2-
methylnonylphosphoric di heptana sebagai fase diam [125]. Sistem CPC digunakan dengan 2136
saluran partisi, pada kecepatan rotasi 800 rpm. Empat ion logam dapat dielusi secara terpisah
dengan mengubah pH larutan asam kloroasetat sebagai fase gerak dalam dua langkah. Kurva elusi
diperoleh dengan memantau absorbansi masing-masing kompleks logam pasca-label dengan
resorilol 4- (2-pyridylazo). Pemisahan FeIII, ZnII, CuII, CoII, dan NiII telah diteliti dengan
menggunakan 0,16 mol / L bis (2-ethylhexy) asam fosfat dalam heptana sebagai fase diam [126].
Asetat, chloroacetate, dan buffer tar digunakan sebagai fase gerak. Kation CoII yang ada dalam
larutan sulfat NiII yang tidak dimurnikan juga bisa dipisahkan dengan metode ini. Larutan sampel
terus dikirim ke fase stasioner, dan kation CoII ditemukan dipertahankan dalam fase diam. Sistem
CPC dioperasikan dengan 2136 saluran partisi dengan kecepatan rotasi 800 rpm. 2. Hidrodinamika
sentrifugasi (HSCCC) Pemisahan CoII, CuII, FeII, FeIII, NiIII, dan Mg dilakukan dengan kolom CCC
hidrodinamik [127]. Pemisahan, menggunakan B2EHP dalam heptana (fase diam) dan asam sitrat
encer (fase gerak), dapat dioptimalkan dengan memilih konsentrasi asam yang tepat. Deteksi
berkelanjutan dari elemen dilakukan oleh spektrometer emisi atom arus searah langsung. Setiap
puncak elemen dipecahkan dengan baik, N mulai dari 200 hingga 3600. Tingkat mg / kg ion logam
dalam 500 mL fase gerak terus terkonsentrasi menjadi volume kecil fase diam (B2EHP dalam
heptana) yang dipertahankan.

Ion logam terkonsentrasi dielusi dengan asam nitrat dan kemudian ditentukan. Keserbagunaan
metode ini lebih lanjut ditunjukkan dalam penentuan jejak logam di perairan yang berbeda. Ion
logam secara efisien diperkaya oleh puncak pH yang memfokuskan HSCCC . Intensitas puncak untuk
sampel standar 10 mL dalam aliran limbah meningkat lebih dari 100 kali lipat (deteksi oleh ICP /
OES). Ca, Cd, Cu, Mg, Mn, Ni, dan Zn secara kromatografis diekstraksi menjadi fase stasioner organik
yang mengandung B2EHP. Setelah larutan sampel dimasukkan ke dalam kolom, ion logam tetap di
sekitar batas pH tajam yang terbentuk antara zona asam dan basa, bergerak menuju outlet kolom.
Ion logam yang diperkaya akhirnya dielusi dengan batas pH tajam sebagai puncak yang sangat
terkonsentrasi menjadi volume kurang dari 100 mL. Metode ini dievaluasi dalam hal efisiensi
konsentrasi dan resolusi puncak dari elemen target dari matriks dalam analisis jejak sampel
lingkungan dalam kondisi yang berbeda [130]. FeII dan FeIII dipisahkan menggunakan langkah elusi
penurunan pH dengan fase diam yang mengandung 5 mmol / L TPMDPD dalam n-dekana dan kolom
CCC hidrodinamik dengan koil tunggal kecil 16 mL [131]. Kromatografi perpindahan adalah cara
menggunakan teknik kromatografi di mana zat terlarut dipisahkan dalam band dalam fase diam.
Karena fase diam adalah cairan dalam CCC, adalah mungkin untuk menghentikan proses
perpindahan ketika band yang terpisah masih dalam fase diam. Pengumpulan pita fase-stasioner
dimungkinkan. Cara menggunakan instrumen CCC ini dijelaskan untuk pemisahan ion transisi-logam.
CoII, NiII, CuII, dan ZnII dipisahkan menggunakan B2EHP di heptana sebagai fase stasioner melalui
proses ekstraksi misel terbalik [132]. Proses pemilahan dan pengumpulan fase heptana stasioner
memungkinkan pemulihan pita ion dengan kemurnian lebih tinggi dari 95%. Makalah [103.104.106]
menarik secara teoritis karena mereka menunjukkan kemungkinan menggunakan puncak pH fokus
dan kromatografi perpindahan untuk pemisahan CCC ion logam. Namun, prosedur yang dijelaskan
dapat diragukan direkomendasikan untuk aplikasi praktis karena ada sejumlah metode pemisahan
dan prakonsentrasi yang sangat baik untuk elemen yang dipelajari, terutama dalam analisis air.
Pemurnian larutan garam oleh CCC Penerapan CCC telah diteliti untuk pemurnian larutan garam
(untuk memperoleh pereaksi kemurnian tinggi, yang setelah penguapan, dapat digunakan untuk
tujuan dekomposisi fusi dalam analisis jejak keramik berteknologi tinggi dan bahan lainnya ) [133].
Ada perbedaan dalam tujuan prakonsentrasi analitik dan prosedur pemurnian: dalam kasus
pemurnian, konstituen yang dimurnikan dari larutan berair adalah komponen target, sedangkan
elemen jejak (TE) dianggap sebagai pengotor untuk dipisahkan dan dibuang. Dalam hal ini, jumlah
maksimum TEs harus dipisahkan dalam satu kromatografi. Persyaratan lain yang harus dipenuhi
dalam penggunaan metode pemurnian apa pun terkait dengan kemurnian semua bahan kimia yang
diterapkan dan dengan dekontaminasi minimum yang diperlukan dari solusi yang terlibat, yang
mungkin karena kontak mereka dengan bahan perangkat. Seperti telah disebutkan sebelumnya,
ketika menggunakan kolom CCC hidrodinamik, solusinya hanya berhubungan dengan Teflon, yang
merupakan salah satu bahan inert yang paling dikenal. Kemungkinan pemurnian larutan berair
garam anorganik, seperti (NH4) 2SO4, NH4F, dan NH4Cl, dari sejumlah kotoran logam yang paling
umum ditunjukkan dengan menggunakan azepan-1-yldithioformic acid, diethylammonium
diethyithithocarbamat, 8-hydroxyquinoline , dibenzo-18- crown-6 (DB18C6), dan DCH18C6 sebagai
mengekstrak reagen. Larutan yang diperoleh bebas dari Fe, Cu, Zn, Co, Cd, Ni, Mn; ini membuktikan
pemurnian lengkap larutan garam dari unsur-unsur yang terdaftar. Perlu dicatat bahwa kontaminasi
larutan oleh bahan kolom, reagen, dan pelarut organik dikontrol. Isi unsur dalam air dan 2 mol / L
HCl melewati kolom kurang dari batas deteksi untuk spektrometri serapan atom elektrotermal (ET /
AAS).

Campuran HMDTCA, DCH18C6, dan DB18C6 dalam kloroform memungkinkan pemurnian larutan 1%
(NH4) 2SO4 dari K, Fe, Cu, Zn, Co, Cd, Ni, Al, Mn; konsentrasi mereka dalam larutan murni berada di
bawah batas deteksi untuk ET / AAS. Oleh karena itu, memvariasikan komposisi fase organik dapat
memberikan pemurnian "lengkap" larutan garam dari TE kontaminan.

APLIKASI LAIN DARI KOLOM CCC HYDRODYNAMIC Sejauh ini, pemisahan zat terlarut dalam sistem
fase cair-cair telah dijelaskan. Tetapi juga dimungkinkan untuk menggunakan sistem cair-padat-cair
dan cair-padat juga. Penggunaan bahan partikulat tersuspensi sebagai fase diam telah menawarkan
tantangan untuk serangkaian aplikasi konvensional yang tidak menjanjikan dari sentrifugal planet
dalam analisis sampel padat lingkungan. Metode baru yang efektif untuk pemulihan langsung zat-zat
organik beracun (hidrokarbon aromatik polisiklik, PAH) dari limbah lumpur liuk [134] dan tanah [135]
telah diusulkan. Metode aliran berkelanjutan baru juga telah dikembangkan yang memungkinkan
tidak hanya fraksinasi yang cepat dan efisien dari spesies TE dalam tanah dan sedimen yang harus
dicapai tetapi juga memungkinkan studi yang diselesaikan secara waktu (kinetik) pada mobilisasi
jejak dan elemen utama dalam formulir yang harus dibuat [136–138]. Metode ini menghemat waktu
dan hanya membutuhkan 4-5 jam daripada beberapa hari diperlukan untuk ekstraksi berurutan rutin
(secara tradisional digunakan untuk fraksinasi TEs untuk menilai mobilitas mereka dan
bioavailabilitas potensial). On-line penggandengan pencucian oleh kolom CCC hidrodinamik dan
pengukuran ICP / OES telah diusulkan [139]. Ini memungkinkan data real-time pada proses pelindian
yang akan diperoleh. Ini juga telah menunjukkan bahwa kolom hidrodinamik dapat berhasil
digunakan dalam bidang aplikasi baru ini: untuk fraksinasi mikropartikel [140.141]. Tidak ada fase
diam konvensional dalam kasus ini. Gaya sentrifugal yang bekerja pada kolom CCC hidrodinamik
menyediakan kecepatan migrasi yang berbeda dari komponen sampel yang ditangguhkan dalam
satu cairan pembawa.

Pemulihan PAH dari lumpur limbah cair dan tanah. Kontaminan organik, misalnya, PAH, tersebar luas
di lingkungan sebagai akibat dari aktivitas manusia. Penentuan yang cepat dan tepat dari polutan-
polutan ini di tanah, sedimen, dan lumpur limbah merupakan kebutuhan vital untuk pengelolaan
lingkungan. Ekstraksi analit dari sampel padat tetap merupakan langkah penting dalam analisis
kontaminan. Serangkaian metode ekstraksi telah diusulkan untuk pemulihan PAH. Dalam
kebanyakan kasus, prosedur pembersihan yang lebih banyak atau lebih sulit diperlukan sebelum
penentuan instrumen PAHs dalam ekstrak. Sentrifugal hidrodinamik dapat digunakan untuk ekstraksi
langsung dan pemisahan beberapa zat organik (misalnya, xenobiotik) dari media lumpur limbah
[135]. Telah ditunjukkan bahwa sampel heterogen dapat disimpan di kolom berputar. Lumpur
limbah (yang sebenarnya merupakan suspensi terkonsentrasi) adalah fase diam dalam kolom,
sedangkan pelarut organik (heptana, diklorometana) atau campurannya digunakan sebagai fase
gerak. Volume suspensi yang dipertahankan dalam kolom tergantung pada perbedaan kepadatan
antara fase stasioner dan fase bergerak, dan parameter operasi centrifuge. Meskipun pemisahan
PAHs berikutnya dari media lumpur limbah telah dilakukan, pemisahan kelompok PAH diikuti oleh
penentu kuantitatif mereka oleh HPLC dengan detektor fluoresensi dapat lebih berguna. Prosedur
yang dikembangkan terlihat menjanjikan dan dapat direkomendasikan untuk menganalisis sampel
mentah (seperti lumpur limbah) tanpa pretreatment sampel. Selain itu, penggunaan pelarut “ringan”
yang tepat untuk ekstraksi dinamis menggunakan sentrifugasi ini mungkin sangat perspektif untuk
simulasi proses yang terjadi secara alami dan penentuan bentuk-bentuk PAH dan polutan lain yang
relevan secara lingkungan dalam padatan lingkungan.

Fraksi kontinyu dari TE dalam padatan lingkungan Mobilitas dan bioavailabilitas TE dalam tanah,
sedimen, dan lumpur sangat bergantung pada bentuk kimia dan jenis pengikatannya, yaitu proses
penyerapan / desorpsi dapat secara signifikan mempengaruhi toksisitas logam di lingkungan alam [
142]. Akibatnya, data total konten elemen cukup tidak cukup untuk memperkirakan risiko
kemungkinan mobilisasi TE dan potensi penyerapan unsur-unsur yang dibebaskan oleh biota. Jadi,
teknik dan prosedur analitik untuk membedakan bentuk-bentuk berbeda (spesies) TE diperlukan.
Suatu pendekatan yang telah ditemukan lebih disukai adalah fraksinasi TE menjadi bentuk yang
ditentukan secara operasional di bawah tindakan berurutan dari ekstraktan yang berbeda. Ekstraksi
selektif, yang digunakan dalam prosedur ekstraksi berurutan, ditujukan untuk simulasi kondisi alam
dimana TE yang terkait dengan komponen tanah tertentu (sedimen) dapat dilepaskan. Misalnya,
perubahan dalam komposisi ion yang mempengaruhi reaksi adsorpsi / desorpsi dapat menyebabkan
pelepasan unsur-unsur, yang tersimpan pada matriks oleh interaksi elektrostatik yang lemah.
Penurunan potensi redoks dapat menyebabkan pelepasan oksida, tidak stabil di bawah kondisi
reduksi. Ekstraksi berurutan harus direkomendasikan untuk memperoleh lebih banyak atau lebih
sedikit informasi rinci tentang asal, bioavailabilitas biologis dan fisikokimia, mobilisasi, dan
transportasi TE. Teknik aliran kontinyu baru telah diusulkan yang memungkinkan tidak hanya
fraksinasi yang cepat dan efisien dari spesies TE dalam tanah dan sedimen yang ingin dicapai tetapi
juga memungkinkan studi-studi yang diselesaikan secara waktu (kinetik) pada mobilisasi TE dalam
berbagai bentuk yang akan dibuat [ 137-140]. Sampel partikel dipertahankan dalam kolom berputar
sebagai fase stasioner di bawah aksi gaya sentrifugal sementara larutan berair dari reagen
pengompleks, asam mineral, dan garam dipompa secara kontinu. Prosedur yang dikembangkan
adalah hemat waktu dan hanya membutuhkan 4-5 jam daripada beberapa hari diperlukan untuk
ekstraksi sekuensial tradisional, otomatisasi lengkap menjadi mungkin.
PERBANDINGAN DENGAN TEKNIK ANALITIS LAINNYA, REKOMENDASI PENGGUNAAN, DAN
KESIMPULAN Meskipun CCC adalah teknik pemisahan yang efisien, umumnya tidak cukup perhatian
telah diberikan kepada CCC analitis, sedangkan banyak aplikasi yang sangat baik dari CCC persiapan
telah dilaporkan selama beberapa dekade terakhir. Salah satu tujuan utama dari makalah ini adalah
untuk menarik perhatian yang lebih luas dari komunitas analitis untuk metode yang menarik ini.
Karena ahli kimia analitik memiliki pilihan yang baik untuk teknik pemisahan dan prakonsentrasi
untuk berbagai zat dalam larutan dan karena CCC, sebagaimana metode lainnya, memiliki kelebihan
dan kekurangannya sendiri, perlu untuk membandingkan CCC dengan metode lain untuk pemisahan
dan pengayaan yang serupa. analit untuk menguraikan relung CCC dalam kimia analitik. Beberapa
perbandingan dibuat di atas ketika menjelaskan prinsip-prinsip CCC dan aplikasi analitisnya. CCC
paling sering dibandingkan dengan LLE satu tahap. Perbandingan dengan LLE berguna untuk
beberapa alasan. Dari sudut pandang fisikokimia, LLE dan CCC keduanya didasarkan pada partisi
substansi antara dua fase cairan bebas-dukungan. Perbedaannya adalah bahwa LLE hanya membuat
pertukaran tunggal (satu pelat) ketika CCC, dengan fase bergerak dan fase diam yang bergerak,
secara otomatis melakukan sejumlah besar pertukaran (beberapa pelat teoritis). Perbandingan
serupa dapat dilakukan antara pertukaran tunggal yang diperoleh dengan ekstraksi fase padat (SPE)
dan pertukaran ganda yang diamati dengan HPLC. Salah satu keuntungan besar dari metode LLE
adalah kemungkinan ekstraksi zat dalam jumlah sangat besar karena mereka dapat mengakses
volume dari dua fase dan tidak hanya permukaan fase padat seperti pada SPE. Inilah sebabnya
mengapa LLE secara luas digunakan sebagai alat pemurnian, tetapi tidak hanya pada skala
laboratorium, dan sejumlah besar informasi tentang kimia dan hidrodinamika LLE dari berbagai
senyawa telah diakumulasi oleh ahli kimia dan insinyur kimia. Kekayaan informasi ini dapat
diterapkan pada prediksi perilaku substansi di CCC, tentu saja, dengan mempertimbangkan fitur
khusus CCC. Keuntungan lain dari kedua LLE dan CCC atas teknik LC lainnya, elektroforesis kapiler
(CE) dan metode terkait adalah kemungkinan untuk bekerja dengan kuat.

larutan asam dan basa yang mungkin penting, terutama dalam analisis anorganik dan radiokimia di
mana solusi tersebut sering digunakan. CCC adalah teknik multistage yang memungkinkan
pemisahan yang jauh lebih baik daripada beberapa ekstraksi konvensional di corong pemisah. Dalam
teknologi LLE, proses multistage diterapkan dengan menggunakan kaskade ekstraksi yang terdiri dari
aparatus satu atau beberapa tahap seperti mixer-penetler, kolom yang berbeda, atau kontaktor
sentrifugal. Peralatan semacam itu tidak praktis untuk laboratorium analitik karena biayanya,
volume minimum yang besar, dan jumlah pelat yang lebih kecil yang dapat direalisasikan pada
aparatus yang cukup kecil. Sentrifugal CCC jauh lebih nyaman untuk digunakan di laboratorium. CCC
tidak akan pernah menggantikan teknik yang sangat bagus seperti HPLC tetapi dapat melengkapi itu
dalam memecahkan masalah analitis tertentu. Meskipun CCC menunjukkan efisiensi yang lebih
rendah dan membutuhkan waktu pemisahan yang lebih lama dibandingkan dengan metode seperti
HPLC dan CE, ia memiliki beberapa kelebihan. Karena CCC colnum tidak memerlukan dukungan yang
solid, CCC bebas dari adsorpsi zat terlarut ke kolom, dan pemulihan sampel dan reagen tanpa
kontaminasi atau dekomposisi adalah mungkin. Manfaat tambahan adalah bahwa harus
dimungkinkan untuk menggunakan kolom yang sama secara berulang untuk pemisahan dengan fase
stasioner yang berbeda. Seperti yang telah ditunjukkan di atas, CCC dapat digunakan untuk
pengayaan analit yang berbeda sebelum deteksi mereka. Metode serapan saat ini adalah pemimpin
di antara teknik analisis untuk prakonsentrasi berbagai zat dengan menggunakan adsorben yang
berbeda. Meskipun banyak bahan adsorpsi efektif diketahui, adalah mungkin untuk membandingkan
CCC dengan SPE pada alkil silika. Silika gel alkil-ikatan adalah kelas unik adsorben yang dapat
diterapkan untuk pengayaan sejumlah besar zat, mulai dari biomolekul dan senyawa organik [143]
hingga ion anorganik [144]. SPE pada gel silika yang terikat alkil harus dipertimbangkan sebagai
teknik adsorpsi, tetapi metodenya juga banyak sama dengan LLE karena lapisan alkil pada
permukaan silika berperilaku seperti pelarut organik di LLE atau CCC. Kisaran zat yang dapat
diekstraksi dan didekonsentrasi oleh CCC dari larutan samudera hampir sama lebar seperti dalam
SPE. CCC dapat digunakan untuk pemulihan analit dari media organik yang hampir tidak mungkin
dengan fase alkil-ikatan: pelarut organik digunakan untuk elusi zat prakonsentrasi dari fase tersebut.
Materi partikulat, polimer terlarut (misalnya, zat humat), dan komponen lain dari sampel "kasar"
dapat menyumbat kartrid SPE serta kolom HPLC dan menyebabkan kesulitan dalam studi CE. Contoh
aplikasi CCC yang diberikan di atas menunjukkan bahwa CCC jauh kurang sensitif terhadap komposisi
sampel mentah. Keuntungan SPE atas CCC adalah kemudahan penggunaan, biaya perangkat yang
lebih rendah, dan kemungkinan untuk mendapatkan eluat bervolume kecil (terkonsentrasi). Metode
adsorpsi memungkinkan isolasi cepat dari analit kepentingan dengan faktor prekonsentrasi dari
beberapa orde magnitudo yang dicapai dalam beberapa menit. Ini praktis tidak mungkin dilakukan
dengan CCC. Ini dan kerugian dan kelebihan lain dari metode pemisahan yang berbeda dibandingkan
dengan CCC dirangkum dalam Tabel 3.

Tabel 3.
Sebagai kesimpulan, kita dapat merumuskan beberapa rekomendasi tentang penggunaan CCC dalam
bidang kimia analitik berikut (sebagian besar sebagai teknik pretreatment):

• Analisis sampel yang mengandung partikel padat atau koloid, molekul tinggi, dan konstituen lain
yang mungkin menyambungkan kolom LC , kartrid pengayaan adsorpsi, dan filter, dan mengganggu
CE dan pemisahan lainnya.

• Isolasi dan pemisahan bahan biologis yang dapat didenaturasi dan hilang karena interaksi yang
kuat atau tidak dapat diubah dengan dukungan yang kuat. Bekerja dengan zat apa pun yang secara
permanen diserap ke bahan kemasan kolom LC.

• Analisis larutan yang mengandung konsentrasi asam, basa, garam, dan komponen sampel terlarut
tinggi lainnya yang dapat mengganggu preseparasi dengan teknik lain dan penentuan analit
berikutnya.

• Studi analisis radio untuk mengurangi risiko memaparkan radionuklida dengan menggunakan
sistem CCC tertutup.

• Ultratrace analisis anorganik. Penggunaan kolom CCC di mana sampel bersentuhan dengan hanya
Teflon meminimalkan risiko kontaminasi sampel.

• Pemurnian reagen analitis.

• Persiapan bahan referensi standar.

SINGKATAN DAN AKRONIM

ATPS sistem dua fase berair

APEO alkylphenol ethoxylate

Spektrometri serapan atom AAS

Kromatografi CCC berlawanan arah

CE elektroforesis kapiler

CPC kromatografi sentrifugal partisi

B2EHP bis (2-ethylhexyl) laju aliran volume hidrogen fosfat F (mL min - 1)

GA gibberellin GC

Kromatografi gas HSCCC saat ini berlawanan

ICP / OES kromatografi kecepatan tinggi secara induktif digabungkan plasma / ICP / MS emisi optik
spektroskopi induktif ditambah plasma / mass spectrometry k faktor retensi

Rasio partisi KD
Ekstraksi cair-cair LLE

Kromatografi cair LC

N nomor pelat teoritis

Pestisida organoklorin OCP

PEO poly (ethylene oxide)

REE elemen tanah jarang

Resolusi puncak faktor RS

SF fase fase retensi fase stasioner

Ekstraksi padat fase SPE dari

TB tributil fosfat

TOEDA tetraoctylethylenediamine

TOPO trioctylphosphine oxide trivalent

Unsur transplutonium TPE

Volume kolom VC

Volume sel fasa VM

Puncak volume retensi VR

Volume fase diam fase α faktor pemisahan dengan rata-rata lebar puncak