Nanomateriales antimicrobianos: por qué

importa la evolución

Joseph L. Graves, Jr. 1, * ,Misty Thomas 2

yJude Akamu Ewunkem 1

1

Departamento de Nanoingeniería, Escuela Conjunta de

Nanociencia y Nanoingeniería, Universidad Estatal de Carolina del
Norte A&T y UNC Greensboro, Greensboro, NC 27401, EE. UU.
2

Departamento de Biología, Universidad Estatal de Carolina del

Norte A&T, Greensboro, NC 27411, EE. UU.
*

Autor a quien debe dirigirse la correspondencia.

Recibido: 29 de agosto de 2017 / Aceptado: 18 de septiembre de
2017 / Publicado: 21 de septiembre de 2017
Resumen
:
Debido a la aparición generalizada de microbios resistentes a
múltiples fármacos, existe un interés creciente en el uso de nuevos
materiales nanoestructurados como
antimicrobianos. Específicamente, las nanopartículas metálicas
como la plata, el cobre y el oro se han desplegado debido a los
múltiples impactos que tienen en la fisiología bacteriana. De esto,
muchos han llegado a la conclusión de que tales nanomateriales
representan grandes obstáculos contra la evolución de la
resistencia. Sin embargo, ya hemos demostrado que este punto de
vista es falaz. Por esta razón, el significado de nuestros
experimentos iniciales está comenzando a ser reconocido en los
efectos antimicrobianos de la literatura sobre nanomateriales. Este
reconocimiento aún no se comprende completamente y aquí
explicamos con más detalle por qué la investigación de los
nanomateriales requiere una comprensión más matizada de los
principios básicos de la evolución microbiana.
Palabras clave:
Antimicrobianos; rieles; aclimatación; adaptación; evolución; genó
mica
1. Introducción
Ha habido mucho interés en utilizar nanomateriales diseñados
para una variedad de aplicaciones antimicrobianas en la agricultura
y la medicina. Sin embargo, gran parte de este trabajo ha sido
realizado por ingenieros y químicos que no entienden
completamente cómo los sistemas biológicos responden a nuevos
materiales en una escala de tiempo fisiológica o evolutiva. Por
ejemplo, Soto-Quintero et al. (2017) declaró:
Además, ambos sistemas de nanocompuestos de hidrogel
mostraron una actividad antibacteriana más efectiva contra P.
aeruginosa ... que contra E. coli ..., como se demostró con el halo
de inhibición superior. La explicación de este hecho podría
depender de la capacidad de E. coli para desarrollar resistencia a
metales pesados, particularmente para la plata.
[1]
Para respaldar esta afirmación, citaron nuestro artículo de 2015,
titulado Evolución rápida de la resistencia a las nanopartículas de
plata en Escherichia coli [ 2 ]. Desafortunadamente, esta afirmación
no está respaldada por los resultados que obtuvimos e indica que
los autores tienen un malentendido fundamental de los mecanismos
subyacentes de la resistencia antimicrobiana. Citar este ejemplo no
es de ninguna manera un intento de minimizar los logros científicos
de estos autores, sino de llamar la atención sobre el hecho de que
este tipo de errores todavía son comunes en la investigación de
materiales cuando se intenta evaluar la eficacia de los
nanomateriales metálicos contra el crecimiento microbiano
[ 3]. Este ejemplo nos permite exponer un punto más amplio sobre
cómo una comprensión más completa de la biología de los
microorganismos resultará en el progreso de la investigación de la
ciencia de los materiales para cumplir mejor con sus objetivos
generales. Por lo tanto, en este breve ensayo intentaremos aclarar
y proporcionar la biología básica que subyace a la resistencia
antimicrobiana (específicamente la resistencia a nuevos
nanomateriales) y por qué este conocimiento es crucial para
entender cómo diseñar materiales antimicrobianos que puedan
tener aplicaciones sostenibles.
2. Aclimatación fisiológica y adaptación evolutiva.
La homeostasis es una característica central autorreguladora de
los organismos biológicos que les permite, siempre que sea posible,
mantener su estabilidad interna y mantener un estado fisiológico
constante. Hay una serie de procesos homeostáticos que deben
preservarse para garantizar la supervivencia del organismo, incluida
la homeostasis del hierro, la homeostasis del metal, la homeostasis
del pH y la homeostasis de la membrana y los lípidos
[ 4 , 5 , 6 , 7 , 8 ]. Desde el comienzo de la vida en este planeta, los
microbios han estado expuestos a metales, algunos necesarios,
pero muchos que son tóxicos para las células [ 9]. El hierro es un
ejemplo de un metal requerido para sobrevivir, pero cuando se
encuentra en cantidades suficientes es tóxico. Con el fin de
mantener la homeostasis, las bacterias han ideado métodos para
controlar los niveles de hierro mediante el aumento o la disminución
de los genes implicados en una serie de mecanismos. Por ejemplo,
en respuesta a la falta de hierro, algunos secretan quelantes de
hierro de alta afinidad para maximizar la absorción y,
alternativamente, en respuesta a los niveles de hierro tóxico,
algunos regulan la expresión de proteínas y genes detoxificantes de
hierro implicados en el flujo de salida. La mayoría de esta regulación
diferencial depende de la proteína reguladora de la absorción férrica
(Fur) [ 4 ]. Por ejemplo, en Escherichia coli hay 7 sistemas de
adquisición de hierro que están controlados por 35 genes reprimidos
por hierro. Estos a su vez están todos regulados por Fur [ 4].
Prácticamente todas las bacterias han adquirido genes que
controlan su fisiología, lo que les permite resistir los iones metálicos
tóxicos (Ag + , Cd 2+ , Hg 2+ , Ni 2+,etc.). Para lidiar con estos metales
tóxicos, muchas bacterias expresan reguladores transcripcionales
sensibles a los metales que pueden detectar metales tanto
beneficiosos como tóxicos, lo que les permite adaptarse a sus
entornos con bastante rapidez y, como resultado, el flujo de energía
dependiente de la energía es el mecanismo de resistencia al metal
más comúnmente implementado entre los microorganismos
[ 5 , 9 ]. Nuestros estudios demostraron esto tanto en la resistencia
iónica como en la nanosilver (Ag + ) en E. coli [ 2 , 10]. Como
alternativa a un aumento en el flujo de salida, algunos otros
mecanismos de resistencia a los metales incluyen transformaciones
enzimáticas (oxidación, reducción, metilación y desmetilación) o la
expresión de proteínas de unión a metales (metalotioneína, SmtA,
chaperona CopZ, SilE [ 9 ]). Además, algunos clones pueden evitar
que los iones metálicos tóxicos entren a sus células a través de la
expresión de proteínas de transporte de la membrana, de las cuales
hemos encontrado evidencia para apoyar [ 2 , 10 , 11 , 12 ].
Finalmente, las bacterias pueden desarrollar fenotipos
persistentes en los que disminuyen su crecimiento o dejan de
dividirse en presencia de materiales tóxicos para prevenir las
consecuencias tóxicas de los metales [ 13 , 14 , 15 ]. Cuando este
proceso es exitoso, las bacterias se someten a aclimatación
fisiológica [ 16 , 17 , 18 ]. Esto puede ocurrir en la escala de minutos
a horas y estos cambios dependen no solo de la especie de bacteria
sino también de la cepa específica. Por ejemplo, un estudio previo
midió los cambios en la expresión génica en E. coli cepa XL-1 azul
expuesta a nanopartículas de plata incrustadas en membranas de
zeolita [ 19]]. Después de 30 minutos de exposición, mostraron un
aumento de 3.0 a 15.0 veces en la expresión de 24 genes. Como
una advertencia sobre cómo la adaptación fisiológica y evolutiva
puede no involucrar a los mismos genes, mientras que E. coli XL-1
blue y E. coli K12 MG1655 comparten muchos de sus genes,
ninguno de los que estaban regulados al alza en ese estudio eran
objetivos de selección en nuestro trabajo [ 2 , 10 ]. E. coli XL-1 blue
es una cepa de clonación que se ha sometido a una importante
ingeniería genética para ser optimizada para experimentos de
clonación y biología molecular (Stratagene), además, su fenotipo
base es resistente a la tetraciclina. Esto está en marcado contraste
con E. coliK12 MG1655 que es una cepa de laboratorio mantenida
con mutación mínima (PMID 9278503). Es posible que estos 25
cambios genéticos observados en el azul XL-1 hayan sido objetivos
iniciales de selección en la cepa K12 MG1655, pero en la
generación 100 no hubo evidencia de cambios de mutación a
frecuencias más altas en nuestras poblaciones. Alternativamente,
estas son cepas significativamente diferentes que desarrollarán
diferentes estrategias para resistir la toxicidad de metales pesados
que dependen de su base genética.
 La evolución por selección natural requiere tres elementos:
variación, herencia y lucha por la existencia. Dado que los microbios
mantienen poblaciones muy grandes (10 8 –10 9 por ml), siempre
hay una gran variación genética dentro de sus poblaciones. El gran
tamaño de la población garantiza que siempre habrá un número
adecuado de mutaciones en las poblaciones microbianas. Una
mutación, que es un cambio hereditario en la información genética
de un organismo, ocurre con mayor frecuencia debido a una
fidelidad reducida en las ADN polimerasas, las enzimas
responsables de la replicación del ADN, lo que hace que el proceso
sea ligeramente propenso a errores [ 20 ]. Por ejemplo, la tasa de
mutación en E. coli se ha estimado en ~ 1 × 10 −10 a 1 × 10 −9por
genoma por generación [ 21 , 22 ]. Por lo tanto, se debe esperar
que la célula de E. coli promedio con un tamaño de genoma de 4.6
millones de pares de bases muestre menos de 1 mutación por
célula. La mayoría de estas mutaciones serán neutrales o tendrán
un efecto mínimo para las células en su entorno [ 23 , 24 ]. El
número de variantes genéticas que esperaríamos en una población
de 10 9 microbios sería de entre 4.6 millones en el extremo superior
a aproximadamente 460.000 en el extremo inferior. Esto significa
que los microbios generalmente contienen grandes cantidades de
variación mutacional para responder a las nuevas condiciones
ambientales.
Bajo todas las condiciones en la naturaleza, las bacterias están
constantemente involucradas en una lucha por la existencia. Si este
no fuera el caso, simplemente por el crecimiento geométrico habrían
excedido la capacidad nutricional de la tierra hace mucho
tiempo. Agregar metales tóxicos al ambiente microbiano produce
una lucha por la existencia directamente relacionada con la
naturaleza de la toxina. Los organismos que no pueden impedir la
entrada de metales, responder con el flujo de salida o desintoxicarse
internamente se matan o se vuelven estériles. La respuesta inicial a
las toxinas es siempre fisiológica, sin embargo, siempre hay una
variación genética entre los microbios que logran sobrevivir en
presencia de la toxina y algunas de estas variantes genéticas
mostrarán un mayor éxito reproductivo en estas
condiciones. Cualquier mecanismo de resistencia que esté
codificado en el genoma se pasa a la siguiente generación
(heredable,
 También puede diseminarse a clones bacterianos no relacionados
dentro de una especie u otras especies de bacterias a través de la
transferencia horizontal de genes si la toxina permanece en el
ambiente. Como resultado, las variantes con mayor capacidad de
reproducción (éxito reproductivo diferencial) dominarán
rápidamente a la población a través del tiempo generacional hasta
que toda la población tenga estas variantes genéticas
específicas. Este proceso se denomina selección natural y es la
única fuerza impulsora de la adaptación evolutiva y, debido al
tamaño de las poblaciones microbianas, el curso de la evolución en
estos organismos es extremadamente rápido [ 25 ].
3. La evolución siempre está ocurriendo.
El hecho de que la evolución siempre esté ocurriendo en
poblaciones bacterianas significa que los investigadores que
desean comprender cómo un nanomaterial determinado va a
afectar a los microbios deben tener esto en cuenta en su diseño
experimental y, hasta el momento, esto es una debilidad en el
campo de los científicos de los materiales [ 3 ]. Por ejemplo, Brown
et al. utilizaron nanopartículas de plata (AgNP) funcionalizadas con
ampicilina (AMP) para reducir las poblaciones resistentes a
múltiples fármacos de Enterobacter aerogenes y Staphyloccocus
aureus[ 26]]. Pudieron mostrar una reducción de las cepas
bacterianas tratadas con AgNP-AMP a <1 unidad formadora de
colonias (CFU) con concentración creciente (4.0 y 20.0 μg / mL) de
AgNP-AMP en sus muestras en comparación con> 8 CFU en
controles no tratado con AgNP-AMP después de 8 horas. A primera
vista, estos resultados son prometedores, sin embargo, los autores
no discutieron la posibilidad de que las cepas bacterianas puedan
desarrollar resistencia al tratamiento combinado de AgNP-
AMP. Esta posibilidad es evidente en los datos que reportaron. Por
ejemplo, a concentraciones de 2.0 y 1.0 μg / mL las cepas de Vibrio
cholera , E. aerogenes y S. aureus(MRSA) mostró solo una ligera
reducción en relación con los controles (a 1.0 μg / mL, 9.19 ± 0.4,
7.48 ± 0.08, 8.67 ± 0.05 en comparación con los controles 9.23 ±
0.04, 9.56 ± 0.01, 9.06 ± 0.13 respectivamente y a 2.0 μg / mL
para E. aerogenes y S. aureus (MRSA) 5.36 ± 0.06, 4.64 ± 0.14 en
comparación con los controles 9.56 ± 0.01, 9.06 ± 0.13
respectivamente). Es precisamente cuando las bacterias
experimentan condiciones de toxinas que son concentraciones
inhibitorias mínimas (CIM) que la posibilidad de la evolución de la
resistencia es mayor y existe evidencia de que esto ocurre
ampliamente en la naturaleza. Por ejemplo, un estudio encontró que
las bacterias ( Klebsiella plantacola) aislado del río Kizilirmak en
Turquía mostró resistencia a 15 antibióticos (ampicilina, amoxicilina
/ ácido clavulánico, aztronam, eritromicina, imipenina, pefloxacina,
adormecina, adicción a la piel, adicción a la piel, adicción a la piel)
ácido, vancomicina) y 11 metales pesados (aluminio, bario, cobre,
hierro, plomo, litio, manganeso, níquel, plata, estroncio y estaño)
[ 27 ]. Este fenotipo de resistencia se origina por la exposición a
concentraciones sub-MIC tanto de los antibióticos como de los
metales que ingresan al flujo de desechos y luego al río. Dobias y
Bernier-Latmani 2013 demostraron que las nanopartículas de plata
podrían continuar liberando plata iónica en aguas naturales durante
aproximadamente 4 meses [ 28 ].
La resistencia a los antibióticos y metales compartidos puede
evolucionar a través de dos mecanismos, ya sea la adquisición de
un plásmido que lleva genes para ambos, como los miembros del
grupo de incompatibilidad IncHI-2 o mutaciones pleiotrópicas de
novo que impactan ambos rasgos [ 29 ]. Recientemente hemos
mostrado un ejemplo de esta última posibilidad en nuestro
laboratorio de investigación [ 30 ]. Utilizando la evolución
experimental para aumentar la resistencia de Fe 2+ y Fe 3+ en una
cepa de E. coli K12 MG1655. Hemos demostrado que
nuestras cepas resistentes al Fe también son resistentes a la
2+

ampicilina, polimixina B y rifampicina en relación con los controles y

el Fe 3+.Las cepas resistentes mostraron una mayor resistencia a los
controles relativos de cloranfenicol, polimixina B y
rifampicina. Hemos realizado la secuenciación del genoma
completo en estas cepas y hemos encontrado algunos barridos
selectivos en las líneas resistentes al Fe2 + y en las líneas
resistentes al Fe3 + que podrían explicar esta
pleiotropía. Específicamente, hemos encontrado mutaciones
en dnaK (ayuda a lidiar con el shock osmótico del daño de especies
reactivas del oxígeno, murC involucrado en la síntesis de la pared
celular y mrdA cataliza la reticulación de la pared celular del
peptidoglicano) y tolC, que está involucrado en las respuestas a los
antibióticos y el soporte transmembrana de iones, que podría
explicar la resistencia a los antibióticos [ 31 ].
4. Los genomas importan
Una característica constante de la investigación en ciencia de
materiales es el enfoque "estándar" para utilizar materiales
biológicos. Por ejemplo, mientras que Nagy et al. (2011) fue un
excelente estudio mecánico, los autores dedicaron mucho tiempo a
describir la síntesis de sus AgNP en zeolita, la caracterización de
AgNP-ZM y cómo llevaron a cabo la expresión de ADN y los
microarrays de expresión génica [ 19 ]. No explicaron por qué
eligieron E. coli XL-1 azul o cuáles eran sus características
genómicas en relación con lo que querían estudiar. Además, el
hecho de que lleve un plásmido resistente a la tetraciclina podría
alterar significativamente los resultados que hubieran visto en una
cepa de tipo salvaje considerando la pleiotropía que hemos
observado en nuestros estudios actuales. En contraste, nuestros
estudios utilizaronE. coli K12 MG1655, una cepa de laboratorio
mantenida con mutaciones mínimas, porque esta cepa contenía
solo una resistencia a la plata rudimentaria, codificada por el grupo
de genes cusCFBARS que se encuentra en todas las cepas de E.
coli [ 2 , 10 , 32 ].
En Soto-Quintero et al. (2017) los autores utilizaron cepas
específicas de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 25922)
y Escherichia coli (ATCC 2785) [ 1 ]. Sin embargo, es posible que
haya un error tipológico, ya que ninguna de las cepas está presente
en Entrez PubMed ni en la base de datos ATCC. La cepa
de Escherichia coli(ATCC 25922) está presente en la base de datos
de ATCC y esta cepa se puede encontrar en la base de datos de
nucleótidos de Entrez Pubmed, en oposición al hecho de que no hay
entradas para Pseudomonas aeruginosa(ATCC 25922) encontrado
en el sitio de ATCC o en la base de datos de Entrez Pubmed. A
pesar del posible error en la designación de la cepa, es más
problemático que la sección de materiales y métodos de este
documento no describa completamente las condiciones de cultivo
en las que se cultivaron estas bacterias. En estos experimentos, es
necesario que las cepas bacterianas, a corto plazo muestren
aclimatación fisiológica, o que a la larga se adapten no solo a las
condiciones experimentales sino a todas las condiciones
ambientales en las que el investigador está utilizando, y por lo tanto
Los detalles de los experimentos son esenciales para entender el
contexto de los resultados. Por ejemplo, es importante informar la
temperatura del cultivo, las rpm en la incubadora de agitación y si
se realizó en una incubadora de agitación. Además, es importante
discutir los mecanismos de resistencia a la plata en las especies en
cuestión, particularmente estas cepas específicas. Esto es crucial
ya que la transferencia horizontal de genes puede conducir a
grandes diferencias genómicas entre las cepas dentro de una
especie bacteriana, por lo que la microbiología moderna considera
más apropiadamente que las especies bacterianas están
compuestas de pangenomas. Por ejemplo, el pangenome
dePseudomonas aeruginosa puede estar entre 6.5 × 10 6 –7.4 ×
10 6 pares de bases y hay 16.820 genes no redundantes, de los
cuales 2503 se consideran parte del genoma central [ 33 ]. En 9108
genes adicionales se consideran parte de su genoma de
accesorios. El número promedio de genes que son únicos por cepa
es de aproximadamente 16. Un examen superficial del genoma del
núcleo de Pseudomonas aeruginosa revela que tiene la vía EnvZ-
OmpR que se demostró que contribuye a la resistencia de la plata
[ 2 , 10 , 33 ]. Además, esta bacteria tiene un sistema de bombeo
de salida de cobre (Cu 2+ ) codificado por copRS y copCBA.sistema
[ 34 ]. Las mutaciones en este sistema podrían reutilizar fácilmente
la bomba y prestarse al flujo de salida de plata (el cobre y la plata
se encuentran en la misma columna de la tabla periódica).
El hecho de que las especies y cepas de bacterias no sean una
cosa ni idénticas, nos lleva al hecho de que el pangenoma tiene un
efecto profundo en cómo interpretamos los resultados de cualquier
tratamiento antimicrobiano. Indicando que para cualquier bacteria
específica podemos esperar un conjunto de resultados específicos
para un antimicrobiano en particular (plata, hierro, antibiótico
tradicional, etc.) y no podemos necesariamente generalizar ese
resultado a cómo esperaríamos que el antimicrobiano trabaje contra
otra cepa bacteriana en el interior. el pangenome Por ejemplo, la
bacteria Cupriavidus metallidurans está especializada en
resistencia a metales y específicamente la cepa CH34 tiene más de
20 resistencias de iones metálicos diferentes [ 35]. Estos genes de
resistencia a metales se pueden encontrar en el cromosoma, en los
plásmidos y en los elementos transponibles móviles, lo que, por lo
tanto, le da la oportunidad de transferir estos genes a cepas no
resistentes. Además del CH34, existen muchas otras cepas y
biotipos de los metaliduranos de Cupriavidus que se han aislado y
su perfil de resistencia puede cambiar significativamente
dependiendo del entorno rico en metales del que se aislaron
[ 36 ]. Por lo tanto, toda investigación antimicrobiana debe prestar
cuidadosa atención a las cepas que se utilizan y describir con
precisión los componentes del genoma en observación. No había
razón para suponer que las diferencias observadas en Soto-
Quintero et al. (2017) resultó de la mayor capacidad de E. colipara
"desarrollar" resistencia a la plata comparada con P.
aeruginosa . Esta conclusión es, en el mejor de los casos,
exagerada y, en el peor, incorrecta, por varias razones, incluida la
necesidad de describir con precisión el fenómeno que se observa.
Si se está probando un material antimicrobiano dentro de una
generación, está observando la aclimatación fisiológica o el fracaso
de tal fenómeno. Si se está evaluando un material antimicrobiano a
lo largo de varias generaciones, se está observando la adaptación
evolutiva o el fracaso del fenómeno. En cualquier caso, lo que está
observando está íntimamente ligado a la elección de las cepas
bacterianas utilizadas. En el caso de P. aeruginosa , hay al menos
181 cepas dentro de su pangenoma, E. coli puede tener> 60 cepas
y estas cepas han evolucionado por separado durante mucho
tiempo [ 37 ]. Por ejemplo, E. coli y Salmonella enterica.son
parientes cercanos cuyo último ancestro común vivió ~ 100 millones
de años antes del presente, mientras que E. coli K12 y E. coli O157:
H7 compartieron un ancestro común hace ~ 4.6 millones de años
[ 37 ]. Para dar un poco de contexto, esto es más largo en el tiempo
cronológico que el último ancestro común de Australopithecus
africanus y los homínidos ( habilis , ergaster , sapiens ) [ 22 ]. De
hecho, esto es mucho más largo en el tiempo evolutivo, ya que la
evolución ocurre por generaciones, no por años cronológicos. E.
colinormalmente puede crecer 6 generaciones en un día, mientras
que las generaciones humanas son ~ 15 años. Finalmente,
subrayar cómo las diferentes cepas bacterianas pueden estar
dentro de la misma especie es el hecho de que las bacterias pueden
recibir genes por transferencia horizontal incluso de bacterias
relacionadas a distancia (transfección de fagos, plásmidos,
transformación) [ 38 , 39 ]. Esto significa que debemos ser
conscientes de la composición genómica de las bacterias que
estamos probando con nanomateriales. Un tamaño ciertamente no
se ajusta a todos, e incluso si lo hizo inicialmente, la evolución
microbiana asegura que esto no seguirá siendo así.
5. Conclusiones: ¿Cómo podemos desarrollar nano-
antimicrobianos sostenibles?
El objetivo de esta discusión ha sido describir los procesos
cruciales que siempre operan en el mundo microbiano. Gran parte
del material anterior se ha centrado en las bacterias (procariotas),
pero se aplica con la misma fuerza con respecto a las aplicaciones
diseñadas para controlar otros organismos unicelulares, como
apicomplexans, microsporidians, amebas o parásitos esporozoos
[ 40 ]. A pesar de nuestro sesgo antropocéntrico, la vida en este
planeta siempre ha sido principalmente microbiana y estos
microbios existen prácticamente en todos los hábitats de la
biosfera. Además, estos microorganismos han desarrollado
consistentemente resistencias a prácticamente todos los biocidas
empleados naturalmente, como los que se originan de bacterias que
viven en el suelo, como los actinomicetos.y para aquellos
desarrollados por los humanos, lo que indica que la resistencia a los
antibióticos fue generalizada en la naturaleza mucho antes de que
los humanos comenzaran a desplegarlos, esto también es válido
para la resistencia del metal [ 9 , 39 , 41 ].
Si esto es cierto, ¿cómo podemos diseñar tratamientos
antimicrobianos sostenibles utilizando
nanomateriales? Ciertamente, hay un gran interés en esta empresa
científica. Una revisión reciente resume los intentos de emplear
varios nanomateriales (ZnO, Ag, Cu, Fe 3 O 4 , Al 2 O 3 , TiO 2 ,
SiO 2 y quitosano) como antimicrobianos [ 42 ]. La Tabla 1 cita otros
ejemplos de aplicaciones de nanomateriales que no se citan en esa
revisión. La evidencia ha demostrado que los enfoques de una sola
sustancia están generalmente condenados al fracaso y que se
requirieron cambios genómicos relativamente simples para conferir
resistencia a compuestos tales como iónicos o nanoplata
[ 2], 10 , 43 ]. Nagy et al. (2011) ilustraron el enfoque correcto para
retardar la propagación de la resistencia a través de enfoques
combinacionales, por ejemplo, usando plata y un antibiótico
[ 19]. Sin embargo, este estudio no consideró cómo podría proceder
la resistencia a este enfoque de combinación. Por ejemplo, esto
puede ocurrir simplemente por la probabilidad combinada de que un
clon adquiera una mutación contra la plata y el antibiótico específico
utilizado. La probabilidad de que esto ocurra de novo es muy baja,
pero con un gran tamaño de población en poblaciones bacterianas,
esto es completamente posible. Además, hay plásmidos que tienen
genes de resistencia a los metales y a los antibióticos, por lo que la
probabilidad de que un clon adquiera ambas resistencias a la vez
aumenta considerablemente. En el caso de la terapia contra el VIH,
el enfoque de combinación de medicamentos antivirales se ha
utilizado desde 1995 y ha logrado reducir pero no eliminar por
completo las cepas resistentes del VIH [ 44]. Otros también han
demostrado la importancia de los enfoques combinacionales en el
diseño de fármacos que se dirigen específicamente a una variedad
de procesos en bacterias para detener su susceptibilidad a las
terapias antimicrobianas disponibles actualmente [ 45 , 46 ].
Tabla 1. Resumen de los estudios seleccionados de los efectos
antimicrobianos de los nanomateriales.

El valor de los enfoques de evolución experimental es que

demuestran objetivos potenciales que podrían utilizarse para
retardar la propagación de la resistencia. Actualmente tenemos
trabajos que muestran que las bacterias que tienen resistencia a la
plata, se encuentran en una gran desventaja cuando desarrollan
resistencia al exceso de iones Fe 2+ y Fe 3+ [ 30 ]. Los resultados
fueron contra intuitivos ya que los mecanismos asociados con la
toxicidad de la plata y el hierro son muy similares en E. coli ( Tabla
2). Esto sugeriría que un enfoque combinado de uso de hierro, un
micronutriente esencial y plata, que siempre es tóxico, podría
retardar significativamente la velocidad a la que evoluciona la
resistencia. Este resultado también está respaldado por la teoría de
cómo se pueden emplear los antimicrobianos en combinación y
sugiere que los modelos de sostenibilidad antimicrobiana deben
considerar si las combinaciones son sinérgicas, aditivas o
antagónicas [ 47 ]. Contrariamente a lo que uno podría esperar, se
pronostica que las tasas de extinción serán mayores cuando la
combinación antimicrobiana es antagónica, ya que las
combinaciones sinérgicas o aditivas pueden ser resistidas más
efectivamente por las respuestas fisiológicas comunes que pueden
generarse por genes con efectos pleiotrópicos (como sospechamos
que estamos viendo en nuestro Fe 2+ / Fe 3+-las lineas selectas
relativas a antibioticos). Sin embargo, los efectos antagónicos
podrían engendrar una batalla genómica en la que los clones no
podrán servir a ambos maestros. Es aquí donde los nanomateriales
pueden ofrecer grandes oportunidades para el desarrollo de
enfoques sostenibles, especialmente si los investigadores de
nanomateriales son conscientes de la complejidad de las
respuestas microbianas a los materiales tóxicos. Nuestro
argumento es que los enfoques combinados que utilizan tanto la
diversidad de elementos (plata, cobre, hierro, oro, fullerenos, etc.)
como los biológicos (bacteriófagos y compuestos antibióticos), así
como también la forma (nanoplacas, nanodarts, nanospikes)
ofrecen La mejor oportunidad para diseñar tratamientos
antimicrobianos más sostenibles.
Tabla 2. Mecanismos de toxicidad de plata y hierro en bacterias.

Expresiones de gratitud
Este trabajo cuenta con el apoyo de National Science Foundation
Grants # 1602593: Caracterización del comportamiento evolutivo de
las bacterias en presencia de nanopartículas de hierro y acuerdo
cooperativo No. DBI-0939454 (Evolución biocomputacional en
acción, BEACON). Los fondos para cubrir los costos de publicación
en acceso abierto fueron proporcionados por la Joint School of
Nanoscience & Nanoengineering, North Carolina A&T State
University y UNC Greensboro. Los siguientes individuos apoyaron
los experimentos de nuestro laboratorio descritos en la revisión:
Marjan Assefi, Sada Boyd, Adero Campbell, Sarah Hammoods,
Jaminah Norman, Anna Tapia y Emma Van Beveren.
Contribuciones de autor
 JLGJ, MT y JAE escribieron partes específicas del documento,
con JLGJ proporcionando supervisión general para el
comentario. Los experimentos descritos en el interior fueron
realizados por MT y JAE, y JLGJ diseñó el estudio general y realizó
el análisis de datos genómicos.
Conflictos de interés
Los autores declaran no tener conflicto de intereses.
Referencias
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