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EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE
ACRILAMIDA EN SUELO CONTAMINADO.
Integrantes del equipo:
Cuellar Rodríguez Alfonso Ramón.
Lugo Rivera Dante Marco Ariel.
Palma Servín Carlos Ernesto.
Reyes Jiménez Juan Guillermo.
Vidal Sánchez Cinthya.
Grupo:
6AV4.
Profesora:
Marina Olivia Franco Hernández.
ACRILAMIDA.
La acrilamida es un producto químico intermedio empleado en la síntesis de poliacrilamidas.
Se presenta como un polvo blanco cristalino. Es soluble en agua y se polimeriza rápidamente al alcanzar
el punto de fusión o al ser expuesto a la luz UV. La acrilamida sólida es estable a temperatura ambiente,
pero puede polimerizarse violentamente cuando se mezcla o expone a agentes oxidantes. Su fórmula
química es la siguiente:
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A manera de resumen, la Tabla 1 presenta más información sobre este compuesto.
Gracias a los microorganismos presentes en el suelo, la acrilamida es degradada con el paso del
tiempo, aunque cabe recalcar que, mientras esta se encuentre en el suelo o agua, representará un riesgo
para la salud y los ecosistemas debido a su peligrosidad.
En varios estudios se ha demostrado que la acrilamida daña el material genético de las células
y que también induce tumores en animales tras un largo periodo de administración. Los estudios en
animales han demostrado también efectos sobre la reproducción, en particular, disminución de la
fertilidad en el macho.
Así se ha llegado a la conclusión de que la acrilamida es un genotóxico carcinógeno para el que
no es posible determinar un nivel de exposición seguro. Se debe asumir que existe algún riesgo, aunque
sea pequeño, incluso a niveles de exposición muy bajos.
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En conjunto, y considerando toda la información de relevancia disponible, la Agencia
Internacional para la Investigación sobre el Cáncer (IARC) ha catalogado a la acrilamida como
"probablemente carcinógeno para los humanos".
METODOLOGÍA.
La forma de trabajo desde el inicio del experimento se desarrolla en forma semanal. Se tienen
4 tratamientos con diferentes contenidos, para poder ser comparados tras aplicárseles la misma
metodología (aunque en algunos casos difiere la metodología aplicada a cada tipo de suelo para que los
resultados sean comparables). Dichos tratamientos se enuncian en la tabla 3.
Tabla 3: Tratamientos del experimento.
Clave Significado
SCB Suelo Control de Bosque
SCS Suelo Control Salino
SBA Suelo de Bosque con Acrilamida
SSA Suelo Salino con Acrilamida
Como se observa en la Tabla 3 se tienen dos tratamientos control para poder evaluar la
diferencia entre una cinética llevada a cabo sin contaminante (SCB, SCS) respecto de la que sí lo posee
(SBA, SSA). De cada una de los 4 tratamientos se toman 5 muestras para 5 tiempos diferentes, lo cual
en total corresponde a 20 unidades experimentales. A cada muestra obtenida cada semana se le da cierto
tratamiento (explicado posteriormente) por triplicado, es decir que se tienen 3 repeticiones por cada
tiempo, lo cual constituye 15 unidades destructivas (ver tabla 4).
Esto significa que cada unidad sólo se usa una vez para el experimento tras lo cual se desecha.
Cabe decir que los equipos de trabajo se dividieron en función del tratamiento que les correspondió,
aunque dos equipos (contando al equipo 4 que elabora este reporte) utilizan Suelo de Bosque con
Acrilamida.
Tabla 4: Resumen de unidades y muestras para el experimento.
Número Tiempo Unidades Destructivas por Unidades experimentales
de (días) tiempo trabajadas en cada tiempo
muestra
1 0 3 4
2 7 3 4
3 14 3 4
4 28 3 4
5 42 3 4
Total 15 20
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INICIO DEL EXPERIMENTO.
Cada equipo tamizó 450 𝑔 de suelo en una maya de plástico con abertura de
aproximadamente 0.5 𝑚𝑚 para tener el suelo con un menor tamaño de partícula y eliminar cualquier
resto de mayor tamaño. Posteriormente se pesaron los 10 𝑔 y los 20 𝑔 para cada frasco de l 𝐿. Cabe decir
que todos los pesos determinados se hicieron en balanza analítica.
El % de humedad del suelo se determinó al meter 20 𝑔 de suelo húmedo sobre una caja Petri
a una estufa durante 24 horas y posteriormente pesar el suelo de nuevo (suelo seco), obteniéndose un
valor final de 9.2 𝑔. Finalmente se aplicó la siguiente ecuación:
𝑃𝑆𝐻 − 𝑃𝑆𝑆
%𝐻 = × 100
𝑃𝑆𝐻
20 𝑔 − 9.2 𝑔
%𝐻 = × 100 = 𝟓𝟒 %
20 𝑔
Posteriormente se determinó la Capacidad de Retención de Agua (CRA) del suelo. Para ello
se colocaron 20 𝑔 de suelo sobre un papel filtro húmedo en un embudo de filtración. Se agregó alrededor
de 100 𝑚𝐿 de agua y se tapó el papel filtro para evitar pérdidas de agua por evaporación. Tras 24 ℎ de
reposo se pesó el filtro con suelo húmedo. También se realizó esto con un blanco de papel filtro sin
muestra de suelo. Se aplicó la siguiente fórmula.
𝑚ℎ − 𝑚𝑠 − 𝑚𝑓 − 𝑎𝑓
𝐶𝑅𝐴 = 100 ×
𝑚𝑠
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El cálculo de la CRA para el tratamiento SBA con los datos experimentales obtenidos es el
siguiente.
𝑔𝐻 𝑂
20 𝑔 − 9.2 𝑔 − 1.3192 𝑔 − 1.2238 𝑔 2
𝑝𝑎𝑝𝑒𝑙
𝐶𝑅𝐴 = 100 × = 𝟖𝟗. 𝟕𝟓 %
9.2 𝑔
Lo cual significa que esos 20 𝑔 de suelo tienen un 100 % de agua retenida. Se busca que las
muestras estén a un 40 % de su Capacidad de Retención de Agua. Como el tipo de suelo boscoso tiene
un alto grado de humedad, se asume que su CRA es alto también. Por lo que la actividad de agua llega
a ser un factor que puede interrumpir la formación de la acrilamida. (FAO, 2004) Un pequeño incremento
de la cantidad final de agua (del 1% al 2%) se ha visto que reduce la formación de acrilamida
(Nekazaritzako & Euskal, 2005) Por lo que la cantidad de agua que es necesario adicionar para ello se
calculó de la siguiente forma para un total de 100 𝑔 de suelo.
100 𝑔𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜
𝑚𝐻2 𝑂 = 40 %𝐶𝑅𝐴 × = 𝟒𝟒. 𝟓𝟔𝟖𝟐 𝒈𝑯𝟐𝑶
89.75 %
44.5682 𝑔𝐻2 𝑂
𝑚𝐻2 𝑂 = 20 𝑔𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 = 𝟖. 𝟗𝟏𝟑𝟔 𝒈𝑯𝟐𝑶 𝒑𝒂𝒓𝒂 𝟐𝟎 𝒈
100 𝑔𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜
44.5682 𝑔𝐻2 𝑂
𝑚𝐻2 𝑂 = 10 𝑔𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 = 𝟒. 𝟒𝟓𝟔𝟖 𝒈𝑯𝟐𝑶 𝒑𝒂𝒓𝒂 𝟏𝟎 𝒈
100 𝑔𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜
Todo esto se homogenizó con un agitador de vidrio para cada frasco pequeño. Una vez
teniendo los componentes se acomodó cada unidad destructiva como ya se describió. Se elaboraron
etiquetas para cada unidad con; Grupo, Asignatura, Equipo, Fecha, Número de Unidad Experimental,
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CÁLCULO DEL NITRÓGENO AMONIACAL.
Se realizaron 3 extractos para esta técnica por cada semana, los cuales se realizaron al pasar el
todo el suelo de los frascos de 20 g a un matraz Erlenmeyer y se les agregaron 80 mL de K 2SO4 0.5 M,
después se agitaron los matraces y se filtró el extracto.
Se tomó una alícuota de cada extracto, las cuales se colocaron en tubos de ensaye, se completó
el mililitro de volumen agregando K2SO4 0.5 M en cada tubo y posteriormente se les añadieron los
siguientes compuestos en orden:
0.1 mL de EDTA.
0.4 mL de Nitroprusiato-Salicilato (se mezcló por inversión).
0.5 mL de agua destilada.
0.2 mL de buffer de hipoclorito (se mezcló por inversión otra vez).
0.3 mL de agua destilada (se mezcló una última vez).
Después se calentaron en baño María durante 40 °C por 30 minutos. Una vez hecho esto, se
enfriaron a temperatura ambiente de 10 a 25 minutos. Finalmente, se leyeron las muestras a 667 ηm,
cuyas absorbancias se pueden ver en la Tabla 5.
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𝜇𝑔 𝑁 − 𝑁𝐻4 + 80 𝑚𝐿 𝜇𝑔 𝑁 − 𝑁𝐻4 + 𝝁𝒈 𝑵 − 𝑵𝑯𝟒 +
(0.8075471698 ) ( ) = 7.02214930 = 𝟕𝟎𝟐𝟐. 𝟏𝟒𝟗𝟑𝟎𝟑
𝑚𝐿 9.2 𝑔 𝑆𝑆 𝑔 𝑆𝑆 𝒌𝒈 𝑺𝑺
Como se realizó una dilución 1:50, se debe multiplicar este valor por 50 para que sea correcto,
𝑚𝑔 𝑁−𝑁𝐻4 +
por otro lado, el resultado final se debe expresar en 𝑘𝑔 𝑆𝑆
, así que:
𝜇𝑔 𝑁 − 𝑁𝐻4 +
(7022.149303 ) (50) 𝒎𝒈 𝑵 − 𝑵𝑯𝟒 +
𝑘𝑔 𝑆𝑆
= 𝟑𝟓𝟏. 𝟏𝟎𝟕𝟒𝟔𝟓𝟏
1000 𝒌𝒈 𝑺𝑺
Donde se puede observar que 1 mol de acrilamida (ACM) produce 1 mol de amonio, es decir
que 71 g/mol de ACM producen 18 g/mol de NH4+. En la preparación de las muestras se agregaron 0.2
g de acrilamida, por lo tanto:
𝑔
(0.2 𝑔 𝐴𝐶𝑀) (18 𝑁𝐻4 + )
𝑔 𝑁𝐻4 +
= 𝑚𝑜𝑙 = 𝟎. 𝟎𝟓𝟎𝟕𝟎𝟒𝟐𝟐𝟓𝟑𝟓 𝒈 𝑵𝑯𝟒 +
𝑔
71 𝐴𝐶𝑀
𝑚𝑜𝑙
Pero esto es en los 20 g de suelo, así que el valor en mg NH 4+ producido por la acrilamida por
kg de suelo es de:
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A continuación, en la Tabla 6 se muestran todos los resultados de nitrógeno amoniacal obtenidos.
**: Las muestras de los días 21, 28, 49 y 56 están próximas a determinar.
CÁLCULO DE DIÓXIDO DE CARBONO.
Cada unidad experimental destructiva contaba con un frasco de 20 mL de NaOH, el cual estaba
abierto y en contacto con el CO2 que se produce por efecto de la respiración microbiana del suelo en los
frascos de 20 g y 10 g de suelo, por lo cual se llevó a cabo la siguiente reacción:
2 𝑁𝑎𝑂𝐻 + 𝐶𝑂2 → 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 + 𝐻2 𝑂
Al realizar las titulaciones con HCl 1 N y 0.1 N se producen las siguientes reacciones:
𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3 + 𝐻𝐶𝑙 ↔ 𝐻2 𝐶𝑂3 + 𝑁𝑎𝐶𝑙
𝐻2 𝐶𝑂3 ↔ 𝐶𝑂2 + 𝐻2 𝑂
∴ 𝑵𝒂𝑯𝑪𝑶𝟑 + 𝑯𝑪𝒍 ↔ 𝑪𝑶𝟐 + 𝑯𝟐 𝑶 + 𝑵𝒂𝑪𝒍
Es por ello que se realiza una titulación con HCl 1 N a una muestra de 10 mL del NaOH, para eliminar
el exceso del mismo. Posteriormente, se hace otra titulación, pero esta vez con HCl 0.1 N para calcular
la concentración de NaHCO3 mediante el siguiente cálculo. NOTA: Se considera el primer gasto de HCl
0.1 N de la Tabla 7.
𝐶𝐻𝐶𝑙 ∙ 𝑉𝐻𝐶𝑙 𝑔𝑎𝑠𝑡𝑎𝑑𝑜 (0.1 𝑁)(7 𝑚𝐿)
𝐶𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3 = = = 𝟎. 𝟎𝟕 𝑵
𝑉𝑎𝑙í𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 10 𝑚𝐿
A partir de esta concentración se calcula la masa de NaHCO3 de la siguiente manera:
𝑊𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3
𝑁= ∴ 𝑊𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3 = 𝑁 ∙ 𝑃𝑒𝑞 ∙ 𝑉𝑓𝑟𝑎𝑠𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝑂𝐻
𝑃𝑒𝑞 ∙ 𝑉𝑓𝑟𝑎𝑠𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝑂𝐻
𝑔
𝑒𝑞 84 𝑚𝑜𝑙
𝑊𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3 = (0.07 ) ( 𝑒𝑞 ) (0.02 𝐿) = 𝟎. 𝟏𝟏𝟕𝟔 𝒈 𝑵𝒂𝑯𝑪𝑶𝟑
𝐿 1
𝑚𝑜𝑙
De manera estequiométrica se sabe que 1 mol de NaHCO3 produce 1 mol de CO2, en otras
palabras, 84 g/mol de NaHCO3 producen 44 g/mol de CO2, por lo tanto se hace el siguiente cálculo:
𝑔
(0.1176 𝑔 𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3 ) (44 𝐶𝑂2 )
𝑚𝑜𝑙 = 𝟎. 𝟎𝟔𝟏𝟔 𝒈 𝑪𝑶𝟐
𝑔
84 𝑁𝑎𝐻𝐶𝑂3
𝑚𝑜𝑙
Pero esta cantidad es en 30 g de suelo, así que se hace el siguiente cálculo para reportar en mg
de CO2 por kg de suelo.
0.0616 𝑔 𝐶𝑂2 1000 𝑔 𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 1000 𝑚𝑔 𝐶𝑂2 𝒎𝒈 𝑪𝑶𝟐
( )( )( ) = 𝟐𝟎𝟓𝟑. 𝟑𝟑𝟑𝟑𝟑𝟑
30 𝑔 𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 1 𝑘𝑔 𝑠𝑢𝑒𝑙𝑜 1 𝑔 𝐶𝑂2 𝒌𝒈 𝒔𝒖𝒆𝒍𝒐
Esto se realizó para cada frasco de NaOH, por lo que a continuación se muestran en la Tabla 7 los
resultados obtenidos. NOTA: Los valores en rojo se descartaron.
Tabla 7: Valores de Dióxido de Carbono obtenidos.
Gasto de
Conc. Masa Masa de mg CO2/kg Desviación
Muestra HCl 0.1 N Promedio
NaHCO3 NaHCO3 (g) CO2 (g) suelo estándar
(mL)
M07-1 1.7 0.017 0.02856 0.01496 498.66667
1276 1099.3153
M07-2 7.0 0.07 0.1176 0.0616 2053.3333
M14-1 8.6 0.086 0.14448 0.07568 2522.6667
2405.3333 165.93439
M14-2 7.8 0.078 0.13104 0.06864 2288
M28-1 6.7 0.067 0.11256 0.05896 1965.3333
M28-2 13.8 0.138 0.23184 0.12144 4048
3740 435.57778
M28-3 11.7 0.117 0.19656 0.10296 3432
M49-1 16.8 0.168 0.28224 0.14784 4928
M49-2 24.6 0.246 0.41328 0.21648 7216
7318.6667 145.19259
M49-3 25.3 0.253 0.42504 0.22264 7421.3333
M56-1 47.0 0.47 0.7896 0.4136 13786.667
13200
11200
mg CO2/kg suelo
9200
7200
5200
3200
1200
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
Tiempo (días)
Se puede observar que la cantidad de Dióxido de Carbono producida en el suelo aumenta con
el paso del tiempo.
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En las siguientes figuras, se muestra la relación de la concentración de las diversas muestras de suelo.
Las acotaciones se usaron conforme a la Tabla 3 de este documento.
Figura 4: Gráfica que muestra el comportamiento de la concentración de dióxido de carbono con respecto al
tiempo. Aquí se muestran los resultados de los distintos tipos de suelo, analizados por los equipos en el
laboratorio.
Figura 5: Comportamiento de la concentración de nitrógeno amoniacal con respecto al tiempo. Aquí se muestran
los resultados de los distintos tipos de suelo, analizados por los equipos en el laboratorio.
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IR.
Conforme a las tablas de frecuencia por grupo funcional orgánico; se ubican en los siguientes rangos:
=CH2 1400 ± 50
C=O 1650 ± 50
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EQUIPO 5: SUELO DE BOSQUE
Se identificaron los grupos funcionales característicos de la acrilamida. Sin embargo, en esta muestra identificaron
más señales que representan a los grupos funcionales siguientes: - CH2
Esto se debe a que la acrilamida se está degradando, dando paso al ácido acrílico y el amonio que pasa a amoniaco.
La cantidad de amonio extra se está generando debido a la materia orgánica existente en el suelo. Así mismo, el
amonio se gasta por el mantenimiento celular.
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HPLC
La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla. La
muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de acuerdo a las
interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna. Estas interacciones químicas, determinan la
separación de los contenidos en la muestra.
Dia 56
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Dìa 28
16
Dìa 14
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Acrilamida pura
Se pesó 0.2 g de acrilamida y se diluyeron en 10 mL de metanol, se tomó 0.5 ml de esta solución y se aforo a 10
ml, por lo tanto fue una dilución 1:20
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REFERENCIAS.
ATSDR. (2012). Resumen de Salud: Acrilamida. Obtenido de Agencia para Sustancias Tóxicas y el
Registro de Enfermedades: https://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs203.pdf
FAO. (2004). Comisión del Codex Alimentarius. Obtenido de Organización de las Naciones Unidas
para la Alimentación y la Agricultura:
ftp://ftp.fao.org/codex/meetings/CCFAC/ccfac36/fa36_34s.pdf
FAO. (2015). Los bosques y suelos forestales contribuyen de manera esencial a la producción agrícola
y la seguridad alimentaria mundial. Obtenido de Organización de las Naciones Unidas para la
Alimentación y la Agricultura: http://www.fao.org/soils-2015/news/news-detail/es/c/285875/
FAO. (s.f.). Apéndice 2: Parámetros de los plaguicidas que influyen en los procesos que tienen lugar
en el suelo. Obtenido de Depósito de Documentos de la FAO:
http://www.fao.org/docrep005/x2570s/x2570s08.htm
Nekazaritzako, E., & Euskal, F. (2005). Acrilamida. Obtenido de Elika: Seguridad Alimentaria:
http://www.elika.net/datos/riesgos/Archivo5/Acrilamida%202005.pdf
UPRM. (s.f.). ¿Qué es la acrilamida? Obtenido de Universidad de Puerto Rico Sede Mayagüez:
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/acrilamida.htm
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