“EXTRACCIÓN Y CROMATOGRAFIA EN TLC DE HOJAS DE

TECA (TECTONA GRANDIS) Y DEL ACEITE ESENCIAL DE LA

HIERBA DE LIMON (CYMBOPOGON SPP)”
Cubas Sharon1; Sánchez, Elaine Yuribeth2, González, Zury3
CIP: 4-782-2072 4-779-2008 4-781-1928

Curso de Química de Productos Naturales (QM-460), Escuela de Química, Facultad de Ciencias

Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí. David, Chiriquí, Republica de Panamá.
Email:
1sharyanc.18@gmail.com, 2yuribeth-0330@hotmail.com,3 zury192521@gmail.com

Resumen:

Esta experiencia se basó en el estudio de los metabolitos secundarios por medio de la cromatografía
de capa delgada (TLC) así como la extracción de aceites esenciales de la hierba de limón, para
posteriormente realizar la correspondiente cromatografía. Primeramente, se utilizó los extractos
vegetales (acuoso y etanolico), obtenidos del laboratorio anterior de las hojas de Teca, en donde se
logró la separación de los componentes de la mezcla por cromatografía en capa fina. Para las muestras
etanolicos se utilizó como fase móvil una mezcla de Cloroformo, alcohol metílico y agua (4:3:2), para
la muestra seca (acuosa) se utilizó una placa revés en donde se utilizó acetonitrilo y agua (9:1) y
alcohol anhidro y para su revelación se utilizó Vainillina a 1%. Como resultado de esto se pudo
determinar el valor de Rf de los principales metabolitos secundarios presentes en los extractos
etanólicos y acuosas de las hojas de la Tectona grandis. Ente los que se pueden mencionar los
flavonoides, alcaloides, taninos. En la segunda parte de la experiencia consistió en la obtención de
aceite esenciales por arrastre de vapor de la planta hierba de limón, en donde se pesaron 50,04 g de
la muestra. Para la extracción del aceite total, la muestra obtenida se utilizó la técnica de extracción
líquido-líquido empleando como solvente hexano. Al producto obtenido también se le realizo una
corrida en cromatografía TLC empleando como fase móvil cloroformo, de igual manera se reveló la
placo con vainillina al 1%; obteniendo como resultado un Rf promedio de 0,47 cercano al Rf que en la
literatura encontramos para el Citral que es de 0.47. Podemos concluir que la importancia de esta
experiencia es observar y determinar la variedad de metabolitos secundarios presentes en una materia
prima vegetal, en este caso en las hojas de Tectona grandis y las hojas del CYMBOPOGON SPP y
evaluar su potencial farmacéutico, terapéuticos o para otros fines que contribuyan al bienestar humano
y ambiental.
Palabras claves: Cromatografía (TLC), aceites la selección adecuada del eluyente, para
esenciales, polaridad, fase móvil, arrastre por así deducir la relación existente entre la
vapor. polaridad de las sustancias que se
analizan y de los eluyentes utilizados.
Objetivos:
Marco teórico:
 Extraer el aceite esencial de la hierba de
limón (Cymbopogon spp) utilizando la Los aceites esenciales son fracciones liquidas
destilación por arrastre con. volátiles, generalmente son mezclas
 Introducir la técnica de cromatografía en homogéneas de hasta 100 compuestos
capa delgada TLC para identificar químicos orgánicos, provenientes de la familia
metabolitos presentes en las hojas de química de los terpenoides. Generan diversos
Tectona grandis L. y en el aceite aromas agradables y perceptibles al ser
esencial de la cymbopogon spp. humano. Bajo condiciones de temperatura
ambiental, son líquidos poco densos, pero con
 Calcular los valores de Rf de los mayor viscosidad que el agua. Los aceites
extractos obtenidos y correlacionarlos a esenciales son metabolitos secundarios
sintetizados por las plantas, producidos al desplacen con mayor velocidad serán los
momento de activarse mecanismos de defensa menos polares.
como respuesta a factores ambientales y
ecológicos, estos presentan roles de defensa, Materiales y Reactivos:
atracción de polinizadores, entre otros. Son Nombre Cantidad capacidad
inflamables, no son tóxicos, aunque pueden Vasos Varios 100mL
provocar alergias en personas sensibles a químicos 250mL
determinados terpenoides (Cadby P, 2002). Balanza 1 250 gr
Probeta 3 10mL 25mL
De acuerdo con Palomino, A (2006), Los 50mL
aceites esenciales se pueden extraer mediante Tijera 1 --
diferentes métodos como: prensado, destilación Cinta adhesiva 1 --
con vapor de agua, extracción con solventes Gotero Varios --
volátiles, enfleurage y con fluidos supercríticos. Embudo de 3 100mL
La destilación por arrastre de vapor no existe un Separación 250mL
Trípodes 3 --
nombre claro y conciso para definirlo, debido a
Plancha 2 --
que se desconoce exactamente lo que sucede Blower 1 --
en el interior del equipo principal y porque se Placa de TLC Varios --
usan diferentes condiciones del vapor de agua Regla 1 --
para el proceso. Es así que, cuando se usa Lámpara UV 1 --
vapor saturado o sobrecalentado, fuera del
equipo principal, es llamado “destilación por Reactivos Toxicidad
arrastre de vapor”. Cuando se usa vapor Inhalación: Irritación en
saturado, pero la materia prima está en el tracto respiratorio,
contacto íntimo con el agua generadora del Etanol náuseas, vómito.
vapor, se le llama “hidrodestilación”. Cuando se Piel: resequedad y
usa vapor saturado, pero la materia no está en agrietamiento.
Ojos: irritación.
contacto con el agua generadora, sino con un
reflujo del condensado formado en el interior del Inhalación: depresión
destilador y se asumía que el agua era un respiratoria, neumonitis
agente extractor, se le denominó química, edema
“hidroextracción”. El término hidrodestilación, lo pulmonar.
definimos como el proceso para obtener el CHCl3 Ingestión: Provoca
aceite esencial de una planta aromática, náusea, vómito,
mediante el uso del vapor saturado a presión salivación, anorexia
atmosférica. Ojos: Ocasiona
conjuntivitis, e, incluso,
Según Bandoni, L (2008), la cromatografía en quemaduras dolorosas.
capa fina se basa en la preparación de una
Inhalación: Corrosivo,
capa, uniforme, de un adsorbente mantenido irritación nasal,
sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los sofocación,
requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, HCl concentrado quemaduras.
placas de vidrio, un dispositivo que mantenga Ingestión: vomito,
las placas durante la extensión, Es preciso diarrea quemadura en
también poder guardar con facilidad las placas la boca, colapso y
preparadas y una estufa para activarlas. La fase muerte
móvil es líquida y la fase estacionaria consiste Piel: Inflamación,
en un sólido. La fase estacionaria será un enrojecimiento, dolor.
componente polar y el eluyente será por lo Ojos: lagrimeo
excesivo, dolor.
general menos polar que la fase estacionaria,
de forma que los componentes que se
 Ojos: Causa irritación y Ingestión: Produce
enrojecimiento. Acetonitrilo dolor abdominal,
Piel: Causa irritación y náuseas, daño a los
enrojecimiento. Si la riñones e Hígado
exposición es Piel: puede causar
constante, se genera irritación con
C6H14 dermatitis. enrojecimiento y dolor
Ingestión: Causa Ojos: puede causar
náusea, vómito e irritación con
irritación de la enrojecimiento y dolor
garganta. En casos Inhalación: Puede irritar
severos, puede la nariz, la garganta y
perderse la conciencia. los pulmones
existe información al Ingestión: irrita la boca,
respecto. Na₂SO4 esófago y estómago.
Inhalación: Irritaciones Piel: Puede causar
en vías respiratorias. irritación si la
Sustancia muy exposición es
corrosiva. Puede prolongada.
provocar Ojos: Puede causar
bronconeumonía, irritación.
edemas en el tracto Inhalación: espasmos,
CH3COOH respiratorio. ‐Piel: edema pulmonar,
Provocar quemaduras. sofocación.
‐Ojos: quemaduras, Ingestión: vómito con
trastornos de visión, sangre, diarrea, sed
ceguera (lesión H2SO4 concentrado Piel: quemaduras
irreversible del nervio severas, profundas y
óptico). Quemaduras dolorosas.
en mucosas. Ojos: es corrosivo,
Inhalación: Irrita las severa irritación
mucosas nasales y (inflamación, dolor).
oculares.
Ingestión: Disturbios
visuales, dolor Flujograma:
CH3OH abdominal, diarrea,
vómito A. Obtención del Aceite Esenciales de la Hierba
Ojos: Irritación, dolor, de Limón.
lagrimeo, sensación de
quemadura y visión Inicie el calentamiento
hasta ebullición, abrir la Recoger unos mL del
borrosa Se peso 50,04 g de
hierba de limon, se
llave de agua que entra al destilado en un vaso
condensador y espere a quimico colocado en un
Piel: Produce coloco en el balon 1
que empieze la baño de hielo
destilación.
resequedad,
enrojecimiento y dolor.
Inhalación: irritación en En el primer balon debe ir
agua y perlas de Todas las uniones deben
las vías respiratorias. ebullición y un tubo de
seguridad que va inmerso
quedar bien selladas para
evitar fugas de vapores.
Ingestión: náuseas, en el agua

Vainillina 1% vómitos.
Piel: Irritación,
enrojecimiento. En el segundo balón
debe ir la muestra con un
El tubo que entra en el
balon 2 debe quedar
Ojos: Provoca irritación poco de agua cerca de la muestra

ocular grave
Inhalación: Puede ser
fatal y causar irritación
en el tracto respiratorio,
daño en el SNC
B. Extracción del Aceite Esenciales de la Hierba Cuadro 1. Detección de Rf en muestras de hojas
de Limón Tectona Grandis L.

Luego de a ver
Utilizando un embudo
obtenido la
de separación, agitar
muestra,separar la
por 30 seg
muestra con hexano

•La fase organica

golocar el embudo en (aceite esencial) se
un anillo y espere a recoge en un vaso
que se diferencien las quimico y se le añade
fases y separar sulfato de sodio
anhidro y agite

•Se calienta sobre una

plancha a muy baja
temperatura girando el •Guardar el aceite en
recipiente hasta vial
sequedad total del
disolvente.

C. Separación de los componentes de la mezcla

por cromatografía en capa fina.

1. Preparar los eluyentes.

Colocar en la camara cromatografica las mezclas de los eluyentes
para cada camara.

2. Anotar la relacion en la que esta preparados los eluyentes para

cada camara .
Con el capilar se aplica sobre la capa fina la muestra del extracto
etanolico, seco y el aceite

3. Posteriormente se coloca la placa dentro de la camara, el borde

inferior debe tener contacto con el eluyente.
Esperar unos min y observar el recorrido del disolvente hasta la
linea superior.

4. Luego se llevo la placa en el horno para secar la placa, revelar

con la lampara UV y marcar la manchaas obtenidas.
Finalmente se calcula Rf.

Figura 1. Capa Fina realizada a los extractos de la

Resultados: hoja Tectona grandis L. Solvente utilizado
-Muestras de extractos de las hojas de Teca. (cloroformo/alcohol metílico/agua).

Figura 2. Capa Fina realizada a los extractos de la
hoja Tectona grandis L. Solvente utilizado (alcohol
anhidro).
Figura 3. Capa Fina realizada a los extractos de la
hoja Tectona grandis L. Solvente utilizado
(acetona/ácido acético).
Figura 4. Capa Fina (placa reversa) realizada a los
extractos de la hoja Tectona grandis L. Solvente
utilizado (acetonitrilo/agua).
Discusión:
La obtención de metabolitos secundarios de
plantas es uno de los temas de mayor interés
en la actualidad con el fin de buscar y conocer
de donde provienen, los diferentes mecanismos
de su producción (biosíntesis) y la utilización de
estos en la planta para los diferentes procesos
que permitan su crecimiento (alimentación,
mecanismos de defensa, interacción con el
medio, entre otros), la utilización de estos en
reemplazo de productos sintéticos; mostrando
siempre un desarrollo del conocimiento y
ayudando a entender mejor otras ramas de la
ciencia como la química, la biología y la
medicina. Algunas de las técnicas más
utilizadas para el aislamiento y purificación de
estos metabolitos son las técnicas separación
tradicionales, cromatográficas y
espectroscópicas. (Vargas, 2011).
(Castillo, 2008) sustenta que la extracción
líquido-líquido es una técnica instrumental
utilizada con diversos fines. Que suele ser una
operación muy habitual en los primeros pasos
de un tratamiento de reacción que permite
eliminar excesos de reactivos utilizados, así
como de algunas impurezas formadas en la
reacción. Por otra parte, explica que es una
técnica muy utilizada para llevar a cabo la
extracción de compuestos orgánicos que se
encuentran en fuentes naturales.
Para llevar a cabo la corrida en la placa de sílica
se partió de los extractos de las muestras de
hojas secas y frescas de las hojas de Tectona
grandis L.
La técnica de cromatografía en capa fina consta
de 4 elementos importantes:
-La fase móvil o eluyente: Se trata de uno o
varios disolventes en una mezcla los cuales
interactúan con el analito de acuerdo a su
afinidad con él.
-Fase estacionaria: Dependiendo de la
polaridad del material se puede dividir en fase
normal (adsorbente polar como sílica-gel) o
fase reversa (adsorbente apolar como C18). La
fase estacionaria se soporta sobre una placa
plana generalmente de vidrio o aluminio.
-Muestra: Contiene los analitos que se someten
al proceso de separación. Se siembra sobre
una parte de la placa que está marcada para
determinar la distancia que recorre sobre la
placa.
-Cámara de desarrollo: Es un medio
generalmente de vidrio sobre el que se deposita
el eluyente y las placas. Su tamaño depende de
si se trata de cromatografía analítica o
preparativa.
(Vargas, 2011), explica que los métodos de
detección de los analitos son los siguientes:
1- Incorporar un material fluorescente sobre la
fase estacionaria, el cual después del
desarrollo de la cromatografía se observa a
través de una lámpara de ultravioleta
generalmente a dos longitudes de onda
254nm (onda corta) y 365 nm (onda larga).
Dependiendo de los grupos funcionales que
contenga el analito este absorbe la energía
de estas longitudes de onda que hacen que
se observen brillantes o no se vean.
2- Adicionar un reactivo que reacciona con el
analito permitiendo que se observe una
mancha con alguna coloración sobre la
placa. Los reveladores más usados son
solucione de yodo y ácido sulfúrico que
muestran manchas oscuras de los
compuestos orgánicos con los que
reaccionan. Algunos otros reveladores más
específicos se usan de acuerdo a los
grupos funcionales que contienen el analito
o dependiendo de que metabolitos se
analiza.
Un factor muy importante a tener en cuenta en
la cromatografía de capa fina es el factor de
retardo Rf que permite diferenciar un analito de
otro y es la relación entre la distancia recorrida
por el analito en la placa y la distancia recorrida
por el eluyente. Se determina de acuerdo a la
siguiente ecuación:
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚ó𝑣𝑖𝑙
En el caso en que varios analitos tengan el
mismo Rf en un sistema determinado se debe
recurrir a un cambio del sistema de elución con
mezclas de otros disolventes o utilizar métodos
alternativos como la cromatografía de Gases
(CG) o la cromatografía de líquidos de alta
eficiencia (HPLC), sustenta (Molina, 2012).
En cuanto el valor de Rf, este depende de las
condiciones en las cuales se corre la muestra:
tipo de adsorbente, eluyente así como las
condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturación, etc. Tiene una reproducibilidad de 
20%, por lo que es mejor correr duplicados de
la misma placa, (Molina, 2012).
En las placas corridas que se muestran en las
figuras 1, 2, 3, y 4; se realizaron con el fin de
visualizar la revelación de los metabolitos
presentes en los extractos estudiados, sin
embargo, con las fases móviles empleadas solo
se pudieron determinar la presencia de
alcaloides en el caso de la placa reversa con
acetonitrilo/agua como eluyente, ya que el Rf
presentado se acercó a los valores presentados
en la literatura. Aparte se pudo determinar la
presencia de flavonoides para el caso de la fase
móvil cloroformo/alcohol metílico/agua como se
puede observar en el cuadro 1 en las muestras
frescas se evidenciaron mayor arrastre que en
las secas lo que con cuerda con los datos
obtenidos del tamizaje del mismo en los cuales
se obtuvieron mayores resultados obtenidos
para los extractos de las muestras frescas.
Estos fueron los metabolitos secundarios que
se pudieron evidenciar con más certeza a pesar
de que en el tamizaje fitoquímico se
presentaron positivamente taninos, fenoles,
glúcidos y terpenos. En esta experiencia no se
emplearon las fases móviles ni los reveladores
indicados en donde se pudiesen evidenciar de
manera correctos cada uno de los grupos
constituyentes de cada metabolito secundario.
Como explica (Pereira, 2015), Los esteroides y
triterpenos puede ser detectados en
cromatografía en capa fina por medio de un
revelador, como Liebermann-Burchard que con
un calentamiento por 5 a 10 por 110°C se
muestran manchas de color: azul, verde, rosa,
violácea, gris, café y amarillo. Cuando se
revelan manchas de color rosa, rojas y violetas
indican la presencia de triterpenoidestipo
sigmasterol. Empleando como fase móvil
tolueno/cloroformo/etanol.
Por otro lado, extiende que en el caso de los
taninos se puede utilizar de fase móvil
(cloroformo/acetato de etilo/ácido fórmico. os
taninos que se revelan con tricloruro de hierro al
1% y dan coloración azul, son los taninos
hidrolizables. Los patrones utilizados se
detectan al dar coloración azul, evidenciando la
presencia de ácido gálico.
Las saponinas en cromatografía de capa fina
son vista a la luz visible con el revelador como
Liebermann-Burchard, que con un
calentamiento por 5 a 10 min a 110°C se
muestran manchas de color: azul, verde, rosa,
violácea, gris, café, amarillo. Este revelador es
específico para el núcleo esteroidal. En los
extractos se muestran manchas de color café y
amarillo, se confirmar este tipo de compuestos,
ya que presentan es su estructura núcleo
esteroidal. En este caso se puede emplear de
fase móvil butanol/ácido acético/agua,
puntualiza (Pereira, 2015).
Posiblemente de haberse utilizado los
reveladores específicos se hubiesen observado
mejor la presencia y separación de cada
metabolito. El revelador empleado Vainillina al
1% es más específico para metabolitos
cumaricos que también se eviddenciaron de
forma tenue en las placas de revelado. En la
cromatografía de capa fina vista a la luz UV de
365 nm, se observan coloraciones azules
intensas o azules verdosas, que puede indicar
la usencia de cumarinas simples furano o
piranocumarinas. (Pereira, 2015).
-Muestras de extractos de las hojas de
Hierba de Limón.
Cuadro 2. Deteccion de Rf en muestras de hojas
Cymbopogon spp.
Figura 5. Capa Fina realizada a los extractos de la
hoja Cymbopogon spp. Solvente utilizado
(cloroformo).
Discusión:
En la destilación por arrastre con vapor de agua,
la muestra fue cortada en trozos pequeños, se
utilizó 50.04 g de la muestra y se sometió a una
corriente de vapor de agua sobrecalentado, la
esencia así arrastrada es posteriormente
condensada, recolectada y separada de la
fracción acuosa.
Es una de las técnicas más comunes que
permite la separación de sustancias
ligeramente volátiles e inmiscibles en agua por
medio de una destilación a baja temperatura. Es
particularmente útil cuando la sustancia hierve
a una temperatura superior a los 100°C y se
descompone por debajo de su punto de
ebullición. El proceso consiste en una
vaporización a temperaturas inferiores a las de
ebullición de cada uno de los componentes
volátiles por efecto de una corriente directa de
vapor de agua, el cual ejerce las funciones de
calentar la mezcla hasta su punto de ebullición
y disminuir la temperatura de ebullición por
adición de la tensión del vapor que se inyecta a
la de los componentes volátiles de los aceites
esenciales. Los vapores que salen del
destilador se enfrían en un refrigerante donde
regresan a la fase líquida, agua y aceite
esencial, y finalmente se separan en un vaso
químico. (Elder, 2010).
Los aceites esenciales se ubican en las
estomas odoríferas de la planta por lo que el
vapor de agua tiene que entrar al material
vegetal, romper las estomas y finalmente
destilar. (Bandoni, 2003).
La composición mayoritaria del aceite de Hojas
de Cymbopogon spp. Son los monoterpenos
(± 80%), y también se encuentran
sesquiterpenos. Las hojas de hierba de limón
tienen olor característico a citral. Los principales
terpenoides encontrados en el aceite esencial
de citronela son el citronelal, citronelol y
geraniol, que se utilizan en perfumería,
jabonería, preparación de insecticidas y
repelentes, su componente mayoritario, el
citronelal, es un importante intermediario o
producto de partida para la síntesis de
terpenoides de mayor importancia comercial.
(Guarnizo,2009).
Debido a dicha composición química de las
Hojas de Cymbopogon spp, se utilizó el
cloroformo para la determinación de los Rf de la
capa fina, ya que este tiene naturaleza apolar y
permite extraer las grasas que se encuentran
en cantidades mayoritarias.
Figura 6. Placa TLC Zona de coloración del Citral.
(Clifford,2010)
Se identificó un solo compuesto en el aceite
esencial extraído de las hojas Cymbopogon
spp. utilizando la técnica de cromatografía de
capa fina oTLC. La corrida de los componentes
se comparó con los reportes en (Wagner,2009).
Para esta hoja se utilizó el siguiente sistema de
cromatografía:
a) Una placa de silica gel 60 como fase
estacionaria.
b) La fase móvil fue cloroformo.
c) El revelado se realizó con vainillina al 1%.
Para así determinar los compuestos presentes
en el aceite.
Se pudo identificar la presencia del compuesto
Citral el cual de acuerdo con la literatura se
encuentran con un con un Rf de 0,47 y también
podíamos referirnos a la probabilidad de
encontrar alcoholes terpénicos dentro de
nuestra muestra ya que según (Wagner 2009),
estos poseen Rf varían de 0,2 a 0,469. Los
cuales no se alejaban de los valores que
experimentalmente obtuvimos. Pero para
descartar la existencia de estos según
(Clifford,2010) nos llevó a comprar
cualitativamente con la comparación de la figura
1 y2 que finalmente se trataba del citral, debido
a que presento una zona de coloración dentro
del rango que estandarizo Clifford con base a la
solución referencia que plaqueo del citral. Y
también concluimos en que si se trataba de este
basándonos en que en nuestros resultados la
coloración obtenida en la placa era de color azul
puro tenue.
Concusiones:
 La cromatografía de capa fina es una
técnica analítica rápida y sencilla, que
permite separar una mezcla de
compuestos presentes en una muestra
dado mediante la misma se pudo
determinar y corroborar la presencia de
algunos metabolitos secundarios
presentes en las hojas de la Tectona
grandis y Cymbopogon spp.
 Inferimos que el uso adecuado de la fase
móvil puede propiciar la identificación y
separación de los metabolitos deseados,
así como también el uso del revelador
especifico que permitirá obtener mayores
resultados en cuantos al valor de lo Rf
experimental que se obtienen.
 Se logró la extracción del aceite esencial
de la Hoja de Cymbopogon spp, esto lo
pudimos comprobar mediante la
cromatografía capa fina, que nos muestra
los compuestos posibles, en este caso el
Citral que se pudo corroborar con la
literatura.
 Logramos inferir que un factor muy
importante a tener en cuenta en la
cromatografía de capa fina es el factor de
retardo Rf que permite diferenciar un
analito de otro y es la relación entre la
 distancia recorrida por el analito en la placa
y la distancia recorrida por el eluyente.
 La importancia de esta experiencia es
observar y determinar la variedad de
metabolitos secundarios presentes en una
materia prima vegetal, en este caso en las
hojas de Tectona grandis y las hojas del
CYMBOPOGON SPP y evaluar su
potencial farmacéutico, terapéuticos o para
otros fines que contribuyan al bienestar
humano y ambiental.
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