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Crecimiento microbiano

• Método: número  cámara de Petroff-Hausser


1
𝑁° 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑚. 𝑜. 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 ∙
= 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑚𝐿 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠 ∙ 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜
• Método: masa
o Peso seco
𝑐(𝑔/𝑚𝑙) = 𝑚/𝑉
o Turbidimetría
𝐼𝑜
𝑂𝐷 = log ( )
𝐼

• Rendimiento de sustrato en biomasa

𝑃𝑀𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎 ∙ 𝑝
𝑌𝑥 =
𝑠 𝑃𝑀𝑒𝑙𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 ∙ 𝐼
• Rendimiento de sustrato en producto
𝑃𝑀𝑚𝑒𝑡𝑎𝑏𝑜𝑙𝑖𝑡𝑜 ∙ 𝑠
𝑌𝑝 =
𝑠 𝑃𝑀𝑒𝑙𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 ∙ 𝐼
△𝑝 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜
𝑌𝑝 = =
𝑠 − △ 𝑆𝑇 𝑛𝑢𝑡𝑟𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜
△𝑝 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜
𝑌𝑝0 = =
𝑠 − △ 𝑆𝑝 𝑓𝑢𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝐶 𝑦 𝐸 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜

• Relación entre ambos rendimientos

1 1 𝑞𝑝 1
= + (𝑚 + )∙
𝑌𝑥 𝑌𝑥0 𝑌𝑝0 𝜇
𝑠 𝑆 𝑠

• Porcentaje del elemento


12 ∙ 𝑑
%𝐶 =
𝑃𝑀𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎
• Cultivo por lotes

𝑋 = 𝑋0 ∙ 𝑒 𝜇𝑡 𝜇 = 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑥𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 (ℎ^(−1) )


𝑋 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑒𝑛 𝑚𝑎𝑠𝑎 (𝑔 ∙ 𝑐𝑒𝑙 ∙ 𝐿^(−1) )
𝑡 = 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 (ℎ)

o Tiempo de duplicación
ln(2)
𝑡𝑑 =
𝜇
• Ecuación de Arrhenius
𝐸𝑎
𝜇 = 𝐴𝑒 −𝑅𝑇 𝐴 = 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑒𝑐𝑢𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎
𝑐𝑎𝑙
𝐸𝑎 = 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑑𝑒 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 8.000 𝑎 27.000 ( )
𝑚𝑜𝑙
• Ecuación de Monod  efecto de la concentración de nutrientes (S)
𝑆
𝜇 = 𝜇𝑀 𝐾𝑆 = 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛
𝐾𝑆 + 𝑆
o Crecimiento inhibido
▪ Altas concentraciones de Sustrato
𝑆
𝜇 = 𝜇𝑀
1
〖𝐾𝑆 + 𝑆) (1 + )
𝐾𝐼
▪ Altas concentraciones de Producto
𝑆
𝜇 = 𝜇𝑀
1
〖𝐾𝑆 + 𝑆) (1 + )
𝐾𝑝

• Diseño de medios definidos


o Rendimiento de nutrientes en célula
△𝑋 𝑋 − 𝑋0 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎
𝑌(𝑥/𝑠) = = =
− △ 𝑆𝑇 𝑆0 − 𝑆 𝑛𝑢𝑡𝑟𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜
Si S=0  todo el sustrato se consume
▪ Ejemplo: fuente de Nitrógeno
△𝑋 %𝑁 % 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑛𝑢𝑡𝑟𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
𝑌𝑋/𝑁 = = =
− △ 𝑆 % 𝑁 𝑒𝑛 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎 % 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑒𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑠𝑖𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎
▪ Caso del Carbono
%𝐶
𝑌𝑋 = ∙𝑓 𝑓 = 0,6 𝑒𝑛 𝑐𝑎𝑠𝑜 𝑎𝑒𝑟𝑜𝑏𝑖𝑜
𝐶 %𝐶 𝑒𝑛 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎
𝑓 = 0,1 𝑒𝑛 𝑐𝑎𝑠𝑜 𝑎𝑛𝑎𝑒𝑟𝑜𝑏𝑖𝑜

o Nutriente limitante
▪ Metabolismo aerobio: O2 como aceptor final de electrones.
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎
𝑌𝑋/𝑂2 =
𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑑𝑒 𝑜𝑥𝑖𝑔𝑒𝑛𝑜
o Balance de masa a fuente de Carbono
△ 𝑆𝑇 =△ 𝑆𝑐 +△ 𝑆𝑚 +△ 𝑆𝑝
𝑆𝑇 =sustrato total
𝜇𝑋 𝜇𝑋 1 𝑑𝑝
= 0 + 𝑚𝑋 + 0
𝑆𝑐 =sustrato destinado a crecimiento 𝑌𝑥/𝑆 𝑌𝑥/𝑠 𝑌𝑝/𝑠 𝑑𝑡
Suponiendo que no hay producto celular p=0
𝑆𝑚 =sustrato destinado a mantención
1 1 1
de viabilidad celular = 0 +𝑚
𝑌𝑥/𝑆 𝑌𝑥/𝑠 𝜇
𝑆𝑝 = sustrato destinado a producción
de metabolitos extracelulares
• Productividades
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑜𝑏𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑎
o 𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚é𝑡𝑟𝑖𝑐𝑎 =
𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 ∙𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛
𝑑𝑋 ∆𝑋 𝑋−𝑋0
▪ 𝑄𝑥 = = = 1 𝑋
𝑑𝑡 ∆𝑡 𝑡𝑚 +𝑡1 +𝜇ln(𝑋 )
0
𝑑𝑝 ∆𝑝
▪ 𝑄𝑝 = =
𝑑𝑡 ∆𝑡
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜
o 𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐í𝑓𝑖𝑐𝑎 =
𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 ∙𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
1 𝑑𝑝
▪ 𝑄𝑥 =
𝑋 𝑑𝑡
1 𝑑𝑋
▪ 𝑄𝑝 = =𝜇
𝑋 𝑑𝑡

Esterilización

• Cinética de muerte celular

𝑁 = 𝑁0 exp(−𝐾𝜃) 𝑁0 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑚. 𝑜. 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠


𝑁 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑚. 𝑜. 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 𝑎𝑙 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝜃

𝐾 = 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑟𝑢𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑡é𝑟𝑚𝑖𝑐𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑚. 𝑜. (𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 −1 )


𝐸
𝐾 = 𝐴𝑒𝑥𝑝 (− ) 𝐴 = 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 (𝑚𝑖𝑛−1 )
𝑅𝑇

𝑐𝑎𝑙
𝐸 = 𝑒𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑑𝑒 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑡é𝑟𝑚𝑖𝑐𝑎 ( )
𝑚𝑜𝑙

𝑅 = 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑔𝑎𝑠𝑒𝑠 𝑖𝑑𝑒𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑅 = 1,987 𝑐𝑎𝑙/𝑚𝑜𝑙

𝑇 = 𝑡𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑒𝑛 𝑘𝑒𝑙𝑣𝑖𝑛

• Esterilización discontinua por calor húmedo


𝑁
ln ( 0 ) = ∇𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝐾𝑡 criterio de reducción térmica
𝑁
𝑁0 𝑁1 𝑁2
∇𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = ∇𝑐 + ∇𝑚 + ∇𝑒 = ln ( ) + ln ( ) + ln ( )
𝑁1 𝑁2 𝑁
∇𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 + ∇𝑐 − ∇𝑒
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑡𝑚 =
𝐾𝑚
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑐𝑖𝑐𝑙𝑜 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑡𝑐 + 𝑡𝑚 + 𝑡𝑒

• Tiempo de reducción decimal o valor D  tiempo para reducir 10 veces (o 90%) el n° de


m.o. a una temperatura dada.
𝑡 N0=n° de células al inicio del tratamiento.
𝐷 =
𝑡 𝑁
log( 0 )
𝑁𝑋
Nx=n° de células supervivientes después del tratamiento.
• Valor Z  cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor
de 10.
∆𝑇
𝑧= 𝐷
log( 𝑇1)
𝐷𝑇2