UNIVERSIDADE TECNOLÓGICA FEDERAL DO PARANÁ

CURSO DE ENGENHARIA QUÍMICA

Annelise Cabral
Bruna Hellen Franco
Michel Henrique Raimundo

APS 1
Engenharia Bioquímica

APUCARANA
2017
1) Porque os microorganismos são corados? Descreva o tipo de
informação que a técnica fornece. Qual o mecanismo geralmente aceito
para a reação diferencial da coloração de Gram?
Os microorganismos são corados utilizando o método de Gram para
diferenciair as gram-positivas das gram-negativas. O método permite ainda a
vizualização das células e dos possíveis agrupamentos. A técnica consiste na
coloração dos microorganisos de acordo com afinidade da sua parede celular
aborver determinada cor. Sendo assim, os que absorverem a coloração roxa
são caracterizados como gram-positivos, entretando os que obtiverem a
coloração rosa serão as gram-negativas.

2) Quais são as diferenças entre as paredes celulares das bactérias

Grampositivas e Gram-negativas? O que são endotoxinas?
As gram-positivas possuem uma espessa camada rígida de
peptideoglicano e ácido teicóico, já as gram-negativas apresentam uma fina
camada de peptideoglicano, sobre o qual e encontra uma camada composta
por lipoproteínas e lipopolissacarídeos.
As endotoxinas são toxinas que constituem a parede celular de algumas
bactérias e só são liberadas quando a bactéria é destruida. Essas toxinas são
também chamadas de toxinas intracelulares e geralmente causam febres.

3) Imagine que você isolou uma nova espécie de bactéria. Como você
preservaria esta amostra por um período de poucos meses? E por
alguns anos?
Se as bactérias forem metabolicamente inativas, tem-se abaixo as
técnicas a serem aplicadas:
Criopreservação:
 Congelamento e preservação na fase líquida ou gasosa de sódio líquido;
 Congelamento e preservação abaixo de -70°C.
Dessecação:
 Preservação por liofilização;
 Preservação por centrifugação;
 Preservação po ‘L-drying”.
Já se as bactérias forem ativas, existem outros métodos de preservá-la,
tais como:
 Repiques periódicos em ágar ou meio líquido;
 Manutenção de culturas em “slant” de ou com óleo mineral.
 Preservação em água (Castellani).
4) Distinguir uma cultura pura e uma cultura mista?
Uma cultura de micro-organismos é considerada uma cultura pura
quando apenas um tipo de organismo está presente, já uma cultura mista é
quando populações de organismos diferentes estão presentes.

5) Quais são os elementos essenciais para o crescimento da célula? Qual

é a forma de carbono de que os heterotróficos precisam para a sua
nutrição? E os autotróficos?
Os elementos essências para o crescimento das células incluem
carbono, nitrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo.
Em suma todos os organismos requerem carbono de alguma forma. O
carbono é o elemento base das três maiores classes de nutrientes orgânicos
(carboidratos, lipídios e proteínas). Tais compostos fornecem energia para o
crescimento da célula e servem como unidade básica do material celular.
Aqueles micro-organismos que utilizam compostos orgânicos como sua
principal fonte de carbono são denominados heterotróficos. Esses obtêm tais
moléculas orgânicas absorvendo-as a partir do meio ou ingerindo organismos
autotróficos ou heterotróficos.
Os organismos que utilizam dióxido de carbono (a forma mais oxidada
do carbono) como sua principal fonte de energia ou até mesmo única fonte de
carbono são chamados autotróficos

6) Qual a importância de um meio sintético? Explique porque os meios

complexos contendo substratos naturais são quimicamente indefinidos?

É o meio quimicamente definidido, ou seja, trata-se de quantidades

exatas e mensuráveis em micro-escala, sendo assim, pode colaborar seja no
crescimento de uma cultura de micro-organismos de interesse - como no caso
dos Lactobacillus que requerem muitos fatores para o seu crescimento ou a
identificação de componentes químicos do meio como mostrado na figura
abaixo, em que é realizado testes de pH para análise qualitativa do meio
MacConkey - a Escherichia coli forma colônias vermelhas, esta coloração
vermelha é devida à reação de um corante vermelho neutro com o ácido
formado a partir da fermentação da glicose pela E. coli. Já a
Pseudomonas aeruginosa a direita, não forma colônias coloridas.
 Figura1: Exemplos de meios de culturas

Os meios complexos são quimicamente indefinidos, pois são

preparados a partir de produtos naturais, são substâncias químicas
complexas que contém açúcares, aminoácidos, vitaminas e sais e
portanto, sua composição exata é indefinida, como por exemplo as leveduras,
carnes, ou plantas, ou produtos de digestão destas ou de outras fontes.

7) Defina inóculo. Como é a técnica de preparação do inóculo a ser

introduzido em um fermentador em escala industrial?

É como os micro-organismos que são introduzidos em um meio de

cultura para iniciar o crescimento são denominados. (TORTORA, 2012)

Em biotecnologia é a denominação dada a suspensão de

microorganismos de concentração adequada a ser usada na fermentação do
mosto.

Figura 2: Exemplos de inóculos preparados em micro-escala.

Com o crescimento exponencial dos microorganismos, torna-se
necessário a mudança do fermentado para recicipentes maiores, e antes da
introdução no fermentador, na fase laboritorial é realizada a inoculação
diretamente no meio, em condições favoráveis a seu crescimento como será
visto na Figura 3 e assim na fase industrial o mosto é levado a grandes
fermentadores (Figura 4), em que os fermentadores chegam a suportar até
200.000 litros.
Figura 3 - Esquema típico da inoculação

Figura 4 - Produção de Penicilina desde a fase laboritorial a escala industrial.

Vale ressaltar que o número de transferêcias dos inóculos para a

produção industrial dependerá do volume útil do pré-fermentador (germinador),
e que este é diretamente relacionado ao volume do fermentador de produção,
o que pode acarretar em uso de mais germinadores.

8) Quais tipos de gases que afetam o crescimento dos microorganismos?

Geralmente os gases quimioesterilizantes gasosos são utilizados como

esterilizadores inibindo o crescimento de micro-organismos, o exemplo mais
conhecido é o óxido de etileno, que mata todos os micro-organismos e
endósporos, requerendo um período longo de exposição a eles. Há também a
beta-propil-lactona, o dióxido de cloro – em sua forma gasosa, o próprio ozônio
– mesmo que seja desvantajoso em água, e também o uso de fluidos
supercríticos – como o dióxido de carbono que é comprimido tendo
propriedades mistas de gás e líquido. Em suma, tais gases provocam a
desnaturação das proteínas e inibem as enzimas, além de romper as
membranas dos micro-organismos, assim os exterminando.

Tabela 1 – Fluidos gasosos e alguns líquidos que afetam o crescimento dos micro-
organismos.