Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
LABORATORIO N° 4
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE
AGUA DE RIO
HUANCAYO – PERÚ
2016
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIÓN
Existen diversos métodos para cuantificar el número de microorganismos presentes en
muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento
directo por microscopia de fluorescencia, así como los procedimientos basados en
diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos
sólidos o líquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
o la estimación por el método del Número Más Probable (NMP).
El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente
sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para
estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo,
se ha demostrado que también puede ser aplicado para la determinación de
microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos
contaminados, por tanto este método es aplicable para estimar el número de
microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como
anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar
la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se
considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se
denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta
es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los
Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos es
favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad.
Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminación fecal.
Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden
estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos
de organismos productores de enfermedades.
3. FUNDAMENTO TEÓRICO
3.1. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
Debido a que un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-
oral utilizando como vehículo los alimentos y el agua, es necesario contar con
microorganismos que funcionen como indicador de contaminación fecal. Estos
deben de ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben
tener una sobrevivencia similar a la de los patógenos intestinales y debe de ser
capaces de desarrollarse extraintestinalmente.
Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo sobreviven, sino que se
multiplican, por lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado
distinto al que recibe en el agua. En productos alimenticios que han recibido un
tratamiento térmico (pasteurización, horneado, cocción, etc.), se utilizan como
indicadores de malas prácticas sanitarias.
Este grupo de bacterias se encuentra constituido por las siguientes cepas: E. coli
enterotoxigénica (ETEC), E. coli enteropatógena (EPEC), E. coli
enterohemorrágica (EHEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli
enteroagregativa (EAEC) E. coli enteroadherente difusa (DAEC). Existen otras
cepas que no han sido perfectamente caracterizadas; de las cepas anteriores,
las 4 primeras están implicadas en intoxicaciones causadas por el consumo de
agua y alimentos contaminados.
Produce verotoxina, denominada así por su efecto citotóxico sobre las células
Vero, una línea de células renales de monoverde africano. Existen al menos dos
variantes antigénicas de la toxina. La ECEH se ha asociado con colitis
hemorrágica, una variedad grave de diarrea; y con el síndrome urémico
hemolítico, enfermedad capaz de producir insuficiencia renal aguda, anemia
hemolítica microangiopática y trombocitopenia. La verotoxina tiene muchas
propiedades similares a la toxina shiga producida por algunas cepas de Shigella
dysenteriae tippo 1; De los serotipos de E. coli que producen la verotoxina el más
común y el único que puede identificarse en muestras clínicas es el O157:H7. La
E. coli O157:H7 no emplea sorbitol y es negativa a la prueba de MUG.
TÉCNICA DE MUESTREO
Lagos, ríos
En ríos o cursos de agua será preciso considerar diversos factores, tales como:
profundidad, caudal, distancia a la orilla, etc. La muestra se tomará lo más lejos
posible de la orilla, procurando no remover el fondo y evitando los remansos o
zonas de estancamiento.
Para tomar una muestra del agua de un lago o de un río se sujetará el frasco por
el fondo en posición invertida, sumergiéndolo completamente y dándole la vuelta
en sentido contrario a la corriente (río) o desplazándolo horizontalmente en la
dirección de la boca del frasco (lago).
Manantiales
En manantiales naturales o fuentes de caudal continuo, sin dispositivos de
intermitencia, se tomará la muestra directamente sin adoptar medidas especiales
de drenaje.
Bocas de riego
Para el muestreo en bocas de riego se utilizarán acoplamientos especiales que
permitan operar como en el caso de un grifo.
En todos los casos la muestra de agua no deberá llenar totalmente el frasco,
siendo necesario dejar un espacio interior a fin de facilitar su homogenización en
el momento de iniciar los análisis.
Pozos y depósitos
Si se dispone de bomba de captación se opera como se ha indicado en el caso
del grifo.
Si no existe sistema de bombeo, no es posible obtener una muestra
representativa.
Con esta salvedad se introducirá en la masa de agua el frasco de muestreo o un
cubo lo más limpio posible, sostenidos con una cuerda y tomando la muestra tras
haber agitado la superficie del agua con el mismo recipiente.
También podrán utilizarse aparatos especiales lastrados que permiten introducir
el frasco esterilizado y destaparlo a la profundidad deseada. En estos casos
deberán utilizarse frascos con tapón a presión.
Grifos
Una vez retirados filtros u otros accesorios, se procederá a una cuidadosa
limpieza con agua o alcohol.
Con el grifo cerrado se flameará el extremo del mismo, mediante la llama
obtenida con un poco de algodón empapado de alcohol y sostenido con unas
pinzas o bien una lámpara de soldar.
Se abrirá el grifo para que el agua fluya abundantemente y se renueve la
contenida en la tubería que la alimenta. Se destapará el frasco esterilizado sin
tocar la boca del mismo ni el interior del tapón.
Todos los movimientos deberán realizarse sin interrupciones, al abrigo de
corrientes de aire y con las máximas precauciones de asepsia.
Este método podrá utilizarse para cualquier tipo de agua y será el procedimiento
oficial obligatorio en casos de litigio.
EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente
de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una
evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa
en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de
diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes
en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de
este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la
población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad
poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones
seriadas y el uso de una tabla probabilística. Algunas de las ventajas del NMP
son la capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos
relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la
densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una
muestra de suelo usando el método de infección de plantas, provee una
recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados,
determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente, y suele ser más
rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en
platos de cultivo, entre otros.
4. PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES
1 pipeta de 10mL
2 pipetas de 1ml
1 propipeta
1 matraz de 250mL
1 matraz de 100mL
1 gradilla
2 tubos de ensayo con tapa blanca
9 tubos de ensayo con tapa negra
1 probeta de 50mL
EQUIPOS
REACTIVOS
Peptona 0.1%
Muestra (agua de río)
Agua destilada
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Lavado de Materiales:
Las canastillas y/o gradillas con tubos con tapones de algodón deben
cubrirse con papel aluminio para evitar que se mojen y diluyan el medio
de cultivo.
Llevar las muestras al laboratorio lo más pronto posible, para analizarlas antes
de que transcurran 2 horas, o 5 horas si se transportan en hielo.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
RESULTADOS
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
5. CONCLUSIONES
En el presente laboratorio se logró realizar la evaluación de la calidad sanitaria
de muestras de agua proveniente de río mediante el método de Número más
probable (NMP) para la identificación de coliformes totales y coliformes fecales
(Escherichia coli)lo cual determino la calidad sanitaria de nuestra muestra.
6. SUGERENCIAS
7. BIBLIOGRAFÍA
http://www.monografias.com/trabajos15/analisis-agua/analisis-
agua.shtml#OBJET#ixzz4BjOyyiYv
http://www.monografias.com/trabajos89/determinacion-coliformes-
totales-fecales/determinacion-coliformes-totales-fecales.shtml
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-
fecales-Ecoli-NMP_6529.pdf
8. ANEXOS
Fuente :Propia
Fuente :Propia