Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de

Biotecnología

Diseño de Plantas (Taller) 7AV2

PRODUCCIÓN DE INSULINA HUMANA

RECOMBINANTE

Integrantes:
Castañeda Castañeda Luis Enrique

Cepeda Chávez Juan Jesús

Cervantes Martínez Alejandra

García Reyes Areli

Lazcano Macías Matías Cuauhtémoc

Plata Pérez Alejandro

Profesor:
M. en C. Rubén Medina Flores

Fecha de entrega: 14 de septiembre de 2018

 Planta de producción de Insulina humana recombinante
Problemática
La diabetes mellitus es una enfermedad crónica provocada por la incapacidad del organismo
para metabolizar glucosa de manera normal, por una deficiencia total o parcial de la hormona
insulina. Es el principal problema de salud en México, no sólo por su alta frecuencia sino
porque es la primera causa de muerte en adultos, amputaciones, ceguera, insuficiencia
renal, infartos cardiacos, invalidez y causa de hospitalizaciones.

La OMS determinó que el número de personas con diabetes en el mundo aumentó de 108
millones en 1980 a 422 millones al 2014 y hay 3,2 millones de muertes anualmente
asociadas a la diabetes.

El director del IMSS, Mikel Arriola Peñalosa, afirmó que la enfermedad va en aumento a un
paso alarmante. De acuerdo con cifras del IMSS se tiene lo siguiente: Más de 21 mil muertes,
4 mil 500 amputaciones y 2 mil incapacidades permanentes en 2015.

El IMSS gastó 42 mil 776 millones de pesos del gasto del Seguro Social, en el año 2015. Sin
embargo, si la situación no cambia, se prevé que para el año 2050 el gasto aumente a 350
mil millones de pesos, un presupuesto con el que no se cuenta.

Justificación
La demanda de insulina es una problemática de salud pública a nivel nacional, lo cual implica
que entrar al mercado de insulina no solamente es viable, también es posible generar
grandes utilidades con solo abordar una pequeña fracción del mercado nacional. Ya que no
solo el gobierno es un comprador mayorista de
insulina, también existen farmacias que requieren de insulina en sus inventarios; por lo cual
el mercado de insulina es enorme.
En este proyecto, se desarrollará en torno a la producción, por medio de la tecnología de
ADN recombinante, de insulina humana recombinante, cuya estructura es idéntica a la
hormona antidiabética producida por el páncreas humano. La utilización de insulina humana
recombinante no causa efectos adversos, por lo cual estaremos ofreciendo al mercado
nacional la mejor clase de insulina que se puede obtener a través de la biotecnología, hasta
ahora.

Definición del producto

La insulina humana recombinante es una proteína de 51 aminoácidos C257H383N65O77S6,
de 5807,7 Da y pI 5,4; formada por dos cadenas polipeptídicas A (21 aa) y B (30 aa), unidas
mediante dos puentes disulfuro. Esta es obtenida con procesos biotecnológicos, en nuestro
bioproceso se obtendrá a través de una cepa de E. Coli modificada para sintetizar insulina
humana.
Una vez obtenida la insulina purificada, ésta se debe de disolver en un excipiente, este puede
ser: m-cresol, glicerol, fenol sulfato de protamina, fosfato sódico dibásico 7H2O, óxido de
zinc, agua para preparaciones inyectables, se puede utilizar ácido clorhídrico y/o hidróxido
de sodio para ajustar su pH, para posteriormente envasar en frascos especializados para
mantener la solución estéril incluso después de realizar la primer toma para su aplicación al
paciente.

Especificaciones del Producto

De acuerdo a la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, la insulina humana

recombinante (Biofármaco), considerando 1 unidad de insulina equivalente a 0.0347 mg,
debe contener

Tabla 1. Especificaciones de la insulina (fármaco).

Parámetro Descripción
Concentración 95%<Insulina<105%

Aspecto Polvo blanco o casi blanco de consistencia

fina

Solubilidad Ácidos minerales diluidos, soluciones

alcalinas diluidas, insoluble en agua y alcohol

Proteínas derivadas de la célula hospedera 10 ppm

Precursor de cadena única 10 ppm

Concentración de zinc <1%

Pérdida por secado (Muestra de 0.200g) <10% (105°C por 16 hr)

Residuo de la ignición (Muestra de 0.200g) <2.5%

Impurezas de compuestos con P.M. superior <1%

a la insulina

Límites microbianos (Muestra de 0.2g) 300 UFC/g

Endotoxinas bacterianas <10 UI/mg

Etiquetado Indicación clara del tipo de insulina y el

método de obtención

Almacenamiento Contenedor protegido de la luz a -18°C

Proinsulina <1 ppm

Peso Molecular 6000 Da

Punto isoeléctrico 5.30-5.35

 De acuerdo a la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, el biomedicamento
(inyectable), deberá tener las siguientes especificaciones:

Tabla 2. Especificaciones de la insulina (medicamento inyectable).

Parámetro Descripción
Concentración 90%<Insulina<111%

Forma farmacéutica Suspensión

Condición de uso Inyectable

pH 6.9-7.8

Insulina en el sobrenadante <2.5% del contenido total de insulina

Impurezas con P.M. mayor que el de la <3% si contiene protamina o <2% si no

insulina contiene protamina

Proteínas relacionadas <5% de insulina desamido, <6% otros

Zinc total 0.010-0.040 mg por 100 UI

Endotoxinas bacterianas <80 UI por 100 UI

Esterilidad Requerida

Conservación 2°C-8°C

Instrucciones de preparación
La insulina tiene baja solubilidad a un pH neutro. Puede ser solubilizada a 1-10 mg/mL diluida
en acético (1%) o ácido clorhídrico, pH 2-3. También puede ser diluida en 125 mL NAHCO3.

Excipientes
 Fenol
 Metacresol
 Glicerol
 Acetato de zinc
 Fosfato disódico dihidrato
 Arginina hidrocloruro
 Nicotinamida (vitamina B3)
 Ácido clorhídrico (para ajuste del pH)
 Hidróxido de sodio (para ajuste del pH)
 Agua para inyectables

La cantidad de cada excipiente no es especificada por él o los fabricantes, debido a dos

factores, el primero de ellos es la vigencia de las patentes y segundo que las normas
nacionales e internacionales expedidas por organismos oficiales como la FDA, COFEPRIS
e ICH no obliga a las industrias a revelar las cantidades utilizadas en la formulación a
expensas de situaciones de riesgo mundial como pandemias.

Usos
 Tratamiento de diabetes insulino dependiente.
 Pacientes con diabetes no insulino dependiente de larga evolución, que ya no
responden al tratamiento con hipoglucemiantes orales.
 Coma hiperglucémico
 Traumatismos
 Infecciones graves

Importancia económica y valor de mercado

El tratamiento con insulina para la diabetes es considerado actualmente como la mejor

opción. En la diabetes tipo 1 es obligatoria, para la tipo 2, se ha demostrado que un gran
porcentaje de las personas requieren utilizarla, para la diabetes gestacional, la insulina
continúa siendo el tratamiento de elección.

Según el Instituto Nacional de Salud Pública, la diabetes es la principal causa de muerte en

México, con un número estimado de 80,000 muertes por año. Se prevé un incremento
mundial del número de pacientes, de 36 millones en 2011 a 552 millones en 2030.

Actualmente en el mercado mexicano un frasco de insulina humana de 10 ml tiene un precio

de mercado que oscila entre los $550 a $300. Dependiendo del consumo de azúcares de la
persona reside la cantidad de insulina que requiere inyectarse, sin embargo el promedio
generalizado es de 1 frasco al mes. Tomando en cuenta lo anterior se puede asumir que una
sola persona diabética al año puede gastar hasta $6,600.00MXN

Demanda, porcentaje de mercado a abordar y producción de insulina

Una vez definido el producto final, se requiere saber la demanda nacional estimada de
nuestro producto. Sin embargo no se encontraron datos respecto a la demanda de frascos
de insulina de 10 ml a nivel nacional, por lo cual se tuvo que realizar un cálculo indirecto de
la demanda de éstos a través de la cantidad de pacientes diagnosticados con diabetes en
México

Una vez realizados los cálculos se obtuvo una demanda nacional 57,600,000 frascos por
año (cincuenta y siete millones seiscientos mil). Se determinó que se abordará el 4% del
mercado nacional, siendo nuestra producción anual de 2,304,00 frascos (dos millones
trescientos cuatro mil). Finalmente determinamos la cantidad de insulina a producir para
elaborar la solución que contendrán nuestros frascos, 79.94 kg de insulina/año;
redondeando da de 80 kg de insulina/año. Esta pequeña cantidad se debe a que un frasco
únicamente contiene 34.7 mg de insulina. (Consultar Anexo 1)

La cantidad de capital anual esperada con nuestra producción, partiendo de un precio de

$500MXN por unidad, es de $1,152,000,000MXN (Mil ciento cincuenta y dos millones de
pesos). (Consultar Anexo 1)

Producto final

La finalidad del proyecto es elaborar frascos de 10ml con 1000 U de insulina humana
recombinante. Esto debido a que es la presentación más demandada del producto en el
mercado nacional. Únicamente venderemos los frascos de insulina, sin adentrarnos en la
producción o distribución de jeringas para administrar la solución a los pacientes.

Figura 1.- Ejemplo de producto finalizado, insulina humana en presentación de 10ml con 100 U de
insulina
Técnica de Producción de Insulina: Insulina Humana Recombinante

Para la producción por este medio se sintetizan químicamente las secuencia de DNA
correspondiente a las cadenas polipeptídicas A y B de la insulina que se insertan por
separado en un gen bacteriano del plásmido recombinante en bacterias

E. coli, donde se multiplican. Las células bacterianas se recuperan por filtración después de
la fermentación. Estas se rompen para liberar los productos proteicos intracelulares. Los
cuerpos de inclusión, donde se encuentra la proteína de interés, son recuperados por
centrifugación diferencial. Una vez purificadas las dos cadenas, se unen mediante una
reacción que forma puentes disulfuro y se obtiene insulina humana pura. El producto final,
la insulina humana biosintética, es idéntica en todos los aspectos a la insulina purificada del
páncreas humano.
 Figura 2. Modificación genética de E. Coli para la expresión de insulina humana.

Microorganismo seleccionado

Se escogió la plataforma de producción que presentó los mejores parámetros, siendo esta la
cepa de Escherichia Coli BL21(DE3) modificada con el vector pET- 3aT2M2 que expresa los
precursores utilizados para la síntesis de la insulina. Esta cepa produce 1.085 (g/L*hr).

Figura 3. Escherichia coli cepa BL21(DE3). Figura 4. Vector insertado.

 Parámetros cinéticos
Tabla 2.- Parámetros cinéticos de organismos productores de insulina

Microorganismo E. coli1 E. coli2 S. P.

cerevisiae3 pastoris4

Destino del producto Citoplasma Excretado Excretado Excretado

Biomasa seca [g/L] 73 1.2 5 59

Vel. Específica de Crecimiento [h-1] 0.08 – 0.12 No se reporta < 0.33 < 0.03

Tasa de Prod. [mg/g h] 14.2 3.4 0.21 0.375

Conc. del Producto [g/L] 4.34 0.009 0.075 3.07

Productividad [mg/L h] 1 085 4.01 1.04 17

Canales de distribución
La distribución de nuestro producto será a través de canales indirectos, lo cual implica que
no tendremos contacto directo con el consumidor, por lo cual tendremos que realizar
campañas publicitarias enfocadas al mercado de mayoreo.
Nuestro cliente principal será el gobierno, a través del IMSS; mientras que nuestros otros
clientes serán empresas privadas especializadas en la venta y distribución de medicamentos
(farmacias). Igualmente se contemplarán hospitales privados que cumplan con la cuota
mínima de venta a mayoreo o con los que se llegue a un acuerdo y se realice un contrato de
venta específico.

Localización de la planta
Para determinar la localización se consideraron ubicaciones en las 3 ciudades más pobladas
de México: Ciudad de México, Estado de México y Guadalajara.

Esto debido a que a mayor población, existirá una mayor demanda de nuestro producto, al
igual que todas las ciudades contempladas poseen una gran cantidad de infraestructura
hospitalaria, además de locales donde se venden productos farmacéuticos.
A continuación se muestran los sitios seleccionados para la ubicación de nuestra planta:
1.-Ubicación: zona industrial Iztapalapa, sobre Periférico Oriente a 2 cuadras de Av. Tláhuac,
area 5,000 m2, precio: $60,000,000.00.

Figura 5.- Terreno para planta de insulina en Ciudad de México, Iztapalapa.

2.- Ubicación: Avenida Río de los remedios cruce con la autopista federal México- Pachuca
cp 54190 Tlanepantla Edo. de México, Área de 6,299 m2, Precio a negociar.

Figura 6.- Terreno para planta de insulina en Estado de México, Río de los Remedios.
 3.- Ubicación: Av. 1780, Col. Zona industrial, Guadalajara, cp 44940, Área 1,800 m2, $
155,000 mensuales.

Figura 7.- Terreno para planta de insulina en Guadalajara, Zona Industrial.

Tabla 3.- Matriz de puntos ponderados para selección de sitio de la planta.

Valor SITIO 1 SITIO 2 SITIO 3

Puntos a valorar CDMX Edo. México Guadalajara

P C P C P C

Infraestructura de 8 4 32 3 24 4 32
servicios públicos

Escala de mercado 10 5 50 4 40 3 30

Proximidad a materiales 7 2 14 3 21 4 28

Vías de comunicación 8 5 40 3 24 2 16

Ambiente laboral 7 3 21 2 14 4 28

Impuestos 6 2 12 3 18 4 24

SUMATORIA 169 141 158

 De acuerdo con lo obtenido en la matriz anterior, se concluye que la mejor ubicación para
nuestra planta de insulina es el sitio de la Ciudad de México. Los factores principales a favor
de la Ciudad de México fueron: escala del mercado, vías de comunicación y la infraestructura
de servicios públicos

Medio de cultivo y materia prima

El medio de cultivo a utilizar es un medio específico para la producción de insulina que
contiene los siguientes componentes por litro, también se muestran la cantidad necesaria
para la producción de un mes (9,166.6L) y de un año (110,000L) con fines de economizar
en la obtención de la materia prima.
Tabla 4. Materia prima necesaria para un litro de medio, para la producción mensual y anual.
Materia prima Cantidad por litro Cantidad para Cantidad para
9,166.6 L 110,000L
KH2PO4 5g 45.8 kg 550 kg

K2HPO4 3g 27.5 kg 330 kg

(NH4)2SO4 1.67 g 15.31 kg 183.7 kg

FeSO4‚H2O 0.1 g 0.92 kg 11 kg

CaCl2‚2H2O 0.02 g 0.183 kg 2.2 kg

Tiamina-HCl 0.1 g 0.92 kg 11 kg

Extracto de levadura 20 g 183.33 kg 2200 kg

MgSO4‚7H2O 2g 18.33 kg 220 kg

Glucosa 20 g 183.33 kg 2200 kg

Ampicilina 1g 9.16 kg 110 kg

 Adquisición de la materia prima
Tabla 5. Adquisición de materia prima, venta mínima y costos anuales

Materia Gramos Cantidad Venta mínima Costo total anual Origen de la

anual materia prima
Prima por litro

Precio Cantidad Precio Cantidad

KH2PO4 5g 550 kg $5,641 100 kg $33,846 600 kg Hebei, China

K2HPO4 3g 330 kg $12,223 100 kg $48,892 400 kg Hebei, China

(NH4)2SO4 1.67 g 183.7 kg $29.09 100 kg $58.17 200 kg Hebei, China

FeSO4‚H2O 0.1 g 11 kg $1357.36 1 kg $14,930 11 kg Shandong, China

CaCl2‚2H2O 0.02 g 2.2 kg $6,087 2.5 kg $6,087 2.5 kg E.U.A.

Tiamina-HCl 0.1 g 11 kg $ 1919.70 1 kg $21,116.7 11 kg Shanghai, China

Extracto 20 g 2200 kg $40.99 0.250 kg $368,91 2250 kg E.U.A.

de
levadura

MgSO4‚7H2O 2 g 220 kg $717.46 1 kg $157,841.76 220 kg E.U.A.

Glucosa 20 g 2200 kg $11692.70 1 ton $35,076 3 ton Shandong, China

Ampicilina 1g 110 kg $14543.16 25 kg $72,715.80 125 kg E.U.A.

TOTAL $54,251.46 $390,563.43

Bases de diseño (Número de lotes a producir por año, mes, semana)

Tabla 6. Producción total de insulina por año, mes, semana y día

Producción total Anual Mes Semana Día

gr producto 79948.8 6662.4 1537.47692 316.00

L solución 106305.211 8858.7676 2044.33098 291.25

biomasa (kg) 8504.4169 708.70140 163.546479 23.30

La siguiente tabla muestra los gramos de producto, los litros de solución y la biomasa
producida por un lote con una duración de 6 horas con un volumen de 32.36 litros, después
es escalado hasta la producción anual que se tendría por un reactor considerando 3 lotes
diarios.

Tabla 4. Producción por lote de insulina por año, mes, semana y día

Por reactor Anual Mes Semana Día Lote

(6 hrs)
gr producto 26649.60 2220.80 512.49 105.33 35.11

L solución 35435.07 2952.92 681.44 97.08 32.36

biomasa (kg) 2834.80 236.23 54.51 7.7 2.59

El número de lotes a producir de acuerdo a la producción total se presenta en la tabla 5.

Tabla 5. Producción por lote

Periodo
Anual Mensual Semanal Diario

Número de
2277 189.75 43 9
lotes

Diseño del biorreactor

El dimensionamiento del biorreactor para insulina partirá desde el volumen requerido a
manejarse por lote, el cual es de 32.26 L. La geometría de nuestro biorreactor será cilíndrica
con tapa torisférica. Los cálculos de dimensionamientos se encuentran en el Anexo 3

Figura 8.- Diagrama de biorreactor con dimensiones

Diagrama de control y automatización del biorreactor

 Figura 9.- Diagrama de control y automatización del reactor.

En el diagrama se consideraron sensores y controladores para los siguientes parámetros:

pH, temperatura, espuma y aireación. El mantener bajo control estos parámetros es de vital
importancia para que el proceso se lleve a cabo de forma óptima y con ello la calidad de
nuestro producto final cumpla con la calidad necesaria para su comercialización.

Se controlará la temperatura a través de un enchaquetado donde pasará vapor o agua fría

para regular la temperatura. El pH se controlará a través de la adición de solución ácida o
alcalina. La espuma se abatirá agregando un tensoactivo. Para regular el oxígeno disuelto
se adicionará una mezcla de oxígeno y nitrógeno en caso de que el OD disminuya a un punto
crítico. Todos lo previamente mencionado será regulado automáticamente.

Lo único que no requerira de algun controlador dentro de nuestro biorreactor será la adicción
del caldo de cultivo al biorreactor, ya que esa será siempre una cantidad constante, al igual
que la inyección de inóculo de cepa E. Coli modificada.
 Costo de la materia prima por lote
Tabla 6. Costo de la materia prima por lote

Gramos por Cantidad por

Materia Prima Venta mínima Costo por lote
litro lote

KH2PO4 5g 161.8 g $5,64 / 100 kg $9.13

K2HPO4 3g 97.08 g $12,223 / 100 kg $11.87

(NH4)2SO4 1.67 g 54.0412 g $29.09 / 100 kg $0.02

FeSO4‚H2O 0.1 g 3.236 g $1357.36 / 1 kg $4.39

CaCl2‚2H2O 0.02 g 0.6472 g $6,087 / 2.5 kg $1.58

Tiamina-HCl 0.1 g 3.236 g $ 1919.70 / 1 kg $6.21

Extracto
d 20 g 647.2 g $40.99 / 0.250 kg $106.11
e levadura

MgSO4‚7H2O 2g 64.72 g $717.46 1 kg $46.43

Glucosa 20 g 647.2 g $11692.70 /1Ton $7.57

$14543.16 / 25
Ampicilina 1g 32.36 g $18.82
kg

TOTAL $212.13
 Diagrama de bloques

Figura 10. Diagrama de bloques del proceso

Descripción del proceso

Todo el lote del biorreactor se lleva a cabo en el equipo mencionado en el diseño, el proceso
consta de 3 biorreactores y 3 lotes cada uno, fueron operados a pH 6.75 y 37 ° C. El oxígeno
disuelto es controlado por encima del 40% de saturación de aire para evitar la limitación de
oxígeno. Adquisición de datos y control de varios parámetros operativos (p. ej., temperatura,
oxígeno disuelto, concentración de gen, pH, rpm y la velocidad de flujo del medio) se
controlan de manera efectiva utilizando los electrodos del biorreactor.

Cuando la velocidad específica de crecimiento (o tasa de absorción de glucosa) de E. coli

excede una cierta tasa crítica, la formación de ácido acético aumenta y se convierte en un
producto inhibidor significativo. Por lo tanto, la tasa de crecimiento de E. coli, debe ser
cuidadosamente controlado para lograr una alta densidad celular en el lote.

En este estudio, el proceso de lote fue operado con el control de retroalimentación de medio.
En el control de pH-stat, la alimentación de medio es controlada por el modo on-off
dependiendo del pH del cultivo, es decir, la alimentación del medio ocurre mientras el pH del
cultivo está por encima de un cierto valor, pHset (6.75 en este caso) y la alimentación del
medio se desactiva cuando el pH del cultivo está por debajo del pHset. La velocidad de
alimentación de medios volumétricos durante el periodo de alimentación se incrementó
gradualmente a medida que la concentración de células aumenta. Tan pronto como la
concentración de la célula recombinante alcance una concentración apropiada (70-80 g/L),
la expresión del gen recombinante se inicia la etapa de posinducción.
El inductor T7, IPTG se inyectó por separado para el cultivo (a cantidades variables) a través
de un filtro de jeringa al comienzo de la alimentación de posinducción. Como el crecimiento
celular no se ha observado mientras el gen recombinante se expresa, la velocidad de
alimentación volumétrica de los medios de posinducción se mantuvo a una alimentación
constante.

Balance de materia

Figura 11. Diagrama de proceso

Equipos de separación y purificación, capacidad y rendimientos

Figura 12. Diagrama de proceso ilustrado

Tabla 6. Eficiencia de los equipos 7,8,9,10

Equipo Eficiencia
Centrífuga de discos 85

Filtro 85
Columna para Cromatografía de
80
intercambio iónico
Biorreactor 80
Cristalizador 95
Digestor 80

Consultando bibliografía se obtuvieron los siguientes rendimientos teóricos, sin embargo los
equipos que se utilizarán en nuestro proceso pueden presentar diferentes rendimientos, por
lo cual se requerirá un reajuste de nuestro balance de presentarse tal caso.
Fichas técnicas de los equipos

Biorreactor

Centrífuga de discos
Filtro tangencial
Cromatógrafo

Digestor enzimático
Cristalizador
Mezclador

Envasador/etiquetador
 Normatividad aplicable al producto
La normatividad aplicable para la comercialización del biomedicamento de insulina son las
siguientes:
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, edición vigente y sus suplementos.
Establece los límites permitidos en la fabricación del fármaco y del medicamento,
además estipula los métodos de análisis necesarios para su caracterización y la
secuencia de pasos para fabricar la forma farmacéutica.
NORMA Oficial Mexicana NOM-164-SSA1-2015, Buenas prácticas de fabricación de
fármacos.
Esta Norma establece los requisitos mínimos necesarios para el proceso de
fabricación de los fármacos o principios activos comercializados en el país o para
fármacos en desarrollo para uso en investigación clínica..
NORMA Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2015, Buenas prácticas de fabricación de
medicamentos.
Esta Norma establece los requisitos mínimos necesarios para el proceso de
fabricación de los medicamentos para uso humano comercializados en el país y/o
con fines de investigación.
NORMA Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-2015, Estabilidad de fármacos y medicamentos,
así como de remedios herbolarios.
Esta Norma establece las especificaciones y los requisitos de los estudios de
estabilidad, su diseño y ejecución, que deben de efectuarse a los fármacos,
medicamentos, así como a los remedios herbolarios para uso humano, que se
comercialicen en territorio nacional, así como aquellos medicamentos con fines de
investigación.
Norma Oficial Mexicana NOM-072-SSA1-2012, Etiquetado de medicamentos y de
remedios herbolarios.
Los textos que contiene el etiquetado e instructivo de los medicamentos y los
remedios herbolarios, son la información de carácter sanitario y comercial que
identifica a cada medicamento o grupo de medicamentos de este tipo, así como los
remedios herbolarios, con el objeto de establecer con precisión su correcta
identificación en el mercado, para su venta y suministro, así como para orientar y
advertir al usuario sobre el adecuado y seguro consumo de estos insumos para la
salud.
Dichos textos deberán ser autorizados y entregados por la Secretaría de Salud ya
sea por la obtención de registro sanitario del medicamento, de la clave alfanumérica
de remedio herbolario o por modificaciones a las condiciones de registro
La norma tiene como fin establecer los requisitos que deberá contener el etiquetado
de los medicamentos y los remedios herbolarios que se comercializan o suministran
en el territorio nacional, sus instructivos y el etiquetado de las muestras médicas de
los mismos
 Residuos

Tratamiento de residuos
La obligación del generador de residuos peligrosos a inscribirse en el registro que la
SEMARNAT establezca al efecto, así como llevar una bitácora mensual y manejar sus
residuos peligrosos de acuerdo a lo establecido por el mismo Reglamento y las normas
oficiales mexicanas correspondientes.(Artículo 8 del Reglamento a la LGEEPA)
Tratamiento de biomasa
durante la etapa de crecimiento microbiano se obtiene biomasa como producto secundario
de la insulina, al ser generado por una cepa modificada es considerado un residuo peligroso
biológico infeccioso, por lo cual debe tener un tratamiento especial
Los RPBI antes de eliminarse deben ser tratados para erradicar toda posibilidad de infección;
uno de los métodos de tratamiento más utilizados es la incineración.
Teniendo una biomasa por lote de 6 horas y por reactor de 2.59kg, un total por dia y 3
reactores utilizados de 23.30kg, en un mes 8504.4169kg los datos de descarga de la planta
serian 291.25 L/dia

Normatividad para residuos

Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005, que establece las características, el
procedimiento de identificación, clasificación y los listados de los residuos peligrosos.

Se especifica como un residuo biológico infeccioso, aquellos derivados de la producción de

biologicos, aunque no especifica para cepas modificadas
Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, protección ambiental - salud
ambiental - residuos peligrosos biológicoinfecciosos - clasificación y especificaciones de
manejo.
Agente biológico-infeccioso Cualquier microorganismo capaz de producir enfermedades
cuando está presente en concentraciones suficientes (inóculo), en un ambiente propicio
(supervivencia), en un hospedero susceptible y en presencia de una vía de entrada.
Tratamiento El método físico o químico que elimina las características infecciosas y hace
irreconocibles a los residuos peligrosos biológico-infecciosos
Clasificación de los residuos peligrosos biológico-infecciosos
Los cultivos y cepas de agentes biológico-infecciosos
Los cultivos generados en los procedimientos de diagnóstico e investigación, así como los
generados en la producción y control de agentes biológico-infecciosos.

Etiquetado
Tabla 7. Envasado del tipo de residuos
Generdador
Tabla 8. Clasificación de los generadodres de residuos

Almacenamiento
Las bolsas deberán ser de polietileno de color rojo traslúcido de calibre mínimo 200 y de
color amarillo traslúcido de calibre mínimo 300, impermeables y con un contenido de metales
pesados de no más de una parte por millón y libres de cloro, además deberán estar
marcadas con el símbolo universal de riesgo biológico y la leyenda Residuos Peligrosos
Biológico-Infecciosos (Apéndice Normativo), deberán cumplir los valores mínimos de los
parámetros indicados en la tabla 3 de esta Norma Oficial Mexicana. Las bolsas se llenarán
al 80 por ciento (80%) de su capacidad, cerrándose antes de ser transportadas al sitio de
almacenamiento temporal y no podrán ser abiertas o vaciadas.
El periodo de almacenamiento temporal estará sujeto al tipo de establecimiento generador,
como sigue:
(a) Nivel I: Máximo 30 días.
(b) Nivel II: Máximo 15 días.
(c) Nivel III: Máximo 7 días.
Como mensualmente se producen 708 kg de biomasa se concidera como un generador de
nivel 3 por lo cual la recoleccion de los residuos seran cada semana por la recolectora y
tratadora
Garbage con incineracion
Datos de la empresa autorizada en el manejo de residuos peligrosos, acopio, reciclaje,
aprovechamiento. tratamiento de RPBI
Recolectora y Tratadora Garbage, SA de CV
Av. del Venado No. 26, Lote 24, Manzana 1, Col. Parque Industrial Tenango del Valle, CP
52300 Tenango del Valle 90 México 15 TELEFONO: 01 72 22 15 83 04

Normatividad para descargas

Se establede de acuerdo al articulo 1, fraccion V de la LGEEPA, El aprovechamiento
sustentable, la preservación y, en su caso, la restauración del suelo, el agua y los demás
recursos naturales, de manera que sean compatibles la obtención de beneficios económicos
y las actividades de la sociedad con la preservación de los ecosistemas;
NORMA Oficial Mexicana NOM-002-ECOL-1996, Que establece los límites máximos
permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a los sistemas de
alcantarillado urbano o municipal.
Tabla 9. Límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas

En esta norma no se tiene contemplado la DQO para las descargas de aguas

residuales en alcantarillado por lo cual la descarga de elementos organicos de facil
degradacion no aplica por lo que se emplean los parametros de la NORMA Oficial
Mexicana NOM-001-ECOL-1996, Que establece los límites máximos permisibles de
contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales
Tabla 10. Límites máximos permisibles para contaminantes básicos

Tabla 11. Límites máximos permisibles para metales pesados y cianuros

Generalmente, estas aguas residuales contienen:

● Un elevado contenido de materia orgánica, de la cual una gran fracción es materia

orgánica fácilmente biodegradable (alcoholes, acetonas, etc.)
● Compuestos inhibidores y tóxicos (antibióticos)
● Jabones y detergentes con tensioactivos
● Metales de los medios de cultivo

La fórmula para biomasa estandar es de Porges C5H7O2N, los insumos que son medio de
cultivo como se ven enla Tabla 6. Costo de la materia prima por lote, menciona las
composiciones de los distintos medios, dentro de los grupos que no entran en la formula de
biomasa son, los fosfatos, potacio, hierro, cloruro de calcio, magnecio y sulfatos, en su
totalidad de los cuales solo el potacio, fosforo hierro, cloro, calcio y magnecio salen en la
solucion liquida junto con trazas de biomasa que no se logran recuperar por lo cual los
principales contamiantes a eliminar son la DBO y los ya mecionados anteriormente

Los datos obtenidos en concentraciones de contaminación son bajos ya que se estima que
después de retirar la biomasa generada en los procesos se retiran el 90% de las
concentraciones, por lo cual son relativamente baja a las normales de las industrias de
fermentación
Cada etapa del tren de tratamiento es distinto en cuento a % de remoción es distinto para
rejillas aplica la disminución de SST y DBO 30% y 15% respectivamente, para la floculación
coagulación SST 95% y DBO de 65 para SS y DQO 95 y 65, ya que se tiene un índice de
biodegradabilidad (DBO/DQO) de 76% hay un buen índice para degradar de forma aerobia
en un reactor biológico, se considera biodegradable índices mayores a 0.4, para el reactor
biológico la disminución consta de 50% tanto en DBO como DQO así llegando a finalizar
el tren de tratamiento, hasta eliminar las bacterias generada por el reactor biológico
Se manejan distintas normas ya que la descarga se hará en alcantarillado por lo cual en la
NOM-002-SEMARNAT.1997 no vienen contemplado muchos contaminantes por lo cual se
realiza un tratamiento para descargar una mejor calidad de agua
Resultados esperados durante el tren de tratamiento, con respecto a los equipos a
utilizar
 Anexos

Anexo 1.- Cálculo de demanda, porcentaje de mercado a abordar y producción anual

de insulina

6.4 millones de personas diagnosticadas con diabetes

Promedio 1 frasco/mes= 12 frascos/año
Asumiendo que un 75% requiere tratamiento con insulina
(6.4M)*(0.75)= 4.8M
4.8 millones de pacientes que requieren insulina 4.8M*12 frascos/año= 57.6
millones*frascos/año Cada frasco es de 10mL con 100U/mL
57.6 millones*frascos/año Abordando el 4% del mercado (57.6
millones*frascos/año)(0.04) 2,304,000 frascos/año
[10 ml/frasco] [0.0347 mg/UI insulina][1000U/frasco][100U/ml] (2,304,000
frascos)*[10 ml/frasco]=23,040,000 ml (23,040,000 ml)*[100U/ml]=2,304,000,000
U/frasco
(2,304,000,000U)*[0.0347 mg/UI insulina]= 79,948,800mg insulina 79,948,800 mg
insulina=79,949 g insulina/año=79.949 kg insulina/ año 80 kg/año
Anexo 2.-Cálculo del balance global del proceso de producción
Anexo 3.- Dimensionamiento del biorreactor
 Referencias

1. Shin et al. Enhanced production of human mini-proinsulin in fed-batch cultures at high cell density
of Escherichia coli BL21(DE3)[pET-3aT2M2]. Biotechnol Prog 1997, 13:249–257.

2. Mergulhao et al. Evaluation of bottlenecks in proinsulin secretion by Escherichia coli. J

Biotechnol 2004, 109:31–43.

3. Kjeldsen T. Yeast secretory expression of insulin precursors. Appl Microbiol Biotechnol 2000,
54:277–286.

4. Gurramkonda et al. Application of simple fed-batch technique to high-level secretory production

of insulin precursor using Pichia pastoris with subsequent purification and conversion to human
insulin. Microb Cell Fact 2010, 9:31.
5. Sigma. Product information: Insulina Humana Recombinante Expresada en E. coli. Disponible
en:https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-
aldrich/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/2/i0259pis.pdf

6. Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios. Ficha técnica Insulina Humana

Recombinante. Disponible en:
www.aemps.gob.es/cima/pdfs/es/ft/62243/FT_62243.pdf

7. Seider, W.; Seader, J.; Lewin, D et al.(2009).Product and Process Design Principles. Estados
Unidos: John Wiley & Sons.

8. Foust, A. (2004). Principios de Operaciones Unitarias. México: CECSA.

9. Perry, R. (1999). Chemical engineer’s handbook. Estados Unidos: McGraw-Hill

10. Treyball, R. (2000). Mass Transfer Operations. Estados Unidos: McGraw-Hill

11. Organización Mundial de la Salud. (2016). Informe mundial sobre la diabetes. Disponible en:
http://www.who.int/diabetes/global-report/en/

12. Instituto Nacional de Salud Pública. (2017). Diabetes, causa principal de muerte en México*.
Disponible en: https://www.insp.mx/presencia-insp/3877-diabetes-causa-muerte-mexico.html