EXAME DE GENETICA 2018

CLONAGEM
Clonagem de genes- uso da reprodução assexuada para produzir cópias de genes de interesse
iguais entre si e com seus parentais.
Clonagem molecular- construção de moléculas de DNA recombinante e a sua propagação numa
célula adequada
Objectivo de clonagem
 Eliminação de fenótipos indesejadas
 Combinar características benéficas de um ou mais organismos
 Criar organismos que sintetizam produtos do interesse humano
Função das enzimas de restrição em bactéria.
As endonucleases de restrição são enzimas produzidas pelas bactérias para defenderem-se da
invasão do DNA exógeno cortando-o em locais específicos e remove-lo, processo este controlado
através da metilação de DNA.
Função de enzimas de restrição na tecnologia do DNA recombinante
Tem o papel de cortar o fragmento de interesse e clivar o vetor no qual será inserido para a posterior
clonagem.
Vetor de clonagem
São moléculas de DNA que permitem a inserção de genes de interesse para a sua multiplicação.
 Vários sítios de restrição e possui marcadores de seleção.
Etapas de clonagem
 Identificar e cortar o fragmento de interesse usando endonucleases de restrição e clivar o
vetor pela mesma enzima.
 Unir o fragmento ao vetor
 Transformar
 Clonar/replicar
Aplicacaoes
 Mapeamento genético
 Produzir vacinas e proteínas recombinantes

PROCESSOS DE RECOMBINAÇÃO
Conjugação- processo de transferência de material genético de bactéria para outra através do
contacto.
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Transformação- ocorre quando a bactéria apanha um fragmento qualquer externo e incorpora no

seu cromossomo.
Transdução- ocorre quando um vírus ataca uma bactéria e injecta o seu material genético no
interior da bactéria e transforma o seu material e produz copias já com material genético contendo
DNA viral.
Tipos de transdução
Transdução generalizada- consiste na incorporação de qualquer pedaço do vírus na bactéria.
Transdução especializada- consiste na integração de uma parte restrita de material viral na
bacterial.
REPLICAÇÃO DO DNA.
Método conservativo- a dupla hélice filha consiste em duas fitas recém sintetizadas e a hélice
parental fica conservada.
Semi-conservativa- cada uma das fitas recém sintetizada poderá conter nucleotideos parentais.
Dispersiva- resulta em hélice filha que contem uma mistura de segmentos de DNA parental e
recém sintetizado.
DNA RNA
Origem Replicação Transcrição
Cadeia Dupla hélice Fita simples
Açúcar Desoxirribose Ribose
Enzima DNA polimerase RNA polimerase
Bases azotadas A, T, G, C A, U, G, C

1. GENOMICA- campo da genética que estuda o conteúdo, organização, função e a evolução

da informação genética contida no genoma completo.
2. GENOMA- é o conjunto de informação hereditária que define e determina o
funcionamento de cada organismo.

GENOMICA

Estrutural-estuda a sequencia e Functional- estuda a funcao e Comparada- estuda as semelhancas

organizacao de nucleotidos de regulacao dos genes e os seus e diferencas entre genomas dos
um genoma completo produtos diferentes organismos

jj
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ANÁLISE DE GENOMA USA-SE A SEQUENCIA E OS MAPAS GENÉTICOS

Os mapas genéticos ajudam a compreender a estrutura, função e evolução do genoma.
 Mapas de ligamento- caracterizado pelo crossing-over meiótico (Recombinação).
 Mapas cromossómicos- usados na hibridização, na reprodução assexuado.
 Mapa fisico- é a representação real do alinhamento dos genes no cromossoma, é crucial para
a caracterização estrutural e funcional do genoma.

DOENCAS GENETICAS
 DOENCAS MENDELIANAS- causados por um defeito em um so gene
 DOENCAS POLIGENICAS- são as que afetam o homem, causado pelos genes distintos.
Ex: Asma, câncer e cardiovasculares.

O GENOMA HUMANO CONSTA DE DOIS TIPOS

Genoma nuclear e mitocondrial e contem um total de 46 cromossomas dos quais 22 pares são
autossómicos e 2 sexuais que definem o sexo do individuo.

EXISTEM DOIS TIPOS DE SEQUENCIAS DO GENOMA HUMANO

1. Sequencias de copia única- codificam proteínas
2. Sequencias repetidas ou de dna repetido.
 DNA repetido em tandem
 DNA repetido e disperso no genoma

TIPOS DE recombinacao
Conjugacao- transferencia de material genetico de bacteria pra bacteris atravs de contacto.
Transformacao- ocorre quando a bacteria apanha um segmento qualquer externo e incorpora no
seu cromossoma.
Transducao- um virus ataca e injecta o seu material genetico na bacteria transformando o
material bacteriano e esta produz copias contendo o material viral no seu genoma.
procariotas Eucariotas
Possuem cromossomas simples Cromossomas complexos
Sao organismos monoploides Organismos diploides
Sem carioteca, crom estao dispersos n plasma Possuem carioteca e ocore meiose

Ciclo lisogenico- ocorre a liberacao de virus sem a lise

Ciclo litico- ocorre a multiplicacao e no fim a lise da celula bacteriana liberando os virus.
Propriendade de factor f
Replicacao e pile de contacto
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NATUREZA DO GENE
Empacotamento de DNA
Mecanismo de compacatacao de molecula de DNA de grandes dimensoes em uma estrutura
pequena e grossa como cromossomo sendo armzenado no nucleo.
Niveis de empacotamento (5)
DNA+ histonas, nucleossoma, solenoide, esqueleto central e cromossomo metafasico
PROCESSO DE EMPACOTAMENTO NA FORMACAO DE CROMOSSOMO
DNA+histnas- o DNA enrola-se em volta das histonas formandonucleossoma
Nucleossoma- as contas enrola-se formando solenoide
Solenoide- os loops enrola-se formando esqueleto central
Esqueleto central sofre um super enrolamento formando a estrutura final o cromossomo
metafasico.
Cromatina é todo o material que constitue o proprio DNA, proteinas histonas e nao histonas.
Histona h1- estabiliza as contas
Proteinas nao histonas- sao proteinas que garantem a associacao entre cromatina e proteinas
histonas e estabilizam a estrutura.
Eurocromatina- composto por segmentos de DNA activos e menos condensados capaz de ser
codificado pela celula.
Heterocromatina-composto por segmentos de DNA inativo e mais condensado que nao sao
codificados pela celula.
Centromero é um factor de caracterizacao de especies e tem a funcao de unir os cromatides
irmaos.
Importancia do centromero
 Fundamental para a uniao de cromatides irmaos
 Garante a ocorrencia de repliccao
 Sem centromero, nao ha uniao do fragmento de DNA quebrado durante a divisao celular.
Telomero-tem a funcao de estabilizar a estrutura do cromossoma.
Repeticoes de ordem tandem- sao repiticoes de mesma sequencia de nucleotidos.
A teoria de contas- o gene é a unudade estrutural mas nao de mutacao, as unidades de mutacao
e menores que gene sao os nucleotides.
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EXPRESSAO GENICA
É a sintese de proteinas (transcricao e traducao).
GENES REGULADORES
Sao genes que codificam produtos genicos par regulacao de outro genes
Transcricao e a primeira etapa de expressao genica que consiste na sintese de ARN apartir de
uma molecula de DNA molde, pela accao de ARN polimerse.
Genes constitutivos- sao genes expressos constantimente que codificao produtos genicos
imprescindiveis para a menutencao das funcoes fundamentais na celula.
Genes estruturais sao expressos somente quando os seus produtos sao necessario ex: b-
galactosidase
UNIDADE DE OPERON OU DE TRANSCRICAO EM PROCARIOTAS
Genes estruturais
Promotor- fragmento de DNA no qual liga-se o ARN polimerase (controla a transcricao dos
genes estruturais).
Operador- fragmento de DNA no qual liga-se a proteina reguladora ( determina a transcricao dos
genes estruturais).
CLASSIFICAO DE OPERON
Operon positivo- o gene regulador produz a proteinareguladora que liga-se a regiao anterior ao
promotor estimulando a transcricao.
Operon positivo induzido- o gene regulador produz a proteina activadora que liga-se na regiao
anterior ao promotor aumentando as chances de ligacao de ARN poli ao promotor estimulando a
transcricao dos genes estruturais.
Operon positivo repressivo- o gene regulador produz a proteina repressora que liga-se a regiao
anterior ao promotor bloqueindo a transcricao dos genes estruturais.
Operon negativo- o gene regulador produz uma proteina reguladora que liga-se ao operador.
Operon negativo induzido- naturalmente é inativo mas com a presenca de substrato no meio o
gene regulador produz uma proteina activdora que se liga ao promotor estimulando a transcricao.
Operon negativo repressivo- nturalmente é activa mas quando os produtos genicos forem muito e
nao mais necessarios o gene reguador produz a proteina repressora que se liga ao operador e
bloqueia a transcricao.
MODELOS DE OPERON
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Operon lac- é o metabolismo de lactose, sendo hidrolizado em galactose e glicose pela b-

galactosidase.
E coli em um meio com glicose e lactose
A E coli, vai matabolizar primeiro a glicose por ser um acucar simples e de preferencia obtendo
um crescimento exponencial, e quando a glicose comeca a escassear ir metabolizar a lactose
como fonte alternativa.
CONTROLO POSITIVO DE OPERON LAC
Quando a concentracao de glicose é alta teremos cAMP baixo.
A proteina cAMP liga-se a regiao antes do promotor e aumenta a chance de ligacao de
RNA poli ao promotor.

REACAO EM CADEIA DE POLIMERASE

PCR-é uma técnica molecular de amplificação de sequencias especificas d moléculas de
DNA/RNA.

 Permite amplificar moléculas mesmo em baixas quantidades;

 Permite a detenção de mutações por deleção, substituição e ou inserção
 Tipagem de transplante de órgãos

Componentes de PCR
 Agua
 Tampão
 Primers
 Iões de Mg
 Dntps
 DNA polimerase

Etapas de PCR
Desnaturação- processo de quebra das pontes de hidrogénio do DNA molde a uma
temperatura de 95 o c.
Anelamento- processo de pareamento da fita molde pela adição de nucleótidos
complementares a uma temperatura de 60 oc.
Extensão da cadeia- é um processo de polimerização realizado a 72 oc pela DNA
polimerase.
Formas de visualizacao dos produtos de PCR
Fazendo a corrida eletroforetica e observar as bandas,
No PC no PCR real time
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Tipos de PCR
PCR-REAL TIME
RT-PCR-converte o ARN em CDNA
PCR-MULTIPLEX- CONSISTE NA DETENCAO DE VARIOS GENES USANDO VARIOS
PRIMERS