PROPUESTA DE INVESTIGACIÓN

VALENTINA ECHEVERRY Y JOHAN VALENCIA

APLICACIÓN DE LA METODOLOGÍA DE SUPERFICIE DE RESPUESTA A UN
PROCESO DE CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN DE Prochilodus magdalenae
(BOCACHICO)

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La alta demanda pesquera actual supone que sobre los ecosistemas acuáticos se esté
ejerciendo una enorme presión, que impide que las poblaciones de peces puedan
recuperarse. Esto sobretodo afecta a las especies de mayor valor comercial tales como
Prochilodus magdalenae, que, como caso particular, se encuentra en un estado de
vulnerabilidad bastante grave. (Olaya-Nieto, Ch. W., F. Segura-Guevara & G. Tordecilla-
Petro). La disminución dramática en los volúmenes de captura de esta especie y otras es un
hecho que refleja la necesidad de implementar nuevas técnicas como la criopreservación de
semén, para apoyar el proceso de producción pesquera, y de alguna forma mitigar el efecto
de las actividades piscícolas, que, a largo plazo, pueden terminar en la extinción de varias
especies. (Atencio, Perez, Espinosa, & Pardo, 2013)

Asimismo, uno de los retos que conlleva la criopreservación es lograr que el semen
conserve su potencial fertilizador, manteniendo de esa manera buena capacidad móvil
después del descongelamiento, así como buenas tasas de fertilidad y eclosión. Estas
variables dependen en gran medida de los crioprotectores implementados, cuya función
principal es proteger a los espermatozoides de los productos del metabolismo celular que
pueden resultar tóxicos y de los cambios drásticos de temperatura inherentes al proceso de
congelamiento-descongelamiento (Atencio, Perez, Espinosa, & Pardo, 2013) (Bibliotecas &
Martínez, 2010). El objetivo de este proyecto es encontrar las concentraciones de
dimetilacetamida (DMA) (un crioprotector intracelular de bajo peso molecular) y de yema de
huevo (un crioprotector extracelular) que permitan obtener los valores óptimos de movilidad,
velocidad y fertilidad de los espermatozoides y eclosión de huevos fertilizados con semen
criopreservado.

2. OBJETIVOS
2.1 GENERAL

2.2 ESPECÍFICOS

3. METODOLOGÍA

Inicialmente, se seleccionarán 10 individuos al azar de Prochilodus magdalenae

procedentes de estanques en tierra, de los cuales 5 serán machos y 5 serán hembras. Se
garantizará que las condiciones de recambio de agua del estanque sea la adecuada y que
los individuos seleccionados de cada sexo tengan más o menos el mismo peso. Asimismo,
los machos deberán estar en época de espermiación y las hembras en la etapa de
maduración final del ovocito. Estos se trasladarian a tanques más pequeños con flujo
continuo de agua, en donde se dejarán por un periodo de 48 horas, a fin de acondicionarlos
al nuevo entorno. Posteriormente, se aplicará extracto pituitario de carpa (CPE) a las
unidades experimentales para estimular la ovulación y espermiación en hembras y machos,
respectivamente.
Para hacer la extracción del semen, se realizará previamente una limpieza de la zona
urogenital para evitar contaminaciones por orina o heces. Así mismo, se evaluará la calidad
de estas muestras para determinar si son aptas para criopreservación.

Se realizarán pruebas de movilidad, velocidad, fertilidad y eclosión antes y después del

congelamiento, con el fin de tener un parámetro de comparación.Asimismo, se determinará
la concentración espermática inicial del semen, para poder hacer una estimación correcta
de la capacidad fertilizante de los espermatozoides, con base en la relación semen:oocito.
Las concentraciones a evaluar serán 0,9M y 1,5M de dimetilacetamida (DMA), y de 12% y
16% de yema de huevo. Cada una de las muestras, se someterán a congelamiento en
vapores de nitrógeno líquido durante 30 minutos, tras aplicarles cada tratamiento. Se
descongelarán en baño serológico a 60°C durante 45 minutos y, posteriormente se
realizarán las pruebas ya mencionadas, mediante la ayuda de equipos especializados.

3.1 DISEÑO EXPERIMENTAL

El diseño experimental a implementar será un DBCA con arreglo factorial del tipo 2 k con
puntos al centro. Los bloques estarán constituidos por cada individuo del cual se extraiga la
muestra de semen, para evitar que factores genéticos propios de cada uno de ellos influyan
sobre las variables de respuesta, las cuales son la movilidad, velocidad y fertilidad de los
espermatozoides y eclosión de huevos fertilizados con el semen criopreservado. Los
factores a evaluar serán las concentraciones de dimetilacetamida (DMA) y de yema de
huevo.

Como parte de la metodología de superficie de respuesta, este experimento constituirá la

etapa de búsqueda de primer orden, en la que a través de los puntos centrales se va a
determinar la presencia o no de curvatura. Dependiendo de los resultados que se obtengan,
se podrá proceder moviendo la zona experimental o ampliando el experimento mediante la
adición de puntos axiales, esto es, transformando el diseño a uno compuesto central. Se
espera que el punto donde se optimiza la respuesta esté dentro de la región experimental
escogida, y de no ser así, se tomarán los resultados como una guía para saber hacia dónde
dirigir la nueva zona de experimentación. De igual forma, se hace necesario aclarar que la
primera etapa de cribado se omitirá porque estudios anteriores demostraron que realmente
las concentraciones de estos crioprotectores tienen una influencia significativa sobre el
potencial fertilizante del semen de Prochilodus magdalenae.

3.2 MATRIZ DE TRATAMIENTOS

4. REFERENCIAS
Olaya-Nieto, Ch. W., F. Segura-Guevara y G. Tordecilla-Petro. 2012.Prochilodus
magdalenae. Pp. 155. En: Mojica, J. I.; J. S. Usma; R. Álvarez-León y C. A. Lasso
(Eds). 2012. Libro rojo de peces dulceacuícolas de Colombia 2012. Instituto de
Investigación de Recursos Biológicos Alexander von Humboldt, Instituto de
Ciencias Naturales de la Universidad Nacional de Colombia, WWF Colombia y
Universidad de Manizales Bogotá, D. C., Colombia, 319 pp
Atencio, V., Perez, E., Espinosa, J., & Pardo, S. (2013). Evaluación de
dimetilacetamida como crioprotector para la crioconservación de semen de
bocachico Prochilodus magdalenae Evaluation of dimethylacetamide as
cryoprotectant for cryopreservation of sperm of bocachico Prochilodus
magdalenae. Arch Med Vet, 45, 151–158. Recuperado de
http://www.scielo.cl/pdf/amv/v45n2/art06.pdf
Bibliotecas, D. N. de, & Martínez, J. G. (2010). Efecto de la concentración de dmso y
glucosa sobre la calidad espermática y el material genético en semen
crioconservado de bocachico Prochilodus magdalenae. Recuperado de
http://www.bdigital.unal.edu.co/1856/1/71195281.2010.pdfart06.pdf