UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 8

DETERMINACIÓN DE GLUCÓGENO HEPÁTICO

Integrantes:

1. Anampa García, Estrella Mayté (20151425)

2. Arias Ospina, Jenny Isabel (20151427)

3. Castillo Arispe, Meybi Ani (20151435)

4. Mollyk Montes, Anwar Rael (20151447)

Grupo: A* (martes/11am a 1pm)

Fecha de la práctica: 30 de mayo del 2017

Fecha de entrega de informe: 6 de junio del 2017

2017-I
 INTRODUCCIÓN

El glucógeno es el polisacárido de reserva más importante en las células animales.

Éste es un polímero con subunidades de glucosa unidas por enlaces (alfa 1,4) y
ramificaciones del tipo (alfa 1,6), presentando una ramificación cada 8 a 12 residuos).

Puesto que cada rama de estos termina con un azúcar no reductor (que no posee
carbono anomérico libre), estos polímeros tienen tantos extremos no reductores como ramas,
pero únicamente un extremo reductor. Cuando el glucógeno se emplea como fuente de
energía las unidades de glucosa son eliminadas a partir de los extremos no reductores.

El glucógeno es especialmente abundante en el hígado pero también se encuentra en

el músculo esquelético (Koolman & Rohm, 2004).

El hígado tiene una gran capacidad para almacenar glucógeno. En una persona bien
nutrida el contenido de glucógeno hepático puede constituir hasta el 10% del peso húmedo
de este órgano.

El glucógeno hepático funciona como reserva de glucosa para el mantenimiento de

las concentraciones de glucosa sanguínea para mantener la glucemia. Esto es importante en
diversas situaciones frecuentes, como, por ejemplo, durante periodos cortos de ayuno (ayuno
diurno) o ejercicio sostenido, y también en otras situaciones que pueden provocar
hipoglucemia, como la producción transitoria de insulina o los traumatismos.

La adrenalina y el glucagón estimulan la degradación del glucógeno en el hígado

mientras que la insulina estimula la síntesis de glucógeno (Hernández Rodriguez, 1999).

OBJETIVOS

 Determinación de la presencia y cuantificación del glucógeno hepático empleando

el método espectrofotométrico de la antrona.
 FUNDAMENTO

La reacción de color para medir la concentración de carbohidratos solubles por

espectrofotometría se basa en la utilización de un compuesto llamado antrona que se disuelve
en ácido sulfúrico concentrado. El medio ácido hidroliza el enlace glicosídico de los
oligosacáridos y los monosacáridos resultantes reaccionan con la antrona (estructura al
margen) produciendo un color verde – azulado.

La reacción de la Antrona (9.10 dihidro-9-cetoantraceno) en medio sulfúrico produce

un derivado del furano que tiene su máximo de absorción en 620 nm. Existen reportados en
la literatura varias alternativas para la determinación de carbohidratos que emplean la
Antrona. En el método desarrollado en este informe, la concentración de carbohidratos (como
Glucosa) se determina espectrofotométricamente, aunque puede utilizarse un fotocolorímetro
de filtro con un filtro adecuado (de color rojo), el calentamiento para el desarrollo del color,
utilizando el calor de reacción entre el ácido sulfúrico y el agua (Universidad de Valladolid,
2013).
RESULTADOS

Determinación del contenido de glucógeno bajo la forma de glucosa usando el reactivo de

antrona.

Reactivos Tubos

Blanco Estándar Muestra

Estándar de glucosa - 0.25ml -

5mg%

Agua destilada 0.25ml - -

Muestra problema - - 0.25ml

Colocar en baño María con hielo por 5min y añadir gota a gota el reactivo de antrona.

Reactivo de antrona 1.5ml 1.5ml 1.5ml

Colocar los tubos en baño María hirviente por 10min, luego enfriar y leer a λ=620nm.

Datos obtenidos:

Blanco Estándar Muestra

Absorbancia 0.392 0.853 0.423

600nm

Calculando la concentración de la solución estándar

5mg 100ml
0.0125mg 0.25ml

0.0125mg 1.75ml
7.1429x10-3mg 1ml (ST)
Calculando la concentración de la muestra

𝐶𝑠𝑡
𝐶𝑚 = 𝐴𝑚
𝐴𝑠𝑡

0.461
𝐶𝑚 = 𝑥7.1429x10-3mg/ml
0.031

𝐶𝑚 = 0.1062mg/ml

0.1062mg 1ml
0.18585mg 1.75ml

0.18585mg 0.25ml
0.7434 100ml 0.5grHigado
(0.7434mgx0.9) mg Glucógeno 0.5grHigado

0.5grHígado 100%
6.6906x10-4 0.1338%

:. El porcentaje de glucógeno en el hígado es 0.1338%

DISCUSIONES

Para determinar el glucógeno hepático es necesario obtener el hígado, bien sea de un

animal de experimentación como un hígado comercial. El hígado extraído se transfiere a un
vaso de precipitados con un porcentaje mínimo de NaCl enfriado con hielo.

Para extraer el glucógeno hepático se pesan 0.5 g de hígado, se trocean, y se

disgregan con un homogeneizador. El homogenato se guarda a 4 C durante 24 h para
conseguir la extracción total del glucógeno y posteriormente se centrifuga, se recoge el
sobrenadante y se guarda a -20 C hasta su uso. (Núñez, 2012)

El compuesto combinado con antrona fue llevado a una absorbancia de 620nm en el

espectrofotómetro. Aunque en el libro se puede apreciar que la reacción de los
carbohidratos con antrona en ácido sulfúrico que produce un color verdoso característico
que ha sido atribuido al producto de la reacción entre el hidroximetilfurfural con la antrona
y que presenta un máximo de absorbancia de 625nm. (CIT, 2000)

Al ser llevados a baño maría se debe tomar en cuenta que los compuestos recién
retirados, estén completamente frio, es decir, llegar a la temperatura ambiente para su
respectivo análisis. Sin embargo, a pesar del tiempo de trabajo en clases mucho de los
compuestos demoraron en llegar a su debido enfriamiento, lo que ocasionaba que el
espectrofotómetro mostrara una absorbancia muy cambiante y demoraba en llegar a su
respectiva absorbancia definida.

La medida y exactitud de los materiales utilizados para la preparación de las muestras es un

punto que se debe tomar en cuenta, ya que una sustancia que es agregada con unos
mililitros demás o menos puede ocasionar, grandes cambios en las absorbancias emitidas
por el espectrofotómetro. En algunas muestras el blanco emitía mayor absorbancia que la
solución estándar y la muestra, evidencia de un fallo en el uso de los reactivos.
CUESTIONARIO

1- Un paciente excretó 1130 mL de orina en 24 horas. Una alícuota de 2 mL se colocó en

fiola de 100 mL se trató con 1 mL de reactivo de molibdato y 4 mL de reactivo
aminonaftosulfónico y se diluyó hasta el enrase. De manera similar se preparó una serie
de 5 estándares en los que se emplearon 0, 1, 2, 3, 4 mL de estándar fosfato (de
concentración 0,4mg en 5mL), los que se diluyeron a 100 mL después de añadir los
mismos reactivos. Las coloraciones fueron medidas a 660nm y se obtuvieron los
siguientes resultados:

ESTÁNDARES ABSORBANCIA

0 0,000

1 0,175

2 0,350

3 0,525

4 0,700

Orina 0,845

a) ¿Cuántos gramos de fosfato han sido excretados al día? Exprese en g/24 horas.

 Hallando la cantidad de fosfato en la fiola:

0,4 mg 5 mL

X mg 100 ml

X= 8 mg

 La cantidad hallada en 50 mL proviene de 2 mL de orina

8 mg 2 mL

 Se halla la cantidad de fosfato en en volumen total

 8 mg 2 mL

Y mg 1130 mL

Y= 4520 mg/ 24 horas

b) Calcular la concentración de fosfato en milimoles por día

 Cálculo de la concentración de fosfato

CM= Corina CST= 0,08mg/mL

AM= 0,845 AST= Aprom= 0,4375

𝐶𝑀 𝐶
= 𝐴𝑆𝑇
𝐴𝑀 𝑆𝑇

𝐶𝑜𝑟𝑖𝑛𝑎 0,08
= 0,4375
0,845

Corina= 0,155mg/mL

2- En un análisis espectrofotométrico de colesterol se realizó el siguiente procedimiento.

Muestra: 1ml de suero con 4,5 ml de reactivo extractante. Estándar: 0,5 g/L de
colesterol. ¿Cuál es la concentración de colesterol en la muestra de suero?

Reactivos Tubos

Blanco Estándar Muestra

Estándar(µL) - 10,0 -

Muestra tratada(µL) - - 25,0

Agua destilada (µL) 50,0 40,0 25,0

Reactivo de trabajo 3,0 3,0 3,0

(mL)

Absorbancia 0,056 0,312 0,350

0,5 mg→ 1000ml

x→ 10 µL

x= 5x10-3 µg

5x10-3 µg→3050 µL

Y → 1ml

Y= 1,64 x10-6 mg

Cm=(Cs/As) x Am
1,64 x10−6 mg
Cm= x (0,350-0,056)= 1,88x10-6 mg
(0,312−0,056)

3- Una muestra fue diluida 5 veces y comparada espectrofotométricamente con un estándar

de 10 mg/mL, observándose las siguientes absorbancias:

Blanco: Estándar: Muestra:

0.023 0.357 0.677

 Calculamos las absorbancias del estándar y de la muestra:

Ast = Ast - AB = 0.357 - 0.023 = 0.334

Amp = Amp - AB = 0.677 - 0.023 = 0.654

 Calculamos la concentración de la muestra problema, comparándola con el estándar:

Cmp = Cst/Ast x1/V Amp

Cmp = 10 x 0.654 / 0.334 x 5
Cmp = 97.90
Cmp = 97.90 mg / mL
4- ¿Qué es el glucógeno y cuál es su estructura química?

Es la forma de almacenamiento de glucosa fácilmente movilizable • El exceso de

glucosa de la dieta se almacena como glucógeno. Se moviliza cuando surge una necesidad:
actividad muscular, entre comidas (reserva energética 12 - 24 h) • Se encuentra en el citosol:
gránulos de 10-40nm. Contiene las enzimas para su degradación y biosíntesis y las enzimas
reguladoras. • Lugares principales de almacenamiento: hígado y músculo esquelético •
Funciones diferentes: regular el nivel de Glucosa en sangre (hígado) y suministrar glucosa
para la actividad muscular vigorosa (músculo) • Existen defectos enzimáticos congénitos que
alteran el metabolismo del glucógeno: enfermedades de almacenamiento del glucógeno
(Dolores, 2017).
5- ¿Por qué se emplea ácido sulfúrico en la preparación del reactivo de antrona?

La antrona reacciona con las aldosas y las aldo pentosas para dar el complejo de color azul-
verdoso, presentando un máximo de absorbancia de 625nm.

Las proteínas con alto contenido de triptófano, dan muestras de color rojo, el que puede
interferir en la reacción. Este método es muy sensible, puede dosificar concentraciones de
azúcares totales en orden de 0 50mg/L. considerando esta particularidad es necesario
efectuar disoluciones de la muestra a analizar. (Chávez, 2005)

En el método de antrona, el medio ácido hidroliza el enlace glucosídico de la sacarosa y los

monosacáridos resultantes reaccionan con la antrona produciendo un color verde – azulado.
(Meza, 2013)
 BIBLIOGRAFÍA

 Chávez, V. V. (2005). Desarrollo de la tecnología de elaboración del choclo

germinado fresco para aumentar el valor nutritivo del grano. Riobamba - Ecuador:
Escuela Superior Politécnica de Chimborazo.

 CIT. (2000). Información Tecnólogica. 192.

 Dolores, M. (26 de abril de 2017). Tema 17. Metabolismo de Glucógeno. Obtenido

de OpenCourseWare - Universidad de Cantabria: http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-
salud/bioqumica/material-de-clase-1/Tema17-Glucogeno08-09.pdf

 Hernández Rodriguez, M. (1999). Tratado de Nutrición . Madrid: Díaz de Santos.

 Koolman, J., & Rohm, K. (2004). Bioquímica . Madrid: Panamericana.

 Meza, A. R. (2013). Bromatología para estudiantes de nutrición. Palibrio.

 Núñez, V. G. (2012). Hidrólisis enzimática y cuantificación de glucógeno hepático.

Salamanca.

 Universidad de Valladolid. (2013). Prácticas de Química Aplicada V1.7. Obtenido

de Alojamientos Universidad de Valladolid:
https://alojamientos.uva.es/guia_docente/uploads/2013/470/45803/1/Documento13.
pdf