Mecanismos de diferenciación celular

Mecanismos moleculares de
la diferenciación celular
Bibliografía:
• Introducción a la Biología Célular. Alberts y colaboradores (2011). 3ª Ed. Cap.
4, 8 y 10. Editorial Médica Panamericana
• Biología Campbell, N.A. y Reece, J.B. (2007) 7ª Edición. Editorial Medica
Panamericana. Cap. 20 y 21.

Pablo Armas – 15 y 16 de agosto de 2017

 ¿Qué mecanismos Mecanismos
permiten quedeuna
diferenciación celular
única célula de
lugar a un organismo completo y complejo formado por
miles de células diferentes que funcionan
coordinadamente?

Organismo
Célula
pluricelular con
huevo
indiferenciada
? tejidos y órganos
diferenciados
 Mecanismos
¿Cómo se generan cientos de
dediferenciación celular
tipos celulares
diferentes a partir de una única célula?
Tipos celulares vegetales
Tipos celulares animales

¿Qué diferencia a un tipo celular de otro?

 Mecanismos de diferenciación celular

¿Qué diferencia a un tipo celular de otro?

Diferentes tipos celulares pueden

“producir” (expresar) diferentes proteínas

TIPOS DE PROTEINAS CELULARES:

• Constitutivas (housekeeping): son comunes a todos los tipos

celulares de un organismo.

• Especializadas: responsables de las propiedades celulares

características
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

Diferentes tipos celulares pueden

“producir” (expresar genes que codifican)
diferentes proteínas

¿Cómo se estudian las proteínas

que dan forma y función a una
célula?
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• HOMOGEINIZACION DE TEJIDOS Y CELULAS

 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• RUPTURA
Ruptura DE
de células CÉLULAS
y tejidos Y TEJIDOS
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• CENTRIFUGACIÓN
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL

1 2

4
3
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• PURIFICACIÓN DE PROTEINAS: cromatografías

Un SOLVENTE (fase móvil) arrastra a la MUESTRA a través de una MATRIZ

(fase estacionaria).

• Cromatografía de intercambio iónico

• Cromatografía de exclusión molecular

• Cromatografía de afinidad
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IONICO
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSION MOLECULAR (FILTRACION EN GEL)
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular
• CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS: electroforesis en geles

• La electroforesis es el
movimiento de moléculas por
una corriente eléctrica.

• La mayoría de las proteínas

tienen carga NETA negativa a
pH neutro; por lo tanto, se
mueven desde el polo
negativo hacia el polo
positivo.
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS

PolyAcrylamide Gel Electrophoresis: PAGE

 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS: PAGE nativo

En las PAGE en condiciones nativas, las proteínas se resuelven en la
malla de gel de acuerdo a su carga neta y a su tamaño hidrodinámico

Tinción (revelado)
de
las proteínas
resueltas
en un gel de
poliacrilamida
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS Monómeros: globulares o

Multímeros: homomultímero fibrosas

Multímeros: heteromultímero
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS
PAGE desnaturalizante: SDS-PAGE
Puede ser en condiciones reductoras o no reductoras
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANÁLISIS DE PROTEINAS: SDS-PAGE en

condiciones reductoras

(T=Total Cell lysate, C=Cytosol Fraction,

M= Total Membrane Fraction)
 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANÁLISIS DE PROTEINAS
Western blot: detección de una proteína específica en una mezcla de
proteínas:
Ac
Secundario
Inmunodetección marcado

Ac
Primario
Anti-A

SDS-PAGE

Electrotransferencia
a memebrana de
nitrocelulosa
 Mecanismos de diferenciación celular
Los anticuerpos como herramienta para la identificación de proteínas
específicas en una mezcla de proteínas

Anticuerpo
Anticuerpo secundario
primario

Antigeno

Particulas de oro, compuesto fluorescente, enzima, biotina, etc.

 Purificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANÁLISIS DE PROTEINAS
Western blot: detección de una proteína específica en una mezcla de
proteínas:
 Mecanismos de diferenciación celular

¿Es posible asegurar que una banda en un gel o en un western está

conformada por sólo un tipo de proteína?
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANÁLSIS DE PROTEINAS: isoelectroenfoque

 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS: electroforesis bidimensional

Proteoma
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• ANALISIS DE PROTEINAS: electroforesis bidimensional

+ Western Blotting

WESTERN BLOTTING

IDENTIFICACIÓN DE PROTEINAS
Mecanismos de diferenciación celular
 Identificación
Mecanismos de y análisis de proteínas
diferenciación celular

• PURIFICACIÓN DE PROTEINAS: criterios de pureza

 Mecanismos de diferenciación celular

Diferentes tipos celulares pueden

“producir” (expresar) diferentes proteínas

? ?
Contienen distinta
Contienen el mismo
cantidad/calidad de ADN:
ADN, pero leen los
diferenciación por
genes de manera
perdida de material
diferencial y regulada
genético
 Mecanismos de diferenciación celular

Paradigma de la diferenciación celular:

el desarrollo embrionario

Generación de más de 200 tipos celulares diferentes a

partir de una única célula cigoto.

TOTIPOTENCIAL
(potencial de generar todos los tipos celulares y tejidos
que constituyen y permiten el crecimiento y desarrollo de un
embrión)
 Mecanismos de diferenciación celular

Hembra de Xenopus laevis

(Línea salvaje) Renacuajo de Xenopus laevis
(Línea albina hembra)

J. B. Gurdon, The developmental capacity of nuclei taken from intestinal epithelium cells of feeding
tadpoles in J Embryol Exp Morphol, vol. 10, Dec 1962, pp. 622-40, PMID 13951335.
Mecanismos de diferenciación celular
Bases de la Mecanismos de diferenciación
clonación animal y vegetal celular

El experimento
de Gurdon
 Mecanismos de diferenciación celular

Equivalencia nuclear => los núcleos de

una célula diferenciada son totipotenciales

En la mayoría de los casos, las células de

un organismo multicelular se diferencian
sin pérdida de material genético.
 Identificación
Mecanismos y análisis de ácidos nucleicos
de diferenciación celular

¿Cómo se logra que diferentes células con el

mismo material genético (el mismo ADN)
expresen diferentes proteínas?