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Glu:
El RNAt presenta una estructura similar a un trébol; el extremo libre de una de las
cadenas presenta siempre ácido adenílico como nucleótido terminal, el cual fija el
aminoácido activado. La molécula RNAt posee una sección con tres bases libres,
llamado anticodón, complementario del codón del RNAm.
La molécula del RNAt puede tomar la forma de doble tira en ciertas unidades por
medio de los enlaces de hidrógeno. También se ha considerado la posibilidad de una
estructura terciaria, en donde la molécula puede doblarse para constituir una forma
más globular.
OH
OH
Iniciación:
Los ribosomas son partículas presentes en la fracción microsomal con diferentes
coeficientes de sedimentación (S) en dependencia del organismo y el tipo de célula
analizada.
Ala
G
CGA
GCU GUU
Terminación:
La etapa de terminación es la última de las etapas de la síntesis proteica y se produce
al concluir la formación de la proteína codificada por el RNAm iniciador del proceso.
Una vez "leídos" los codones aparece en le sitio A un codón " sin sentido " o "codón
terminador de cadena" (ver figura 11.1). Esto produce serias modificaciones en el
aparato sintetizador (los ribosomas funcionales) que por medio de algunas proteínas
específicas llamadas factores de liberación (R1, R2 y R3) se unen al ribosoma e
inducen la liberación de la cadena polipeptídica, concluyendo la síntesis proteica
propiamente dicha (figura 11.5).
En algunas proteínas que el aminoácido inicial (metionina) no es requerido para su
acción, este es eliminado por una enzima específica, el RNA puede iniciar la síntesis de
otras proteínas más y en algunos casos, antes de terminarse de "leer" por un ribosoma
funcional se comienza la síntesis de otra proteína por otro ribosoma hablándose en
éste caso de poli ribosomas.
R1,R2 y R3
Aunque las técnicas de la biotecnología son conocidas desde hace cientos de años,
algunas inclusive desde hace miles de años, últimamente, con el desarrollo de las
ciencias antes mencionadas, su aplicación se amplia a todo el trabajo científico de la
sociedad, muy en especial en la producción agropecuaria y en la medicina y sus
diversas ramas.
La biotecnología incluye el área de las fermentaciones, el área de los transplantes y la
transferencia de células, tejidos u órganos y el área de la manipulación del DNA o
ingeniería genética que a su vez incluye la terapia génica, los animales y las plantas
transgénicas y la clonación.
Previamente en 1972, Arber, así como Snith y Nathars habían identificado las
"enzimas de restricción" que producen la escisión del DNA en determinados sitios
específicos de la cadena polinucleotídica y a las "Iigasas" enzimas requeridas para la
síntesis de fracciones de DNA. Ambas enzimas son esenciales para introducir genes o
fracciones de DNA en el genoma de una célula.
De todas formas las síntesis del DNA era lenta y las cantidades obtenidas muy
pequeñas y limitantes para otros trabajos. Es entonces que aparece la Reacción en
Cadena de la Polimerasa (RCP) que (obtenida de la bacteria Thermus Aqueaticus)
permiten realizar un ciclo de dos minutos y disponer en una hora de una ampliación de
mil millones de veces. Esto permite obtener cantidades apreciables de cualquier DNA
para su análisis, experimentación y su utilización para trabajos de ingeniera genética.
Hoy se trabaja utilizando todos estos avances científicos y técnicos antes mencionados
en la obtención de la insulina humana y la STH (ambas son hormonas de amplio uso),
diferentes tipos de interferones, producción de inmunógenos y vacunas, producción de
estreptoquinasa, anticuerpos monoclonales, etc.
Todo este trabajo ha contribuido a que en la actualidad se domine con mayor precisión
todo lo relacionado con los genes y la herencia. El concepto gen representa la unidad
de DNA que contiene la información para la formación de una fracción de una cadena
polipeptídica.
Las sondas de DNA son fragmentos de DNA marcado radiactivamente con secuencia
conocida que reconoce la secuencia complementaria de un ácido nucleico en el núcleo
y permite su identificación.
Los vectores son moléculas de DNA que se usan para transportar un fragmento de
DNA. Los principales son los plásmidos (DNA circular) de bacteria y los fagos virales
(DNA lineal)
La Clonación.
El termino clonación (del griego Klon que significa brote) fue propuesto para designar
las plantas que se propagan de manera asexuada.
Más tarde se extendió el empleo de este término a todos los modos de reproducción
asexuada y se utiliza también en el caso de la manipulación de ADN (clonación de los
genes). El uso científico estricto denomina clón a un organismo que proviene de una
célula por divisiones mitóticas.
Para la clonación primeramente se introduce el DNA en una especie (bacterias,
hongos, planta, animal,) lográndose un individuo transgénico que al reproducirse
transmite a su dependencia la información recibida quedando clonado. Otra variante
es vaciar totalmente el DNA de un núcleo y sustituirlo por otro.
Es por lo tanto necesario crear, a! mismo tiempo que se perfeccionan las técnicas de
producción masiva, bancos de genes para conservar los patrimonios hereditarios
indispensables para el mantenimiento de la diversidad genética
Los problemas bioéticos relacionados con esta área son sumamente complejos,
subjetivos y muy sensibles para la opinión publica. En todo ello hay una condición
bioética presente y estamos situados dentro de determinadas corrientes ideológicas.
Podemos ser ecologistas o no. Críticos de las biotecnologías o defensores. Defensores
de la agricultura orgánica o críticos. Defensores de la producción intensiva con altos
insumos, energía, pesticida, etc. o de una agricultura tradicional, racional, sostenible.
En este problema bioético y filosófico estamos inmersos y sobre ello debemos
reflexionar.
A partir de las consideraciones antes señaladas se podría concluir con los siguientes
criterios. Estamos obligados a contribuir al desarrollo de la sociedad, a incrementar la
producción de alimentos, a preservar el entorno, a sanear el medio, a proteger la
biodiversidad, a producir alimentos de alta calidad y en definitiva a contribuir a
satisfacer las necesidades materiales y espirituales del hombre.
Todo esto dentro de una concepción bioética de respeto a la integridad de los
ecosistemas biológicos, de respeto a la integridad de los animales y de su derecho a
existir, de respeto en definitiva al estado de los sistemas metabólicos dentro de sus
ecosistemas.
11.2 DIGESTIÓN PROTEICA
La digestión de las proteínas de la dieta comienza en el estómago, donde las proteína
son hidrolizadas dependiendo de su digestibilad en parte por la acción de las pepsinas,
enzimas proteolíticas producidas por las células principales del estómago en forma de
zimógeno inactivo, el pepsinógeno, el cual es activado por acción del HCI del jugo
gástrico y después por autocatálisis. La pepsina es activa hasta pH de 5, pero su pH
óptimo de acción es 1,5 a 2,5. Su función es trasformar las proteínas naturales en
proteasas y peptonas; por tanto, es considerada como una endopeptidasa que ataca
principalmente los enlaces peptídicos localizados en los aminoácidos aromáticos de la
cadena. Es la primera enzima proteolítica que actúa sobre las proteínas de la dieta.
En el estómago actúa también otra enzima sobre las proteínas, llamada catepsina,
aunque esta se encuentra fundamentalmente en el interior de las células y es una
mezcla de protéasas.
En el intestino delgado, las proteínas, los péptidos y las peptonas son atacadas por la
tripsina y la quimiotripsina: dos enzimas de fuerte acción proteolítica (sobre todo la
primera) producidas por el páncreas en forma inactiva (tripsinógeno y
quimiotripsinógeno) que en el intestino delgado, por acción de una peptidasa, la
enteroquinasa, se transforma en la forma activa. Después ocurre un proceso de
autocatálisis.
La tripsina posee un pH óptimo de acción de 7,9, actúa sobre los enlaces peptídicos
situados en el grupo carboxílico de la lisina y la arginina. La quimiotripsina, por su
parte, actúa sobre el enlace peptídico del grupo carboxílico de la tirosina y la fenil
alanina, también es una endopeptidasa. La acción de estas enzimas libera péptidos de
pequeño peso molecular y en parte algunos aminoácidos.
Posteriormente a esto, sobre los productos de la hidrólisis de las proteínas actúan un
conjunto de enzimas conocidas como exopeptidasas (antiguamente llamadas
erepsinas), que terminan la digestión proteica. Son producidas por el jugo intestinal y
pancreático y su pH de acción es ligeramente alcalino. Dentro de ellas se encuentran
las carboxipeptidasas, que separan el aminoácido con el - COOH terminal y varias
dipeptidasas que hidrolizan péptidos. El resultado de la acción de éste grupo de
enzimas es la digestión completa de la proteína y la liberación de aminoácidos que
serán absorbidos.
Parte de las proteínas de la dieta escapan a este proceso y llegan al intestino grueso,
donde son en parte hidrolizadas por la acción de los fermentos bacterianos y luego los
aminoácidos sufren varios procesos, sobre todo descarboxilación. Es de señalar que
también existen proteínas que escapan a todos estos procesos y aparecen en las
heces fecales.
Los productos de la digestión proteica, o sea, los aminoácidos, van a ser absorbidos
por la vía de la vena porta fundamentalmente.
La absorción de los aminoácidos parece ser que ocurre por mecanismos pasivos
(difusión) y en parte por transporte activo. Ciertos tipos de aminoácidos se absorben
selectivamente y en algunos interfieren la absorción de otros por tener un sistema de
transporte común. La absorción intestinal puede ser mucho más rápida que la
digestión, por lo que la existencia de aminoácidos libres en la luz intestinal es sólo
momentánea. Normalmente se pueden absorber pequeños péptidos, aunque si son de
alto peso molecular o de carácter proteico se produce sensibilización y una respuesta
inmunológica a ellos.
Los aminoácidos absorbidos son utilizados rápidamente por el organismo. La mayoría
pasan por el hígado, donde son incorporados a las proteínas formadas por éste órgano
y en parte sufren varias reacciones o pasan a través de la circulación a otros tejidos. A
estos aminoácidos se incorporan los que son producto de la proteolísis de las proteínas
degradadas en el organismo. Quiere esto decir que el conjunto de los aminoácidos que
existen en el organismo en un momento dado, tienen su origen a partir de las proteínas
ingeridas y también a partir del catabolismo proteico intracelular. Estos aminoácidos
tienen los siguientes destinos o vías:
1. Participan en la biosíntesis proteica.
2. Participan en reacciones de carácter general, tales como transaminación,
desaminación oxidativa y descarboxilación.
3. Participan en reacciones de carácter particular, tales como transmetilación
y transthiolación.
4. Participan en la formación de sustancias fisiológicas (creatina, porfirinas, etc.)
5. Tienen un metabolismo particular.
La primera de estas vías, la biosíntesis proteica quedo ampliamente tratada en el
epígrafe anterior. Veamos las otras.
11.3 TRANSAMINACIÓN
El proceso de transaminación es catalizado por enzimas específicas, conocidas como
transaminasas o aminotransferasas.
La transaminación se realiza entre un aminoácido que aporta el grupo amino y un
cetoácido que acepta dicho grupo. El fosfato de piridoxal (B 6), actúa como coenzima.
En esta reacción participan todos los aminoácidos a partir de sus respectivos
cetoácidos. El alfa cetoglutárico y el oxaloacético, cetoácidos del ácido glutámico y del
ácido aspártico respectivamente, son los cetoácidos más comunes en estas
reacciones. Ejemplos:
Alanina cetoglutárico
amino transferasa
(ALAT, GTP)
+
B6
Á Á
La reacción es reversible aunque ocurre con mayor rapidez hacia la derecha. Además,
existe la transaminación entre el ácido aspártico y el cetoglutárico.
+ +
Á Á
oxaloacético
Á Á
Á Á
Glutaminasa
Ácido
11.5 DESCARBOXILACION
Se trata de una reacción que le puede ocurrir a todos los aminoácidos mediante la cual
estos son convertidos en aminas con pérdida del grupo carboxílico como CO 2.
La reacción es catalizada por la enzima aminoácido descarboxilasa con la vitamina B 6
como coenzima.
Estas aminas biógenas pueden ser tóxicas (ptomaínas) y muchas son vasopresoras
poderosas. La reacción puede ocurrir por acción bacteriana producto de la
putrefacción, aunque también puede tener lugar en los tejidos normales y producidos
por enzimas propias (Tabla 11.2).
Ácido
Ácido
Estas aminas son generalmente detoxicadas por el hígado por medio de un sistema
enzimático, conocido como las mono amino oxidasa (MAO).
La urea constituye el principal producto del catabolismo de los aminoácidos; por tanto
es un producto de desecho que se obtiene a partir de la oxidación de los aminoácidos.
Cuando estos son oxidados en el hígado, por medio de la desaminación oxidativa, se
producen grandes cantidades de amoniaco (NH 3), el cual debe ser eliminado del
organismo ya que éste producto es tóxico, para ello el hígado lo convierte en urea y lo
elimina por medio del riñón. De ahí que el objetivo fundamental del ciclo de la urea sea
convertir el amoniaco en urea, lo que constituye un proceso de detoxicación del
organismo
En la síntesis de la urea, que se realiza en el hígado, intervienen tres aminoácidos
directamente, la ornitina. la citrulina y la arginina, que trabajan en forma de ciclo y otros,
tales como el ácido glutámico y el ácido aspártico, que tienen responsabilidades muy
señaladas dentro del ciclo. Además, como aspecto muy importante hay que señalar
que el proceso consume gran cantidad de energía, se gastan cuatro enlaces del ATP
por cada molécula de urea producida.
El ciclo fue descrito por primera vez por H. A. Krebs y K. Henseleit en 1932 por lo que
lleva sus nombres. Desde el punto de vista didáctico, el proceso puede ser separado
en cuatro pasos:
1. Síntesis del carbamil fosfato
2. Síntesis de la citrulina
3. Síntesis de la arginina
4. Hidrólisis de la arginina
La síntesis de carbamil fosfato se realiza en la fracción mitocondrial por medio de la
enzima carbamil fosfato sintetasa. El carbamil fosfato se forma a partir del NH 3 libre,
producto de la desaminación oxidativa y el C0 2. La reacción requiere de dos moléculas
de ATP como fuente de energía, del acetil glutámico que actúa como activador
alostérico de la enzima y de la biotina portadora del grupo C0 2. La reacción ocurre de la
siguiente manera:
Ácido
Ácido
Los estudios realizados indican que las bases guanina, uracilo, citosina y timina son en
gran parte catabolizadas después de la absorción, mientras que la adenina puede ser
incorporada mayormente a los ácidos nucleicos. Todo esto indica que el organismo
animal es capaz de sintetizar activamente las bases púricas y pirimídicas, lo cual ocurre
en el hígado fundamentalmente.
El primer nucleótido que se forma es aquel que tiene como base a la hipoxantina,
llamado ácido hipoxantínico o ácido inosínico. También es de señalar que la base no se
forma sola, sino unida a la ribosa (o desoxirribosa) y al fósforo, o sea, como ácido
nucleótido. Los diferentes elementos del anillo de la hipoxantina han sido aportados por
los siguientes compuestos (figura 11.13).
ú
A partir del ácido inosínico se forman los demás ácidos nucleótidos del tipo púrico: el
adenílico y el guanidílico (figura 11.14).
Ácido
Ácido
Ácido Ácido
Ácido
Ácido
- CO2
Ácido Ácido
1.8.4 Catabolismo de las bases pirimídicas.
La degradación de las bases pirimídicas tiene lugar, fundamentalmente, en el hígado.
El proceso implica la desaminación de la citosina a uracilo, el cual es metabolizado con
producción de CO2, NH3 y beta alanina. La timina, por mecanismos similares. En la
figura 11.18 se observan estos procesos.
11.9 METABOLISMO DE LAS PORFIRINAS
En el metabolismo de las porfirinas estudiaremos su síntesis, excreción y algunos
trastornos relacionados con ellas.
11.9.1 Síntesis
El grupo porfirínico fundamental que constituye los principales cromoprótidos del
organismo animal está formado por la protoporfirina, esta es sintetizada en el hígado y
en la médula ósea a partir de la glicocola y el succinil CoA del ciclo tricarbóxilico.
Ácido
Ácido
Parte de estas porfirinas pueden aparecer en la orina y las heces fecales normalmente.
También pueden aparecer en la sangre coproporfirinas y uroporfirinas, aunque se
excretan en cantidades mayores por la orina; esto se conoce como porfinuria, que
puede tener un origen hereditario o adquirido en el curso de varias enfermedades, tales
como hepatitis, leucemias, poliomielitis y otros trastornos.
Posteriormente la bilirrubina es llevada por las albúminas del plasma al hígado donde
se conjuga con el ácido glucurónico formando el diglucoronato de bilirrubina, el cual
pasa por medio de la bilis al intestino. En el intestino, especialmente en el colon, los
pigmentos biliares son reducidos por los sistemas enzimáticos de las bacterias
coliformes formando mesobilirrubina y mesobilirrubinógeno. A partir de estos, también
por reducción se forman el estercobilinógeno y el urobilinógeno, los cuales por
oxidación forman la estercobilina y la urobilina respectivamente.
Los diversos productos de la reducción de la bilirrubina pueden ser absorbidos en parte
y ser excretados de nuevo por la bilis o en parte por el riñón, normalmente aparecen
huellas de urobilinógeno y/o urobilina en la orina (figura 11.22)
Cuando hay un aumento de los pigmentos biliares, estos pasan a los tejidos, que
pueden presentar una coloración amarilla más o menos intensa, a lo cual se le llama
ictericia o íctero, que puede deberse a diferentes causas y según las cuales se
clasifican en hemolítico, hepático y obstructivo.
El íctero hemolitico se debe a cualquier fenómeno que aumente la destrucción de los
eritrocitos, bien por parásitos o venenos hemolíticos. El caso más común en la práctica
veterinaria es la piroplasmosis, parásito del glóbulo rojo que produce una hemólisis
intensa, a aumentar los pigmentos del tipo de la bilirrubina tiñe las mucosas de color
amarillo. El íctero hepático se debe a una deficiencia hepática causada por agentes
infecciosos o tóxicos que producen la incapacidad total o parcial para eliminar el
pigmento por la bilis.
Aquí, los agentes más comunes son los virus que producen hepatitis, así como
diversos tóxicos hepáticos tales como el tetracloruro de carbono, cloroformo, etc. El
íctero obstructivo se debe a la obstrucción del conducto hepático o colédoco, lo que
impide la llegada de la bilis al intestino, por lo que las heces se observan ligera o
totalmente acólicas.
Estercobilinógeno
Ácido
Ácido
Ácido
Ácido
El enlace S - metílico es macro energético, por lo que puede ser cedido fácilmente en
las reacciones de transmetilación. La desmetilación de la adenosil metionina produce
homocisteína, la cual puede originar metionina de nuevo, por medio del ácido fólico y la
vitamina B12 a partir de residuos de formiato
De esta manera la metionina activa puede donar su radical metílico para l a síntesis de
colina, creatina, adrenalina, etc. También son necesarios estos grupos metílicos para
eliminar productos de desechos o para excreción de otros productos.
2. Formación de cisteína. La metionina, por medio de su producto de desmetilación, la
homocísteina participa en la formación de la cisteína junto a la serina. En la
reacción se produce la transferencia del azufre se la homocisteína a la serina,
proceso llamado transtiolación, que requiere la presencia de la enzima cistationín
sintetasa y B 6 c o m o coenzima y cistationasa finalmente (figura 11.26).
3. Desaminación oxidativa: La desaminación oxidativa de la metionina transcurre por
vía de la homocisteína, una vez desmetilada. La reacción implica la desulfuración,
con formación final del ácido cetobutírico, que por descarboxilación origina
propiónico. Ya hemos señalado que este es capaz de originar succinil CoA, de
forma que la metionina también es glucogenética.
Ácido
Ácido
Ácido
.
11.10.11 Metabolismo del ácido glutámico
El ácido glutámico es un aminoácido no esencial que puede ser ampliamente
sintetizado en el organismo. Son varios los aminoácidos que en su vía final oxidativa
conducen a ácido glutámico. Además, es el aminoácido que mayor participación
presenta en la transaminación. La mayoría de los aminoácidos conocidos pueden ceder
su grupo amino el ácido cetoglutárico originado en el ciclo tricarboxílico, formando
ácido glutámico.
Vías metabólicas
1. Transaminación y desaminación oxidativa: Según explicamos en el capítulo de las
reacciones generales de los aminoácidos, el ácido glutámico es el aminoácido que
mayor participación presenta en estos procesos. Producto de la transaminación y la
desaminación oxidativa, origina cetoglutárico, que puede formar glucosa, por lo que
es el aminoácido glucogenético más destacado.
2. Formación de otros aminoácidos: A partir del ácido glutámico pueden originarse la
prolina y la ornitina.
3. Formación de gamma amino butírico: En los tejidos del sistema nervioso central se
localiza una enzima que cataliza la descarboxilación del ácido glutámico con
formación del ácido gamma amino butírico (GABA). El GABA es un regulador
normal de la actividad nerviosa pues actúa como inhibidor de la transmisión
sináptica en la sinapsis neuro - neuronal. El GABA es posteriormente desaminado
en el hígado con formación del ácido succínico.
4. Formación de la glutamina: El origen de la glutamina, como se señaló anteriormente,
ocurre en el sistema nervioso central a partir del ácido glutámico y el NH 3, reacción
catalizada por la glutamina sintetasa, que requiere ATP para realizar su función.
Mediante este mecanismo se elimina gran cantidad del amoniaco del sistema
nervioso central y detoxica la neurona. Posteriormente la glutamina se hidroliza en
el riñón por la glutaminasa, con lo cual aporta NH 3 a la regulación renal del ácido -
básico.
En la figura 11.29 el metabolismo del ácido glutámico.
Ácido Ácido
Ácido
Ácido
Ácido
Ácido
Ácido
Ácido Ácido
- CO2
Varios
pasos
Ácido Ácido