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REB 29(2): 29-38, 2010 29

EL MARCAPASO DEL CORAZÓN PUEDE SER


MODULADO POR LA ACETILCOLINA MEDIANTE UNA VÍA
DELIMITADA A LA MEMBRANA*
José María Farías1, Dieter Mascher1, María Cristina Paredes-Carbajal1,
Patricia Victoria Torres-Durán2, Marco Antonio Juárez-Oropeza2
1
Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Uni-
versitaria, Distrito Federal, México. 2 Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad Nacional
Autónoma de México, Ciudad Universitaria, Distrito Federal, México. Correo E: jomafa@liceaga.facmed.unam.mx

RESUMEN PALABRAS
La acetilcolina es un neurotransmisor liberado por el nervio vago que se une al CLAVE:
receptor muscarínico M2 en las células marcapaso del corazón. Esta unión ligando- Canales de
receptor activa una proteína G de la cual sale el dímero beta-gamma. Este dímero potasio (K+),
se mantiene anclado a la cara interna de la membrana plasmática, ejerciendo una células
acción rápida, directa, delimitada a la membrana y que no requiere fosforilación sobre marcapaso,
los canales de K+. Estos canales, inicialmente llamados K(Ach), hacen que sea más efecto de la
lenta la despolarización de la célula marcapaso y disminuya la frecuencia cardiaca. acetilcolina,
Además, la acetilcolina puede iniciar y mantener mecanismos de modulación lentos, modulación por
con mensajeros intracelulares solubles, activación de cinasas y fosforilación. Se revisó proteínas G.
también la acción adrenérgica complementaria y antagónica a la respuesta colinérgica.

ABSTRACT KEY WORDS:


Acetylcholine is a neurotransmitter released by the vagus nerve that binds to the G-protein
muscarinic M2 receptor of heart pacemaker cells. Ligand-receptor binding releases modulation,
a beta-gamma dimmer from the G protein. This dimmer remains anchored to the pacemaker
inner surface of the plasma membrane, exerting a fast, direct, membrane delimited cells,
action that does not require phosphorylation of K+ channels. These channels, initia- potassium
lly called K (Ach), produce a slow depolarization of the pacemaker cell, decreasing channels (K+),
the heart rate. In addition, acetylcholine initiates and maintains slow modulation Acetylcholine
mechanisms that require soluble intracellular messengers, activation of kinases and effect.
phosphorylation. We also review the adrenergic action, complementary and antago-
nistic to cholinergic response.

juega un papel sinérgico con la noradrenalina,


INTRODUCCIÓN
y proviene principalmente de la médula su-
La contracción rítmica del corazón es el sustrato prarrenal. El proceso contrario a la estimulación
básico del mecanismo de bombeo, el cual hace adrenérgica, la estimulación colinérgica, está me-
que la sangre circule por todo el organismo diada, en el corazón, por el nervio neumogástrico.
llevando nutrientes y recogiendo desechos. La Este nervio corresponde al décimo par craneal y
contracción rítmica del corazón es un proceso es comúnmente llamado nervio vago. La acción
automático que puede incrementarse, tanto en del neurotransmisor acetilcolina, liberado por el
frecuencia como en intensidad, por la noradre- nervio vago en el corazón, frena el ritmo cardiaco
nalina y/o la adrenalina. La noradrenalina es y debilita la fuerza de la contracción. El objetivo de
un neurotransmisor liberado por los nervios este trabajo es revisar un mecanismo fisiológico
simpáticos. La adrenalina es una hormona que particular, delimitado a la membrana plasmática,

*Recibido: 10 de marzo de 2009 Aceptado: 13 de octubre de 2009


30 Farías JM, Mascher D, Paredes-Carbajal MC, Torres-Durán PV, Juárez-Oropeza MA

desencadenado por la acetilcolina y llevado a cabo enzima o proteína efectora que formará el segundo
por uno de los componentes de las proteínas G, mensajero. Existen componentes adicionales que
que realiza la transducción de la señal externa con participan en la regulación del sistema transductor,
el canal iónico. tales como el factor intercambiador del nucleó-
tido de guanina (GEF, por sus siglas en inglés),
que facilita el intercambio de GDP por GTP en la
COMPONENTES DEL SISTEMA TRANSDUCTOR
proteína Gabg, por lo cual la activa. La proteína
Históricamente, las proteínas G recibieron el aceleradora de la actividad GTPasa (GAP, por sus
nombre de proteínas N, debido a su capacidad siglas en inglés) favorece la hidrólisis del enlace
de unir nucleótidos; después de conocer que es- fosfodiéster del GTP a GDP, por lo cual inactiva a
pecíficamente unían nucleótidos de guanina, se la proteína G. A estos reguladores también se les
cambió la nomenclatura a proteínas G. Más tarde conoce como RGS (por las siglas en Inglés, regula-
se identificaron varias proteínas G, mismas que tor of G-protein signaling), mismas que se añaden
en la actualidad han constituido una superfamilia. a una lista creciente de reguladores identificados.
Esta familia comprende dos grandes grupos, las Los receptores GPCRs comprenden una mul-
monoméricas y las heterotriméricas. Las mono- titud de proteínas, y se reconocen gran variedad
méricas no están asociadas a la membrana y se de ligandos, tales como los neurotransmisores,
encuentran en el citoplasma o en el núcleo. Puesto las feromonas, las hormonas, los odorivectores
que las proteínas G heterotriméricas son las que y una gran variedad de péptidos y proteínas. Los
participan en la transducción de señales acopladas GPCRs se clasifican en seis grupos de acuerdo con
a receptor y la formación de segundos mensaje- su homología funcional y estructural:
ros, se describirán brevemente estas proteínas. 1. Receptores semejantes a rodopsina (clase A o
Las proteínas G heterotriméricas están formadas clase 1), 2. Receptores de la familia de la secretina
por las subunidades a, b y g (Gabg), de las que se (clase B o clase 2), 3. Receptor metabotrópico del
conocen múltiples isoformas; no obstante, es en glutamato y de las feromonas (clase C o clase 3),
la subunidad a en donde reside la actividad de 4. Receptores fúngicos de las feromonas (clase D o
GTPasa. Las subunidades a y g pueden mantenerse clase 4), 5. Receptores del AMPc (clase E o clase 5)
ancladas a la cara interna de la membrana plasmá- y 6. Receptores de la familia Frizzled/Smoothened
tica debido a modificaciones post-traduccionales, (clase F o clase 6) (1).
a saber: a se acila con ácido mirístico o con ácido En los vertebrados solamente se han encontrado
palmítico, mientras que g se derivatiza con farne- las tres primeras clases, la familia A es el grupo
silo o geranilgeranilo. Existen diferentes familias más grande, que comprende al receptor para la
de proteínas G heterotriméricas que se clasifican luz (rodopsina), para la adrenalina (receptores
con base en la subunidad a, misma que define el adrenérgicos), para otras moléculas pequeñas
tipo de efector, o segundo mensajero que regulan. (aminas biogénicas, quimiocinas, prostanoides,
Con base en lo anterior, existen las proteínas Gas, neuropéptidos, canabinoides y opioides), para
Gai/o, Gaq, GaT, Gaolf, Gagust, entre otras (Tablas la dopamina, la serotonina, la acetilcolina (mus-
1 y 2). Cuando la proteína Gabg se activa por la carínicos, odorivectores, péptidos, tales como la
interacción con el complejo ligando-receptor, Ga bradicinina, la angiotensina, la somatostatina y
une al GTP y se separa del dímero Gbg. En algunos hormonas glicoprotéicas como la FSH, la LH, y la
sistemas transductores, el efector es Ga, mientras TSH, que en total suman más de 670 miembros
que en otros es el dímero Gbg. La subunidad Ga en el ser humano (2). Los receptores de la clase
hidroliza al GTP, mantiene al GDP unido y entonces B comprenden aproximadamente 25 miembros,
se reasocia con el dímero Gbg para regenerar el que incluyen a la familia de las hormonas peptídi-
heterotrímero inactivo Gabg, reiniciando el ciclo. cas gastrointestinales tales como la secretina, el
Básicamente, este sistema transductor de se- glucagón, el péptido intestinal vasoactivo (VIP),
ñales consta de tres componentes: además, la hormona liberadora de la hormona
1. El receptor de la membrana plasmática con siete del crecimiento (ghrelina), la hormona liberadora
segmentos transmembranales llamado receptor de la cortico-tropina, la calcitonina y la hormona
7TM, serpentin o receptor metabotrópico, o más paratiroidea. La familia C es la más pequeña e
recientemente llamado, receptor asociado a pro- incluye a la familia del receptor metabotrópico del
teínas G (GPCR, G protein coupled receptor); 2. glutamato, el receptor tipo B del GABA, el receptor
Una enzima de membrana plasmática que genera sensor del calcio, así como algunos receptores del
intracelularmente el segundo mensajero, y final- gusto (3-6).
mente, 3. Una proteína G heterotrimérica que se En lo que se refiere a las proteínas G, tanto la
disocia del receptor GPCR ocupado y activa a la subunidad a como el dímero bg tienen, indepen-
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TABLA 1
CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS G

Proteínas Efec-
Clase Ga Efectos Ejemplos de receptores
toras Asociadas

Estimuladoras de Adenilil ciclasa Aumento de AMPc Adrenalina (β2, β3, etc), glucagón
la adenilil ciclasa Canal de calcio Incremento de la [Ca2+]i (GLP-1), vasopresina (V2),
Gαs (1-4), Gαolf Cinasa de tiro- odorivectores
sina c-Src

Inhibidoras de la Adenilil ciclasa, Disminución de AMPc Adrenalina (α1), acetilcolina


adenilil ciclasa Canal de K+ Cambios en el potencial de (M2,M4), serotonina (5-HT1),
Gαi (1-3), Gαz, Gαo membrana glutamato (mGluR2-4, mGluR6),
orexinas, ghrelina, aminas traza
(octopamina, tiramina), GABA
(GABAB)

Estimuladoras de Fosfolipasa Cβ Aumento de IP3, DAG Adrenalina (α2), acetilcolina (M1, M3,
la Fosfolipasa C M5), serotonina (5-HT2, 5-HT4-7),
Gαq, Gα11, Gα14-16 glutamato (mGluR1, mGluR5)

Gα12, Gα13 LARGE RhoGEF Vías de señalización por proteí- Angiotensina (AT1), trombina,
y otras proteínas nas Rho. esfingosina-1-fosfato (S1P2, S1P3),
GEF, ERK5 Aumento del antiportador Na+/ ácido lisofosfatídico (LPA), seroto-
H+. nina (5-HT4), Tromboxano A2
Transcripción de genes y regu-
lación del crecimiento celular.
Efectos oncogénicos y
de proliferación celular

Estimuladoras de fosfodiesterasa Disminución de GMPc Fotones (rodopsina de células


la Fosfodiesterasa de GMPc fotorreceptoras)
de GMPc Sabores amargo y dulce en
Gαt (transducina) neuronas de papilas gustativas
Gαgust (gustducina)

SIGNIFICADO DE LAS ABREVIATURAS


GIRK (rectificadores entrantes acoplados a proteínas G), GRKs en contraposición del derivado del virus del sarcoma), VOCC
(cinasa de receptor asociado a proteínas G). c-Src (proteína (canales de calcio operados por voltaje), LARGE (factor Rho de
citoplasmática con actividad de cinasa de residuos de tirosina, intercambio de nucleótidos de guanina, asociado a leucemia),
y catalogada como proto-oncogen, su nombre deriva de la ERK5 (cinasa 5 regulada por señales extraceluares), RhoGEF
abreviatura en inglés de Sarcoma, Src, y de su origen celular (factor Rho de intercambio de nucleótidos de guanina).

TABLA 2
CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS G

Clase Gβγ Proteínas efectoras asociadas Efectos Ejemplos de receptores

Kir3.1-3.4(K(Ach) o GIRK Cambios en el potencial Acetilcolina (M2),


GRKs, de membrana Histamina (H3R)
Adenilil ciclasa, isoformas I y II Fos- Aumento de AMPc,
Gβγ
folipasa C (isoformas β1 a β3), Fosfa- Aumento de IP3, DAG
tidil inositol-3 cinasa (PI3K, isoforma
γ), VOCC
32 Farías JM, Mascher D, Paredes-Carbajal MC, Torres-Durán PV, Juárez-Oropeza MA

Figura 1. Ilustración gráfica


del mecanismo delimitado
a la membrana. A: Cuando
el ligando no está unido a
A
su receptor, el canal no es
afectado por las subunidades
bg de la proteína G. B:
Cuando el ligando se une a su
receptor (en el presente caso
acetilcolina y receptor M2), las
subunidades bg de la proteína
G llegan al canal mediante un
mecanismo delimitado a la
membrana. Figura modificada
de Tedford y Zamponi, 2006

B
(29).

dientemente, la capacidad de activar o inhibir la 7M, que no funcionan como canales, sino que son
formación de diferentes efectores, lo que indica la miembros típicos de la superfamilia GPCR clase
gran complejidad en las vías de señalización (7-9). A. Se conocen cinco subtipos de estos receptores
En general, las proteínas G heterotriméricas se han muscarínicos, denominados M1 a M5. Los M2 y M4
agrupado en subfamilias teniendo en cuenta la muestran selectividad por la familia Gi, mientras
subunidad a o la bg, que se definen de acuerdo al que los M1, M3 y M5, por la Gq (10).
tipo de actividad, como se presenta en las Tablas Uno de los mecanismos fisiológicos de la ace-
1 y 2. tilcolina es la regulación de la frecuencia cardiaca,
mediante la movilización delimitada a la cara interna
LA ACETILCOLINA PUEDE INICIAR LA AC- de la membrana plasmática del dímero bg de la
TIVACIÓN DE LAS PROTEÍNAS G MEDIANTE proteína G. Este dímero, realiza la transducción de
RECEPTORES MUSCARÍNICOS la unión específica del ligando con su receptor en el
plano de la membrana, gracias a su proximidad con
La acetilcolina es uno de los más abundantes neu-
el canal iónico o con las enzimas unidas a la mem-
rotransmisores en el sistema nervioso central y
brana plasmática. Esto lo puede realizar porque su
periférico, y el primero en haber sido identificado
subunidad g se mantiene unida a la cara interna
como una sustancia con funciones de neurotrans-
de la membrana (11). También, el dímero bg de la
misor. Este descubrimiento, realizado por Otto
proteína G puede activar enzimas como la adenilil
Loewi, le ameritó el Premio Nobel de Fisiología o
ciclasa y las fosfolipasas, que generan segundos
Medicina en 1936. La acetilcolina es sintetizada a
mensajeros difusibles, que a su vez activan a las
partir de colina y acetil-CoA mediante la enzima co-
cinasas respectivas, con el fin de lograr la fosforila-
lina acetiltransferasa, la primera derivada del me-
ción de los canales iónicos y así modular su función.
tabolismo de la fosfatidilcolina y/o por la metilación
de la etanolamina. Los receptores a la acetilcolina
CÉLULAS MARCAPASO, RECEPTORES Y PRO-
son los nicotínicos (ionotrópicos) y los muscarínicos
TEÍNAS G
(GPCR metabotrópicos). En el músculo esquelético
de las personas adultas, la acetilcolina se une a la A diferencia de la adrenalina, que puede circular
subunidad alfa del canal nicotínico, que son dos de libremente en el torrente sanguíneo, la acetilcolina
las cinco subunidades que forman el poro de este no lo puede hacer debido a que existen colines-
canal. A las otras tres se les denomina subunida- terasas tanto séricas como del espacio sináptico,
des beta. Por otra parte, en células de músculo que la degradan. El nervio vago inerva al corazón
cardiaco y liso, la acetilcolina se une a proteínas y a muchos otros órganos, siendo uno de los com-
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ponentes principales de la división parasimpática mero bg de la proteína G (Gbg), que lleva a cabo -
del sistema nervioso autónomo. La acetilcolina entre otras - un tipo de señalización que, por el he-
liberada de las terminaciones nerviosas se une cho de no ser mediada por un segundo mensajero
a receptores específicos que se encuentran en la difusible, en el sentido de que pueda desprenderse
membrana de las células del corazón que forman de la membrana, se le denomina señalización “deli-
parte del mecanismo generador del ritmo cardíaco, mitada a la membrana” y no requiere fosforilación.
llamadas células marcapaso. También la noradre- En esta forma libre, este dímero Gbg se desplaza un
nalina, liberada por neuronas de la división sim- corto trayecto anclado a la superficie intracelular
pática, se une a receptores específicos sobre las de la membrana plasmática para unirse a un canal
células marcapaso del corazón, pero con efectos iónico determinado. Es importante mencionar que
opuestos a los de la acetilcolina. este sitio en donde se une el dímero Gbg al canal
Las células marcapaso del corazón se definen iónico, puede ser fosforilado por un mecanismo en
así porque son las células que presentan la mayor paralelo. Este doble mecanismo determina que en
frecuencia de despolarización en este órgano. Esto los canales iónicos pueda ocurrir un antagonismo
da inicio a los potenciales de acción, los cuales se de la modulación de la apertura del canal debido a
propagan a las células adyacentes, induciendo en una competencia entre la acción que ejercen direc-
forma coordinada las contracciones de los múscu- tamente las subunidades Gbg y la acción fisiológica
los de las paredes de las cavidades del corazón. de la fosforilación (13).
La frecuencia a la que se activan las células mar-
capaso y la fuerza de la contracción pueden ser
EL RECEPTOR MUSCARÍNICO PUEDE ACTIVAR
moduladas por señales químicas, neurotransmiso-
MENSAJEROS DIFUSIBLES Y UN MECANISMO
res u hormonas, que llegan a receptores GPCR en
DELIMITADO A LA MEMBRANA
la membrana celular. Estos receptores atraviesan
siete veces la membrana plasmática, con su ex- Al receptor GPCR para la acetilcolina expresado en
tremo N-terminal fuera de la célula y su extremo el corazón se le ha clasificado dentro de la familia
C-terminal en el interior de ésta (Fig. 1). Cuando de receptores metabotrópicos colinérgicos musca-
el neurotransmisor se une al receptor, para que la rínicos, debido a que la muscarina es su agonista
unión sea de alta afinidad, el receptor tiene que específico. La atropina es considerada como su
estar al mismo tiempo unido a una proteína G, la antagonista más común. Los receptores muscarí-
cual inicia alguna de las vías de señalización intra- nicos clasificados como M2 se han encontrado en
celular (12). El ligando, una vez habiendo dejada todo tipo de células cardíacas (12). Dos acciones
activada la cascada de señalización intracelular muscarínicas de la acetilcolina en el corazón han
mediada por los componentes de la proteína G, se sido estudiadas con mucho interés: la disminución
puede separar del receptor con el fin de activar a de una corriente de Ca2+ sensible al voltaje, y la
otros receptores. Una de las características de la apertura de un canal de K+ rectificador entrante. El
proteína G es que puede encontrarse anclada a la primer mecanismo correspondiente a la reducción
superficie intracelular de la membrana plasmáti- de la corriente de Ca2+ es mediado por un mecanis-
ca, lo cual le permite mantenerse cerca tanto del mo que utiliza un segundo mensajero difusible, es
receptor como de las proteínas efectoras que se decir que no está delimitado a la membrana plas-
encuentran integradas a la membrana plasmática. mática, y que por lo tanto puede moverse dentro
Si la proteína G no está en ese instante unida al del citoplasma de la célula. En cambio, el segundo
receptor, entonces la unión del ligando con este mecanismo, el correspondiente a la apertura del
receptor es de baja afinidad, y esta unión de canal de K+, es debido a un mecanismo delimitado
baja afinidad no puede iniciar alguna cascada de a la membrana. El primero requiere fosforilación
señalización intracelular, precisamente porque la del canal de Ca2+, en cambio en el segundo no se
proteína G no estaría haciendo contacto con el requiere que el canal de K+ sea fosforilado.
receptor en ese momento.
REDUCCIÓN DE LA CORRIENTE DE CALCIO
PARTICIPACIÓN DE LAS PROTEÍNAS G HETE- POR LA ACETILCOLINA MEDIANTE ACTIVA-
ROTRIMÉRICAS TANTO EN MECANISMOS QUE CIÓN DE CINASAS
REQUIEREN DE LA FOSFORILACIÓN COMO EN
La acetilcolina puede disminuir la corriente de Ca2+
MECANISMOS QUE NO LA REQUIEREN
tipo L en las células del corazón, pero solamente
Las proteínas G tienen tres subunidades (Ga, Gb si previamente esta corriente ha sido aumentada
y Ga). En la subunidad Ga reside la actividad de mediante la acción de los agonistas adrenérgicos
GTPasa. Los otros dos componentes forman el dí- sobre el receptor adrenérgico b (14,15).
34 Farías JM, Mascher D, Paredes-Carbajal MC, Torres-Durán PV, Juárez-Oropeza MA

Los principales receptores adrenérgicos fun- ción intracelular del AMPc, también disminuirá la
cionales son el a1, el a2 y los b. En general po- activación de la PKA, lo cual a su vez hará que se
demos decir que, por una parte, los receptores pierda la fosforilación del canal, y en esta forma
adrenérgicos a1 incrementan transitoriamente la la corriente de Ca2+ se reduce a los niveles previos
concentración intracelular de Ca2+, de diacilglicerol a la estimulación adrenérgica b. El resultado es
(DAG) y de trisfosfato de inositol (IP3), que son los una reducción de la entrada de Ca2+ durante cada
segundos mensajeros de esta vía de señalización contracción del corazón, lo cual hace que la fuerza
intracelular (16). Esto se logra por la activación de la contracción se vea debilitada (17,18).
temporal de la fosfolipasa C (PLC), que convierte
a determinados fosfoinosítidos de la membrana en
CORRIENTES DE POTASIO QUE RALENTIZAN
DAG e IP3. Este último abre un canal iónico libera-
LA FRECUENCIA CARDIACA ACTIVADAS POR
dor de Ca2+, denominado receptor de la ryanodina,
ACETILCOLINA MEDIANTE UN MECANISMO
que está localizado en el retículo sarcoplásmico.
QUE NO REQUIERE DE LA FOSFORILACIÓN
Tanto el Ca2+ como el DAG activan a la proteína
DEL CANAL IÓNICO
cinasa C (PKC) que fosforila distintas proteínas,
entre las que se encuentran los canales iónicos. A diferencia de los canales de Na+ o de Ca2+, que al
Por otra parte, tenemos una vía de señalización abrirse despolarizan a la célula, la apertura de los
distinta, que es la del AMP-cíclico (AMPc). Los re- canales de K+ la mantienen polarizada o, incluso
ceptores adrenérgicos b, mediante una proteína pueden inducir un estado de hiperpolarización.
Gs, activan a la adenilil ciclasa, que es la enzima Todas las células tienen una polaridad eléctrica
que tiene como sustrato al ATP para convertirlo en transmembranal, a la cual se le ha llamado po-
el AMPc, con lo cual se incrementa la concentración tencial de membrana en reposo, y su valor se
de este mensajero intracelular. El AMPc activa a puede calcular mediante la ecuación de Nernst si
la proteína cinasa A (PKA). Esta acción de los re- se conocen los valores de las concentraciones de
ceptores adrenérgicos b puede ser antagonizada K+ que se encuentran fuera y dentro de la célula, y
tanto por los receptores adrenérgicos a2 como se asume que en reposo la membrana es selectiva-
por los receptores colinérgicos muscarínicos M2. mente permeable al ion K+. La polaridad eléctrica
Este mecanismo inhibitorio se realiza mediante de la célula se mantiene mientras estén abiertos
una proteína Gi y que por lo tanto, disminuye la los canales de K+, y esta condición tiene que ser
concentración intracelular del AMPc. Estas bajas contrarrestada en las células marcapaso. A las
concentraciones de AMPc reducen la actividad de células con actividad eléctrica espontánea rítmica
la PKA dependiente de este mensajero, con lo cual se les llama marcapaso, y se caracterizan por tener
se reduce la fosforilación y el estado abierto de los un potencial de membrana que disminuye espon-
canales de Ca2+. Los receptores a2 y M2 también táneamente hasta el nivel denominado umbral en
incrementan la apertura de canales de K+, lo cual el que se desencadena el potencial de acción. Se
complementa la acción inhibitoria sobre los canales conoce como potencial umbral al valor que hace
de Ca2+, produciendo así una disminución de la que se abran los canales cuya apertura depende
actividad celular. Junto con estas vías de señaliza- del voltaje. Las células marcapaso del nodo sinusal
ciones lentas, tenemos además a la rápida, que es no tienen canales de Na+, y su potencial de acción
el mecanismo delimitado a la membrana, y que no se genera al activarse las compuertas sensibles al
requiere fosforilación. En resumen, podemos decir voltaje de los canales de Ca2+. Para que se active
que la activación del receptor a1 incrementa la la corriente despolarizante de Ca2+ se requiere que
concentración de Ca2+ intracelular, a diferencia del esté ausente o disminuida la corriente polarizante
receptor b que incrementa el AMPc. Esta activación de K+. Cuando se termina el potencial de acción,
b que aumenta el AMPc, se ve contrarrestada tanto la polaridad de la célula recupera la condición ini-
por los receptores a2 como por los receptores M2, cial (repolarización) gracias a la apertura de los
que lo disminuyen. Y a esto se añade que tanto el canales de K+, y empieza un nuevo ciclo al ocurrir
receptor a2 como el receptor M2 pueden activar el nuevamente la despolarización espontánea que se
mecanismo delimitado a la membrana (12). denomina potencial marcapaso.
Puesto que el efecto de la acetilcolina está Con la estimulación del nervio vago, la membra-
mediado por una disminución de la formación de na de la célula marcapaso se hiperpolariza debido a
AMPc, la acetilcolina no tiene efecto cuando el un aumento en la conductancia al K+. Esto hace que
aumento de la corriente de Ca2+ es inducido por la la despolarización marcapaso se haga más lenta.
aplicación intracelular del AMPc o de la subunidad El efecto de la activación vagal puede ser de dos
catalítica de la PKA, la cual fosforila al canal de tipos, lento o rápido. Lento, porque la activación
Ca2+. Por el contrario, si disminuye la concentra- de los receptores M2 disminuye la concentración de
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AMPc intracelular. Rápido, porque las subunidades ceptor y el canal iónico están dentro de la pipeta
Gbg ejercen un efecto directo sobre un canal de puede haber respuesta. Por eso se requiere que el
K+ presente en las células marcapaso del corazón. agonista sea colocado dentro de la pipeta, para que
Estos canales de K+ fueron inicialmente llamados sea posible la comunicación entre el receptor y el
canales K(Ach) por los fisiólogos (19,20), pero canal mediante las subunidades bg de la proteína
actualmente también son llamados canales GIRK G que se mueven ancladas al lado intracelular de
(rectificadores entrantes acoplados a proteínas G) la membrana.
o canales Kir3 (12). En las células marcapaso del Lo importante en este experimento es compren-
corazón la apertura del canal K(Ach) es uno de los der que el dímero Gbg, al tener que desplazarse
factores que contribuyen a disminuir la frecuencia anclado a la membrana, no puede traspasar el
cardíaca. Por el contrario, la estimulación de los obstáculo circular constituido por la protuberan-
nervios simpáticos cardiacos determina que el po- cia que forma el borde de la pipeta al unirse con
tencial de membrana disminuya con más rapidez la membrana. El borde de la pipeta, formado por
(despolarización) y se generen los potenciales de un vidrio que es un líquido de alta viscosidad, se
acción con una mayor frecuencia, lo cual se debe fusiona con la membrana, que también es un lí-
a la activación de los receptores adrenérgicos a1 quido pero más fluido, estableciendo un sello de
que incrementan la PLC, y a los receptores adre- alta resistencia eléctrica, el cual es indispensable
nérgicos b que, al aumentar el AMPc facilitan la para poder realizar este tipo de registros electro-
apertura de los canales de Ca2+ (17,18). fisiológicos.
La cercanía del receptor molecular con el canal
iónico y una porción de la membrana plasmática
DILUCIDANDO EL MECANISMO DELIMITADO
sin obstáculos es la condición óptima para que la
A LA MEMBRANA
proteína G, cuya acción principal es la de llevar a
En los experimentos electrofisiológicos de fijación cabo la transducción de la señal, pueda contactar
de voltaje en micro-áreas de membrana celular fácilmente a la proteína blanco (canal iónico) y
(en inglés llamados de “patch-clamp”), se le suele ejercer su acción (21).
llamar “parche” al área de membrana que queda
atrapada y aislada debajo de la punta de la mi-
¿QUÉ TAN RÁPIDA ES LA RESPUESTA DE LAS
cropipeta de registro. Este parche contiene unos
CÉLULAS MARCAPASO A LA ACETILCOLINA?
cuantos canales iónicos rodeados por el círculo que
forma el borde pulido de la punta de la micropipeta. Tan rápida que puede modular la frecuencia car-
Bajo estas condiciones, cuando se agrega acetilco- diaca mediante la velocidad de los movimientos
lina a la solución que baña a la célula, la acetilcolina de la ventilación pulmonar. La arritmia sinusal del
no puede entrar en contacto con la membrana del corazón debida a los movimientos respiratorios es
parche, y no se observan cambios en los canales un fenómeno normal que se debe a las fluctuacio-
del parche. Pero, cuando la acetilcolina es añadida nes en la señal parasimpática que llega al corazón.
a la solución contenida en el interior de la pipeta, Durante la inspiración, los impulsos del nervio vago
la cual está en contacto con la membrana atrapada provenientes de los receptores de estiramiento de
en el interior del parche, entonces se presenta ac- los pulmones inhiben al área inhibidora cardiaca del
tivación de corrientes iónicas por la apertura de los bulbo raquídeo. Al reducirse la descarga tónica del
canales. Esto delimita la localización del receptor nervio vago que mantiene la frecuencia cardiaca
dentro de la membrana del parche. baja, se eleva la frecuencia cardiaca durante cada
Aquí es notable el hallazgo de que la respuesta movimiento respiratorio.
no es tan rápida como en los receptores iono- Este efecto del nervio vago, y por lo tanto de la
trópicos, en los cuales el receptor y el poro del acetilcolina, es una de las respuestas más rápidas
canal corresponden a la misma proteína. Así que observadas en receptores acoplados a proteínas
se trata de un receptor formado por una proteína G. También tiene una reversibilidad rápida, de 300
diferente de la que forma el canal, pero con una ms, después de que la acetilcolina es removida.
vía de comunicación próxima, rápida y asociada a Esto difiere notablemente de la respuesta clásica
la membrana, que no requiere fosforilación, pero de los receptores metabotrópicos que se conocen
sí de la proteína G, porque el dímero Gbg no puede como de respuesta lenta. En éstos, el efecto se
atravesar el círculo formado por el borde pulido de instala con lentitud y al quitar el estímulo el efecto
la micropipeta adherido a la membrana. Solamente se desvanece lentamente. También difiere de la
si pudiera salirse de la membrana podría atravesar respuesta casi inmediata de los receptores iono-
ese obstáculo (Fig. 2). trópicos. Un ejemplo de éstos son los receptores
En estas condiciones cuando el agonista, el re- nicotínicos, que se encuentran en la membrana de
36 Farías JM, Mascher D, Paredes-Carbajal MC, Torres-Durán PV, Juárez-Oropeza MA

Figura 1. Ilustración que com-


para al mecanismo delimitado a
la membrana con el mecanismo
que utiliza un segundo mensaje-
ro difusible. El borde circular del
electrodo de vidrio pulido forma
un sello de alta resistencia con
la membrana, que aísla a los
componentes que quedan den-
tro. Cuando el neurotransmisor
se aplica en la solución que está
dentro de la pipeta se observa
respuesta por la vía delimitada a
la membrana, pero esto no suce-
de si el agonista es aplicado en
el baño. Esto último solamente
puede generar una respuesta
muy lenta que depende de la
activación de cinasas y de la fos-
forilación.

la placa neuromuscular y responden a la acetilco- iónico. El que esta segunda unión sea igualmente
lina liberada por parte de las neuronas motoras permanente es consecuencia de la primera. Mien-
del sistema somático voluntario. En los receptores tras la subunidad Ga se mantenga unida al GTP,
ionotrópicos, el receptor es un canal, de tal forma las otras subunidades que corresponden al dímero
que la comunicación es más rápida que la de los Gbg, permanecerán sin elementos que puedan se-
receptores metabotrópicos acoplados a proteínas pararlas del canal iónico.
G. Uno de los primeros argumentos esgrimidos Por otra parte, se han obtenido resultados que
para descartar que esta acción de modulación local confirman la presencia de las proteínas G con
no sea igual a la de los canales ionotrópicos es experimentos en los que, una vez establecido el
que la latencia de respuesta no es tan breve. En el sello arriba descrito, se retira la micro-pipeta de
caso del mecanismo delimitado a la membrana, la la célula. Queda aislada una micro-área de mem-
comunicación entre el receptor y el canal se realiza brana, el mencionado parche, la cual permanece
mediante las subunidades Gbg (12). unida al círculo que hace el borde pulido de la punta
de la micro-pipeta, con su lado interno expuesto
a la solución de perfusión. En esta configuración
HERRAMIENTAS Y ESTRATEGIAS UTILIZADAS
es posible abrir los canales K(Ach) sin aplicar el
PARA LA DETERMINACIÓN DE LA VÍA DELIMI-
agonista muscarínico o el GTP, sino solamente
TADA A LA MEMBRANA QUE LLEVA LA SEÑAL
aplicando a la cara interna de la membrana una
Se han desarrollado sustancias análogas al GTP, solución que contenga las subunidades Gbg.
excepto que no se hidrolizan y por lo tanto, no La aseveración de que se requiere una proteí-
puede darse la conversión a GDP (22,23). La na G para la activación del canal K(Ach) quedó
GTPasa de la subunidad Ga no tiene efectos sobre confirmada cuando en líneas celulares en las que
estas sustancias equivalentes al GTP. Uno de estos se expresan canales K(Ach) clonados, es posible
análogos no hidrolizables es el GTPgS. Cuando se mantener a estos canales constitutivamente
aplica intracelularmente este compuesto, el canal abiertos si, en estas células, se expresan conjun-
de potasio K(Ach) se mantiene abierto. Esto sucede tamente (coexpresión) las subunidades bg de la
a la par de otros efectos, porque permanecen ac- proteína G. La activación de los canales K(Ach)
tivas las vías de señalización intracelular. Cuando fue el primer hallazgo de señalización delimitada
se utiliza el GTPgS, la subunidad Ga queda unida a la membrana mediada por las subunidades Gbg.
a éste en forma permanente. Como consecuencia Actualmente se han descrito otros procesos en
de esto tenemos que las subunidades Gbg, por su los cuales participan las señales delimitadas a la
parte, conservan su estado de unión con el canal membrana (24-28).
REB 29(2): 29-38, 2010 Modulación del marcapaso del corazón por la acetilcolina 37

disocian en el dímero Gbg y la subunidad Ga, las


CONCLUSIÓN
cuales, dependiendo de las isoformas de las subi-
Las células reaccionan a una gran cantidad de nidades abg, pueden actuar independientemente
estímulos extracelulares a través de proteínas sobre una gran variedad de efectores tales como la
receptoras específicas que se localizan tanto en adenilil ciclasa, las fosfodiesterasas, la fosfolipasa
la membrana plasmática como en el interior de C o los canales iónicos, entre otros. El efecto del
la célula. Entre estos estímulos se encuentran las dímero Gbg puede ser independiente, antagonista
hormonas, los neurotransmisores, los factores de o sinérgico al efecto de Ga.
crecimiento, la luz, los olores, los sabores, etc. Con relación a la modulación de la actividad
La interacción de estos estímulos o ligandos con marcapaso de las células cardíacas por la ac-
sus receptores genera la activación ordenada de tivación de los receptores muscarínicos, se ha
proteínas efectoras y/o la modulación de genes demostrado que la acetilcolina se une al receptor
específicos que, finalmente, inducen una deter- muscarínico M2. Esta unión ligando-receptor activa
minada respuesta celular, conocida como vía de una proteína G de la cual se disocia el dímero Gbg.
transducción de señales. Existen múltiples vías de Este dímero se mantiene anclado a la cara interna
transducción de señales, que involucran procesos de la membrana plasmática, ejerciendo una acción
bioquímicos de recepción y transferencia de men- rápida, directa, delimitada a la membrana y que no
sajes, desde exterior hasta el interior de la célula, requiere fosforilación sobre los canales de K+. Estos
algunas de las cuales pueden ser mediados por canales K(Ach), hacen más lenta la despolarización
los receptores acoplados a proteínas G (GPCRs). de la célula marcapaso e inducen la disminución
Los GPCRs son proteínas transmembranales que de la frecuencia cardiaca. Tales mecanismos deli-
comparten el dominio intracitoplásmico de unión a mitados a la membrana, no sólo pueden abrir en
una proteína G, pero en contraste, muestran una forma rápida a los canales de K+ tipo K(Ach), sino
gran heterogeneidad en la porción extracelular que que también pueden ejercer acciones sobre otros
realiza la unión de ligando. Las proteínas G hete- procesos fisiológicos.
rotriméricas (abg), al ser activadas por el GPCR se

REFERENCIAS

1. Xiao X, Wang P, Chou KC (2009) GPCR-CA: 6. Eglen RM, Bosse R, ReisineT (2007) Emerg-
A Cellular Automaton Image Approach for ing Concepts of Guanine Nucleotide-Binding
Predicting G-Protein-Coupled Receptor Func- Protein-Coupled Receptor (GPCR) Function
tional Classes. J Comput Chem 30:1414- and Implications for High Throughput Screen-
1423. ing. Assay Drug Dev Technol 5:425-451.
2. Wess J, Han SJ, Kim SK, Jacobson KA, Li 7. Rangel-Serrano A (1999) Función y propie-
JH (2008) Conformational changes involved dades bioquímicas de las proteínas G. BEB
in G-protein-coupled-receptor activation. 18:53-59.
Trends Pharmacol Sci 29:616-625. 8. Suzuki N, Hajicek N, Kozasa T (2009) Regula-
3. Pierce KL, Premont RT, Lefkowitz RJ (2002) tion and Physiological Functions of G12/13-
Seven-transmembrane receptors. Nat Rev Mediated Signaling Pathways. Neurosignals
Mol Cell Biol 3:639-650. 17: 55-70.
4. Strader CD, Fong TM, Graziano MP, Tota MR 9. Herroeder S, Reichardt P, Sassmann A, Zim-
(1995) The family of G-protein-coupled re- mermann B Jaeneke D, Hoecknerr J, Hollmann
ceptors. FASEB J 9:745-754. MW, Fischer KD, Vogt S, Grosse R, Hogg N,
5. Ulloa-Aguirre A, Stanislaus D, Janovick JA, Gunzer M, Offermanns S, Wettschureck N.
Conn PM (1999) Structure-activity relation- (2009) Guanine nucleotide-binding proteins
ships of G protein-coupled receptors. Arch of the G12 family shape immune functions by
Med Res 30:420-435. controlling CD4+ T cell adhesiveness and motil-
ity. Immunity 30:708-20.
38 Farías JM, Mascher D, Paredes-Carbajal MC, Torres-Durán PV, Juárez-Oropeza MA

10. Wess J (2004) Muscarinic acetylcholine re- 21. Zhou XB, Lutz S, Utku E, Sausbier U, Ruth
ceptor knockout mice: novel phenotypes and P, Wieland T, Korth M (2008) M2 muscarinic
clinical implications. Annu Rev Pharmacol receptors induce airway smooth muscle ac-
Toxicol 44:423-450. tivation via a dual Gbg-mediated inhibition of
11. Simonds WF, Butrynski JE, Gautam N, Un- large conductance Ca2+-activated K+ channel
son CG, Spiegel AM (1991) G-protein beta activity. J Biol Chem 238:21036-21044.
gamma dimers. Membrane targeting requires 22. Breitwieser GE, Szabo G (1985) Uncoupling
subunit coexpression and intact gamma C-A- of cardiac muscarinic and beta-adrenergic
A-X domain. J Biol Chem 266:5363-5366. receptors from ion channels by guanine
12. Hille B (2001) Ion Channels of Excitable nucleotide analogue. Nature 317:538-540.
Membranes. Sinauer Associates, Sunderland, 23. Breitwieser GE, Szabo G (1988) Mechanism
MA, USA. of muscarinic receptor-induced K+ channel
13. Díaz-Cardenas AF, Arenas I, García DE activation as revealed by hydrolysis-resistant
(2008) PMA counteracts G protein actions on GTP analogues. J Gen Physiol 91:469-493.
Ca(V)2.2 channels in rat sympathetic neurons. 24. Soejima M, Noma A (1984) Mode of regulation
Arch Biochem Biophys 473:1-7. of the ACh-sensitive K-channel by the mus-
14. Giles W, Noble SJ (1976) Changes in mem- carinic receptor in rabbit atrial cells. Pflügers
brane currents in bullfrog atrium produced Arch 400:424-431.
by acetylcholine. J Physiol 261:103-123. 25. Logothetis DE, Kurachi Y, Galper J, Neer EJ,
15. Hescheler J, Kameyama M, Trautwein W Clapham DE (1987) The beta gamma subunits
(1986) On the mechanism of muscarinic of GTP-binding proteins activate the musca-
inhibition of the cardiac Ca current. Pflügers rinic K+ channel in heart. Nature 325:321-
Arch 407:182-189. 326.
16. Siegel GJ, Albers RW, Brady S, Price DL 26. Reuveny E, Slesinger PA, Inglese J, Morales
(2006) Basic Neurochemistry. Molecular, JM, Iniguez-Lluhi JA, Lefkowitz RJ, Bourne HR,
Cellular, and Medical Aspects. Elsevier, 7a. Jan YN, Jan LY (1994) Activation of the cloned
Edition, Philadelphia EUA. muscarinic potassium channel by G protein
17. Hartzell HC (1988) Regulation of cardiac ion beta gamma subunits. Nature 370:143-146.
channels by catecholamines, acetylcholine, 27. Morrey C, Estephan R, Abbott GW, Levi R
and second Messenger systems. Prog Biophys (2008) Cardioprotective Effect of Histamine
Molec Biol 52:165-247. H3-Receptor Activation: Pivotal Role of G-
18. Yatani A, Brown AM (1989) Rapid beta-Adren- Dependent Inhibition of Voltage-Operated
ergic modulation of cardiac calcium channel Ca2+ Channels. JPET 326:871-878.
currents by a fast G protein pathway. Science 28. Hu C, Depuy SD, Yao J, McIntire WE, Barrett
245:71-74. PQ (2009) Protein kinase A activity controls
19. Trautwein W, Dudel J (1958) Zum Mecha- the regulation of T-type CaV3.2 channels
nismus der Membranwirkung des Acetylcho- by Gbetagamma dimmers. J Biol Chem
lin an der Herzmuskelfaser. Pflügers Arch 284:7465-7473.
266:324-334. 29. Tedford HW, Zamponi GW (2006) Direct G
20. Sakmann B, Noma A, Trautwein W (1983) protein modulation of Cav2 calcium channels.
Acetylcholine activation of single muscarinic Pharmacol Rev 58:837-862.
K+ channels in isolated pacemaker cells of
the mammalian heart. Nature 303:250-253.