INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MATAMOROS

Laboratorio Integral I

Práctica V: Centrifugación.

DOCENTE:

ING. JOSÉ CRUZ RAMÍREZ MARTÍNEZ

NOMBRE DEL ALUMNO:

HUGO JESÚS TORRES GONZÁLEZ

27 de noviembre del 2018 H. Matamoros, Tamps.

Centrifugación
El objetivo de la práctica es separar una mezcla de carbonato de sodio y agua a través
del método de separación llamado centrifugación; de la misma manera obtener la
diferencia de densidades antes y después de centrifugar la solución.

Frecuentemente en la industria es necesario separar los componentes de una mezcla en

fracciones individuales. Las fracciones pueden diferenciarse entre sí por el tamaño de las
partículas, por su estado, o por su composición química.

Así́, por ejemplo, un producto bruto puede purificarse por eliminación de las impurezas
que lo contaminan, una mezcla de más de dos componentes, puede separarse en los
componentes puros individuales, la corriente que sale de un proceso puede constar de
una mezcla del producto y de material no convertido, y es preciso separar y recircular la
parte no convertida a la zona de reacción para convertirla de nuevo; también una
sustancia valiosa, tal como un material metálico, disperso en un material inerte, es preciso
liberarlo con el fin de proceder a su beneficio y desechar el material inerte.

Se han desarrollado un gran número de métodos para realizar tales separaciones y

algunas operaciones básicas se dedican a ello. En la realidad se presentan muchos
problemas de separación y el ingeniero debe de elegir el método más conveniente en
cada caso.

En este reporte se explicará el funcionamiento de una de estas técnicas de separación

de sólidos-líquidos por medio de la centrifugación, que es colocar la mezcla lechosa en
este caso en una tela que servirá como malla o tamiz y se hará girar a una velocidad
constante para que por efecto de la fuerza centrífuga el líquido sea empujado a través de
la tela mientras que el sólido es retenido en esta misma. Determinaremos el resultado
calculando la densidad del líquido puro, la densidad del líquido ya mezclado con nuestra
sustancia sólida que en este caso será el carbonato para comparar densidades y calcular
la densidad de la mezcla que ya pasó por la centrifugación y

compararla con la densidad en su estado puro para así confirmar el funcionamiento del
equipo de separación de sólidos.
Una mezcla se puede separar girándola muy rápidamente. Este método se llama
Centrifugación. La Centrifugación es un método que permite separar sólidos de líquidos,
o líquidos de líquidos de diferentes densidades mediante la utilización de una centrífuga
de laboratorio. La centrífuga obliga a una mezcla a experimentar un movimiento rotatorio
con una fuerza de mayor intensidad que la fuerza gravitacional, provocando la
sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de los
principios en los que se basa la densidad: todas las partículas, por poseer masa, se ven
afectadas por cualquier fuerza. La centrifugación impone, gracias a la aceleración
centrífuga, un efecto parecido al gravitacional: Las partículas experimentan una
aceleración que las obliga a sedimentar.
Existe una correlación entre el tamaño, la densidad de una partícula y la velocidad que
separa la partícula de una mezcla heterogénea, cuando la única fuerza aplicada es la de
la gravedad. Cuanto mayor sea el tamaño y cuanto mayor sea la densidad de las
partículas, más rápido se separarán de la mezcla. Mediante la aplicación de una mayor
fuerza gravitacional efectiva a la mezcla (como una centrífuga lo hace), la separación de
las partículas se acelera. Esto es ideal en entornos industriales y de laboratorio porque
las partículas que se separan naturalmente durante un largo período de tiempo pueden
separarse en mucho menos tiempo.

Si el objetivo de la separación de dos líquidos es obtener la fase ligera libre de fase

pesada, el proceso se denomina purificación y cuando lo interesante es aislar la fase
pesada libre de fase ligera se habla de concentración. Si en una separación sólido-líquido
se pretende lograr un efluente puro libre de partículas sólidas se denomina clarificación; y
si lo que se desea es obtener una suspensión, pero con mayor contenido de sólidos se
habla de un proceso de espesamiento.

Existen tres tipos fundamentales de separadores centrífugos:

● Centrifugador "tubular-bowl". Gira a velocidades muy altas, generando fuerzas

centrífugas del orden de 13.000 veces la fuerza de la gravedad. Está construido
para operar con caudales de entre 200 y 2.000 L/h.
 ● Centrifugador "disk-bowl". Gira a una velocidad inferior al anterior y genera una
fuerza centrífuga 7.000 veces la de la gravedad. Puede manejar caudales de hasta
20.000 L/h con cantidades moderadas de sólidos.
● Centrifugador "solid-bowl". Su velocidad de giro provoca fuerzas centrífugas de
3.000 veces la de la gravedad. Es capaz de trabajar con corrientes que contienen
gran cantidad de sólidos, separando hasta 50 T/h.
Esta clase de separadores están diseñados para operar con corrientes líquido-sólido y
líquido-líquido-sólido. Los sistemas gas-sólido se separan por medio de otro tipo de
equipos que son los ciclones.

Todo cuerpo, de masa m, sometido a un movimiento giratorio según una trayectoria

circular de radio R con una velocidad angular w experimenta una fuerza (Fc) que tiende
a alejar el cuerpo del centro de giro. Esta fuerza de inercia se conoce como fuerza
centrífuga y su valor viene expresado por:

El número de veces que la fuerza centrífuga supera a la fuerza de gravedad se

denomina factor centrífugo y permite evaluar la eficiencia de una centrífuga.

Instrumental

Tubos

De vidrio o plástico. Resistentes químicamente (disolventes, reactivos) y físicamente

(tensión a las velocidades elevadas que se emplean). Diversos tamaños y formas.
Plásticos especiales para altas velocidades.
Centrífugas

Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura. Elevadas velocidades (10 2-105 rpm).

Rotores
Dos rotor angular
tipos o de ángulo rotor basculante
: fijo

Modalidades

Según la velocidad:
Criterio aproximado:

Centrifugación a baja velocidad menos de 10.000 rpm

Centrifugación a alta velocidad entre 10.000 y 20.000 rpm

Ultracentrifugación más de 20.000 rpm

Según el propósito:

1. Centrifugación analítica

Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales como su
coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la
variante ultracentrifugación analítica.

Las moléculas se observan mediante un sistema óptico durante la centrifugación. Los

tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor
basculante, observación en vertical.

2. Centrifugación preparativa

De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis o
utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la
analítica.

Según el medio en el que se centrifuga y la forma como se aplica la muestra:

1. Centrifugación diferencial

(También llamada de frontera móvil). El tubo se llena con muestra y se centrifuga. El

comportamiento de cada componente de la muestra depende de su forma, tamaño,
densidad y, lógicamente, de las condiciones de centrifugación. Se obtienen sólo 2
fracciones: sedimento y sobrenadante.

[Nota: la palabra precipitado es más adecuada para algo insoluble, que precipita por
centrifugación o por otros mecanismos (por ej., una reacción química); sedimento es
más correcto para lo que se ha forzado a ir al fondo pero seguiría siendo soluble; pellet es
una palabra inglesa para lo que queda compactado en el fondo como consecuencia de
la centrifugación]

Una aplicación típica es el fraccionamiento subcelular (separación de los distintos

componentes de una célula, principalmente de los orgánulos) (véase Luque o Alberts)
empleando sucesivas centrifugaciones a velocidad creciente.
2. Centrifugación zonal o de velocidad de sedimentación

La muestra se aplica en una capa delgada sobre el medio de centrifugación, que es

un gradiente de densidad. Bajo la fuerza centrífuga, las partículas sedimentan a través
del gradiente concentrándose en zonas o bandas discretas. Su velocidad de avance (y,
por tanto, el mecanismo de la separación) depende de su tamaño, forma y densidad;
todos estos parámetros se combinan en el coeficiente de sedimentación,

Coeficiente de sedimentación=s=velocidad de sedimentaciónaceleración

centrífugaCoeficiente de sedimentación=s=velocidad de sedimentaciónaceleración
centrífuga

que se mide en unidades svedberg (1 S = 10−13 segundos).

La centrifugación debe terminar antes de que alguna de las partículas separadas llegue
al fondo del tubo. Los componentes separados se recogen individualmente aspirando con
mucho cuidado las diferentes bandas o, mejor, perforando el fondo del tubo y recogiendo
en fracciones el líquido que cae.

El gradiente de densidad se crea mediante un gradiente de concentración:

concentraciones crecientes, al bajar en el tubo, de un componente adecuado. Se usan
para ello sacarosa, cloruro de cesio, albúmina, suero fetal bovino..., o medios comerciales
como Ficoll –un polisacárido sintético–, Percoll, metrizamida....

Se puede preparar:
a) un gradiente discontinuo o escalonado, manualmente
b) un gradiente continuo, empleando un dispositivo formador de gradientes
c) un gradiente continuo autoformado, si se crea mediante centrifugación,
normalmente a la vez que se fracciona la muestra
Centrifugación zonal.
A) Preparación de un gradiente continuo de densidad usando un mezclador.
B) Aplicación de la muestra sobre el gradiente.
C) Colocación de los tubos en un rotor basculante y centrifugación.
D) Recogida en fracciones de los componentes separados.

Con esta técnica se consigue, por ejemplo, separar todos los tipos celulares sanguíneos,
purificar espermatozoides viables, separar células viables y no viables de tejidos
desagregados y muestras con células en suspensión, etc.

3. Centrifugación isopícnica o de equilibrio de sedimentación

Se utiliza también un gradiente de densidad, pero en este caso el tiempo de

centrifugación es lo suficientemente largo (hasta 1 o 2 días) como para que se alcance
el equilibrio de sedimentación (entre la fuerza centrífuga, el empuje hidrostático de la
célula y su difusión). Para conseguirlo, se usan gradientes continuos que cubren todo el
intervalo de densidades de los componentes de la muestra: en el fondo del tubo la
densidad del medio ha de ser mayor que la del componente más denso. De esta forma,
independientemente del tiempo de centrifugación, las partículas, células, etc. nunca
sedimentarán en el fondo, sino que alcanzan una posición estable intermedia en el
gradiente, donde se concentran en una banda muy estrecha (mejor resolución). Lo más
frecuente es mezclar la muestra con el material que formará el gradiente y generar un
gradiente autoformado a la vez que se hace la separación. Requiere velocidades muy
altas (ultracentrifugación) para que se forme el gradiente.

Además de la mayor resolución, lo interesante de esta técnica es que

separa exclusivamente según la densidad de los componentes de la muestra, que se
sitúan en la posición del gradiente donde la densidad del medio es igual a la suya propia
(isopícnica = de igual densidad, en griego).

Comparación e información adicional:

Centrifugación
Centrifugación zonal o de
Centrifugación isopícnica o de
velocidad de
diferencial equilibrio de
sedimentación
sedimentación

(generalmente en
(en gradiente preformado,
gradiente preformado o
continuo o discontinuo)
auto-formado, continuo)

Rotor angular, Rotor basculante. Rotor basculante.

generalmente. Separación en función delSeparación en función de la
Separación en funcióncoeficiente de sedimentación s,densidad. El gradiente evita
principalmente del tamaño,que depende de masa y forma. Ella mezcla por
pero también del coeficientegradiente evita la mezcla porconvección/difusión: bandas
de sedimentación s, queconvección/difusión: bandas bienbien separadas. El tiempo de
depende de la masaseparadas. Se detiene lacentrifugación es lo
(tamaño × densidad) y de lacentrifugación antes de alcanzarsuficientemente largo como
forma. (medido enel equilibrio. Densidad máxima delpara que se alcance el
Svedbergs, 1S = 10-gradiente < densidad de losequilibrio. Densidad máxima
13
segundos) componentes de la muestra. del gradiente > densidad de
Aplicación: separación deAplicación: separación delos componentes de la
tipos celulares,macromoléculas, de orgánulosmuestra.
fraccionamiento subcelularsimilares, etc. Aplicación: separación de
(separación de orgánulos), moléculas de ácido nucleico,
 separación de asociaciones purificación de ácidos
macromoleculares, etc. nucleicos, etc.

4. Métodos de barrera

Método rápido, típico por ejemplo en la obtención de leucocitos de sangre circulante libres
del resto de células sanguíneas. Se trata de una centrifugación a través de un medio de
densidad constante (se podría considerar como un gradiente escalonado de una sola
etapa). La densidad de este lecho debe ser intermedia entre la de los tipos celulares que
se quieren separar. Se emplean para ello medios comerciales como Ficoll-
Paque, Lymphoprep y otros muchos, formados generalmente por mezclas de Ficoll (un
polisacárido sintético) y metrizamida (un compuesto sintético yodado). Se dispone de
varios medios con densidades adecuadas para la separación de tipos celulares
concretos; por ej., Nycoprep 1.077 para células mononucleares, Nycoprep 1.068 para
monocitos, Polymorhoprep para células polimorfonucleares, o Nycoprep 1.063 para
plaquetas.

➢ Aplicaciones en la industria:
● Industria láctea. La leche es centrifugada para escindir su contenido de agua y
de lípidos, pues estos últimos son empleados para elaborar la mantequilla, o a
partir del remanente la leche desnatada.
● Obtención de enzimas. En la industria médica y farmacológica, a menudo se
recurre a la centrifugación para obtener determinadas enzimas de las células
especializadas que las producen.

● Separación del ADN. La centrifugación isopícnica a menudo se emplea en

laboratorios genéticos para separar el ADN celular y permitir su posterior estudio
y manipulación.
 ● Alimentos para celíacos. A la hora de separar la proteína del gluten de los
alimentos que lo contienen, el proceso de centrifugado se hace indispensable. Se
realiza sobre la pasta de almidón, cuyo contenido de gluten alcanza el 8%, y se
reduce por debajo del 2% en sucesivas centrifugaciones selectivas.

● Pruebas sanguíneas. Se emplea una centrífuga para separar los elementos de

la sangre, como el plasma y otros elementos que comúnmente están mezclados
en ella.

● Aceleración de la sedimentación. En diversas industrias alimenticias, como la

cervecera o la de los cereales, la centrifugación permite apresurar los procesos de
sedimentación que la gravedad genera espontáneamente, reduciendo el tiempo
de espera de la materia prima.

● Secado de sólidos. Otra aplicación industrial de la centrífuga es el secado de

cristales u otros materiales cuya obtención va acompañada de agua. Al girar, el
agua se separa de los sólidos y es desechada, dejando los sólidos deseados sin
el líquido.
● Tratamiento de aguas residuales. La centrifugación de las aguas contaminadas
permite extraer sustancias densas en su interior, no sólo sólidas, sino incluso
aceites, grasas y otros componentes indeseados que, una vez centrifugados,
podrían descartarse.

Procedimiento:
Para poder realizar la separación de Agua (H2O) con Carbonato de Sodio (Na2CO3) se
deben de seguir los siguientes pasos:

1. Preparar material.
2. Pesar la cantidad de carbonato de sodio.
 3. Una vez realizado el paso anterior verter carbonato de sodio en un galón de agua
(3785.41 mililitros) por medio de un embudo.
4. Agitar el galón de agua para que este tenga un buen mezclado.
5. Verter la sustancia en la centrífuga con las medidas que se brindaron para lograr
una buena separación de sustancia.
6. Tomar notas del tiempo y la velocidad de la centrífuga.
7. Una vez terminado el proceso, extraer la sustancia para poder apreciar los
cambios que hubo en este.
8. Limpiar el material usado en la práctica.
9. Tomar notas y realizar los cálculos.

Cálculos para la obtención de la densidad de carbonato de sodio antes

y después del método de centrifugación:
Fórmula

Densidad del carbonato de sodio disuelto en agua

Ρ=69.9946-45.2781 / 25= .98866 gr/ml

Densidad después de la separación de sólidos por el método de centrifugación

Ρ=69.9090-45.2781 / 25= 0.9852 gr/ml

➢ Conclusión:
En conclusión, se puede observar en los cálculos de las densidades que se realizaron
antes y después de la centrifugación que no hubo mucho cambio, es decir, no se separó
correctamente del todo, sin embargo, mezclando de una manera diferente la solución tal
vez los resultados hubieran sido distintos, como el enfriar un poco más la solución para
lograr la cristalización y que de esta manera pudiese ser más fácil la separación. Los
métodos de separación se deben de utilizar del más sencillo al más complicado, son muy
útiles en la industria siempre y cuando la persona que está operando los equipos
responsables de estas, sepa utilizarlos y sacarles el mejor provecho.