MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

Cultivos bacterianos: siembra por dilución.

Dr. María Jiménez Forero

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Dr. María Jiménez Forero

“Año del Dialogo y la Reconciliación Nacional”

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Ingeniería Pesquera

Asignatura:

Microbiología de Alimentos.

Docente:

Dra. María Jiménez Forero.

Título de la Práctica:

Cultivos bacterianos: Siembra Por Dilución.

Integrantes:

Navarro Cruz ,Brian Nicolas

Chingel Surita Bruss My Tison

Risco Yarleque ,Jim

Benites Guevara , Marlon

Paucar Garcia , Jhonathan

Semestre Académico:

2018 – II

Piura – Perú

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Dr. María Jiménez Forero

PRACTICA Nº 07

CULTIVOS BACTERIANOS: SIEMBRA POR DILUCIÓN.

I. INTRODUCCION

Los cultivos bacteriológicos, facilitan al alumno a determinados conceptos del mundo

microbiano para que comprenda como se comportan los microorganismos, los cambios
que causan en los medios de cultivo y como es su desarrollo.

Con las prácticas en el análisis de diferentes alimentos el alumno, efectuara la detección

y la identificación de microorganismos, relacionados con el campo alimentario. El
examen microbiológico rutinario de los alimentos para detectar microorganismos
patógenos y de sus toxinas no es practicable en la mayoría de los laboratorios de
microbiología de alimentos. Sin embargo, es imperativo realizar los análisis
microbiológicos de rutina correspondientes siempre que la información epidemiológica
sugiera la presencia de un agente patógeno específico en un determinado alimento. El
procesador de alimentos prefiere la identificación de grupos de microorganismos, cuya
enumeración o recuento se realiza con gran facilidad y cuya presencia en los alimentos
(en determinado número) indica que sus productos estuvieron expuestos a condiciones
que pudieran haber introducido microorganismos peligrosos.

II. COMPETENCIAS:

2.1. Competencias específicas:

 Prepara muestras en diluciones y medios de cultivo para realizar

cultivos bacteriológicos siguiendo instrucciones de la docente de
manera reflexiva.
 Desarrolla el procedimiento de siembra de microorganismos por
dilución de acuerdo con lo normado y establecido científicamente.

2.2. Competencia profesional:

 Aplica las técnicas de siembra por dilución y comprueba la utilidad de

los medios de cultivo, diferenciales y selectivos para efectuar análisis
microbiológicos de alimentos eficientemente en el área de control de
calidad.

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III. FUNDAMENTACIÓN TECNICA:

El cultivo de microorganismos es indispensable para realizar diversos estudios, de

identificación morfológica, bioquímicos, entre otros.
Existen diferentes técnicas de siembra: por dilución, en superficie por estría en medios
solidificados en placas; por estría en agar inclinado, por piquete o picadura en tubos; en
medios solidos recto y en suspensión en medios líquidos.
Cuando se requiere investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento,
la técnica comúnmente utilizada es la cuenta en placa por dilución. Para obtener
resultados reproductibles y por lo tanto significativos, pero es de suma importancia
controlar cuidadosamente las condiciones ambientales requeridas.
Esta técnica se utiliza cuando no se conoce la magnitud de la población bacteriana de la
muestra por lo que se necesita hacer diluciones en tubos para obtener colonias bien
aisladas. Se efectuarán las pruebas microbiológicas a los alimento solicitados por la
profesora, agua potable, etc.
IV. MATERIALES
 4 gradilla para pipetas
 16 placas Petri
 4 mecheros de Bunsen
 6 matraces Erlenmeyer
 4 espátulas
 2 mortero con mazo.
 4 pizetas con agua destilada
Medios de cultivo
 Agar nutritivo
 Agar Mc Conkey
 Agar Baird Parker
 Agar Saboraud
 Agar E. coli
 Caldo Nutritivo
Equipos
 Autoclave
 Camara de incubación
 Baño maría
 Balanza
Muestras
 2 pescados frescos
 2 frutas
 1 litro de yogurt
 500 ml de agua contaminada

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V. PRUEBAS MICROBIOLOGICAS A REALIZARSE

 Numeración total de microorganismos aerobios facultativos viables.
 Numeración total de Enterobacteriaceas.
 Recuento total de Staphylococcus coagulasa (+)
 Numeración de Streptococcus faecalis
 Numeración más probable de coliformes totales

VI. PROCEDIMIENTO

Antes de realizar la practica de laboratorio se efectúa la limpieza adecuada de manos:

Lavado de manos

Se realiza el reconocimiento del material y la rotulación indicada por la profesora

Materiales para utilizar en la practica

Rotulación de las placas petri

Luego se efectúa el desenvolvimiento del material estéril

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Desenvolviendo material estéril

1. Plaqueo:
El agar que ha sido previamente preparado en la práctica anterior y colóquelo en
baño maría para que se licue, luego agregue con cuidado en placas estériles en una
cantidad que cubra toda la superficie de fondo aproximadamente un cuarto de la
altura de la placa. Dejar enfriar para luego efectuar las siembras microbiológicas
por superficie.

Plaqueo, colocar el agar en las placas Petri.

Placas Petri con agar nutritivo, mc conkey, coliformes respectivamente

2. Preparación de la muestra:
Muestra liquida: para muestras liquidas no viscosas como: agua, leche, refrescos,
etc. La distribución de Mos, es homogénea o fácilmente homogenizable con
agitación.

Muestras solidas: las muestras solidas congeladas, deben descongelarse en

refrigeración de 4 a 8ºC durante 18 horas y no mas de 24 horas antes de proceder
a su dilución y análisis.

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Para la preparación de las muestras a analizar, se debe seguir los pasos siguientes:
 Triturar la muestra solida en forma homogénea en un mortero con la ayuda
del Mazo

Sacamos la muestra Trituramos

.
 Pesar 10 gr de la muestra a analizar.

Pesaje de la muestra 10 gr

 Colocar los 10 gr de la muestra, en un Erlenmeyer que contiene 90ml de

solución salina peptonada, homogenizar cuidadosamente, dejar
sedimentar, esta solución sería solución 10-1

Colocar la muestra en un Erlenmeyer

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 De esta solución 10-1 de la parte sobre nadante transferir 1 ml con una

pipeta estéril a un tubo que contiene 9 ml de solución salina peptonada,
esta sería solución 10-2

 De esta solución 10-2 de la parte sobre nadante transferir 1 ml con una

pipeta estéril a un tubo que contiene 9 ml de solución salina peptonada,
esta sería solución 10-3

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3. Pruebas a realizar:

3.1. Numeración total de microorganismos aerobios viables:

Tipo o método de siembra: incorporación
Colocar 0.1 ml de cada disolución preparada o muestra 10-1 10-210-3en placas
esteriles luego agregar el agar nutritivo en una cantidad que cubra toda la
superficie de la placa aproximadamente hasta un cuarto de su altura dejar
solidificar

Lectura de colonias

3.2. Numeración total de Enterobacteriáceae

Tipo o método de siembra: Por superficie
Colocar 0.1 ml de cada disolución preparada o muestra en placas Petri de agar
sólido por duplicado esparcir con la espátula de Driglasty bien la muestra en la
superficie del agar; por lo mismo se coloca en tubos de siembra y se procede a
ser la siembra por estría con el asa de kolle esterilizada teniendo cuidado de no
romper el medio.

Siembtre en superficie esparciendo la muestra

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VII. LOGROS OBTENIDOS:

1. Cultiva microorganismos por dilucion, de importancia alimentaria en el

area de control de calidad de alimentos.
2. Prepara medios de cultivo y siembra por dilucion para el desarrollo y
estudio de los microorganismos in vitro en forma aislada
3. Interioriza la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad en la
siembra de microoorganismos.

VIII. CUESTIONARIO

1. ¿Qué se requiere para un buen cultivo microorganismos?

Requerimientos:
 Que el medio de cultivo cumpla y garantice buenos resultados del
cultivo
 Disponibilidad del nutriente
 Consistencia adecuada del medio
 Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases
 Condiciones adecuadas de humedad (mantener refrigeradas)
 Luz ambiental
 pH adecuado
 Temperatura
 Esterilidad

2. Mencione dos diferencias entre cultivos mixtos y cultivos puros

CULTIVOS MIXTOS CULTIVOS PUROS

Contienen diferentes tipos de Contienen un solo tipo de

microrganismos formando diversas microrganismo. Para obtener estos
colonias. Para obtenerlos no es cultivos se necesita tener colonias
necesario tener colonias aisladas en bien aisladas
el medio de cultivo. Las colonias deben tener igual
El cultivo mixto permite que las forma, tamaño, y color. Así mismo
cualidades naturales de las deben ser bioquímica y
diferentes especies se fisiológicamente iguales
complementen

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3. ¿Qué métodos conoce Ud., para aislar cultivos puros?

3.1. Técnica de siembra en placa: Por estrías y rayado

a) Técnica de siembra por estrías: se pasa una porción de la muestra a la
superficie de un medio de cultivo y se siembra por estrías o por difusión.
b) Técnica de siembra por rayado método francés: consiste en hacer 5 líneas
paralelas con la el inoculo sobre la superficie del medio. Luego girar la
placa y hacer 5 líneas arrastrando el inoculo hasta completar la placa.

3.2. Técnica de la placa vertida:

Consiste en diluir la muestra en tubos con agar fundido Esta técnica se hace
de forma cualitativa o cuantitativa Cuando se hace de forma cuantitativa
podremos determinar el número de MOS Esta técnica también usa
diluciones múltiples en tubos

3.3. Técnica de enriquecimiento de cultivo:

Los medios de enriquecimiento se usan cuando: el tipo de bacterias que
queremos aislar se encuentra en muy pequeñas cantidades y es de
desarrollo muy lento que otras especies presentes.

3.4. Técnica de la gota pendiente:

Las células bacterianas quedan superficialmente separadas en algunas
áreas de la placa.

4. ¿Qué factores afectan el recuento de microorganismos en placa?

 Métodos de muestreo
 Antecedentes del alimento previos al examen
 Temperatura y tiempo de incubación
 PH, Aw y potencial de óxido reducción
 Tipo de diluyente
 Existencia de otros microorganismos competidores o antagonistas

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