El análisis epidemiológico y microbiológico de las cepas resistentes a la meticilina Staphylococcus

aureus asociadas a la comunidad aisladas de un hospital japonés.

Los informes de la comunidad asociada a la meticilina resistente Staphylococcus aureus (CA- SARM) han
aumentado recientemente en Japón, sin embargo, estos estudios contienen información limitada sobre su
epidemiología. Se realizó un estudio de un solo centro en el Hospital de la Universidad Médica de Tokio
localizado en Shinjuku, una zona central de Tokio, Japón. Desde 2099 SARM aislados obtenidos durante
julio 2007 a marzo de 2009, se seleccionaron 44 cepas de SARM con CMI de 2 mg / ml de imipenem.
Entre 44 aislamientos, 28 cepas tuvieron Tipo IV o tipo V SCCmec, y las calificó de CA-MRSA.
Identificamos sólo 1 Panton-Valentine leucocidina (PVL) positivo cepa MRSA, que pertenecía al tipo
SCCmec V. La cepa CA-MRSA PVL-positivo se aisló de un paciente con múltiples abscesos subcutáneos.
El paciente había regresado a Japón desde la India, por lo que la cepa puede haber sido contratado desde
fuera de Japón. Trece (46.4%) y 15 cepas (53.6%) fueron aisladas de pacientes ambulatorios y
hospitalizados, respectivamente. Los principales sitios de infección incluyen las vías respiratorias (8 cepas,
28.6%), la piel / tejido blando (4 cepas, 14.3%), y la cavidad nasal (4 cepas, 14.3%). Es importante señalar
que el sitio más común de CA-MRSA infección en pacientes hospitalizados fue de las vías respiratorias,
infecciones respiratorias con CA-MRSA con frecuencia causar enfermedades infecciosas graves.

Resistente a la meticilina Staphylococcus aureus (MRSA) surgido en la década de 1960 como una causa de
infección entre los pacientes expuestos a las bacterias en los centros asistenciales. Sin embargo, la
comunidad asociada MRSA (CA-MRSA) fue reconocida a mediados de los años 1990 (1) y ha surgido en
todo el mundo como un patógeno potencialmente mortal. CA-MRSA causa infecciones de tejido de piel /
suave, sino que también ha sido asociada con la sepsis y neumonía necrotizante (2). En contrario a la salud
asociada a SARM (HA-MRSA) infecciones, para los cuales no es un factor de riesgo predisponente o
enfermedad, las infecciones por SARM pueden ocurrir en personas sanas en individuos, lo que sugiere que
estas cepas bacterianas tienen mayor virulencia de cepas de HA-MRSA tradicionales. Los informes de las
infecciones por SARM tienen poco en aumentado en Japón, sin embargo, los estudios anteriores han
contenidas información limitada sobre su epidemiología. CA-MRSA cepas contienen una resistencia a la
meticilina elección, conocida como casete cromosómico estafilocócico mec (SCCmec) de tipo IV o V (3),
mientras que tradicional HA-MRSA cepas contienen un elemento SCCmec mayor tipo I-III. En contraste
con la mayoría de HA-MRSA aislados, CA-MRSA aislados son susceptibles a la no-b-lactámicos Antibiot-
ICS y por lo tanto, no son resistentes a múltiples fármacos.

En este estudio, se recogieron los aislados de MRSA con un MICº de 2 mg / ml para el imipenem (MIP), ya
que algunos se refierencias sugieren que las cepas de tipo IV SCCmec son susceptible IPM (4). Los
aislados se probaron para SCCmec Tipo (5) y se clasificaron como CA-MRSA si las cepas tenido de tipo
IV o tipo V SCCmec. Los datos epidemiológicos de CA-MRSA son muy útiles para los médicos, que
investigaron características genotípicas de las cepas de MRSA aislados en nuestro hospital y se analizaron
los datos clínicos recogidos por re- ver los registros médicos para determinar la epidemiología de CA-
MRSA entre los hospitales universitarios de Japón. El MIC de cada aislado se determinó usando un caldo
ensayo de microdilución, según la Clínica y Laboratory Standard métodos de referencia del Instituto (6).
Anti- susceptibilidad microbiana de cada cepa fue probada usando placas secas prefabricadas (DP32)
fabricados por la Eiken Chemical Co. (Tokio, Japón). Placas contenidos 18 agentes antimicrobianos, como
oxacilina (MPIPC), ampicilina (ABPC), cefoxitina (CFX), cefazolina (CEZ), cefmetazol (CMZ), flomoxef
(FMOX), IPM, gentamicina (GM), arbekacina (ABK), Minomycin (Mino), eritromicina (EM),
clindamicina (CLDM), fosfomicina (FOM), sulfametoxazol / trimetoprima (ST), levoflox- ACIN (LVFX),
vancomicina (VCM), teicoplanina (TEIC), y linezolid (LZD). El inóculo se ajustó para producir una
densidad celular de 5 × 105 UFC / ml. Las placas se incubaron durante aproximadamente 24 horas a 359C
y se examinaron mediante visuales observación. El ADN bacteriano fue extraído por medio de la Sangre
DNeasy Y kit (Qiagen, Hilden, Alemania) de tejido con lysostaphin (Wako, Osaka, Japón). El ADN
genómico se utilizó como una plantilla para la amplificación por PCR. Tipos de SCCmec (I V) de MRSA
se analizaron mediante un ensayo de PCR como anteviamente descrito y las cepas de referencia (7). Para
SCCmec Tipo II y Tipo IV SCCmec, subtipos eran más analizados usando un ensayo de PCR (5).
Multilocus secuencia de mecanografía (MLST) se ha realizado mediante 7 genes de limpieza como descrito
previamente (8). Se obtuvo un perfil alélica desde el sitio web MLST (http://WWW.mlst.net/). Se
detectaron los genes de virulencia estafilocócicas utilizando un Ensayo de PCR con cebadores previamente
reportados. Dirigido genes incluidos el leucocidina Panton-Valentine (PVL) gen (9), 3 genes de la toxina
exfoliativa (eta, etb y ETD) (10,11), y el síndrome de choque toxina-1 del gen tóxico (tst-1) (9). Debido a
que algunos tipos de SCCmec son raros en Japón, las siguientes cepas se utilizaron como controles
positivos en este estudio: NCTC10442 (SCCmec tipo I), N315 (SCCmec Tipo IIa), JCSC3063 (SCCmec
tipo IIb), 85/2082 (SCCmec tipo III), JCSC4744 (SCCmec tipo IVa), JCSC2172 (SCC mec tipo IV b),
JCSC4788 (SCCmec Tipo IV c), JCSC4469 (SCCmec tipo DIV), JCSC4796 (SCCmec tipo IVg) y WIS
(SCCmec tipo V). Estas cepas fueron proporcionadas por el profesor Keiichi Hiramatsu (Universidad
Juntendo, Tokio, Japón). ATCC49775 fue utilizado como un control positivo para los genes de CVP.

Las 44 cepas fueron seleccionados de 2099 cepas de MRSA aislados entre julio de 2007 y marzo de 2009
en el laboratorio de microbiología de la Universidad Médica de Tokio- hospital de Japón se clasificaron
como SCCmec tipo I (2, 4.5%), tipo II (12, 27.3%), tipo IV (19, 43.2%), y el tipo V (9, 20.5%). Dos
aislamientos (4.5%) fueron designados como no tipificable. Para SCCmec tipo II, 4. Se analizaron los
subtipos. Entre 12 SCCmec tipo II cepas, sólo 1 cepa fue SCCmec tipo IIa, 4 fueron SCCmec tipo IIb, y 7
fueron no tipificables y Adolescentes (IIN). SCCmec cepa de tipo IIa pertenecía al tipo de secuencia (ST)
5, con el perfil alélica 1-1-1-1-22-1-1, y se aisló a partir internado en mujeres de 57 años de edad. Entre los
11 restantes aislamientos, 8 fueron aisladas de pacientes ambulatorios, y 3 eran de pacientes pediátricos.
Para SCCmec tipo IV, 8 tipos fueron analizadas y clasificadas en 5 subtipos. Diecinueve cepas fueron
clasificadas como SCCmec tipo IV bis (6, 31.6%), Tipo IV c (1, 5.3%), tipo IVg (3, 15.8%), tipo IVj (1,
5.3%), y no tipificable (8, 42.1%). SCCmec Tipo IVA cepas eran del mismo tipo que el clon USA300; Sin
embargo, en este estudio, 6 cepas del tipo SCC mec IV bis mostraron diferentes patrones de campo pulsado
de USA300 (Fig. 1), y que fueron negativas para los genes de CVP. Se analizaron los genes de virulencia y
antimicrobiana SUS- ceptibilities de estas cepas. Resultados de gen de virulencia detección se muestran en
la Tabla 1. De todos los aislamientos, el PVL gen se detectó en sólo 1 cepa, el gen de la ET en 3 cepas, y el
gen de TSST-1 en 13 cepas. A PVL-positensión CA-MRSA tivo era SCCmec tipo V y fue isoLated de
múltiples abscesos subcutáneos de un paciente. Debido a que la respuesta al tratamiento fue negativa, este
paciente necesita ser hospitalizado. Esta cepa pertenecía a ST772, con el perfil alélica 1-1-1-1-22-1-1, que
es una variante de un solo locus de ST1. La cepa fue aislada de un paciente que había regresado de la India.
Resistencia a los antimicrobianos de las 44 cepas es por el clon USA300 en Japón (17-19). Los informes
han sugerido un aumento en la proporción de CA-MRSA aislados en un hospital de EE.UU. (20), no- tanto,
se analizaron las cepas CA-MRSA aislados de un hospital universitario de Japón. Muchas cepas de CA-
MRSA son susceptibles a IPM. Por lo tanto, la proyección criterio de CA-MRSA que hemos adoptado en
este estudio fue MIP susceptibilidad de las cepas. Sin embargo, puesto que hay puede haber habido algunos
IPM resistentes cepas CA-MRSA, era probable que hubiera más cepas CA-MRSA entre los 2.099 aislados
de MRSA. En este estudio, hemos identificado sólo 1 PVL-positivo MRSA, que pertenecía a la ST772 y
tipo SCCmec V. ST772 cepas PVL-positivos se han encontrado en Malaysia, Bangladesh, India, Inglaterra
e Italia (21-24), pero no han sido aislados en Japón. Debido a que el ST772 cepa fue aislada en muchos
aislamientos clínicos en la India, los Tensión positivo PVL en este estudio puede haber sido introdujo de la
India (22,25). Este estudio sugiere que la mayoría de las cepas de CA-MRSA en Japón no contienen el gen
PVL. La patogenicidad de PVL-negativo cepas CA-MRSA parece ser débil.

Al igual que en PVL-positivo CA-MRSA, PVL-negativo CA-MRSA cepas causan la piel / infecciones de
tejidos blandos individuos sanos, pero estas cepas suelen causar graves infecciones. Sin embargo, muchos
PVL-negativo CA-MRSA cepas se aislaron a partir del tracto respiratorio superior son muestras de
pacientes en nuestro estudio. Aunque el CA-MRSA cepas fueron PVL-negativas, estas cepas pueden
causar infecciones Vere, como la neumonía, en inmunocomprometidos hosts prometidos. Se detectaron
más cepas CA-MRSA entre los pacientes que entre los pacientes ambulatorios. Sin embargo, entre todas
las muestras en los hospitales, la mayoría de las cepas de MRSA fueron aislados de pacientes
hospitalizados. Por lo tanto, la relación de CA-MRSA entre todos los MRSA aislados de pacientes
hospitalizados fue muy baja. Dado que se seleccionaron las cepas de MRSA basado en anti- sensibilidad
microbiana en este estudio, la mayoría de tipo II de SCCmec cepas fueron el tipo IIb y el IIN, que no son
muy interesantes a los agentes antimicrobianos. Sólo 1 se pudo aislar SCCmec tipo IIa y ST5, por lo que
llegamos a la conclusión de que esta cepa era un York / Japón clon Nueva. Las Cepas de tipo IIN SCCmec
tipo IIb y se aislaron de pacientes ambulatorios pediátricos hospitalizados o ambulatorios. Se han tratado
estas cepas como HA-MRSA en este estudio, sin embargo, SCCmec Tipo IIb cepas de MRSA son a veces
aislados de dentro de la comunidad (26,27). PVL-positivas las infecciones por SARM son poco comunes
en Japón, pero PVL-negativos CA-MRSA cepas causan no sólo piel / infecciones de tejidos blandos, sino
también infecciones graves en huéspedes inmunocomprometidos. Por lo tanto, se debe tener cuidado en el
tratamiento de pacientes inmunocomprometidos que tienen infecciones nosocomiales. Cepas CA-MRSA
PVL-positivos pueden ser importados y se pueden diseminar por todo Japón. Por lo tanto, es importante
vigilar cuidadosamente el cambio de estas cepas.