Cinética Enzimática

Fermentación enzimática
Fermentaciones
 Son reacciones donde una materia
prima orgánica es convertida en
productos por la acción de
microorganismos o enzimas
 Fermentaciones enzimáticas
vs. microbiológicas
 Fermentaciones enzimáticas: el agente
catalítico, la enzima, no se reproduce a sí
misma, sino que actúa simplemente como
un agente químico ordinario
E
A R

 Fermentaciones microbiológicas: el agente

catalítico, la célula o microorganismo, se
reproduce a sí misma
C
A R + C
Cinética de Michaelis- Menten
rR

CEO

CA
E
A R
 Cinética de Michaelis - Menten
 Considerando la reacción enzimática en
dos pasos elementales:
1 3
A+E X R+E
2
CEO = CE + CX
Donde:
CEO Concentración total de enzima
CE Concentración de enzima libre
CX Concentración de enzima atada al
reactante
 Cinética de Michaelis - Menten
1
A+E X 3 R+E
2

CEO = CE + CX d CX/dt = 0

rR = k3 CA CEO (Ec. 1)
CM + CA

Donde CM = Constante de Michaelis – Menten

= (k2+k3)/k1
Significado de CM
 Dado que:

d CX/dt = 0 = k1CACE - (k2+k3) CX

y
CEO = CE + CX

 Entonces:
CX / CE = CA / CM
 Significado de CM
 Por consiguiente, cuando:
 CA = CM La mitad de la enzima está en
su forma libre y la mitad
combinada
 CA >> CM La mayoría de la enzima se
encuentra formando el
complejo X
 CA << CM La mayoría de la enzima está
en su forma libre
 Cinética de Michaelis - Menten

r 1er orden
Orden 0
CA<<CM
CA>>CM
rmax

r = rmax / 2

CA = CM CA
Bioreactor de lote o flujo de tapón

Al tiempo
t=0 Al tiempo t

CAo CA

CEo CE = CEo

CRo = 0 CR
 Bioreactor de lote o flujo de tapón

CM ln CAO +(CAO - CA) = k3 CEO t (Ec. 2)

Término de Término
primer orden de orden cero
Bioreactor de lote o flujo de tapón

Alta CA : Orden 0

CA = CM
CA Baja CA: 1er. orden

t
Valores de las constantes k3 y CM
 La Ec. 2 puede rearreglarse de la
siguiente forma:

CAo – CA = -CM + k3CEo t (Ec. 3)

ln(CAo/CA) ln(CAo/CA)
 Valores de las constantes k3 y CM
C Ao

Orden 0
CAo – CA
ln(CAo/CA) 1er. Pend. = k3
orden
CEo t
0
CM / k3 CM+CAo ln(CAo/CA)
-CM k3
 Valores de las constantes k3 y CM
C Ao

Orden 0
CAo – CA
ln(CAo/CA) 1er. Pend. = k3CEo
orden
t
0
CM / k3CEo CM+CAo ln(CAo/CA)
-CM k3CEo
Bioreactor de flujo mezclado

CAo CA
CEo CE = CEo
CRo = 0 CR
Bioreactor de flujo mezclado

t = CAo – CA = (CAo – CA)(CM + CA)

-rA k3 CEo CA

k3 CEo t = (CAo – CA)(CM + CA)

CA
Valores de las constantes k3 y CM
(Flujo mezclado)

C Ao

Orden 0
CA
1er. Pend. = k3
orden
CEo CA t
0
CM / k3 CM+CAo CAo - CA
-CM k3
Valores de las constantes k3 y CM
(Flujo mezclado)

C Ao

Orden 0
CA
1er. Pend. = k3CEo
orden
CA t
0
CM / k3CEo CM+CAo CAo - CA
-CM k3CEo
Adaptación directa de la ecuación M-M
con datos de velocidad-concentración
1. Obtener datos experimentales de r vs. C
i. Para flujo mezclado: rR = CAo – CA
t
ii. Para lote o flujo fijo: rR = - d CA
dt
 Graficar r vs. C para encontrar k3 y CM
i. Gráfica Eadie – Hofstee
ii. Gráfica Lineweaver - Burk
Gráfica de Eadie
 Rearreglando la ecuación de Michaelis –
Menten:

-rA = k3 – CM -rA
CEo CEoCA
Gráfica de Eadie
Régimen de
rAmax = k3
orden 0

Pend. = -CM
-rA/CEo
Régimen de
1er. orden
0 k3 / CM
-rA/CEo CA
Gráfica de Eadie

k3 CEo Régimen de
orden 0

Pend. = -CM
-rA

Régimen de
1er. orden
0 k3 CEo / CM
-rA / CA
Gráfica de Lineweaver

 Rearrgando de otra manera la euación de

M-M:

1 = CM 1 + 1
- rA k3CEo CA k3CEo
 Gráfica de Lineweaver

1/ -rA
Régimen de
Pend. = CM
1er. orden
k3CEo

1 / k3CEo
Régimen de
orden 0
1/CA
1/CM
0
Inhibición por una sustancia extraña

 Se le llama inhibidor a una sustancia B,

cuya presencia retarda la velocidad de la
reacción enzima-sustrato.
 En base a su modo de acción, la
inhibición puede ser:

 Inhibición competitiva
 Inhibición no competitiva
Inhibición por una sustancia extraña

B
E
E

COMPETITIVA NO COMPETITIVA
 Importancia en farmacología
Acción
de medicamentos

Estudio Bioquímico
Estudio de de enfermedades
enzimas
Síntesis de químico
e inhibición bloquear enzima
Desarrollo
nuevos medicamentos
Cinética de inhibición competitiva

 Con A y B compitiendo por el mismo sitio de la

enzima, se tiene
1
A+E X R+E
3
(Ec. 4)
2
4
B+E Y (Ec.5)
5

 La velocidad de reacción es

rR = d CR = k3CX (Ec.6)
dt
Cinética de inhibición competitiva

 Aplicando Briggs-Haldane a las ecuaciones 1 y 2

d CX/dt = 0 = k1CACE – (k2 + k3)CX (Ec. 7)

d CY/dt = 0 = k4CBCE – k5 CY (Ec. 8)

 Y haciendo el recuento de la enzima en sus

diferentes formas

CEo = CE + CX + CY (Ec.9)
 Cinética de inhibición competitiva

 Finalmente, suponiendo que:

=0
 CBo = CB + CY

 o CBo = CB

 o CBo >> CY

 o k4 / k 5 0

 o CBo >> CEo

 Cinética de inhibición competitiva

rR = k3CEoCA = k3CEoCA
CM+CA+NCBCM CM(1+NCB)+CA

Donde:
CM = k2 + k3 mol
k1 m3

N= k4 m3
k1 mol
Cinética de inhibición no competitiva
 A se une a un sitio de la enzima y B a otro
diferente pero detiene la acción de A
1 3
A+E X R+E (Ec. 10)
2
4
B+E 5
Y (Ec. 11)
6
B+X Z (Ec. 12)
7

 La velocidad de reacción es

rR = d CR = k3CX (Ec.13)
dt
 Cinética de inhibición no competitiva
 Aplicando Briggs-Haldane a las ecuaciones 1 y 2

d CX/dt = 0 = k1CACE + k7CZ - (k2 + k3)CX - k6CBCX

(Ec. 15)

d CY/dt = 0 = k4CBCE – k5 CY (Ec. 16)

d CZ/dt = 0 = k6CBCX – k7 CZ (Ec.17)

 Y haciendo el recuento de la enzima en sus

diferentes formas

CEo = CE + CX + CY + CZ (Ec.18)
Cinética de inhibición no competitiva

rR = k3CEoCA = k3CEoCA/(1+LCB)
CM+CA+NCBCM +LCACB CM 1+NCB +CA
1+LCB
Donde:
CM = k2 + k3
k1
N = k4
k5
L= k6
k7
 Inhibición competitiva
Bioreactor de lote o flujo de tapón
Baja Alta

CB = 0 CB CB
C Ao

CAo – CA Pend. = k3
ln(CAo/CA)

CEo t
0
C M / k3 CM(1+NCB)
ln(CAo/CA)
k3
-CM
 Inhibición no competitiva
Bioreactor de lote o flujo de tapón
Baja Alta

CB = 0 CB CB
C Ao

CAo – CA Pend. = k3
ln(CAo/CA) 1 + LCB
CEo t
0
C M / k3 CM(1+NCB)
ln(CAo/CA)
k3
-CM
Inhibición competitiva
Bioreactor de flujo mezclado
Baja Alta

C Ao CB = 0 CB CB

CA
Pend. = k3

CEo CA t
0
C M / k3 CM(1+NCB)
Cao - CA
k3
-CM
Inhibición no competitiva
Bioreactor de flujo mezclado
Baja Alta

CB = 0 CB CB
C Ao

CA
Pend. = k3
1 + LCB
CEo CA t
0
C M / k3 CM(1+NCB)
Cao - CA
k3
-CM
Inhibición competitiva
Datos de velocidad vs. concentración
k3
Pend. = -CM

Pend. = -CM(1+NCB)
-rA/CEo
Baja
Alta CB = 0
CB
CB
0 k3 / C M
k3 / CM(1+NCB) -rA/CEo CA
Inhibición no competitiva
Datos de velocidad vs. concentración
k3

k3/(1+LCB) Pend. = -CM

Pend. = -CM(1+NCB)
-rA/CEo
Baja
Alta CB = 0
CB
CB
0 k3 / C M
k3 / CM(1+NCB) -rA/CEo CA
Inhibición por substrato

 El exceso de substrato A puede causar

interferencia en los sitios activos de la enzima
1
A+E X R+E
3
(Ec. 19)
2
4
A+X Y (Ec.20)
5

 La velocidad de reacción es

rR = d CR = k3CX (Ec.21)
dt
Inhibición por substrato

 Aplicando Briggs-Haldane a las ecuaciones 1 y 2

d CX/dt = 0 = k1CACE + k5 CY – (k2 + k3)CX - k4CACX

(Ec. 22)

d CY/dt = 0 = k4CACX – k5 CY (Ec. 23)

 Y haciendo el recuento de la enzima en sus

diferentes formas

CEo = CE + CX + CY (Ec.24)
Inhibición por substrato

rR = k3CEoCA
CM + CA + NCA2

Donde:
N = k4
k5
 Gráfica de bioreactor de lote o
flujo de tapón
N=0 Baja N Alta N
CAo

Cao - CA
lnCAo/CA
CEo t
CM / k3 lnCAo/CA
(CM+C Ao)/ k3 (CM+C Ao+2NCAo)/ k3

- CM
Gráfica de velocidad vs. concentración
rR / CEo

k3

Baja N

Alta N
rR / Ceo CA
0
k3 / C M
k3 / 2C M