UNAM – EPIA GUIA DE PRÁCTICA DEL CURSO DE CINETICA QUIMICA

TEMA
PRACTICA DE LABORATORIO Nº 08

DETERMINACION DE LA CINETICA ENZIMATICA MEDIANTE LA

HIDROLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL

I. INTRODUCCION

Las enzimas son macromoléculas proteínicas que catalizan reacciones

químicas. Esta actividad catalizadora puede verse afectada por diversos
factores estos pueden ser las concentraciones (sustrato y enzima), la
ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y efectores, el cambio de
temperatura y de pH. A su vez para determinar como estos factores
influencian la actividad catalítica de la enzima es necesario medir la
velocidad inicial de la reacción en función de los factores que pueden afectar
esta o también determinando la presencia o ausencia de un sustrato o de un
producto de la reacción, a medida que se varia uno de los factores. En esta
práctica se pretendió evaluar como afectan los distintos factores la reacción
enzimática. Para conseguir resultados, fue necesario la preparación de una
solución de saliva y la evaluación de cómo el cambio en el pH y la
temperatura influían en la reacción enzimática de la amilasa. A su vez de
cómo el cambio de concentración de la enzima influía sobre la reacción de
hidrólisis de la amilosa.

II. OBJETIVOS
 Determina, conoce e identifica la Acción de la amilasa salival sobre el
almidón.

III. FUNDAMENTO TEORICO

Las enzimas son macromoléculas proteínicas cuya función es catalizar
reacciones químicas, realizando un cambio químico específico sobre el sustrato
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sobre el que actúan. La actividad catalítica de una enzima puede verse afectada
por diversos factores, uno de ellos es la variación de pH, ya que un cambio en
este transforma la forma y la estructura de la misma enzima, y debido a que el
pH al cual las enzimas adquieren su máxima actividad es diferente para cada
una de ellas y depende de la secuencia de aminoácidos que las conforman, por
lo que si se ve afectada su conformación también se vera afectada su actividad
catalítica. A su vez pH extremos se puede ocasionar la desnaturalización de las
enzimas, debido a que se modifican las interacciones iónicas que intervienen en
la estabilidad de la enzima en su estado nativo. Otro factor que puede afectar la
actividad catalítica es la concentración del sustrato básicamente existe una
relación lineal es decir al aumentar el sustrato la velocidad aumenta, esto se da
debido a que existía una cierta cantidad de enzima libre, pero al saturar esta se
llega a la velocidad máxima y a altas concentraciones del sustrato, la velocidad
de la reacción es independiente de su concentración.

3.1. ENZIMAS

Las enzimas son proteínas que actúan una acción de catálitica, es decir,
favorecen el que se reproduzca una reacción determinada.
La presencia de las enzimas dentro del cuerpo, permite que muchas
reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura
constante, y un ph con poca variación.
Existiendo en el cuerpo una gran cantidad de enzimas y de acorde a la
práctica detallamos lo siguiente:

a. LA AMILASA

Es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos,

específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

a. Materiales
 03 vasos de precipitado 500ml
 03 vasos precipitados de 100ml
 03 pipetas de 10ml
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 03 propipetas
 01 espátulas
 02 probetas de 50ml
 02 fiolas de 50ml
 06 tubos de ensayo
 Gradilla
 Pisetas
 Gasa médica.

b. Equipos
 01 balanza analítica
 01 cronometro
 01 Agitador magnético

c. Reactivos
 10 gotas de H2SO4 (diluido al 10%)
 10 gotas de NaOH (diluido al 5%)
 20 gotas de Lugol.
 8ml de solución de almidón (diluido al 2%)
 Agua destilada
 5ml de saliva

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Preparar la solución de 8ml de almidón al 2%.

2. Obtención de la muestra de saliva:
- Colocar la pieza de gasa sobre el vaso de precipitado.
- Adicionar la muestra de saliva. La cual pasará a través de la gasa y será
recepcionada en el vaso de precipitado.
- Complete los 5ml de saliva, siempre teniendo en cuenta que no se tome
espuma.
3. Rotule los cuatro tubos, y continuar según el siguiente cuadro:
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3.1 TUBO 1:
- Añadir 2ml de solución de almidón.
- Adicionar 4 gotas de Lugol.
- Adicionar 1ml de H2SO4.
- Por último, adicionar 1ml de saliva.
- Llevar a baño maría a 40°C.
- Observar y anotar.

3.2 TUBO 2:
- Añadir 2ml de solución de almidón.
- Adicionar 7 gotas de Lugol.
- Adicionar 1ml de NaOH.
- Por último, adicionar 1ml de saliva.
- Llevar a baño maría a 40°C.
- Observar y anotar.

3.3 TUBO 3:
- Añadir 2ml de solución de almidón.
- Adicionar 3 gotas de Lugol.
- Por último, adicionar 1ml de saliva.
- Llevar a baño maría a 40°C.
- Observar y anotar.

3.4 TUBO 4:
- Añadir 2ml de solución de almidón.
- Adicionar 3 gotas de Lugol.
- Por último, adicionar 1ml de saliva.
- Colocar a temperatura ambiente.
- Observar y anotar.
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VI. RESULTADOS

Los primeros resultados en obtener fueron el % de intensidad de color azul

en los tubos tratados con pH diferente para la evaluación del cambio de pH
sobre la actividad de la enzima amilasa y una vez obtenida esta fue posible
calcular el porcentaje de la reacción empleando la siguiente formula :
% Reacción = 100 - % Intensidad
Resultados de la evaluación del cambio de concentración de la enzima sobre
la reacción de hidrólisis de la amilosa.

Tubo % % %
Saliva Intensidad Reacción
1 50 10 90
2 25 15 85
3 12,5 20 80
4 6,2 30 70
5 3,1 35 65
6 1,6 40 60
7 0,8 45 55

% reacción vs
concentración de la
enzima
100
% reacción

50

0
0 0.2 0.4 0.6
Concentración de la enzima

% de reacción vs Concentración de la enzima

Finalmente los últimos resultados en ser obtenidos fueron el % de intensidad

de color azul en los tubos tratados a temperaturas diferentes para la evaluación
del cambio de de temperatura sobre la actividad de la amilasa y una vez obtenida
esta fue posible calcular el porcentaje de la reacción empleando la siguiente
formula:
% Reacción = 100 - % Intensidad
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A su vez con los datos obtenidos fue posible graficar “% de reaccion vs Temp”
como se ve en la gráfica 3.
En esta práctica la saliva utilizada se tomó de uno de los integrantes del grupo,
los resultados pueden variar dependiendo de cada persona ya que las
características y concentraciones de los compuestos varían de una persona a
otra. La saliva para la prueba debía estar sin espuma ya que esto afecta en la
medición del volumen dando medidas erróneas.

% reacción vs Temp
(oC)
100
80
% reacción

60
40
20
0
0 50 100
Temp(oC)

Para comprobar que a mayor concentración de enzima hay mayor degradación

del sustrato de almidón, se utilizaron 5 tubos de ensayo en los cuales se
introdujeron concentraciones diferentes de enzima, cada concentración de
enzima fue la mitad de la anterior, luego se agregó solución salina, almidón.

VII. CONCLUSIONES

 Las enzimas son biomoléculas sensibles a cambios de temperatura y

pH, estos son capaces de afectar su actividad metabólica.
 El porcentaje de reacción de una enzima sobre una misma cantidad
de sustrato es directamente proporcional a la concentración de esta
que se halle en la solución.
 Las altas temperaturas son capaces de desnaturalizar y cambiar la
conformación estructural de las proteínas causando que cese su
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actividad, las bajas temperaturas tienen efectos sobre la entropía

causando que las colisiones enzima sustrato disminuyan.

VIII. BIBLIOGRAFIA

 Guilleme, J; Casanueva, J; Díez, E; Herrasti, P; Juan, J; López, R;

Ocón, P; Poyato, J.M.L; San Fabián, J; Sánchez, A; de la Vega,
J.M.G; Zuluaga J. Experimentación en Química Física. Capítulo
Cinética Química. Ed. Universidad Autónoma de Madrid, 2003.

 Arencibia, A; Arsuaga, J.M; Coto, B; Suárez, I. Laboratorio de

Química Física. Práctica 3. Ed. Universidad Rey Juan Carlos, 2005.

 A; Esteban, S; Navarro, R; Coruago, P; Barthelemy, C. Técnicas

Experimentales en Química. 3ª ed. Experiencia 15. Ed. Universidad
Nacional deEducación a Distancia, 1991.

IX. PREGUNTAS

 ¿Cómo ACTUA LA AMILASA SOBRE EL ALMIDON?

La enzima amilasa degrada el almidón

 ¿Cómo ESTA FORMADO EL ALMIDON QUIMICAMENTE?

El producto está formado por la polimerización de monómeros de
glucosa es almidón.
 ¿Qué es LA AMILASA DESDE UN PUNTO DE VISTA QUIMICO?
La amilasa, (más propiamente amilasas, dado que existen varias)es
una enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción de
hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de glucosa al digerir
el glucógeno y el almidón para formar fragmentos (dextrinas, maltosa)
y glucosa libre.