Biología Molecular de la

Célula
BIO238M 2013

Ruta Exocítica: Tráfico

intracelular, elementos
moleculares y su regulación

María Paz Marzolo C. PhD

Facultad de Ciencias Biológicas
P. Universidad Católica de Chile
 TEMARIO

• Conceptos de transporte en la ruta exocítica y

endocítica.
• Rutas de transporte intracelular de vesículas y
sus elementos moleculares
• Formación, fisión y fusión de vesiculas.
RUTAS DE TRÁFICO DE MEMBRANAS
ASPECTOS BÁSICOS EN LA EXOCITOSIS Y ENDOCITOSIS
Mecanismos básicos presentes en todo evento de transporte vesicular
Mecanismos básicos presentes en todos los eventos del transporte vesicular
 ETAPAS EN EL TRANSPORTE VESICULAR DE
PROTEINAS

• Formación de la cubierta: Reclutamiento de

proteínas citosólicas, selección de carga,
deformación de membrana, yemación, fisión
(liberación de la vesícula).

• Liberación de cubierta: hidrólisis de GTP y,o ATP

• Reconocimiento de membrana blanco y anclaje

• Fusión de membranas
Formación de una vesícula
Proteínas que definen transporte vectorial en la célula
 Ensamblaje y desensamblaje de vesículas cubiertas :
Requerimientos de activación y desactivación de GTPasas

GTPasas pequeñas: reclutan cubierta, modifican indirectamente composición lipídica

Favoreciendo la fisión, favorecen el proceso de segregación de la carga. …
Transporte Vesicular: Proteínas participantes en
las distintas etapas

•Proteínas de Cubierta: Clatrina, Adaptadores

(complejos AP1, AP2, AP3, AP4), GGAs,
Retrómero, Coatómeros (COP-I, COP-II)

•Receptores para la carga y la cubierta

•Proteínas de anclaje: Etapa de reconocimiento

•SNARES: fusión de membrana

•Rabs: Regulación del proceso a varios niveles

 Proteínas de cubierta en las distintas rutas intracelulares

Flujo continuo, bidireccional, regulado, se mantiene identidad….requerimientos de

Cubierta para concentrar carga y deformar la membrana.
Vías de tráfico y Componentes de Cubierta en la Ruta Exocítica

Transporte anterógrado entre Retículo y Golgi: vesículas con COPII y sar1p

Transporte retrógrado entre Golgi y Retículo: vesículas con COPI y ARF

Transporte entre cisternas de Golgi : vesículas con COPI y ARF

Transporte entre Golgi y sistema endosoma/lisosoma: vesículas con

clatrina, ARF/AP1 o GGAs

Transporte entre endosoma y aparato de Golgi: Cubierta “retrómero”

Transporte entre Golgi y membrana plasmática: Menos caracterizado

COPI: Transporte de proteínas entre
Golgi y RE (retrógrado) y entre
cisternas de
Golgi (anterógrado)

COPII: Transporte de proteínas de

membrana y secreción entre RE y
Golgi
Visualización por microscopía electrónica de las vesículas
intracelulares de transporte
 Compartimiento Intermedio Tubular o VTCs:
Alimentado por vesículas anterógradas CopIi
desde RE y lugar de salida vesículas retrógradas CopI

Figure 13-23b Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

Vía anterógrada: Vesículas con CopII desde Retículo endoplásmico a VTC
 Formación de Vesículas de transporte con COP-II:

Salida desde RE es un proceso:

Pasivo (carga entra sin discriminación a vesículas)?

O...

Activo (carga es seleccionada al expresar alguna señal e

interactua con la maquinaria de formación de vesícula)?
 Visualización por microscopía electrónica de complejos

intermediarios de vesículas y vesículas derivadas de RE

+ citosol + Sar1p, sec23-24,

sec13-31
+ Sar1p y sec23-24
Vía anterógrada: Vesículas con CopII desde Retículo endoplásmico a VTC
 …El proceso de formación de vesícula es activo…..

Figure 13-20 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Algunas Patologías asociadas a la ruta secretoria dependiente
de la maquinaria de COP II

 Enfermedad de retención de quilomicrones (CRD) y Enfermedad de Anderson.

Poco frecuentes, autosómica recesiva, caracterizada por Diarrea crónica, fallas en
el desarrollo, hipocolesterolemia. Mutaciones en gen sar1b, que codifica para la
GTPasa Sar1b. Pacientes
retienen partículas
lipoproteicas intestinales, deficiencia
de vitaminas liposolubles (ejemplos,
vitaminas E y A).
 Algunas Patologías asociadas a la ruta secretoria dependiente
de la maquinaria de COP II

Defectos se asocian a mutaciones o ausencias de componentes de COPII, con

acumulación de colágeno II en retículo, defectos en la secreción de elementos de
la matriz extracelular de fibroblastos y condrocitos.
En el desarrollo de pez cebra, se ven defectos en la condrogénesis craneofacial
 Vía retrógrada Golgi-RE e intracisternas de Golgi:
vesícula con COP-I

A diferencia de las vesículas CopII, en este caso la cubierta se recluta

a la membrana en bloque una vez activada la GTPasa pequeña Arf1…

Formadas por: Arf1, Coatómero (complejo de siete proteínas)

Proteínas de membrana que reclutan el coatómero
Ruta Retrógrada de Golgi al RE y entre cisternas de Golgi:
Formación de vesículas COPI
Ciclo de activación-desactivación de GTPasas
Etapas en la formación de vesículas COPI

Formación de la cubierta: Reclutamiento

de proteínas citosólicas, selección de carga,
deformación de membrana, yemación.

Fisión (liberación de la vesícula).

Liberación de cubierta: hidrólisis de GTP

Transporte retrógrado desde cis Golgi al retículo:
Reciclaje y recuperación de proteínas de retículo

Para proteínas
Luminales,
como BIP, RAP
y otras….

Proteínas de membrana residentes de RE

que reciclan tienen secuencia en su dominio
Citoplásmico del tipo KKXX reconocido por
la cubierta CopI
Rutas de transporte Golgi-endosomas y
Membrana Plasmática
 Secreción regulada
Secreción constitutiva

Formación de lisosomas
Vesículas cubiertas con
clatrina, ARF1 y AP1
 Transporte de hidrolasas lisosomales Golgi-Endosomas

Ruta Golgi-Endosoma tardío/lisosoma: vesiculas cubiertas con clatrina

Ruta Endosomas-Golgi: Cubierta “retrómero”
COMPARACIÓN DE LA MORFOLOGÍA DE VESÍCULAS COPI
CON LAS CUBIERTAS CON CLATRINA
 ESTRUTURA DE LA CLATRINA Y SU ENSAMBLAJE

Red Fibrosa constituida

Por: 12 pentágonos y 8
Hexágonos. 36 triskelios
ESTRUTURA DE LA CLATRINA Y SU ENSAMBLAJE
 ESQUEMA DE LOS COMPLEJOS ADAPTADORES

AP1: Transporte Golgi a Membrana Plasmática

AP2: Membrana plasmática (endocitosis)
AP3 y AP4, funciones menos conocidas.
ADAPTADORES MONOMERICOS GGAs
Formación de vesículas cubiertas con clatrina: Aparato de Golgi y
Membrana Plasmática
Formación vesículas cubiertas con clatrina en Golgi
Fisión de vesículas cubiertas con clatrina es dependiente de dinamina
Figure 13-12b Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
 ETAPAS EN EL TRANSPORTE VESICULAR DE
PROTEINAS

• Formación de la cubierta: Reclutamiento de proteínas

citosólicas, selección de carga, deformación de
membrana, yemación, fisión (liberación de la vesícula).

• Liberación de cubierta: hidrólisis de GTP y,o ATP

• Reconocimiento de membrana blanco y anclaje

• Fusión de membranas
Etapas Finales en el transporte vesicular: Anclaje y Fusión…..
Ejemplo: Modelo de anclaje y fusión de vesículas
COP-I intracisternas de Golgi
La Fusión de Membranas no es un proceso espontáneo y es
asistido por Proteínas SNARES
 Fusión de membranas: SNARES

Formación de complejo estable de membranas

Disociación del complejo de SNARES, requisito

Acercamiento de SNARES y para reciclar, requiere de gasto energético….
cambio conformacional hidrólisis de ATP
 Proceso de Fusión homotípica en la formación de organelos

Fusión de vesiculas iguales, con v- y t-snares, que generan organelos como VTC
(entre RE y Golgi), Endosomas tempranos, (Clase endocitosis).

Figure 13-22 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Rabs: GTPasas que regulan el transporte
vesicular

Funciones reguladoras de las Rabs, pueden ser directas

o indirectas tales como:

1) Facilitar el proceso de yemación de vesículas.

2) Asociación de vesículas al citoesqueleto (transporte de

vesículas).

3) Reclutar complejos de anclaje y facilitar el anclaje de la vesícula

a la membrana blanco (hace mas específico el evento posterior de
fusión).

4) Facilitar el apareamiento de SNAREs.

 Localización subcelular de las GTPasas pequeñas Rabs

Table 13-1 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

Esquema de funcionamiento de las proteínas reguladoras Rabs
 Regulación del tráfico vesícular, localizadamente por Fosfatidilinositoles

Figure 13-10 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Distribución diferencial de Fosfatidilinositoles en membranas

Figure 13-11 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

FIN