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Cartas en Microbiología Aplicada 2004, 39, 74-83doi :10.1111/j.1472-765X.2004.01540.x

Impacto diferencial de algunas especies de

Aspergillus sobre el biocontrol de Meloidogyne
javanica por la cepa CHA0 de Pseudomonas
fluorescens

I.A. Siddiqui1, S.S. Shaukat1 y A. Khan2

1Soil 2Crop
Biology and Ecology Laboratory, Department of Botany, University of Karachi, Karachi, and Disease Research Institute,
Pakistan Agriculture Research Council, Karachi University Campus, Karachi, Pakistan

2003/1195: Recibido el 27 de diciembre de 2003, revisado el 6 de abril de 2004 y aceptado el 8 de abril de 2004

RESUMEN
I . A . S I D D I Q U I, S . S . S H A U K A T Y A . K H A N . 2004.
Objetivos: El objetivo era determinar la influencia de algunas especies de Aspergillus en la producción de
agente(s) nematicida(s) in vitro y biocontrol de Meloidogyne javanica en tomate mediante cepas de Pseudomonas
fluorescens CHA0 y CHA0/ pME3424.
Métodos y resultados: Seis especies de Aspergillus, aisladas de la rizosfera de ciertos cultivos, produjeron una
variedad de metabolitos secundarios in vitro. Filtrado de cultivo (CF) obtenido a partir de Ps. fluorescens cepa
CHA0 y su
El 2,4-diacetilfloroglucinol mutante sobreproductor CHA0/pME3424 cultivado en el medio líquido B de King's B
causó una mortalidad significativa de M. javanica juveniles in vitro. El medio de crecimiento bacteriano
modificado con FQ de A. niger mejoró las actividades nematicidas y b-galactosidasas de las pseudomonadas
fluorescentes, mientras que A. quadrilineatus reprimió dichas actividades. Los extractos de metanol o acetato de
etilo de la FQ de A. niger optimizaron notablemente la eficacia bacteriana para causar la muerte de nematodos,
mientras que el extracto de hexano del hongo no tuvo ninguna influencia en la actividad nematicida de las cepas
bacterianas. A. niger aplicado solo o en conjunto con los inoculantes bacterianos inhibió el desgaste de los
nematodos del nudo radicular en el tomate. Por otro lado, el A. quadrilineatus utilizado solo o junto con CHA0 no
inhibió el gripado de nematodos, pero cuando se utilizó en combinación con la cepa CHA0/pME3424 sí redujo la
intensidad del gripado.
Conclusiones: Aspergillus niger aumenta la producción de compuestos nematicidas por Ps. fluorescens in vitro
y mejora el potencial de biocontrol de los inoculantes bacterianos en el tomate, mientras que A. quadrilineatus
reduce el rendimiento bacteriano para suprimir los nematodos del nudo radicular.
Significado e impacto del estudio: La rizosfera alberga una variedad de microorganismos, incluyendo bacterias,
hongos y virus. Las especies de Aspergillus son ubicuas en la mayoría de los suelos agrícolas y generalmente
producen una variedad de metabolitos secundarios. Estos metabolitos sintetizados por especies de Aspergillus
pueden influir en la producción de agentes nematicidas y en el subsiguiente comportamiento de biocontrol de los
inoculantes bacterianos contra nematodos parasitarios de plantas. Este hecho debe tenerse en cuenta cuando se
utilizan cepas de control biológico en un sistema agrícola.

Palabras clave: control biológico, pseudomonas fluorescentes, nematodos del nudo radicular, metabolitos
secundarios, hongos del suelo.

Correspondencia a: Imran A. Siddiqui, Laboratorio de Biología y Ecología
del Suelo,
Departamento de Botánica, Universidad de Karachi, Karachi-75270,
Pakistán (e-mail: imran_75850@yahoo.com).
Dirección actual: Imran A. Siddiqui, Unidad de Interacción de Nematodos,
Plant Pathogen Interaction Division, Rothamsted Research, Harpenden, AL5
2JQ, Reino Unido.
INTRODUCCIÓN
Los nematodos parasitarios de plantas son considerados
como plagas graves de muchos cultivos comerciales.
Aunque los problemas de nematodos ocurren en todo el
mundo, el daño más evidente ocurre en áreas cálidas donde
las temperaturas más altas y más largas
2004 La Sociedad de Microbiología Aplicada
 EFECTO DE AS PE RG I LLI EN PS E UDO MO NA S 75

las estaciones de crecimiento inducen más generaciones de glucosa o la sacarosa (Duffy y De´fago 1999). Además, se ha
nematodos y, en consecuencia, un aumento de las informado que el sulfato de zinc y el molibdato de amonio
poblaciones. Sobre la base de datos de encuestas excesivas favorecen la producción de DAPG en algunas cepas,
(Sasser y Freckman 1987; Koenning et al. 1999), se ha mientras que el fosfato inorgánico en general tiene un efecto
estimado que la pérdida global de rendimiento es del 12Æ3% inhibidor (Duffy y De´fago 1999). Recientemente, Siddiqui
anual; esta cifra se aproxima al 20% para algunos cultivos. En y Shaukat (2002) demostraron que la enmienda del suelo con
términos monetarios, la cifra mundial supera con creces la zinc solo o en combinación con zinc es una buena opción.
de
100 mil millones de dólares anuales.
Existe una creciente oposición al control químico de las
plagas de nematodos debido a los efectos secundarios no
deseados en el medio ambiente. Se están desarrollando
alternativas para estas medidas de control, incluyendo el
control biológico por parte de bacterias no patógenas de la
rizosfera. Estudios anteriores han demostrado que
determinadas bacterias de la rizosfera tienen una actividad
antagonista contra varias especies de nematodos parasitarios
de plantas. En un programa de cribado, 16 cepas bacterianas
de 179 cepas aisladas de raíces y quistes causaron una
reducción significativa (>25%) de la penetración de
Globodera pallida en las raíces de la patata (Racke y Sikora
1992). Se obtuvo una reducción del 68% de la invasión de
nematodos del quiste de la remolacha azucarera mediante la
aplicación del rizobacterium, Pseudomonas fluorescens P523
a las semillas de remolacha (Oostendorp y Sikora 1990).
Estudios posteriores indicaron que las rizobacterias también
pueden inducir resistencia sistémica en las raíces de la papa
para reducir la infección por el nematodo del quiste de la
papa G. pallida (Reitz et al. 2000). Las capacidades de
biocontrol de la mayoría de las bacterias de la rizosfera
resultan en gran medida de su capacidad para producir una
batería de metabolitos nematicidas. Se ha descubierto que la
producción del metabolito secundario 2,4-diacetil-
floroglucinol (DAPG) por parte de muchas especies de
Pseudomonas spp. fluorescentes desempeña un papel
importante en el biocontrol de los nematodos parasitarios de
las plantas, incluidos los nematodos del quiste de la patata
(Cronin et al. 1997) y los nematodos del nódulo radicular
Meloidogyne spp. En un estudio reciente, se encontró que la
producción de DAPG por Ps. fluorescens redujo
indirectamente la infección por nematodos al inducir
resistencia sistémica en el tomate (Sidd-iqui y Shaukat
2003a).
Es una observación común que después de la introducción
en el suelo, para el control de un patógeno vegetal
específico, los antagonistas bacterianos tienden a mostrar un
espectro relativamente estrecho de actividad en
comparación con los plaguicidas sintéticos (Mazzola et al.
1995). El desempeño inconsistente de estas bacterias, de año
en año y de sitio en sitio, es otro obstáculo que limita su uso
comercial en la agricultura práctica. Los factores
ambientales influyen en la producción de metabolitos
secundarios, incluyendo DAPG, en los anuncios
fluorescentes de pseudomonas, lo que resulta en una
variación en el rendimiento del biocontrol de estas bacterias.
Por ejemplo, la producción de DAPG por muchas
Pseudomonas spp. fluorescentes es estimulada por la
con glicerol mejoró la eficacia del biocontrol de las
pseudomonadas fluorescentes contra el nematodo del nudo
de la raíz, promovió el crecimiento de la planta del tomate
y mejoró la rizosfera bacteriana y la colonización
endofísica. Duffy y De´fago (1997) han identificado el ácido
fusárico, producido por el fitopatógeno Fusarium
oxysporum, como un efector que representa la producción
de DAPG en una cepa de biocontrol de Ps. fluorescens. Esta
toxina fúngica conduce a la represión de la producción
bacteriana de DAPG en las raíces del tomate, aboliendo así
el biocontrol de la pudrición de la corona y la raíz de
Fusarium (Duffy y De´fago en 1997). Asimismo, el medio de
crecimiento bacteriano modificado con filtrado de cultivo
(CF) de F. solani no patógeno reprimió la actividad
nematicida de Ps. fluorescens cepa CHA0 in vitro, mientras
que la suspensión conidial de F. solani cepa Fs5 redujo el
potencial de biocontrol de los inoculantes bacterianos
contra
M. javanica en tomate (Siddiqui y Shaukat 2003c).
El objetivo del presente estudio fue determinar el impacto
de algunas especies de Aspergillus en la producción de
agente(s) nematicida(s) por Ps. fluorescens cepa CHA0 y
su derivado sobreproductor DAPG CHA0/pME3424 in
vitro y el rendimiento de biocontrol de estos inoculantes
bacterianos contra M. javanica en el tomate bajo
condiciones de invernadero. Las especies de Aspergillus
fueron elegidas aquí porque: i) además de determinados
hongos que infectan las raíces, los aspergilos y los penicilos
son los géneros comunes en la mayoría de los campos
agrícolas de Pakistán,
2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-765X.2004.01540.x
(ii) Se sabe que las especies de Aspergillus producen una
variedad de metabolitos secundarios que actúan como
marcadores en el taxón de aspergilli y, (iii) mientras que el
efecto de los hongos transmitidos por el suelo, incluyendo
F. oxysporum f.sp. radisic lycopersici (Duffy y De´fago
1997), no patógenos F. solani (Siddiqui y Shaukat 2003c)
y saprofito Trichodrema harzianum (Siddiqui y Shaukat
2004) sobre la efectividad del biocontrol de la cepa CHA0
de Ps. fluorescens, hasta donde sabemos, no existe ningún
informe previo sobre la influencia de aspergilli en la
producción de agentes nematicidas y la efectividad del
biocontrol de la cepa CHA0.
MATERIALES Y MÉTODOS
Microorganismos, medios y condiciones de
crecimiento
Seis especies de Aspergillus fueron aisladas de la rizosfera
de varios cultivos (Tabla 1) de los campos agrícolas del
Distrito de Thatta y sus suburbios (85 km, al sureste de
Karachi, Pakistán) durante mayo de 2001 a marzo de 2002.
Las especies de hongos se mantuvieron en el agar dox de
Czapek (Oxoid Chemicals Ltd, Basingstoke, Hampshire,
Reino Unido) en la oscuridad a 30°C. Las colonias fueron
subcultivadas en aislados puros e identificadas por su
morfología microscópica utilizando literatura micológica
estándar (Thom y Rapper 1945).
Pseudomonas fluorescens cepa CHA0 y su DAPG
mutante sobreproductor CHA0/pME3424 (Siddiqui and
76 I.A. SIDDIQUI ET AL.

Tabla 1 Especies de Aspergillus aisladas de varios cultivos que todas las manchas, es decir, el color y los valores de Rf. Las
crecen en diferentes localidades del sur de Sindh, Pakistán placas fueron rociadas con 0Æ5% (v/v)
Aspergillus spp. huésped rizosferaLocalidad

Aspergillus flavus TomateGharo

A. nidulans TomateMirpur Sakro
A. niger OkraGharo
A. Cuadrilíneas TomateThatta
A. tamarii BrinjalThatta
A. terreus MungbeanMirpur Sakro

Shaukat 2003b). Las cepas bacterianas se cultivaban

rutinariamente en caldo de levadura de nutrientes (caldo de
nutrientes Difco 25 g, extracto de levadura Difco 5 g, y agua
destilada 1 l; Difco Laboratories, Detroit, MI, USA). Para
los ensayos in vitro de nematicidas y supresión de
enfermedades, las bacterias se cultivaron en frascos
Erlenmeyer de 250 ml que contenían 100 ml de King's B
Liquid Medium (KBLM; King et al. 1954) a 24°C durante
24 h con agitación (150 rev min)1). El cultivo bacteriano se
centrifugó a 2.800 g durante 20 minutos, el superna- tante se
recogió en un vaso de precipitados mientras que el
precipitado se resuspendió en el MgSO4 (0Æ1 M).

Producción de metabolitos extracelulares por

Aspergillus
especie
Los hongos se cultivaron durante una semana en la
oscuridad a 30°C en frascos Erlenmeyer de 250 ml de
capacidad que contenían 100 ml de extracto de levadura de
sacarosa (YES) en medio líquido sin agitar. SÍ Medio
compuesto de los siguientes ingredientes (g)1): extracto
de levadura, 20Æ0; sacarosa, 15; agua destilada (1 l). El caldo
se filtró a través de dos capas de papel de filtro Whatman
No. 1 para obtener la CF. El análisis cualitativo del
metabolito secundario en el sobrenadante de cultivo se
realizó con TLC utilizando gel de sílice fluorescente de
Merck (60F254, 5 - 12 cm, Merck K GaA, Darmstadt,
Alemania) tras la extracción de acetato de etilo. La
extracción de acetato de etilo se realizó de la siguiente
manera: el sobrenadante del cultivo se mezcló
completamente con acetato de etilo (1 : 2, v/v) en una placa
de 2 l de capacidad y se colocó en un embudo separador. La
fase orgánica que contiene compuestos activos se recogió en
un matraz Erlenmeyer de 500 ml de capacidad y se
concentró en un evaporador rotativo al vacío (Eyela,
Rikakikai Scientific, Tokio, Japón) a presión reducida a
37°C. Se disolvió 1 mg del extracto (masa gomosa) en 5 ml
de acetato de etilo y se observó 1 ll en la base de cada placa
varias veces; se dejó secar cada mancha antes de aplicar la
siguiente. Se utilizó una placa TLC separada para cada
especie de hongo. Las placas TLC fueron desarrolladas en
tolueno, acetato de etilo 90%, ácido fórmico (5 : 4 : 1, v/v)
usando almohadillas de saturación. Las placas TLC fueron
secadas a temperatura ambiente y examinadas bajo luz
ultravioleta (365 nm). Se registraron las características de
p-a nisaldehído en metanol-ácido acético-ácido sulfúrico
concentrado (17 : 2 : 1, v/v), calentado durante 8 min a
105°C y luego examinado como antes. Los puntos se
identificaron comparando los valores y colores de Rf 100
con los de Paterson y Bridge (1994).
Influencia de Aspergillus CF en la actividad
nematicida por Ps. fluorescens in vitro
El KBLM autoclavado y semirrefrigerado (20 ml en un
matraz Erlenmeyer de 100 ml) se modificó con 5 ml de
CF de una especie de Aspergillus. Posteriormente, se
inoculó al medio un asa de la bacteria. Los tratamientos se
organizaron como un factor 6 - 3 en un diseño de parcela
dividida con una parcela principal de la FQ de seis
especies de Aspergillus y una subparcela de los
inoculantes bacterianos (ninguna, CHA0,
CHA0/pME3424). Se guardaron dos frascos replicados
para cada tratamiento y después de 24 horas, el cultivo
bacteriano se dividió en dos mitades iguales. Una de las
porciones se usó para determinar la actividad de la b-
galactosa y la otra mitad para la evaluación de la actividad
nematicida. Para evitar los efectos del crecimiento
bacteriano causado por la adición de diferentes
Aspergillus species CFs, se reportan actividades de b-
galactosidasa y nematicidas para una cierta densidad
celular (O.D. 600 de 1Æ0) en lugar de tiempo de
incubación; O. D. 600 de 1Æ0 corresponde
4Æ5 - 108 CFU ml)1. b-Galactosidasa fueron
realizados de acuerdo con el método de Miller (1992).
2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-
765X.2004.01540.x
Brevemente, se centrifugó una alícuota de 1 ml, se descartó
el sobrenadante y las células resuspendidas en 1 ml de
NaCl (0Æ9% p/v). A la suspensión bacteriana se le
añadieron 50 microlitros de tolueno, mezclados por vortex e
incubados a 37°C durante 20 min. Las células bacterianas se
mantuvieron en hielo durante 24 h. Se mezclaron 100 ll de
células permeabilizadas con 900 ll de tampón Z recién
preparado (en mM: Na2HPO4, 60; NaH2PO4, 40; KCl, 10;
MgSO4, 1; b-merceptofenol, 50). La solución tampón Z sin
las células bacterianas sirvió como control. La reacción
enzimática se inició mezclando 200 ll de solución ONPG
(ortnitrofenil-b-D-galactosido, 4 mg ml)1 H2O) a 37°C.
Cuando apareció un color amarillo claro, la reacción fue
detenida mezclando bien con 500 ll Na2CO3 (1 mM). Las
muestras se dejaron a temperatura ambiente durante 30
minutos antes de que se midiera el diámetro exterior a 420
y nm. Las actividades se expresaron en unidades por cada 108
UFC. Los valores unitarios se calcularon por el método de
Miller (1992), siguiendo la fórmula 1000 - {O.D.
420/[tiempo (minutos) - volumen de muestra (mililitros)]}
unidades de b-galactosidasa.
Para la preparación de la FQ, la mitad restante del cultivo
bacteriano se centrifugó dos veces a 2.800 g durante 20
minutos. El perdigón fue desechado y el sobrenadante
recogido en un vaso de precipitados. El sobrenadante fue
pasado a través de dos capas de papel de filtro Whatman No.
1 y el filtrado recogido. La actividad nematicida del FQ se
a determinó según lo descrito por Siddiqui y Shaukat (2003a)
de la siguiente manera: 1 ml
¼
 EFECTO DE AS PE RG I LLI EN PS E UDO MO NA S 77

de la FQ se transfirió en portaobjetos con cavidad de vidrio en macetas de plástico de 8 cm de diámetro (400 g por
a los que se añadió 1 ml de suspensión juvenil recién maceta).
eclosionada que contenía 46 ± 4 juveniles esterilizados en la El diseño experimental fue un factorial de 3 - 3 con
superficie. Los juveniles mantenidos en 1 ml de KBLM sin cuatro repeticiones. Los factores fueron las aplicaciones de
la bacteria sirvieron como control. Los portaobjetos de la Aspergillus
cavidad de vidrio se mantuvieron a temperatura ambiente
(28 ± 2°C). Después de 48 horas de incubación, se contó el
número de juveniles muertos y se calculó el porcentaje de
mortalidad. Los nematodos se consideraban muertos si no se
movían al sondaje con una aguja fina. El experimento se
repitió.

Solubilidad de los agentes fúngicos, que influyen

en la producción de agentes nematicidas
mediante
Ps. fluorescentes in vitro
Como en el experimento anterior, A. quadrilineatus reprimió
notablemente la actividad nematicida, mientras que A. niger
aumentó esta actividad de las cepas de Ps. fluorescens, por
lo tanto, estas especies de hongos se utilizaron para pruebas
posteriores. Para determinar la solubilidad de los
compuestos activos, la FQ de los hongos se extrajo con
metanol, acetato de etilo o hexano (1 : 2, v/v) y la fracción se
concentró en un evaporador rotativo al vacío (Eyela,
Rikakikai Scientific, Tokio, Japón) bajo presión reducida a
37°C. Se preparó un 1 mg ml1 de cada extracto en el
disolvente correspondiente y se modificó con caldo KB (100
ml en un matraz Erlenmeyer de 250 ml). El medio líquido
KB modificado con metanol, acetato de etilo o hexano sirvió
como control. Después de las enmiendas, el medio de cultivo
se mezcló con un bucle lleno de la bacteria. Los tratamientos
se organizaron como un factor 3 - 3 - 3 con una parcela
principal de inoculación bacteriana (ninguna, CHA0 o
CHA0/pME3424), una subparcela de hongos (ninguna, A.
quadrilineatus, A. niger), y una subparcela de disolventes
(metanol, acetato de etilo o hexano). Los procedimientos
para la preparación de la FQ y la evaluación de su actividad
nematicida fueron los mismos que los descritos
anteriormente. Se incubaron cuatro portaobjetos de vidrio
para cada tratamiento y control a 28°C. El experimento se
repitió.

Efectos de la suspensión conidial de Aspergillus

sp. sobre el biocontrol de nematodos por Ps.
fluorescens
en tomate
Las especies de Aspergillus se cultivaron en YES medio
durante 1 semana a 28°C. Los conidios del hongo se
separaron de los micelios mediante filtración a través de lana
de vidrio estéril y se cuantificaron mediante un
hemocitómetro. El suelo (arena 70%, limo 19%, arcilla 11%,
pH 8Æ1 con una capacidad máxima de retención de agua de
37%) para el experimento se obtuvo de un campo de
experimentación situado cerca del Departamento de
Botánica de la Universidad de Karachi. El suelo se colocó
(ninguna, A. quadrilineatus y A. niger) y tres cepas
bacterianas (ninguna, CHA0 y CHA0/pME3424). Se
eliminó la superficie superior del suelo de 2 cm y se
vertieron 20 ml de suspensión celular acuosa de CHA0
(3Æ4 - 108 CFU ml)1) o CHA0/ pME3424 (3Æ1 - 108
CFU ml)1) preparados en agua destilada estéril por toda
la superficie de cada maceta. Asimismo, tras la aplicación
bacteriana, el suelo se vertió con 20 ml (105 conidia ml)1 )
suspensión conidial de
A. o A. niger. El suelo aplicado con 40 ml de agua destilada
estéril sirvió como control. Después del tratamiento, las
plántulas de tomate de 3 semanas de edad cv. 'SUN 6002
(PVP)' cultivadas en suelo esterilizado se plantaron a tres
plántulas por maceta. Se permitió que las plántulas se
establecieran durante una semana antes de que el suelo de
cada maceta estuviera infestado con 2000 juveniles recién
nacidos de M. javanica, haciendo tres agujeros (de 5 mm de
diámetro) en el suelo alrededor de las plántulas. Cuatro
réplicas usadas para cada tratamiento fueron asignadas al
azar en un banco de invernadero. La temperatura del
invernadero a lo largo de los experimentos osciló entre 24
y 30°C.
El experimento fue terminado 6 semanas después de la
infestación por M. javanica, y los parámetros de
crecimiento de la planta, incluyendo la altura de la planta y
el peso fresco del brote y la raíz, fueron desalojados. El
sistema radicular que crece en una maceta después de un
lavado a fondo con agua corriente del grifo se cortó en
pequeños segmentos y se dividió en dos porciones iguales.
Una de las porciones se utilizó para el aislamiento de
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poblaciones de rizosfera de especies de Ps. fluorescens y
Aspergillus según lo descrito por Siddiqui y Shaukat
(2003a), mientras que la otra se utilizó para determinar las
poblaciones de nematodos del nudo de la raíz que habían
penetrado en las raíces de la siguiente manera: la muestra de
la raíz se cortó en pequeños segmentos (3 mm), se volvió a
pesar en un paño de muselina y se sumergió en agua hirviente
durante 3-5 minutos 0Æ25% ácido fucsina con ácido láctico
. Se lavaron las raíces en agua corriente para eliminar el
exceso de manchas y se maceraron en una trituradora
eléctrica durante 45 s. El homogeneizado se suspendió en
100 ml de agua y las hembras y los juveniles de M. javanica
en cinco muestras de 5 ml se contaron con la ayuda de un
estereomicroscopio de baja potencia (-6).
Análisis estadístico
Dependiendo del diseño experimental, se realizó un análisis
unidireccional de varianza (ANOVA) o un análisis factorial de
varianza (FANOVA) utilizando STATISTICA ver. 5.0 (Statsoft Inc.
Tulsa, OK, USA). Como seguimiento de FANOVA, los
valores medios del tratamiento se separaron utilizando la
diferencia menos significativa (LSD) de Fisher y las pruebas
de rango múltiple de Duncan. Los datos de los ensayos
repetidos se agruparon después de confirmar la
homogeneidad de las varianzas y/o determinar que la
interacción tratamiento - ensayo no era significativa. Los
datos de colonización de la rizosfera bacteriana se
normalizaron con una transformación log10 más 1 antes del
análisis. El coeficiente de correlación (r) fue
78 I.A. SIDDIQUI ET AL.

calculado entre la mortalidad de nematodos y la actividad
de la b-galactosidasa.
RESULTADOS
Producción de metabolitos extracelulares por
Aspergillus
especie
El análisis cualitativo de las seis especies seleccionadas de
Aspergillus, aisladas de la rizosfera de varios cultivos
cultivados en Sindh del Sur (Distrito Thatta), reveló la
presencia de una variedad de metabolitos secundarios
extracelulares (Tabla 2). El mayor número de metabolitos
(cinco) se detectó a partir de la FQ de A. niger, mientras que
A. flavus produjo el menor número (dos). Los metabolitos
más comunes fueron la brevianamida A y la brevianamida B
que se encontraron en tres y dos especies respectivamente.
Influencia de la FQ de las especies de
Aspergillus en
Expresión del gen reportador Phl'-'lacZ y
actividad nematicida por Ps. fluorescens in vitro
La expresión génica del reportero, determinada en términos
de unidades de actividad de la b-galactosidasa, reveló que
la FQ de diferentes especies de Aspergillus ejerció una
influencia diferencial en la expresión del gen reportador
Phl'-'lacZ por la cepa CHA0 de Ps. fluorescens y su derivado
sobreproductor de DAPG.
CHA0/pME3424 in vitro (Tabla 3). Adición de CF de
A. nidulans o A. niger en medio de crecimiento bacteriano
mejorado (P < 0Æ05) Phl'-'lacZ reporter gene expression
by both Ps. fluorescens strain while, A. quadrlineatus
repressed this activity. Independientemente de la FQ de la
especie Aspergillus, el grado de expresión génica fue
generalmente mayor para la cepa CHA0/pME3424 en
comparación con su homólogo de tipo silvestre CHA0.
Con la excepción de A. terreus y A. tamarii, otras especies
de Aspergillus causaron una mortalidad significativa (P a lo
sumo 0Æ05) de M. javanica juveniles en comparación con
los controles (Tabla 4). A. niger y A. nidulans produjeron
altos efectos nematicidas. Independientemente del
Aspergillus CF, la cepa CHA0/pME3424 causó mayor (P <
0Æ05) mortalidad de M. javanica juveniles en
comparación con la cepa CHA0. En general, la actividad
nematicida se incrementó (P < 0Æ05) cuando el
crecimiento medio de los inoculantes bacterianos fue
modificado con la FQ de las especies Asperg- illus. Entre las
especies de Aspergillus probadas, A. niger mejoró mucho (P
< 0Æ05) eficacia bacteriana para causar la muerte de
nematodos mientras que A. quadrilineatus reprimió (P <
¼
0Æ05) la eficacia bacteriana . Se obtuvo una fuerte
correlación positiva (r 0Æ678; P < 0Æ01) entre la
mortalidad de
M. javanica juveniles y actividad de la b-galactosidasa
por la FQ de las cepas bacterianas (la correlación para el
CHA0 ¼ solo fue r 0Æ833; P < 0Æ05 y para ¼
CHA0/pME3424 r 0Æ787; P < 0Æ05).

Tabla 2 Metabolitos extracelulares de algunas especies de Aspergillus en placas TLC

Antes de la Después de la
pulverización pulverización*
Especie Rf - 100 Visible UV 365 Visible UV 365 Metabolitos

A. flavus 14Æ3 – Verde – Verde Brevianamida A

35Æ2 – Verde – Verde Desconocido
A. nidulans 14Æ0 – – Marrón Verde Brevianamida B
25Æ5 – – – Verde Ácido Gladiólico
oscuro
32Æ0 – – – Verde Desconocido
A. niger 14Æ0 – Verde – Verde Brevianamida A
26Æ5 Marrón Verde Marrón Verde Itaconitina
oscuro
33Æ5 – – – Verdoso Desconocido
38Æ1 Marrón – – Negro Ácido canadiense
45Æ8 – Violeta – Verde Ácido micofenólico
A. Cuadrilíneas 38Æ4 Amarillo – – – Flavosquirina
48Æ2 – – amarillo – Deshidrocanadensolida
53Æ0 – Verde – Azul a-Ácido colatólico
A. tamarii 14Æ5 – – Marrón Verde Brevianamida B
27Æ0 Marrón Marrón – – Ácido tenuazónico
36Æ2 – Marrón – Marrón Desconocido
A. terreus 14Æ0 Marrón Verde – Verde Brevianamida A
27Æ3 Marrón Verde Marrón Verde Itaconitina
oscuro
35Æ4 – Marrón – Marrón Desconocido-1
 49Æ0 – Marrón Marrón Desconocido-2
oscuro
*Analdehído utilizado como reactivo de pulverización.

2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-
765X.2004.01540.x
 EFECTO DE AS PE RG I LLI EN PS E UDO MO NA S 79

Tabla 3 Influencia de la adición de filtrados de Aspergillus spp. crecimiento de la bacteria

cultivados en extracto de levadura medio de sacarosa sobre la
expresión de phlA'-'lacZ en un cultivo creciente de P. fluorescens
CHA0 y CHA0/pME3424

Actividad de la b-
galactosidasa 1000
unidades 10)8 UFC

Aspergillus spp. CHA0 CHA0/pME3424

Ninguno 1Æ686a 1Æ924a

A. flavus 1Æ836a 2Æ104a
A. nidulans 2Æ124b 2Æ328b
A. niger 2Æ262b 2Æ466b
A. Cuadrilíneas 1Æ332c 1Æ564c
A. tamarii 1Æ746a 2Æ050a
A. terreus 1Æ944a 2Æ142a
LSD0Æ05
Aspergillus 0Æ335
Pseudomonas 0Æ282
Aspergillus - Pseudomonas 0Æ443

Los valores medios seguidos de la misma letra en cada columna no

difieren significativamente (P < 0Æ05) de acuerdo con la prueba de
alcance múltiple de Duncan.

Tabla 4 Influencia del filtrado de cultivo de Aspergillus spp. en la

mortalidad de juveniles de Meloidogyne javanica por Pseudomonas
fluorescens cepa CHA0 y su cepa sobreproductora DAPG
CHA0/pME3424 in vitro

Mortalidad juvenil (%)

Cepa de Pseudomonas

Aspergillus spp. Ningu CHA0 CHA0/pME3424

no
Ninguno 12d 38c 47cd
A. flavus 22c 41bc 43d
A. nidulans 38b 49b 50c
A. niger 56a 82a 94a
A. Cuadrilíneas 25c 29d 38e
A. tamarii 17d 36c 55c
A. terreus 14d 47b 66b
LSD0Æ05
Aspergillus 7
Pseudomonas 5
Aspergillus - Pseudomonas 10

Los valores medios seguidos de la misma letra en cada columna no

son significativamente diferentes (P < 0Æ05) de acuerdo con la prueba
de alcance múltiple de Duncan.

Influencia de varios extractos de CF de

especies de Aspergillus en la actividad
nematicida por Ps. fluorescens in vitro
Independientemente de los disolventes, la FQ de los
inoculantes bacterianos, sin especie de Aspergillus, causó
una mortalidad significativa (P < 0Æ05) de M. javanica
juveniles in vitro y que l a s cepas bacterianas no mostraron
un efecto diferencial (Tabla 5). Cuando el medio de
se modificaron los inoculantes con extractos de metanol o
acetato de etilo de A. quadrilineatus, se reprimió la
actividad nematicida de las cepas bacterianas (P < 0Æ05),
mientras que A. niger aumentó su eficacia (P < 0Æ01)
bacteriana para inducir la muerte de nematodos. El extracto de
hexano de ambas especies de Aspergillus no alteró
significativamente la eficacia bacteriana para producir
mortalidad de nematodos.
Efectos de la suspensión conidial de Aspergillus
especies en el biocontrol de nematodos por
Ps. fluorescentes en tomate
La aplicación en el suelo con la cepa CHA0 o CHA0/
pME3424 de Ps. fluorescens causó una supresión
significativa (P < 0Æ05) del desgaste de los nematodos
del nudo radicular en el tomate en comparación con los
controles (Cuadro 6). La cepa CHA0/pME3424 inhibió la
infección del nudo radicular en mayor medida que la
cepa silvestre CHA0.
A. niger aplicado solo o en combinación con cepas de Ps.
fluorescens resultó en una reducción significativa (P <
0Æ05) de las tasas de irritación. Mientras que A.
quadrilineatus no suprimió el frotamiento de nematodos
cuando se utilizó solo o en combinación con CHA0, sí
redujo (P < 0Æ05) la intensidad del frotamiento en
comparación con los controles cuando se aplicó en
combinación con CHA0/ pME3424. La mayor reducción
(51% en comparación con el control) en la intensidad de la
irritación se produjo cuando se utilizó CHA0/ pME3424
junto con A. niger. Los agentes microbianos ejercieron una
2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-765X.2004.01540.x
influencia similar en la penetración de los nematodos
(densidad radicular) a la que ejercieron en el frotamiento de
los nematodos (datos no presentados). La cepa silvestre
CHA0 o las dos especies de Aspergillus cuando se usan solas,
mejoró (P < 0Æ05) la altura de la planta sobre los controles;
el peso del brote aumentó significativamente (P < 0Æ05)
después del tratamiento con A. niger solo. Los inoculantes
bacterianos aplicados en combinación con A. niger
resultaron en un aumento de la altura de las plantas, pero el
crecimiento de los brotes sólo aumentó en CHA0/pME3424
junto con A. niger. El crecimiento de la raíz se incrementó
significativamente (P < 0Æ05) ya sea por
A. quadrilineatus solo o A. niger aplicado junto con
CHA0/pME3424. Se observó una variación no significativa
en la formación de nematodos y en el crecimiento de las
plantas entre los ensayos, presumiblemente debido a la
temperatura variable del invernadero. Ambos agentes
bacterianos colonizaron con éxito la rizosfera del tomate y
que las especies de hongos no afectaron notablemente el
potencial de colonización bacteriana. La cepa de tipo
silvestre mostró un potencial de colonización ligeramente
mayor que el de su mutante sobreproductor de antibióticos.
DISCUSIÓN
Los resultados indican que las especies de Aspergillus
influyen en la producción de agente(s) nematicida(s) por la
cepa CHA0 de Ps. fluorescens y su derivado sobreproductor
DAPG CHA0/ pME3424 in vitro y en el rendimiento de
biocontrol de los inoculantes bacterianos contra M. javanica,
el nódulo radicular.
80 I.A. SIDDIQUI ET AL.

Tabla 5 Influencia de los extractos de metanol, acetato de etilo y hexano del filtrado de cultivo de Aspergillus quadrilineatus o A. niger en la
mortalidad de
Meloidogyne javanica juveniles de la cepa CHA0 de Pseudomonas fluorescens y su cepa sobreproductora DAPG CHA0/pME3424 in vitro

Mortalidad juvenil (%)

Extracto de metanol Extracto de acetato de etilo Extracto de hexano

Cepas de Pseudomonas Ningun A. Cuadrilíneas A. Ninguno A. Cuadrilíneas A. Ningun A. Cuadrilineato A . níger

o niger niger o
Ninguno 3a 24a 44a 3a21a 51a 5a 11a16a
CHA0 44b 30a 91b 48b34a 72b 37b 26b33b
CHA0/pME3424 53b 39b 98b 46b31a 88c 40b 29b35b
LSD0Æ05
Aspergillus 13
Pseudomonas 15
Extracto 31

Los valores medios seguidos de la misma letra en cada columna no son significativamente diferentes (P < 0Æ05) de acuerdo con la prueba de
alcance múltiple de Duncan.

Cuadro 6 Efectos de la suspensión conidial de Aspergillus quadrilineatus o A. niger sobre la eficacia de las cepas CHA0 y CHA0/ pME3424 de
Pseudomonas fluorescens en el desarrollo del gripado debido a Meloidogyne javanica, el crecimiento de plantas de tomate y la colonización
bacteriana de la rizosfera

Población de
Sistema Altura de la Peso del Peso de la rizosfera bacteriana
Tratamientos Galls/root planta (cm) sarmiento raíz (g) [(log CFU g)1 fr. peso
(g) de la raíz) + 1]].
Control 107 ± 9 15Æ3 ± 1Æ4 2Æ7 ± 0Æ3 1Æ4 ± 0Æ1 0
CHA0 78 ± 6 16Æ9 ± 2Æ3 2Æ6 ± 0Æ5 1Æ5 ± 0Æ2 5Æ12 ± 0Æ5
CHA0/pME3424 68 ± 8 13Æ6 ± 1Æ8 2Æ1 ± 0Æ1 1Æ1 ± 0Æ1 5Æ04 ± 0Æ6
A. Cuadrilíneas 115 ± 13 17Æ3 ± 1Æ7 2Æ9 ± 0Æ2 1Æ9 ± 0Æ3 –
A. niger 72 ± 11 16Æ8 ± 1Æ5 3Æ3 ± 0Æ4 1Æ3 ± 0Æ1 –
CHA0 + A. quadrilineatus 89 ± 6 16Æ1 ± 2Æ0 2Æ6 ± 0Æ3 1Æ6 ± 0Æ3 5Æ28 ± 0Æ4
CHA0/pME3424 + A. cuadrilínea 61 ± 8 15Æ5 ± 1Æ7 2Æ9 ± 0Æ4 1Æ6 ± 0Æ2 5Æ11 ± 0Æ4
CHA0 + A. niger 71 ± 6 17Æ8 ± 1Æ2 2Æ4 ± 0Æ2 1Æ5 ± 0Æ2 5Æ02 ± 0Æ6
CHA0/pME3424 + A. niger 52 ± 7 17Æ6 ± 2Æ2 3Æ2 ± 0Æ3 1Æ8 ± 0Æ3 4Æ89 ± 0Æ4
LSD0Æ05 27 1Æ2 0Æ5 0Æ4 0Æ21

Los valores medios seguidos de la misma letra en cada columna no son significativamente diferentes (P < 0Æ05) de acuerdo con la prueba de alcance
múltiple de Duncan;
± ¼ una desviación estándar.

nematodo en el tomate. De las especies de Aspergillus diseñada para determinar la solubilidad de los principios
probadas, activos en varios solventes; extractos de metanol o acetato de
A. niger aumentó la actividad antagonista bacteriana hacia etilo de la FQ de A. niger mejoraron la eficacia bacteriana para
los nematodos, mientras que A. quadrilineatus abolió el inducir la muerte de nematodos en comparación con el extracto
potencial de biocontrol de las dos cepas bacterianas. Las de hexano. Piel-
especies de Aspergillus se encuentran comúnmente en
suelos de climas más cálidos, en compost, material vegetal
en descomposición, granos almacenados, etc. y se sabe que
muchas de ellas producen una variedad de metabolitos
secundarios (Domsch et al. 1980). Algunas especies de
Aspergillus también han sido reportadas por su potencial de
biocontrol contra nematodos del nudo de la raíz (Siddiqui et
al. 2001). En el presente estudio, seis especies de
Aspergillus aisladas de la rizosfera de ciertas plantas de
cultivo produjeron una serie de metabolitos secundarios, que
son solubles en acetato de etilo y, por tanto, de naturaleza
polar. Este hallazgo fue confirmado a partir de una prueba
ther, mientras que el extracto de hexano no influyó en la
actividad nematicida de los antagonistas bacterianos, el
metanol y los extractos de acetato de etilo de los CFs de
A. quadrilineatus reprimieron invariablemente la eficacia
bacteriana para causar mortalidad de nematodos. Es
necesario seguir trabajando para confirmar la
identificación de los compuestos aislados. La actividad
nematicida de los compuestos sintéticos comercialmente
disponibles, similares a los detectados en el TLC por A.
niger o A. quadrilineatus, puede producir resultados
interesantes y puede probar nuestra hipótesis de que los
2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-
765X.2004.01540.x
metabolitos secundarios biosintetizados por especies de
Aspergillus influyen en la eficacia de las cepas de control
biológico de las pseudo- mónadas contra los nematodos
parasitarios de las plantas.
En el presente estudio, las especies de Aspergillus fueron
aisladas en las placas de agar dox de Czapek utilizando el
método de placa de dilución e identificadas sobre la base de
sus estructuras vegetativas y reproductivas. Los métodos
convencionales para la identificación de hongos en el
laboratorio se basan a menudo en pruebas morfológicas y
bioquímicas. Estos métodos, aunque la piedra angular
 EFECTO DE AS PE RG I LLI EN PS E UDO MO NA S 81

de los diagnósticos fúngicos puede dar lugar a problemas de proteína de flujo (phlE) y flanqueado por el gen phlF
identificación, lo que da lugar a una interpretación transcrito divergentemente, que codifica una proteína
incorrecta, un diagnóstico (en caso de patología vegetal y represora de la síntesis de DAPG (Bangera
médica) y un tratamiento final. Los métodos se basan en
personal de laboratorio experimentado y capacitado, la
capacidad del organismo para ser cultivado consume mucho
tiempo, no es cuantitativo, es propenso a la contaminación y
al error y a menudo retrasa el tratamiento. Cada vez hay más
tendencia a realizar diagnósticos moleculares de hongos en
todos los campos. Se han aplicado varias técnicas
moleculares, incluyendo métodos inmunológicos,
tecnología de sonda de ADN/ARN y PCR para estudiar
hongos y cepas fitopatógenas clínicamente importantes
(revisado por Atkins y Clark 2004). Sin embargo, estos
métodos generalmente no son adecuados para estudios de
suelo, ya que los primers desarrollados no son específicos
para hongos y algunos de los sistemas están diseñados para
tipificar cepas o cultivares, y por lo tanto, producen
resoluciones taxonómicas que son demasiado altas. Además,
la resolución taxonómica podría no ser siempre suficiente
para identificar especies y cepas de hongos.
Los genes Reporter proporcionan un enfoque llamativo
para monitorizar la expresión génica de las bacterias, con
una alta sensibilidad y relativamente pocas restricciones
técnicas. El gen lacZ de Escherichia coli se utiliza
frecuentemente como gen reportador para detectar la
expresión de estudios de genes de fusión recombinantes y
para monitorizar la eficacia con transfusiones transitorias o
estables de células de mamíferos, levaduras y bacterias
(Miller 1992). Una fusión translacional dentro del marco del
gen de interés y el gen LacZ pone la expresión de lacZ bajo
control del promotor de interés. La actividad del promotor
puede entonces ser ensayada midiendo la actividad de la b-
galactosidasa. Debido a que la b-galactosidasa tiene una
alta tasa de rotación, sirve como una herramienta de reporte
útil y sensible para la expresión génica. En el presente
estudio, se obtuvo una fuerte correlación positiva entre la
mortalidad de los juveniles de M. javanica y la expresión de
los genes notificadores de la phlA, determinados en términos
de actividad de la b-galactosidasa, por la FQ de las cepas
bacterianas. A. niger mejoró notablemente las actividades de
b-galactosidasa y nematicidas de Ps. fluorescens in vitro,
mientras que A. quadrilineatus reprimió dichas actividades.
Schnider-Keel et al. (2000) desarrollaron un gen reportador
de DAPG para monitorizar cuantitativamente la biosíntesis
mediante Ps. fluorescens CHA0 en cultivo. Estos
trabajadores demostraron que la biosíntesis de DAPG
depende en gran medida de la densidad celular y está
autorregulada por DAPG in vitro. El ácido fusárico (AF) que
produce la cepa 798 de Fusarium oxysporum reprimió la
expresión de phlA en CHA0 de forma significativa, mientras
que la cepa 242, que no produce AF, no lo hizo (Notz et al.
2002).
En Ps. fluorescens CHA0, los cuatro genes biosintéticos
de DAPG, phlACBD, están organizados como un operón y
son indispensables para la producción de DAPG. Este
operón es seguido por un gen que codifica una supuesta
y Thomashow 1999; Schnider-Keel et al. 2000). Es
concebible que los compuestos de A. quadrilineatus puedan
interactuar con el represor, llevando a un aumento de las
características de unión del complejo promotor de PhlF. En
el presente estudio, el efecto reprimidor de A.
quadrilineatus contrastó con un efecto potenciador de A.
niger sobre la expresión del gen phlA en CHA0. Notz y
otros (2001) han demostrado que Pythium ultimum puede
estimular la expresión del gen phlA en CHA0 tanto en
pepinos como en maíz. Es plausible que
A. niger produce inductores que se unen al PhlF y por lo
tanto previenen la interacción de la proteína represora con
el promotor del phl. Esta hipótesis está respaldada por el
estudio de Notz et al. (2002), quienes observaron que la
cepa 242 de F. oxysporum que no produce F. no alteró la
expresión de phlA en el mutante CHA638 de phlF.
En el estudio actual, la cepa CHA0 de Ps. fluorescens o
su derivado DAPG CHA0/pME3424, utilizado junto con A.
niger o A. quadrilineatus, mostró un rendimiento
contrastado con respecto a la supresión de la enfermedad de
los nematodos del nudo radicular en el tomate. Mientras que
A. niger junto con CHA0 o CHA0/pME3424 causaron una
reducción significativa de las tasas de abrasión en
comparación con su aplicación sola, la aplicación
combinada de la cepa silvestre CHA0 y A. quadrilineatus
no produjo esta respuesta. Estos resultados se deben en gran
parte al hecho de que estas dos especies de Aspergillus
biosintetizan metabolitos secundarios químicamente
diferentes (Abu-Seidah 2003), como también se ha
2004 Sociedad de Microbiología Aplicada, Cartas en Microbiología Aplicada, 39, 74-83, doi:10.1111/j.1472-765X.2004.01540.x
determinado en la presente investigación. También es
evidente que el CHA0 es relativamente más sensible a las
toxinas de A. quadrilineatus en la rizosfera que el CHA0/
pME3424. Por lo tanto, es razonable asumir que en suelos
con A. quadrilneatus, la cepa CHA0/pME3424
proporcionaría mejores resultados contra nematodos en
comparación con el tipo silvestre CHA0. Sin embargo, antes
de la aplicación de DAPG que sobreproduce
CHA0/pME3424 en el suelo, es imperativo evaluar su
impacto en los miembros no objetivo de las comunidades
microbianas de la rizosfera (Shaukat y Siddiqui 2003).
En comparación con los plaguicidas sintéticos, los agentes
de control biológico presentan un espectro relativamente
estrecho de actividad contra los patógenos vegetales. Esta
variabilidad en la eficacia podría deberse a varios factores
bióticos y abióticos prevalentes en el entorno en el que se
aplican estos agentes. Factores bióticos complejos, como
especies de plantas, edad del hospedante, genotipo del
hospedante (Siddiqui y Shaukat 2003b), densidad de los
nematodos del nudo radicular y nivel de inóculo de la
bacteria de control biológico en el suelo (Siddiqui y Ehtesha-
mul-Haque 2001), y la presencia de otros microbios en la
rizosfera (Siddiqui y Shaukat 2003b), pueden alterar de
forma significativa la eficacia de los antagonistas
bacterianos contra los nematodos parasitarios de las plantas.
En estudios recientes, Siddiqui y Shaukat (2003c)
encontraron que la aplicación en el suelo con una suspensión
conidial de la cepa Fs5 de F. solani (una cepa represora para
la cepa
82 I.A. SIDDIQUI ET AL.

de compuestos nematicidas en P. fluorescens) junto con Ps. de control biológico por parte de los productores.
fluorescens CHA0 o CHA0/pME3424 redujo
sustancialmente la eficacia bacteriana para suprimir los
nematodos del nudo radicular en el tomate. Por
otro lado, las cepas CHA0 y T. harzianum Th6 (una cepa
que promueve la biosíntesis de agentes nematicidas in vitro
por Ps. fluorescens) aplicadas simultáneamente en suelos
franco-arenosos no esterilizados, causaron una amplia
reducción en las densidades poblacionales de nematodos en
la rizosfera del tomate en comparación con la aplicación de
cualquiera de los dos organismos por separado (Siddiqui y
Shaukat 2004). Los resultados de nuestras investigaciones
actuales y anteriores amplían el conocimiento sobre los
efectos interactivos de los hongos del suelo, incluidos los
aspergilos, y las cepas de biocontrol de las psedomonadas
fluorescentes contra los nematodos del nudo de la raíz.
Con la prohibición del uso de muchos nematicidas, la
búsqueda de métodos de control más benignos para el medio
ambiente está en curso. El uso de agentes de control
biológico es uno de esos métodos de control. En este estudio,
mientras que la cepa CHA0 de Ps. fluorescens proporcionó
un control sustancial del nematodo del nudo de la raíz en
condiciones de invernadero, todavía hay varias preguntas
que deben ser respondidas antes de la aplicación de un
agente(s) de control biológico específico en el suelo. ¿Es
factible el control biológico de los nematodos parasitarios de
las plantas? Si los agentes potenciales de control biológico
pueden producir resultados consistentes bajo condiciones de
campo. Los productos biológicos disponibles son demasiado
caros y difíciles de usar en comparación con los métodos de
control existentes. Con un manejo cuidadoso se pueden
agregar agentes de control junto con otros métodos tales
como la rotación de cultivos para controlar las poblaciones
de nematodos y acumular suelos que suprimen a las plagas
de nematodos. La ampliación a las aplicaciones de campo de
los agentes biológicos todavía tiene dificultades prácticas,
pero el uso de agentes de control biológico en ambientes
controlados como casas de vidrio, camas de semillas y
camas de viveros es factible y se están aplicando varios
agentes comerciales de control biológico a varios cultivos.
Dos de los productos comercializados están basados en
hongos, Myrothecium verrucaria (DiTera, Abbot
Laboratories, Abott Park, IL, USA) y Paecilomyces
lilacinus (BIOACT, The Bioact Corporation, Laguna,
Filipinas). Otros dos productos son bacterias: Burkholderia
cepacia (Deny, CCT Corp, Wenatchee, WA, EE.UU.; Inter-
cept, Soil Technologies Corp, Fairfield, IA, EE.UU.; Blue
Circle Liquid Biological Fungicide, Stine Microbial
Produkts, Adel, IA, EE.UU.) y Pasteuria penetrans
(Nematech, Leeds, UK). Se afirma que todos estos
productos son activos en la rizosfera y, a excepción de
Pasteuria (Davies et al. 1988), poseen un amplio espectro
de actividad contra nematodos y también contra hongos
patógenos para plantas que infectan las raíces (Copping
1998). Los bajos costos, la eficacia, la compatibilidad con
las prácticas agrícolas existentes y la seguridad son
importantes para determinar la aceptación de los productos

CONFESIÓN
Los autores desean agradecer al Dr. Simon Atkins, de
Rothamsted Research, Reino Unido, por su ayuda en la
mejora del manuscrito.
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