La lignocelulosa, el componente principal de la biomasa, constituye aproximadamente la mitad

de la materia producida por la fotosíntesis. Consiste en tres tipos de polímeros (celulosa,

hemicelulosa y lignina) que están fuertemente entremezclados y unidos químicamente por
fuerzas no covalentes y por enlaces cruzados covalentes. Una gran variedad de hongos y
bacterias pueden fragmentar estas macromoléculas utilizando una batería de enzimas
hidrolíticas u oxidativas. En sustratos nativos, la unión de los polímeros dificulta su
biodegradación. La genética molecular de los sistemas de degradación de celulosa, hemicelulosa
y lignina avanzó considerablemente durante los años noventa. La mayoría de las enzimas se han
clonado, secuenciado y expresado tanto en huéspedes homólogos como en heterólogos. Se sabe
mucho sobre la estructura, la organización genómica y la regulación de los genes que codifican
estas proteínas. Está más allá del alcance de esta revisión, sin embargo, resuma estos hallazgos.
Nuestro propósito es proporcionar una visión general de la degradación de la celulosa,
hemicelulosa y lignina y los sistemas enzimáticos involucrados. Para una mejor comprensión de
la enzimología y la degradación, primero describiremos brevemente la estructura de la pared
celular y sus componentes. Las lignocelulosas en la naturaleza se derivan de la madera, el pasto,
los residuos agrícolas, los desechos forestales y los desechos sólidos municipales. Se han
sugerido varios métodos biológicos para el reciclaje de lignocelulosa, basados en la enzimología
de la degradación de celulosa, hemicelulosa y lignina. Entre ellos, el compostaje y su uso como
materia prima para la producción de etanolas, un combustible alternativo, parecen ser los más
económicamente factibles. Además, el uso generalizado de tecnologías ecológicas alternativas
que introducen enzimas lignocelulósicas en diferentes etapas de la fabricación de pasta y papel
como un tratamiento previo a la producción de pulpa (biopulping), blanqueo (bio-blanqueo) o
tratamiento de aguas residuales ha permitido un considerable ahorro de energía eléctrica y una
reducción de contaminantes. En las aguas residuales de estas industrias. Además, el tratamiento
previo de desechos agrícolas con hongos ligninolíticos permite su uso como materia prima para
la fabricación de papel. El uso de microorganismos o sus enzimas para mejorar el destintado de
las fibras recicladas y la liberación de toners a partir de desechos de oficinas es otro campo
prometedor que se está investigando.

Composición de materiales lignocelulósicos y estructura de la pared de madera

El componente principal de los materiales de lignocelulosa es la celulosa, junto con la lignina y

la hemicelulosa. La celulosa y la hemicelulosa son macromoléculas de diferentes azúcares;
mientras que la lignina es un polímero aromático sintetizado a partir de precursores de
fenilpropanoides. La composición y los porcentajes de estos polímeros varían de una especie de
planta a otra. Además, la composición dentro de una sola planta varía con la edad, la etapa de
crecimiento y otras condiciones [21]. Células largas envueltas por una pared celular
característica de la madera. Esta pared es una estructura compleja que actúa al mismo tiempo
que la piel de la planta y la columna vertebral (Fig. 1). La celulosa representa aproximadamente
el 45% del peso seco de la madera. Este polímero lineal está compuesto por subunidades de D-
glucosa unidas por enlaces glicosídicos b-1,4 que forman moléculas de celobiosa. Estas forman
largas cadenas (llamadas fibrillas elementales) unidas entre sí por enlaces de hidrógeno y fuerzas
de van der Waals. Las microfibrillas que cubren la hemicelulosa y la lignina (que están formadas
por fibrillas elementales). La orientación de las microfibrillas es diferente en los diferentes
niveles de la pared. Las microfibrillas se agrupan para constituir la fibra de celulosa. La celulosa
puede aparecer en forma cristalina, llamada celulosa cristalina. Además, hay un pequeño
porcentaje de cadenas de celulosa no organizadas, que forman celulosa amorfa. En esta
conformación, la celulosa es más susceptible a la degradación enzimática [5]. La celulosa
aparece en la naturaleza asociada con otras sustancias vegetales y esta asociación puede afectar
su biodegradación.

La hemicelulosa es un polímero de carbohidratos complejos y constituye el 25-30% del peso

total de madera seca. Es un polisacárido con un peso molecular más bajo que la celulosa.
Consiste en D-xilosa, D-manosa, D-galactosa, D-glucosa, L-arabinosa, 4-O-metil-glucurónica, D-
galacturónica y D-glucurónica. Los azúcares están unidos entre sí por enlaces glicosídicos b-1,4
y, en ocasiones, por b-1,3. El componente principal de la hemicelulosa de la madera dura es
glucuronoxylan (Fig. 2A), mientras que el glucomanano es predominante en la madera blanda
(Fig. 2B). Las estructuras de las hemicelulosas se describen en varias revisiones [ver referencia
21]. La principal diferencia con la celulosa es que la hemicelulosa tiene ramas con cadenas
laterales cortas que consisten en diferentes azúcares. En contraste con la celulosa, son
polímeros fácilmente hidrolizables. No forman agregados, incluso cuando están co-cristalizados
con cadenas de celulosa. La lignina (junto con la celulosa) es el polímero más abundante en la
naturaleza. Está presente en la pared celular celular, lo que confiere apoyo estructural,
impermeabilidad y resistencia contra el ataque microbiano y el estrés oxidativo.
Estructuralmente, la lignina es un heteropolímero amorfo, no soluble en agua y ópticamente
inactivo; consiste en unidades de fenilpropano unidas por diferentes tipos de enlaces. El
polímero se sintetiza mediante la generación de radicales libres, que se liberan en la
deshidrogenación mediada por la peroxidasa de tres alcoholes fenilpropiónicos: alcohol
coniferílico (guaiacil propanol), alcohol cumaril (p-hidroxifenilpropanol) y alcohol sinapílico
(jeringilpropanol). El alcohol de coniferilo es el principal componente de las ligninas de madera
blanda, mientras que los alcoholes de guaiacilo y sirio son los constituyentes principales de las
ligninas de madera dura. El resultado final de esta polimerización es una estructura heterogénea
cuyas unidades básicas están unidas por enlaces C-C y aril-éter, siendo la estructura
predominante el aril-glicerol b-ariléter (Fig. 3).

La degradación biológica de la celulosa, la hemicelulosa y la lignina ha atraído el interés de los

microbiólogos y biotecnólogos durante muchos años. La diversidad de sustratos celulósicos y
lignicelulósicos ha contribuido a las dificultades encontradas en los estudios enzimáticos. Los
hongos son los microorganismos más conocidos capaces de degradar estos tres polímeros.
Debido a que los sustratos son insolubles, tanto la degradación bacteriana como la micótica
tienen que ocurrir exocelularmente, ya sea en asociación con la capa de la envoltura de la célula
externa o extracelularmente. Los microorganismos tienen dos tipos de sistemas enzimáticos
extracelulares: el sistema hidrolítico, que produce hidrolasas y es responsable de la degradación
de la celulosa y la hemicelulosa; y un sistema ligninolítico oxidativo y extracelular único, que
despolimeriza la lignina. Una discusión sobre la bioquímica y la genética de las enzimas
involucradas en los materiales celulósicos y lignocelulósicos está fuera del alcance de esta
revisión.

Biodegradación de celulosa.

La mayoría de los microorganismos celulolíticos pertenecen a eubacterias y hongos, aunque

también se han descrito algunos protozoos anaeróbicos y mohos del limo capaces de degradar
la celulosa. Los microorganismos celulolíticos pueden establecer relaciones sinérgicas con
especies no celulolíticas en desechos celulósicos. Las interacciones entre ambas poblaciones
conducen a una degradación completa de la celulosa, liberando dióxido de carbono y agua en
condiciones aeróbicas, y dióxido de carbono, metano y agua en condiciones anaeróbicas [5,30].
Los microorganismos capaces de degradar la celulosa producen una batería de enzimas con
diferentes especificidades, trabajando en conjunto. Las celulasas hidrolizan los enlaces b-1,4-
glicosídicos de la celulosa. Tradicionalmente, se dividen en dos clases denominadas
endoglucanasas y celobiohidrolasas. Las endoglucanasas (endo-1,4-b-glucanasas, EG) pueden
hidrolizar enlaces internos (preferiblemente en regiones amorfas de celulosa) que liberan
nuevos extremos terminales. Las celobiohidrolasas (exo-1,4-b-glucanasas, CBH) actúan sobre los
extremos de cadena existentes o generados por la endoglucanasa. Ambas enzimas pueden
degradar la celulosa amorfa pero, con algunas excepciones, los CBH son las únicas enzimas que
degradan eficientemente la celulosa cristalina. CBHs y EGs liberan moléculas de celobiosa. Una
hidrólisis efectiva de celulosa también requiere b-glucosidasas, que rompen la celobiosa
liberando dos moléculas de glucosa (Fig. 4A). Los productos de hidrólisis de celulosa están
disponibles como fuentes de carbono y energía para microorganismos celulolíticos u otros
microbios que viven en el ambiente donde se está degradando la celulosa. De hecho, esta
liberación de azúcares a partir de celulosa es la base principal de las interacciones microbianas
que ocurren en tales ambientes [30]. Para funcionar correctamente, las endoglucanasas,
exoglucanasas y glicosidasas b deben ser estables en el entorno exocelular y pueden formar un
complejo ternario con el sustrato.

Los sistemas de celulasa de los hongos mesófilos Trichoderma reesei y Phanerochaete

chrysosporium son los más estudiados [revisión en 24]. Los EG de estos consorcios tienen dos
dominios estructurales: el dominio catalítico y el dominio de unión. Sus masas moleculares
varían de 25 a 50 kDa, y tienen actividades óptimas a pH ácido. Los CBH actúan sinérgicamente
con los EG para solubilizar moléculas de celulosa de alto peso molecular. También están
glicosilados y presentan una actividad óptima a pH ácido. P. chrysosporium tiene varias b-
glucosidasas, mientras que solo una isoenzima se ha descrito en T. reesei. Todos ellos tienen una
masa molecular alta que oscila entre 165 y 182 kDa. Varios hongos termófilos pueden degradar
la celulosa más rápido que T. reesei. Los EG de los hongos termófilos son termoestables y sus
masas moleculares varían de 30 a 100 kDa. Muestran optimalactividad entre 55 y 80 C a pH 5.0–
5.5. Las exoglucanasas (40–70 kDa) son óptimamente activas a 50–75ºC. Las características
moleculares de las b-glucosidasas son variables; sus masas moleculares varían de 45 a 250 kDa,
una HP óptima de 4.1 a 8.1 y una temperatura óptima de 35 a 71 C [32]. Entre las bacterias
celulolíticas aerobias, las especies de los géneros Cellulomonas, Pseudomonas y Streptomyces
son las mejor estudiadas [5].

Alrededor del 5-10% de la celulosa se degrada en la naturaleza en condiciones anaeróbicas. El

sistema de celulosa de los microorganismos anaeróbicos es claramente diferente del de los
hongos y bacterias aeróbicos. La mejor caracterizada es la de Clostridium thermocellum, una
bacteria esporulada anaerobia estricta y grampositiva. En este sistema, las enzimas se organizan
en grandes entidades funcionales denominadas celulosomas (ver más abajo). La organización de
las enzimas en concentrados de celulosoma y los coloca de tal manera que promueve el
sinergismo entre las unidades catalíticas. Las ventajas de estas disposiciones de las enzimas
celulolíticas son que, dado que la celulosoma está unida a la superficie celular, las enzimas están
ubicadas en la interfaz entre la célula y el sustrato insoluble. Los productos de la celulólisis (como
la celobiosa) pueden pasar dentro de la bacteria a través de materiales fibrosos extendidos que
están presentes entre la célula y la celulosa. Sin embargo, estos microorganismos requieren altas
temperaturas para el crecimiento y la degradación de la celulosa, por esta razón probablemente
desempeñan un papel menor en la biodegradación de la celulosa en la naturaleza. Varios
anaerobios celulolíticos mesofílicos se han aislado de ambientes comunes, como suelo y
sedimentos, compost, aguas residuales, lodos y digestores anaeróbicos [30]. Otros
microorganismos celulolíticos anaerobios bien conocidos son las bacterias del rumen, los hongos
y los protozoos, que degradan grandes cantidades de celulosa [30].

Biodegradación de hemicelulosa.

Las hemicelulosas se biodegradan a azúcares monoméricos y ácido acético. Las hemicelulasas

se clasifican frecuentemente según su acción sobre distintos sustratos. Xylan es el principal
carbohidrato que se encuentra en la hemicelulosa. Su completa degradación requiere la acción
cooperativa de una variedad de enzimas hidrolíticas. Debe hacerse una distinción importante
entre la endo-1,4-b-xilanasa y la xilana 1,4-b-xilosidasa. El primero genera oligosacáridos a partir
de la escisión del xilano; el último trabaja en oligosacáridos xilano, produciendo xilosa [21].
Además, la biodegradación de la hemicelulosa necesita enzimas accesorias como las xilanas
esterasas, ferúlicas y p-coumáricas, al-arabinofuranosidasas y a-4-O-metil glucuronosidasas que
actúan de forma sinérgica para hidrolizar eficientemente xilanos y mananos [para una revisión
sobre hidrólisis de otros hemicelulasas ver 24]. En el caso de O-acetil-4-O metilglucuronxylan,
una de las hemicelulosas más comunes, se requieren cuatro enzimas diferentes de degradación:
endo-1,4-b xilanasa (endoxilanasa), acetil esterasa, a-glucuronidasa y b-xylosidasa ( Fig. 4B). La
degradación de O acetylgalactoglucomanann comienza con la ruptura del polímero por
endomannases. Las esterasas de acetilglucomanano eliminan los grupos acetilo, y las a-
galactosidasas eliminan los residuos de galactosa. Finalmente, la b-manosidasa y la b-glicosidasa
rompen los oligómeros generados por las endomannasas enlaces b-1,4 (Fig. 4C).

Las xilanasas, el componente principal de las hemicelulasas, se han aislado de muchos nichos
ecológicos donde hay presencia de material vegetal. Debido a las importantes explotaciones
biotecnológicas de las xilanasas, especialmente en biopulping y blanqueo, muchas publicaciones
han aparecido en los últimos años [27]. Se ha demostrado que el hongo de la pudrición blanca
Phanerochaete chrysosporium produce múltiples endoxilanasas [24]. Además, las xilanasas
bacterianas se han descrito en especies severalaeróbicas y algunos géneros ruminales [7, 27]. La
hidrólisis de los enlaces b-glicosídicos se lleva a cabo mediante reacciones catalíticas ácidas
comunes a todas las glicanasas. Muchos microorganismos contienen múltiples loci que codifican
funciones xilanolíticas superpuestas. Las xilanasas, como muchas otras enzimas celulolíticas y
hemicelulolíticas, tienen una estructura altamente modular. Consisten en un dominio único o
en varios dominios diferentes, clasificados como dominios catalíticos y no catalíticos. Sobre la
base de la homología de los aminoácidos conservados, las xilanasas se pueden agrupar en dos
familias diferentes: familia 10 (F), con peso molecular relativamente alto, y familia 11 (G), con
peso molecular más bajo. Los dominios catalíticos para las dos familias difieren en sus masas
moleculares, carga neta y puntos isoeléctricos [27] y pueden jugar un papel importante en la
determinación de la especificidad y la reactividad. Bioquímica y estructuralmente, las dos
familias no están relacionadas. La liberación de azúcares reductores de xilano purificado es
altamente dependiente de la xilanasa pI. Los puntos isoeléctricos para endoxilanasas de diversos
microorganismos varían de 3 a 10. La temperatura óptima para las xilanasas de las bacterias y
fungaloriginas varía de 40 a 60 ° C. Las xilanasas generalmente son menos termoestables que las
bacterialxilanasas.

Los investigadores han prestado especial atención a las hemicelulasas termoestables debido a
sus aplicaciones biotecnológicas (ver más abajo). Las xilanasas termofílicas se han descrito en
actinobacterias (antes actinomicetos) como Thermomonospora y Actinomadura [14]. Además,
se ha aislado una xilanasa muy termoestable de la bacteria primitiva hipertermofílica
Thermotoga [45]. Las xilanasas de los hongos termofílicos también reciben una atención
considerable. Al igual que en los hongos mesófilos, se ha observado una multiplicidad de
xilanasas que difieren en estabilidad, eficiencia catalítica y actividad en sustratos [32]. Las
temperaturas óptimas varían de 60 a 80 C y el pI varía de 3.7 a 9.0. Esta diversidad de isoenzimas
de xilanasa de diferentes masas moleculares podría permitir su difusión en las paredes celulares
de las plantas. El uso de xilanasas en pulpas blanqueadoras ha estimulado la búsqueda de
enzimas con pH óptimo alcalino. La mayoría de las xilanasas de hongos tienen un pH óptimo
entre 4.5 y 5.5. Las xilanasas de actinobacterias son activas a pH 6.0–7.0 [21]. Sin embargo, las
xilanasas activas a pH alcalino se han descrito a partir de Bacillus sp. o Streptomyces viridosporus
[7]. Los genes que codifican varias xilanasas se han clonado en hospedadores homólogos y
heterólogos con el fin de sobreproducir la enzima con el objetivo de alterar sus propiedades
para que pueda ser utilizado para aplicaciones comerciales [27].

Las b-xilosidasas son menos comunes que las endoxilanasas. La mayoría de ellas están unidas a
células y son más grandes que las xilanasas. Se han descrito en varios hongos como T. reesei y
P. chrysosporium con masas moleculares que oscilan entre 90 y 122 kDa, y la mayoría tienen pH
óptimo ácido y pIs [24]. Las b-xilosidasas también se han descrito en B. stearothermophilus y la
bacteria ruminal Butyrivibrio fibrisolvens [20]. Las enzimas que degradan la glucomanía se han
descrito con menos frecuencia que las xilanasas. Se han estudiado varias mananasas
microbianas de bacterias grampositivas y gramnegativas [41]. Las endomananasas también se
han descrito en hongos de podredumbre blanca y en ascomicetos [24]. Las esterasas
galactosidasas y acetilglucomanano más estudiadas son las del género Aspergillus, mientras que
las b-manonidasas mejor estudiadas provienen de los hongos Polyporus sulfureus y A. niger [24].
Por lo que sabemos, hasta la fecha no se han aislado a-galactosidasas o b manosidasas de hongos
de la podredumbre blanca.

Biodegradación de lignina.

La complejidad estructural de la lignina, su alto peso molecular y su insolubilidad hacen que su

degradación sea muy difícil. Las enzimas extracelulares, oxidativas e inespecíficas que pueden
liberar productos altamente inestables que además sufren muchas reacciones oxidativas
diferentes catalizan los pasos iniciales de la despolimerización de la lignina. Esta oxidación no
específica de lignina se ha denominado "combustión enzimática" [25]. Los hongos de la
podredumbre blanca son los microorganismos que degradan más eficientemente la lignina de
la madera. De estos, Phanerochaete chrysosporium es el más extenso. Para revisiones recientes
sobre la biodegradación de la lignina por hongos de la pudrición blanca y los avances en la
genética molecular de los hongos ligninolíticos, ver [10,50]. Dos importantes familias de enzimas
están involucradas en la ligninolisis por hongos de la pudrición blanca: las peroxidasas y las
laccasas. Aparentemente, estas enzimas actúan utilizando mediadores de bajo peso molecular
para llevar a cabo la degradación de la lignina. Se han propuesto varias clasificaciones de hongos
basadas en sus enzimas ligninolíticas. Algunos de ellos producen todas las enzimas principales,
otros solo dos de ellos, o incluso uno solo. Además, las enzimas reductoras, incluidas las enzimas
oxidantes de la celobiosa, las arilalcoholoxidasas y las deshidrogenasas de alcohol arílico, juegan
un papel importante en la ligninolisis [10].

Dos grupos de peroxidasas, peroxidasas de lignina (LiPs) y peroxidasas dependientes de

manganeso (MnPs), han sido bien caracterizados. El LiP se ha aislado de varios hongos de
podredumbre blanca. El ciclo catalítico, oxidativo de LiP ha sido bien establecido y es similar a
los de otras peroxidasas. En la mayoría de los hongos, el LiP está presente como una serie de
isoenzimas codificadas por diferentes genes. LiP es una glicoproteína con un grupo hemo en su
centro activo. Su masa molecular varía de 38 a 43 kDa y su pI de 3.3 a 4.7. Hasta ahora, es la
peroxidasa más efectiva y puede oxidar compuestos fenólicos y no fenólicos, aminas, éteres
aromáticos y compuestos aromáticos policíclicos con un potencial de ionización apropiado [24].
Como el LiP es demasiado grande para entrar en la célula vegetal, su degradación se lleva a cabo
solo en las regiones expuestas del lumen. Este tipo de degradación se encuentra en las caries
simultáneas de la madera. Sin embargo, los estudios microscópicos de la revaloración selectiva
de la lignina revealthat de hongos de pudrición blanca eliminan el polímero del interior de la
pared celular. Se ha sugerido una oxidación indirecta por LiP de compuestos difusibles de bajo
peso molecular capaces de penetrar la pared celular y oxidar el polímero. Sin embargo, esta
teoría carece de evidencia, ya que los intermedios de bajo peso molecular, como el radicular de
veratryl y el alcoholcation, son de corta duración para actuar como mediadores [23]. Las MnPs
son molecularmente muy similares a las LiP y también son proteínas glicosiladas, pero tienen
masas moleculares ligeramente más altas, que van de 45 a 60 kDa. Las MnPs oxidan Mn (II) a
Mn (III). Tienen un ciclo catalítico de peroxidasa convencional, pero con Mn (II) como sustrato.
Este Mn (II) debe ser quelado por quelantes de ácidos orgánicos, que estabilizan el producto Mn
(III) [40]. Mn (III) es un oxidante fuerte que puede abandonar el centro activo y oxidar los
compuestos fenólicos, pero no puede atacar unidades no fenólicas de lignina. MnP genera
radicales fenoxi que a su vez experimentan una variedad de reacciones, lo que resulta en la
despolimerización [16]. Además, la MnP oxida los compuestos del modelo de lignina no fenólica
en presencia de Mn (II) a través de la peroxidación de lípidos insaturados [24]. Se ha descrito
una novela peroxidasa versátil (VP), que tiene actividades de peroxidasa de manganeso y
peroxidasa de lignina y que está implicada en la degradación natural de la lignina [8]. VP puede
oxidar la hidroquinona en ausencia de H2O2 exógeno cuando Mn (II) está presente en la
reacción. Se ha sugerido que la oxidación química de las hidroquinonas promovidas por Mn (II)
podría ser importante durante los pasos iniciales de la biodegradación de la madera porque las
enzimas ligninolíticas son demasiado grandes para penetrar en las paredes celulares de la
madera no modificada [17].

Las lacasas son fenoloxidasas de cobre azul que catalizan la oxidación de un electrón
principalmente de compuestos fenólicos y no fenólicos en presencia de mediadores [15]. El
núcleo fenólico se oxida mediante la eliminación de un electrón, lo que genera productos de
radicales libres fenoxi, que pueden conducir a la escisión del polímero. Los hongos que se pudren
en la madera son los principales productores de lacasas, pero esta oxidasa se ha aislado de
muchos hongos, como el Aspergillus y el hongo termófilo Myceliophora thermophila y
Chaemotium thermophilium [29]. Recientemente, se han encontrado proteínas similares a
lacasas bacterianas [3]. Estas enzimas polimerizaron una fracción de materia orgánica soluble
en agua, de bajo peso molecular, aislada del compost en productos de alto peso molecular, lo
que sugiere la participación de la lacasa en la humificación durante el compostaje [32]. El papel
de las lacasas en la biodegradación de la lignina se ha discutido recientemente [29]. Las
aplicaciones biotecnológicas potenciales de los hongos whiterot o sus enzimas ligninolíticas son
muchas. Las aplicaciones más prometedoras pueden ser biopulping y blanqueo de pulpas
químicas (ver más abajo). Los hongos de la podredumbre blanca pueden degradar / mineralizar
una amplia variedad de xenobióticos tóxicos que incluyen hidrocarburos aromáticos policíclicos,
clorofenoles, nitrotoluenos, colorantes y policlorados y bifenilos [para una revisión, véase 42].
Una aplicación obvia es la biorremediación in situ de suelos contaminados [39]. Otros campos
en investigación son el uso de estos hongos para la biocatálisis en la producción de productos
químicos finos y sabores naturales (por ejemplo, vainillina) y el tratamiento biológico de varias
aguas residuales como los efluentes de plantas de lejía (ver más abajo) u otras aguas residuales
que contienen lignina. Los polímeros, como es el caso de los efluentes de la industria del tinte y
las aguas residuales de los molinos de aceite de oliva [33]. La degradación de la lignina y las
enzimas de degradación de la lignina también se ha informado de actinobacterias del género
Streptomyces [6]. Aunque la biodegradación de la lignina se acepta como un proceso aeróbico,
algunos autores han informado que los microorganismos anaeróbicos en el rumen pueden
alterar, si no degradar parcialmente, las porciones de células vegetales lignificadas [2].

Tratamientos biológicos de materiales celulósicos y lignocelulósicos.

Biotransformación de biomasa lignocelulósica en combustibles alternativos

La obtención de etanol como combustible alternativo que utiliza celulosa y residuos

lignocelulósicos como materia prima se ha considerado en gran medida, especialmente después
de la crisis de los combustibles fósiles. En todo el mundo, la conversión de almidón de maíz y
otros cultivos en etanolis, una de las aplicaciones de biotecnología a mayor escala. El etanol
mezclado con gasolina (10:90) reduce las emisiones de monóxido de carbono. La biomasa
lignocelulósica ofrece una materia prima más económica que el almidón. En los últimos 20 años
se ha avanzado mucho en la conversión enzimática de las lignocelulosas en etanol, y el precio
de este producto ha bajado tanto que hoy en día el etanol puede competir con la gasolina. La
transformación de lignocelulosa en etanol se completa en dos pasos: (1) hidrólisis del polímero,
deslignificación para liberar celulosa y hemicelulosa de su complejo con lignina y
despolimerización del polímero de carbohidratos para producir azúcares libres; y (b) la
fermentación a etanol utilizando pentosas y hexosas liberadas en el primer paso. En los procesos
convencionales, las ligninas presentes en las materias primas y en la liberación de azúcares
fermentables se eliminan mediante un pretratamiento químico y / o térmico seguido de
hidrólisis enzimática / ácida. Sin embargo, se han propuesto tratamientos biológicos para
reemplazar el tratamiento físicoquímico o para la desintoxicación o la eliminación específica de
inhibidores antes de la fermentación. Los hongos de pudrición blanca mencionados
anteriormente u otros microorganismos ligninolíticos, incluyendo Streptomyces, pueden lograr
la deslignificación. Las principales ventajas de la deslignificación biológica incluyen condiciones
de reacción leves, mayores rendimientos de producto, menos reacciones secundarias y menos
demanda de energía [28]. Una alternativa atractiva a la bioconversión en dos etapas es la
sacarificación y la fermentación simultáneas [9], en la que las enzimas hidrolíticas (por ejemplo,
las celulasas de T. reesei) y los microorganismos fermentativos están presentes en el reactor.
Cuando el sustrato es lignocelulosa, el uso de xilano es esencial para la transformación biológica.
Las microbialxilanasas catalizan la hidrólisis de xilano a xilosa en una reacción leve con una
pérdida de sustrato insignificante. Sin embargo, el tratamiento enzimático es caro y es uno de
los factores que limitan la hidrólisis enzimática.

La xilosa y otros azúcares de hemicelulosa se liberan fácilmente por hidrólisis ácida. Aun cuando
solo representan el 15% del total de azúcares de madera, comprenden el 45% de los azúcares
recuperables por hidrólisis. Durante muchos años, la conversión de azúcares en etanol se limitó
a hexosas porque la xilosa es un azúcar difícilmente fermentable. La xilosa se puede fermentar
en etanolor xilitol (que se utiliza como edulcorante). En la mayoría de las levaduras, el
metabolismo de la xilosa requiere condiciones aeróbicas para estimular la producción de etanol,
e incluso entonces los niveles de etanol resultantes son muy bajos. Un avance reciente a este
respecto es el desarrollo de cepas mejoradas de microorganismos fermentativos capaces de
fermentar los azúcares de pentosa y hexosa en etanol [22]. Durante la década de 1990, muchos
laboratorios en el mundo se esforzaron por obtener la producción de etanol directamente a
partir de materiales lignocelulósicos utilizando microorganismos termófilos anaeróbicos, siendo
Clostridium thermocellum el mejor estudiado. La gran ventaja de usar estas bacterias es que
hidrolizan la celulosa y, al mismo tiempo, también fermentan los azúcares resultantes
directamente en etanol. El hecho de que C. thermocellum sea una bacteria termófila ofrece
varias ventajas adicionales, como mayores tasas de crecimiento, mayor actividad metabólica y
mayor estabilidad de la enzima. Además, la recuperación de los productos es más fácil. La
celulosoma de C. thermocellum (Fig. 5) contiene diferentes tipos de glicosil hidrolasas, incluidas
las celulasas y hemicelulasas, todas las cuales están unidas a un polipéptido principal llamado
scaffoldin o CipA (para proteínas integradoras de celulosomas). Scaffoldin contiene varios
módulos funcionales. Uno de ellos es un único dominio de unión a la celulosa (CDB), y hay nueve
dominios repetitivos, llamados cohesinas, que interactúan con las enzimas celulosomales.
Además, la andamio tiene un dominio que le permite unirse a la superficie de la célula [44]. Sin
embargo, las cepas de tipo salvaje tienen una tolerancia limitada al etanol. La ingeniería genética
ayudará a aliviar este problema [44]. Se ha analizado la digestión anaeróbica para convertir la
biomasa lignocelulósica en metano; sin embargo, se requieren avances adicionales en esta
tecnología, como el aumento de los niveles de enzimas para la descomposición de la celulosa en
azúcares fermentables y la mejora de los organismos que toleran diferencias de pH más amplias,
para alcanzar el potencial económico [51].

Compostación de materiales lignocelulósicos.

El compostage es un procedimiento dinámico en el que se necesita la acción sinérgica de una

variedad de microorganismos para reciclar materiales lignocelulósicos. Las capacidades de los
microorganismos para asimilar los carbohidratos complejos, como la celulosa, la hemicelulosa y
la lignina, dependen de la capacidad de producir las enzimas descritas anteriormente. La
microbiota de compost lignocelulósica ha sido revisada recientemente por Tuomela et al. [47].
Las poblaciones que crecen en pilas de compost consisten principalmente en bacterias (incluidas
las actinobacterias) y hongos. Los polímeros como la hemicelulosa, la celulosa y la lignina solo
se degradan una vez que se han consumido los compuestos más fácilmente degradables.
Posteriormente, los materiales lignocelulósicos se transforman parcialmente en humus. Según
Tuomela et al. [47], al comienzo del compostaje predominan las bacterias mesófilas. Una vez
que la temperatura ha alcanzado más de 40 ° C, las bacterias y los hongos termofílicos aparecen
en las pilas de compost. Cuando las temperaturas alcanzan más de 60 ° C, la actividad de la
actividad microbiológica disminuye y, a medida que la pila de compost se enfría, vuelven a
aparecer bacterias mesófilas. Excepto el 1% de las bacterias anaeróbicas en el proceso de
compost, que llevan a cabo gran parte de la actividad celulolítica y, por lo tanto, desempeñan
un papel importante en la biodegradación de los materiales lignocelulósicos, la mayor parte de
la biodegradación se lleva a cabo en condiciones aeróbicas. Entre las bacterias aeróbicas que se
han aislado del compost, las actinobacterias probablemente desempeñan un papel importante
en la degradación de las lignocelulosas. Estas bacterias pueden degradar la celulosa y solubilizar
la lignina. Sin embargo, parece que los hongos termófilos y termotolerantes, que se sabe que
tienen actividad celulolítica y ligninolítica, son críticos para la degradación de los materiales
lignocelulósicos en el compost. En los procesos de compostaje, los hongos whiterot se han
aislado solo durante las fases de enfriamiento y maduración. Algunos autores creen que, incluso
si estos hongos son muy importantes en la degradación de la lignina en la naturaleza, no deben
participar en la degradación de este polímero en ambientes de compost.

Biotratamiento de aguas residuales de pulpa y papel.

En los últimos años, las agencias de protección ambiental se han vuelto más restrictivas con
respecto a las descargas de aire y agua de las fábricas de pasta química y papel. Las reducciones
de contaminantes afectan a todas las etapas de la industria del papel, incluidas la fabricación de
pasta, el blanqueo y la fabricación de papel. Los procesos de fabricación de pulpa liberan
compuestos coloreados, como las residualligninas, productos de degradación de carbohidratos
y extractivos (compuestos lipofílicos) en las corrientes de efluentes. La eliminación de esta resina
residual puede reducir significativamente el volumen de los productos químicos utilizados para
el blanqueo, reduciendo así la cantidad de compuestos peligrosos formados en las aguas
residuales de la planta de blanqueo. Las residualligninas en las pulpas son la causa de su color
marrón oscuro típico, que debe eliminarse mediante blanqueo en varias etapas. El uso de cloro
elemental para el blanqueo conduce a problemas ambientales que incluyen la liberación de
compuestos aromáticos clorados tóxicos y recalcitrantes, como las dioxinas. El número de
industrias papeleras que utilizan dióxido de cloro en el blanqueo sin cloro elemental (ECF) está
disminuyendo, especialmente en Europa. La producción totalmente libre de cloro (TCF) se
estima en un 15% de la producción total. La producción de celulosa TCF está creciendo
lentamente. Se han utilizado productos químicos alternativos para el blanqueo, por ejemplo,
Oxigeno, peróxido de hidrógeno y ozono. Estos compuestos tienen algunas desventajas, y el
papel pierde calidad durante el blanqueo. Alternativamente, se han desarrollado tecnologías
amigables con el medio ambiente, basadas en la capacidad de los microorganismos para
degradar la celulosa, la hemicelulosa o la lignina. Ali y Sreekrishnan [4] y Thompson et al.
Revisaron los tratamientos actuales de los efluentes de pulpa y molinos de papel. [46]. Todas las
plantas de celulosa y papel tienen instalaciones para asegurar el cumplimiento de las
regulaciones establecidas por las agencias ambientales en su propio país. Aun así, las aguas
residuales imponen problemas de coloración y toxicidad en las aguas receptoras, causando
daños ambientales. Actualmente, la mayoría de las industrias del papel utilizan los tratamientos
biológicos primarios y secundarios clásicos. Casi la mitad de las industrias papeleras utilizan el
método aeróbico de lodos activados para el tratamiento secundario. Algunas industrias aplican
tratamientos terciarios físicos y químicos, especialmente para eliminar el color oscuro residual;
Pero estos tratamientos son caros e ineficaces.

El color oscuro de estos efluentes se debe principalmente a la lignina y sus derivados, liberados
durante las diferentes etapas de los procesos de fabricación de pasta y papel. La lignina se
convierte en tio y álcali-lignina durante el proceso kraft, y en lignosulfonatos en el proceso de
sulfito. Las cloroligninas son los principales subproductos del blanqueo químico de pasta de
madera. Estos compuestos de alto peso molecular no se degradan por ninguno de los
tratamientos biológicos descritos anteriormente, y sus destinos finales son desconocidos. La
descarga de estos residuos coloreados no solo es un problema de estética, sino que también se
ha demostrado que las cloroligninas son tóxicas y mutagénicas [4]. Los procesos químicos para
eliminar el color oscuro son costosos y no solucionan el problema porque las ligninas persisten,
aunque en forma diferente. Un tratamiento alternativo es el uso de microorganismos
ligninolíticos [13]. Se han estudiado diversas especies de bacterias por su capacidad de
decoloración. Si bien algunos de ellos pueden decolorarse, solo unas pocas cepas metabolizan
los derivados de lignina [37]. La eliminación del color se logró de manera eficiente empleando
el método FPL / NCSU Mycor, que utiliza Phanerochaete chrysosporium en contactores
biológicos rotativos [12]. Una modificación posterior de este método, denominada MYCOPOR,
fue desarrollada por Messner et al. [34]. La decoloración biológica de los desechos de las fábricas
de papel utilizando micelios, pellets o células inmovilizadas se logró con diferentes cepas [4, 33].
Además, se pueden emplear enzimas ligninolíticas solubles o inmovilizadas para la decoloración
del efluente [36]. Además de los hongos de la podredumbre blanca, otras cepas evaluadas para
la decoloración y descontaminación de los efluentes kraft incluyen ascomicetos y Thermoascus
aurantiacus [31,43].

Fungaland tratamientos enzimáticos de virutas y pulpas de madera: biopulping y biobleaching

El biopulping se define como el tratamiento adecuado de las astillas de madera con hongos que
degradan la lignina antes de la fabricación de pasta. Este tratamiento biológico no solo reduce
el consumo de energía en el proceso de fabricación de pulpa, sino que también mejora la
resistencia del papel y elimina los extractos de madera, lo que genera beneficios adicionales,
como menos problemas de inclinación y menor toxicidad del efluente [1]. La industria de la pulpa
y el papel utiliza procesos de pulido mecánico o químico o una combinación de ambos para
producir pulpas. La fabricación de pasta mecánica implica una fuerza mecánica para separar las
fibras de madera. Con este método, el rendimiento es alto y el papel producido es de buena
calidad. En los procesos de fabricación de pulpa química, el rendimiento es bajo, pero la pulpa
producida tiene una mayor resistencia. Se han desarrollado pretratamientos de virutas de
madera para el mecanizado y la eliminación química con varios hongos de podredumbre blanca
en varios laboratorios [1]. El pulpado biomecánico que utiliza estos microorganismos ha
demostrado ser viable tanto desde el punto de vista de ingeniería como económico. Las
preocupaciones globales por la preservación de los bosques y la eliminación de la contaminación
ambiental de las industrias de celulosa y papel se han centrado en la investigación de recursos
fibrosos alternativos para la fabricación de papel, como las plantas no leñosas o los residuos
agrícolas. El biopulping de plantas no leñosas con C. subvermispora, Pleurotus y otros
basidiomycetes reduce la cantidad de energía eléctrica utilizada para la etapa de refinación
hasta en un 30% y mejora las propiedades del papel [6,11]. El tratamiento de hongos elimina
algunos y / o modifica; estos cambios facilitan la eliminación de macromoléculas,
probablemente porque mejoran la penetración de los químicos y minimizan el uso de químicos.
El biopulping también beneficia a otras técnicas de pulpado, como el sulfito, el organosolv y la
producción de pasta de disolución. El tratamiento fúngico previo a la pulpa kraft ha recibido
poca atención. Sin embargo, varios estudios indican que la formación de pulpa de biokraft con
hongos de pudrición blanca aumenta el rendimiento y la resistencia de la pulpa y reduce el
tiempo de cocción durante la preparación de pulpa kraft [1,35]. En conjunto, los datos sugieren
que el biopulping podría ser una alternativa respetuosa con el medio ambiente y rentable a los
métodos actuales de fabricación de pasta.

El blanqueo de pulpas con enzimas u hongos ligninolíticos se conoce como biobleaching. El uso
de enzimas ligninolíticas y hemicelulasas ayuda en el blanqueo de la pulpa y disminuye la
cantidad de blanqueador químico requerido para obtener un brillo deseable de pulpas. Vikarii
et al. [48] fueron los primeros en demostrar que el tratamiento de las pulpas kraft con
hemicelulasas fúngicas reduce los requisitos posteriores de blanqueo con cloro. Otros autores
han confirmado estos estudios. Los tratamientos con xilanasa reducen la demanda de cloro para
la pulpa kraft en un 6–15% [26]. En los últimos años, se han lanzado al menos 15 patentes
relacionadas con tratamientos enzimáticos para mejorar las pulpas kraft. Existen diferentes
hipótesis para explicar el mecanismo de la pre-decoloración de hemicelulosa. Uno de ellos
sugiere que la hidrólisis del xilano reubicado y reprecipitado en la superficie de las fibras de la
pulpa hace que la pulpa sea más permeable, lo que mejora la extracción de la alquilina. El
segundo modelo sugiere que la lignina o los cromóforos generados durante la cocción kraft
reaccionan con los restos de carbohidratos. Las hemicelulasas liberan lignina al liberar
fragmentos de cromóforo xilano y aumenta la extracción de lignina. Las mananasas interactúan
de forma sinérgica con las xilanasas y mejoran el biocolor, especialmente en madera blanda.
Aunque inicialmente se obtuvieron resultados prometedores, las mananasas parecen ser menos
efectivas que las xilanasas [49]. Varias xilanasas de diferentes microorganismos han demostrado
ser efectivas para el blanqueo biológico de diversos tipos de pulpas. A escala de laboratorio, se
han analizado las xilanasas de hongos y bacterias [27]. La mayoría de las preparaciones
comerciales contienen xilanasas de diferentes especies de Trichoderma.

Los hongos ligninolíticos también se han evaluado para la decoloración biológica. El sistema
ligninolítico parece estar involucrado en el proceso, pero se deben agregar cofactores de bajo
peso molecular como alcohol veratrílico para LiP, manganeso y ácidos orgánicos para MnP y
aromáticos n-sustituidos para laccasas. Severalfungi son efectivos en biobleaching; entre estos,
se han reportado muy buenos resultados con Trametes versicolor [37], Bjerkandera sp., Phlebia
radiata y Lentinus tigrinus [36]. Laccase y MnP parecen desempeñar un papel primordial en la
decoloración, mientras que el papel de la LiP no está claro porque esta enzima no se ha
detectado durante el proceso. Además, las enzimas lignocelulósicas, como las endoglucanasas
de Paenibacillus sp., Se han aplicado a la biorrefinación como alternativa a la refinación
mecánica [38].

Desincorporación enzimática y control de tono.

El papel y el cartón son los materiales reciclables más importantes de Europa. Alrededor del 40%
de la producción total de ambos materiales se recicla realmente y la proporción está creciendo.
En España, el 81% del material total para la fabricación de papel es papel reciclado. En los
Estados Unidos [26], los papeles de imprenta y de escritura ascienden a unos 20 millones de
toneladas métricas por año. Los papeles de desecho contienen tóner y otras tintas. Estos son
polímeros sintéticos que no se dispersan durante la repulsión convencional. El destintado
convencional usa surfactantes para flotar el tóner seguido de altas temperaturas para agregarlo,
y luego una dispersión vigorosa para reducir el tamaño. Esos procesos son caros y consumen
energía. Las celulasas y las xilanasas liberan partículas de tóner que facilitan la flotación y los
pasos posteriores. Este método enzimático se ha ampliado y se ha demostrado que es
económicamente viable [19]. El término "itch" se aplica tanto a los extractivos de madera como
a los depósitos que estos extractivos causan durante la fabricación de pasta y papel. La toxicidad
de los componentes de brea está bien establecida y su fracción extraíble es actualmente la
fuente de un importante problema ambiental en las aguas residuales de pulpa y papel. Varios
hongos ligninolíticos han sido analizados para el control biotecnológico del tono. Desde el punto
de vista de la aplicabilidad industrial, las más prometedoras son Phlebia radiata y Poria
subvermispora [18].