TECO GRAM S.A.
JUEGO DE REACTIVOS PARA
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JUEGO DE REACTIVOS PARA COLESTEROL (LIBRE DE
FENOL)
Para la determinación cuantitativa de colesterol en suero.
INTRODUCCION
El colesterol es una sustancia grasa que se haya en la sangre, la bilis el
tejido cerebral. Sirve de precursor de los ácidos biliares, esteroides y la
vitamina D. La determinación del colesterol sérico es una gran ayuda en
el diagnóstico y clasificación de las lipemias. Otras condiciones
patológicas que influyen en los niveles del colesterol son las
enfermedades hepáticas y problemas tiroideos.
Los métodos enzimáticos han reemplazado a los antiguos métodos de
determinación. Allain y colaboradores desarrollaron una técnica
totalmente enzimática en la cual el peróxido de hidrógeno se utiliza en
la oxigenación del colesterol junto a la peroxidasa, la 4-Aminoantipirina
y el fenol para formar un compuesto coloreado de quinoncimina con
mayor absorbancia en el rango de lectura de 520 nm y un reductor de
tensión superficial para facilitar la reacción.
PRINCIPIO
La reacción enzimática empleada en la prueba de colesterol es la
siguiente:
Colesterasa
Esteres del colesterol -------------- > Colesterol + ácidos grasos
Colesterol + Oxígeno --------------- >Coleter-3-ona + H2O2
2H2O2 + la 4-Aminoantipirina H. Peroxidasa
4p-HBS ------------------- > Quinoincimina + 2H202
(Compuesto rojizo)
Los ésteres del colesterol son hidrolizados para producir colesterol. El
peróxido de hidrógeno se produce con la oxidación del colesterol en
colesterol oxidasa. Es una reacción doble catalizada por la peroxidasa.
La quinoincimina de color rojiza se forma por la 4-Aminoantipirina p-
HBS y Péroxido de hidrógeno. La absorción en un rango de lectura de
520 nm es proporcional a la concentración de colesterol de la muestra.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Cuando se reconstituye tal y como se indica el reactivo de colesterol,
contiene lo siguiente:
1. REACTIVO DE COLESTEROL:
(Concentración referida al reactivo reconstituído) 4-Aminoantipirina
0.6 nm, Colato de sodio 8.0 nm, Colesterol esterasa > 150 U/L,
Colesterol oxidasa > 200 U/L, p-Hidroxibenceno sulfonato 20 nm,
Buffer 125 nm, pH 6.8, estabilizadores no reactivos y volumétricos.
2. ESTANDAR DEL COLESTEROL:
200 mg/dl en alcohol. Manténgase a 2 – 8°C y herméticamente cerrado.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para diagnóstico “In Vitro”.
PRECAUCION: No pipetee el reactivo constituido con la boca
pues sus efectos son desconocidos.
COLESTEROL (Libre de Fenol)
2. Las muestras de suero deben considerarse infecciosas y deben
manipularse adecuadamente.
3. Use agua destilada o desionizada tal y como se indica.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Manténgase el reactivo entre 2 – 8°C. El reactivo reconstituido es
estable por 60 días en un frasco ámbar y a 2 – 8°C.
DETERIORO DEL REACTIVO
El reactivo debe desecharse si:
1. Presenta turbidez, la cual puede ser signo de contaminación.
2. La humedad ha penetrado en el frasco.
3. El reactivo falla en linealidad o no recobra valores normales en el
rango establecido.
RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
1. Las muestras deben ser de sueros libres de hemólisis.
2. EL colesterol en suero es estable por 7 días a temperatura ambiente
(18 – 25°C) y seis meses congelado y protegido de la evaporación.
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN
Los anticoagulantes tales como fluoratos y los oxalatos pueden dar
resultados falsos en valores bajos. La prueba no es interferida por
valores de hemoglobina hasta de 10 mg/dl. La interferencia provocada
por muestras ictéricas o muy bemolizadas se corrige utilizando un
blanco de muestra con suero o plasma.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROVISTOS
1. Espectrofotómetro con capacidad de lectura a 520 nm.
2. Porta tubos
3. Pipetas de precisión.
4. Reloj.
5. Bañomaría o bloque térmico (37°C)
INSTRUCCIONES GENERALES
El reactivo de colesterol se usa tanto para procedimientos manuales
como automatizados en un espectrofotómetro adecuado.
PROCEDIMIENTO MANUAL
1. Prepare el reactivo de acuerdo a las instrucciones en la etiqueta del
frasco.
2. Rotule tubos: blanco, estándar, paciente, control, etc.
3. Pipetee 1.0 ml de reactivo a todos los tubos e incúbelos a 37°C
durante 2 min. al menos.
4. Agregue 0.01 ml (10 ul) de muestra a los tubos respectivos, mezcle
y ponga a incubar.
5. Incúbese durante 10 minutos.
6. Ajuste el espectrofotómetro a cero (0) con blanco reactivo y a 520
nm.
7. Lea y anote las absorbancias de todos los tubos.
NOTA: Si el espectrofotómetro que se usa requeire de un volumen
final mayor de 1.0 ml para lecturas precisas, utilice 0.025 ml (25
ul) de muestra y 3.0 ml de reactivo.
LIMITES DEL PROCEDIMIENTO
El reactivo es lineal hasta 500 mg/dl.
1. Muestras con valores superiores a 500 mg/dl deben diluirse en 1:1 4. Especificidad: La oxidasa del colesterol no es totalmente específica
con solución salina isotónica y reanalizadas. Multiplique el para el colesterol. Otros análogos del colesterol (dihidrocolesterol,
resultado final por 2. 7-dehidrocolesterol, 20 hidroxicolesterol, etc.) tambien son
2. Los sueros muy lipémicos requieren de un “blanco muestra”. oxidados. Estos análogos normalmente no aparecen en cantidades
Agregue 0.02 ml (20 ul) de muestra a 2.5 ml de agua destilada, apreciables en el suero.
mezcle y lea la absorbancia contra agua. Reste este valor de la
absorbancia del paciente para obtener lectura corregida.

CALCULOS

A = Absorbancia

A ( paciente) x Concentración de estándar = Concentración de

A (estándar (mg/dl) paciente (mg/dl)

Ejemplo:
A (paciente) = 0.40, A (estándar) = 0.32,
Concentración de estándar = 200 mg/dl

0.40 x 200 = 250 mg/dl

0.32

CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda que se incluyan controles en cada juego de reactivos. Se
pueden usar material de control comercialmente disponible con valores
establecidos de colesterol para control de calidad. El valor asignado del
material de control debe ser confirmado por la aplicación escogida. El
fracaso al obtener un rango apropiado de valores en el ensayo del
material de control puede indicar deterioro del reactivo, mal
funcionamiento del reactivo, o errores del procedimiento.

VALORES ESPERADOS
Se recomienda mucho que cada laboratorio establezca su propio rango
normal

CLASIFICACION DE RIESGO COLESTEROL TOTAL

EN SANGRE (mg/dl)
Deseable < 200
Límite 200 – 239
Alto > 240

CARACTERISTICAS DE LA PRUEBA
1. Linearidad: 500 mg/dl.
2. Comparación: Un estudio de comparación entre este procedimiento
y uno que utiliza fenol libre produjo una ecuación de regresión de
Y= 0.95X + 10.3 con una correlación de coeficiente de 0.98.
3. Precisión:

Dentro de la corrida
Media (mg/dl) S.D. C.V.%
127 3.6 2.8
330 4.9 1.4

De corrida a corrida
Media (mg/dl) S.D. C.V.%
130 4.7 3.6
324 8.2 2.5

JUEGO DE REACTIVOS PARA TRIGLICERIDOS
GPO
Para la determinación cuantitativa de Triglicéridos en
suero o plasma.
INTRODUCCION
Los triglicéridos son esteres de los ácidos grasos y
son hidrolizados a glicerol y ácidos grasos libres. La
determinación de los triglicéridos cuando se realiza
junto con otros exámenes de lípidos es útil en el
diagnostico de hiperlipoproteinemia primaria y
secundaria. También son de interés para el
seguimiento de la diabetes mellitus, nefrosis,
obstrucción de las vías biliares y varias
anormalidades por disturbios endocrinos.
Los métodos estándar para la medición de las
concentraciones de triglicéridos a incluido tanto la
hidrólisis alcalina para la liberación de glicerol como
los enzimáticos. Nuestro exámen utiliza la hidrólisis
enzimática y cuantificación puesto que es especifica y
no está sujeta a interferencias por los fosfolipídicos.
PRINCIPIO
La reacción enzimática empleada en este exámen de
triglicéridos es el siguiente:
Lipasa
Triglicéridos ---------------- Glicerol más ácidos grasos
Glicerol kinasa
Glicero + ATP ---------------------------
glicerol-1-fosfato+ADP
Peroxidasa
Glicerol-1-fosfato+O2--------------------Cromógeno
Quinoimeimina
+2H2O2.
Este procedimiento incluye la hidrólisis de los
triglicéridos por la lipasa.
La concentración del glicerol se determina
enzimáticamente junto con la reacción de Trinder que
determina por su absorción a 520nm, y es
directamente proporcional a la concentración de los
triglicéridos de las muestras.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Cuando se reconstituye tal y como se orienta, el
triglicéridos contiene lo siguiente:
1. Reactivo de triglicéridos (Concentración referida
al reactivo reconstituido):ATP 3.3nM, Sales de
magnesio 3.0nM, 4 – Amino antipirina 0.7nM,
3.5-Dicloro-2-Hidrobenceno sulfato 0.8nM. Oxido
Glicerol-fosfato oxidasa 7000 U/L, ácida sódica
Juego de Reactivos para
Triglicéridos GPO
0.01%, glicerol kinasa 1000U/L, peroxidasa
10000 U/L, Buffer 50nM, pH 7.3.
2. Estándar de triglicéridos: Contiene glicerol con un
reductor de tensión superficial para mantener los
200mg/dl. De triglicéridos como trioleina.
Contiene ácida sodica 0.1% como preservativo.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para diagnostico “IN VITRO”
2. Evite la ingestión del reactivo pues su toxicidad
aún no ha sido determinada.
3. Las muestras deberán ser consideradas
infecciosas y se manipularán apropiadamente.
4. El reactivo y el estándar contienen azida sódica
como preservativo. Esto puede reaccionar en el
cobre o formar un compuesto explosivo con el
plomo. Al desecharse vierta buena cantidad de
agua para evitar la reconstitución de la azida
sódica.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Tanto el reactivo para triglicéridos como el estándar
deben almacenarse entre 2 – 8 C después de
reconstituirlos. El reactivo puede usarse hasta la
fecha de expiración indicada en el envase. Después
de reconstituido, el reactivo es estable por lo menos
durante 30 días se esta conservando entre 2 – 8C. y
siete días a temperatura ambiente. Debe protegerse
el reactivo de la luz.
DETERIORO DE LOS REACTIVOS
El reactivo deberá desecharse si:
de 1. El polvo seco aparece húmedo y tiene una
coloración oscura.
2. El reactivo no da linealidad establecida o no
recobra los valores establecidos.
Nota.- una coloración amarilla o rosada es normal
3. El reactivo reconstituido tiene una absorbancia
sobre 0.5 a 520nm.
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
1. Se recomienda el suero fresco, claro no
hemolizado de pacientes en ayuna.
2. Los triglicéridos en suero son estables por 3 días
conservados a una temperatura entre 2-8C.
3. No es recomendable mantener las muestras a
temperatura ambiente, pues otros compuestos
que contienen glicerol se hidrolizan, liberando
glicerol.
4. No deben usarse tubos para recolección de
muestras lubricados con glicerina.
INTERFERENCIAS Abs.(paciente) x Conc. del estándar = Conc. del
El glicerol de los tapones de goma o la cristalería paciente
contaminada elevarán los resultados de los Abs.(estándar) (mg/dl)
triglicéridos. Las muestras lipémicas o muy itéricas (mg/dl)
darán resultados falsamente elevados y por tanto
deberá usarse en estos casos un blanco muestra. Ejemplo: 0.24​ x 200 = 154.8 mg/dl
También las muestras muy hemolizados producirán 0.31
resultados falsamente elevados. Determinado
números de drogas y sustancias afectan las NOTA: ​Para obtener resultados en unidades del
mediciones de triglicéridos. sistema internacional (mmol/L) multiplique el
resultado en mg/dl por 10 para convertir dl. A litros y
MATERIALES PROVISTOS divida el resultado entre 885, o sea por el peso
1. Reactivo para triglicéridos. molecular de los triglicéridos como trioleína.
2. Estándar de triglicéridos de 200mg/dl.
Ejemplo: ​1.548 mg/dl. x 10 = 1.75 mmol/L
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO ​885
PROVISTOS
1. Espectrofotómetro capaz de media absorbancias CONTROL DE CALIDAD
en 520 nm. Se recomienda que se incluyan controles en cada
2. Pipetas de Precisión con los volúmenes tanda de exámenes. En el mercado se ofrecen
requeridos (1.0ml, 2.0ml, 0.01ml, 0.02ml). materiales de control con valores de triglicéridos
3. Incubador de temperatura constante entre 25 – establecidos. El valor del material de control debe ser
37 C. confirmado. Fallos al obtener un rango apropiado de
4. Reloj. valores del control puede significar deterioro del
5. Agua destilada. reactivo, mal funcionamiento instrumental o errores
de procedimiento.
INSTRUCIONES GENERALES
El reactivo para triglicéridos se usa tanto para RANGO DE VALORES
procedimientos manuales como automatizados en un Entre 36 y 165 mg/dl.
espectrofotómetro adecuado. Se recomienda mucho que cada laboratorio
establezca su propio rango normal.
PROCEDIMIENTO MANUAL
1. Reconstituya el reactivo para triglicéridos de CARACTERISTICAS PROPIAS
acuerdo a las instrucciones de la etiqueta. 1. Linealidad: 1000 mg/dl.
2. Rotule tubos: blanco, estándar, paciente, control, 2. Sensibilidad: basada en una resolución
etc. instrumental de A=0.001, éste procedimiento
3. Pipetee 1.0ml de reactivo a todos los tubos. tiene una sensibilidad de 064 mg/dl.
4. Coloque todos los tubos en incubación a 37 C. al 3. Comparación: se realizó un estudio comparativo
menos por 4 minutos. entre nuestro procedimiento y otro con 22 sueros
5. Agregue 0.01 ml (10ul) de muestra (tubo de humanos. Se obtuvo un coeficiente de
muestra) y mezcle correlación de 0.98 y una ecuación lineal de y=
6. Incube todos los tubos por 5 minutos a 37º 1.0x + 2.03
7. Ajuste el espectrofotómetro a cero con blanco de 4. Estudios de presición:
reactivo y en una longitud de onda de 520nm.
(Longitud de onda: 500 – 550 nm) Precisión dentro de la corrida: se utilizaron dos
8. Lea y anote las absorbancias de todos los tubos. controles comerciales y ensayados 15 veces se
obtuvo la siguiente precisión (N=15)
NOTA: El color final permanece estable durante 60
minutos. Valor (mg/dl) D.S. C.V.
84 4 4%
METODO ALTERNATIVO 200 8 4%
Para espectrofotómetros que requieran más de 1.0 ml
de reactivo agregue 0.02 ml (20ul) de muestra a 1.0 Precisión de día a día: se ensayaron dos sueros
ml de reactivo. Incube durante 10 minutos a 37 C. y comerciales durante 30 días y se obtuvo la
agregue 2.0ml de agua destilada a todos los tubos, siguiente Precisión (N=30)
inviértalos para que se mezclen y léalos
inmediatamente a 520nm. Valor (mg/dl) D.S. C.V.
82 3 3%
LIMITES DEL PROCEDIMIENTO 199 7 3%
El reactivo es lineal hasta 1000 mg/dl deben diluirse
con agua destilada, vueltos a procesar y los 5. Especificidad: este procedimiento mide los
resultados multiplicarlos por 2. triglicéridos totales que se encuentran en el suero
y también el glicerol libre presente en la muestra.
CALCULOS En el suero fresco la concentración del glicerol
Abs. absorción libre generalmente no excede los 1.0 mg/dl (9.6
mg/dl de triglicéridos).

JUEGO DE REACTIVOS PARA FOSFATASA
ALCALINA
Para la determinación cuantitativa de fosfatasa alcalina en
suero humano.
INTRODUCCION
Distribuida casi en cada tejido del cuerpo, los niveles de la
fosfatasa alcalina (FAL) en suero son de interés en el
diagnóstico de desordenes hepatobiliares y enfermedad de los
huesos. La mayor parte de FAL en suero normal de un adulto
viene del hígado o del tracto biliar. Los niveles normales de la
fosfatasa alcalina dependen de la edad, y los niveles son
elevados durante períodos de crecimiento activo de los huesos.
Aumentos moderados de FAL (indiferente al hígado o huesos)
puede ser atribuida a la enfermedad de Hodgkin, congestión de
corazón, e infecciones abdominales bacterianas. Los aumentos
también ocurren el en tercer trimestre del embarazo.
La Fosfatasa Alcalina se determina midiendo el porcentaje de
hidrólisis de varios esteres de fosfato. El fosfato p-Nitrofenil es
uno de los esteres que ha sido usado como sustrato por Fujita
en 1939. Bowers y McComb más adelante modificaron el
procedimiento hacia un ensayo cinético. En 1974, el Comité de
Enzimas de la Sociedad Escandinava para Química Clínica y
Fisiología clínica recomendó un procedimiento que era una
modificación del procedimiento mencionado. El método
presente es una modificación de los métodos de referencia del
comité mencionado y de la Asociación Americana para
Química Clínica.
PRINCIPIO
La secuencia enzimática empleada en el ensayo de Fosfatasa
Alcalina es la siguiente:
Fosf. Alcalina
p-Npp + H2O -------------------- > p-Nitrofenol + H3PO4
El p-Npp no tiene color pero el p-Nitrofenol tiene una fuerte
absorbancia a 405 nm. El porcentaje del aumento en la
absorbancia a 405 nm es proporcional a la actividad
enzimática.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Cuando se lo reconstituye como se debe, el reactivo para
Fosfatasa Alcalina contiene lo siguiente:
(Reactivo de Fosfatasa Alcalina): Fosfato de p-Nitrofenil 17
mM, Iones de Magnesio 4 mM, Buffer (pH 10.2 ± 0.2),
activador y fusionador.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para diagnóstico “In Vitro”.
PRECAUCION: Los reactivos para diagnóstico “In vitro”
pueden ser peligrosos.
2. Manipúlese de acuerdo a un buen procedimiento de
laboratorio que evite la ingestión y el contacto con ojos y
piel.
3. Las muestras de suero deben considerarse infecciosas y
deben manipularse adecuadamente.
4. Use el agua destilada o desionizada indicada.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacene el juego de reactivos de 2 – 8°C (refrigerado). El
reactivo reconstituido es estable por treinta (30) días cuando se
lo ha almacenado a 2 – 8°C y por veinticuatro (24) horas a
temperatura ambiente.
1. Almacénese el reactivo a temperatura ambiente (18 – 30°C).
DETERIORO DEL REACTIVO
El reactivo debe ser desechado si:
1. Ha ocurrido turbidez; la turbidez puede ser señal de
contaminación.
2. Ha penetrado humedad al frasco.
3. El reactivo reconstituido tiene una absorbancia contra el
agua mayor de 0.8 a 405 nm.
RECOLECCION DE LA MUESTRA
Se prefiere como muestra al suero no hemolizado. EL plasma
heparinizado también puede ser usado. El Oxalato, fluoruros, y
EDTA pueden inhibir la fosfatasa alcalina, por lo tanto no
deben ser usados como anticoagulantes. Las muestras deben
mantenerse frías y deben ser analizadas lo antes posible
después de su recolección. El tiempo de rutina para la
recolección de la muestra y para el análisis debe ser establecido
por cada laboratorio debido a que los niveles de FAL en el
suero o plasma, o en sueros de control reconstituidos,
aumentan significativamente cuando se los ha almacenado de 2
– 8°C o a temperatura ambiente.
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN
El EDTA, citratos, fluoruros y oxalatos inhiben la fosfatasa
alcalina. Young provee una lista de drogas y otras substancias
que interfieren con la determinación de la actividad de FAL.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROVISTOS
1. Pipetas de precisión.
2. Tubos de ensayo/ Porta tubos.
3. Reloj.
4. Espectrofotómetro con una cubeta de temperatura
controlada.
5. Baño María o bloque térmico.
INSTRUCCIONES GENERALES
El reactivo para Fosfatasa Alcalina puede usarse tanto en
métodos manuales como automatizados.
PROCEDIMIENTO MANUAL
1. Reconstituya el reactivo de acuerdo a las instrucciones. 7. Multiplique el Δ Abs./min por el factor 2720.
2. Pipetee 1.0 ml de reactivo en los tubos apropiados y deje 8. Las muestras con valores por encima de 800 IU/L deben
equilibrar a 37°C. ser diluidas a 1:1 con solución salina, re-analizadas y el
3. Ponga el espectrofotómetro a 0 con agua a 405 nm. resultado debe ser multiplicado por dos (2).
4. Transfiera 0.025 ml (25 ul) de muestra al reactivo. Mezcle
bien.
5. Después de un (1) minuto, mida la absorbancia. Devuela CALCULOS DEL PROCEDIMIENTO
el tubo a la temperatura de 37°C. Repita las lecturas cada Unidad: Cada unidad es la cantidad de enzima que cataliza la
minuto por los siguientes dos (2) minutos.* transformación de un micromol de sustrato por minuto bajo las
6. Calcule diferencia promedio de absorbancia por minuto. condiciones especificadas.
7. El Δ Abs./min multiplicado por el factor 2187 (Vease
Cálculos) lo llevará a los resultados en IU/L.
8. Las muestras con valores por encima de 800 IU/L deben
ser diluidas en 1:1 con solución salina, deben ser
re-analizados y los resultados deben ser multiplicados por
dos (2). Donde:
Δ Abs./min = Cambio de absorbancia por minuto
Nota​: Si el espectrofotómetro a usarse está equipado con una 1000 = Conversión de IU/ml a IU/L.
cubeta de temperatura controlada, la mezcla de la reacción TV = Volumen de la reacción total (0.510 ml.)
puede ser dejada en la cubeta mientras se toman las lecturas de 1 cm = Paso de la luz en centímetros.
las absorbancias. 18.75 = Absorción mili molar del p-Nitrofenol.
SV = Volumen de la muestra (0.025 ml.)
VOLUMENES Ejemplo: A1 = 0.56, A2 = 0.60
Si el espectrofotómetro a usarse puede leer con precisión el Entonces: (0.60 – 0.56) = 0.04 x 2720 = 108.8 IU/L
volumen final de 0.50 ml o volúmenes menores, siga el
“PROCEDIMIENTO ALTERNATIVO” NOTA: Si los parámetros de la prueba son alterados, el factor
debe ser re calculado usando la fórmula descrita.
Unidad: Una unidad es la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de una micromol de substrato por minuto bajo UNIDADES SI: Para convertir a unidades SI (nkat/L)
las condiciones especificadas. multiplique IU/L por 16.67.

IU/L = ​Δ Abs./min. x 1000 x TV = ​Δ Abs./min. x 1000 x

1.025 LIMITES DEL PROCEDIMIENTO
є x LP x SV 18.75 x 1 x Esta metodología mide la Fosfatasa Alcalina total ya sea de
0.025 origen del tejido u orgánico. Se deben realizar otras pruebas
que ayuden a una diferenciación en el diagnóstico.
= ​Δ Abs./min x 2187
CONTROL DE CALIDAD
Donde: Se recomienda incluir controles en cada juego de ensayos.
Δ Abs./min = Cambio de absorbancia por minuto Pueden ser usados el material de controles disponibles en el
1000 = Conversión de IU/ml a IU/L. mercado con valores establecidos de Fosfatasa Alcalina. El
TV = Volumen de la reacción total (1.025 ml.) volumen asignado del material de control debe ser con/L, por
є = Absorción mili molar de p-Nitrofenol la aplicación escogida. Un fracaso al obtener un rango
(18.75) apropiado de valores en el ensayo del material de control puede
LP = Paso de la luz en centímetros (1.0 cm) indicar ya sea deterioro del reactivo, mal funcionamiento del
SV = Volumen de la muestra (0.01 ml.) instrumento, o errores del procedimiento.
Ejemplo: Si el Δ Abs./min. = 0.007 entonces 0.007 x 15.3
IU/L. VALORES ESPERADOS
Adultos 25 – 90 IU/L a 37°C. Los niños tienen un valor normal
NOTA: Si los parámetros de la prueba son alterados el factor más alto. Se recomienda mucho que cada laboratorio
debe ser recalculado usando la fórmula descrita. establezca su propio rango normal.

UNIDADES SI: Para convertir a unidades SI (nkat/L) CARACTERISTICAS DE LA PRUEBA

multiplique IU/L por 16.67. 1. Linearidad: 900 IU/L.
2. Comparación: De un estudio realizado entre el
PROCEDIMIENTO ALTERNATIVO procedimiento presente y un producto comercial resultó
1. Reconstituya el reactivo de acuerdo a las instrucciones. una correlación de coeficiente de 0.99 con una regresión
2. Pipetee 0.50 ml (500 μL) de reactivo en tubos apropiados de y = 0.95x + 3.50.
y deje equilibrar a 37°C. 3. Estudios de precisión.
3. Ponga a cero el espectrofotómetro con agua a 450 nm.
4. Añada 0.010 ml (10 μL) de la muestra al reactivo, mezcle
bien. Dentro de la corrida
5. Después de un (1) minuto, mida la absorbancia. Devuelva Promedio IU/L S.D. C.V.
el tubo a los 37°C. Repita las lecturas cada minuto por los 76.1 2.1 2.7%
siguientes dos (2) minutos. 331.3 15.4 4.6%
6. Calcule a diferencia promedio de las absorbancias por
minuto (Δ Abs./min.). De corrida a corrida
Promedio IU/L S.D. C.V.
75.3 5.1 6.7%
328.6 11.26 3.4%

JUEGO DE REACTIVOS PARA TGO
Para determinación cuantitativa de aspartato
aminotransferasa (AST) en suero.
INTRODUCCIÓN
La aspartato aminotransferasa, conocida también como
transaminaza glutáminico axalacética (TGO) es una
enzima tisular que cataliza el intercambio de los grupos
amino y keto en alfa aminoácidos y alfa-keto ácidos. La
TGO está ampliamente distribuida en los tejidos,
principalmente en el cardíaco, hepático, músculos y
riñones. El deterioro de los tejidos, dan como resultado la
salida de ésta enzima a la circulación general.
Después de infarto al miocardio, los niveles séricos de
TGO se elevan y alcanzan un pico máximo entre las 48 y
60 horas posteriores. Las enfermedades hepatobiliares,
tales como la cirrosis, carcimona metástico y la hepatitis
viral también incrementan los niveles de TGO.
La primera prueba cinética de TGO para propósitos
diagnósticos fue descrita por Karmen y Col. en 1955
utilizando una reacción de malato deshidrogenasa (MDH)
Y NADH. Este sistema de prueba fue evaluado y
optimizado en 1960 por Henry y Col. en 1977 la
federación internacional de Química Clínica recomendó
un procedimiento de referencia para la medición de la
AST, (TGO), basado en el procedimiento de Karmen,
este reactivo emplea la formulación recomendada por la
FIQC.
PRINCIPIOS
La reacción enzimática empleada en este exámen de
aspartato aminotransferasa es la siguiente:
AST
1. Aspartato + 2-Oxaglutarato ----> Oxalacetato +
L-glutamato.
2. El reactivo reconstituido es estable por 8 horas a
temperatura ambiente y por 21 días cuando es
refrigerado inmediatamente.
DETERIORO DEL REACTIVO
El reactivo debe desecharse si:
1. Si la absorbancia inicial, leída contra agua a 340nm
es inferior a 0.800.
2. Falla el reactivo para obtenerse los parámetros
establecidos.
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
Este exámen es para realizarse con suero. Los informes
indican AST en suero permanece estable a 4C. por un
mínimo de 7 días. Muestras no hemolizadas no deberán
ser usadas ya que los eritrocitos contienen quince veces
más actividad de AST que el suero.
Juego de Reactivos para
Aspartato Aminotransferasa
(T.G.O.)
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN
El fosfato de peroxidal puede elevar los valores de AST al
activar la apoenzima formada de la transaminaza. El fosfato
de piroxidal se haya en el agua contaminada con crecimiento
bacteriano altos niveles de piruvato pueden interferir también
en el exámen. Young y Col, dan una lista de medicamentos y
otras drogas que interfieren en la determinación de la
actividad de la AST. (TGO).
MATERIALES REQUERIDOS Y NO PROVISTOS
1. Pipetas de presición.
2. Portatubos
3. Reloj
4. Espectrofotómetro con capacidad de lectura de 340 nm
(UV)
5. Baño maría o bloque de calentamiento a 37C.
Oxalacetato + NADH +H ------> L-Malato + NADH + H2O
La AST cataliza la transferencia de un grupo amino entre
L-Aspartato y 2-Oxaglutarato. El Oxalacetato formada en
primera reacción reacciona entonces con el NADH en
presencia de la Malato deshidrogenasa (MDH) para formar
NAD. La actividad de la AST se determina midiendo el rango
de oxidación del NADH a 340nM. Se incluye en el reactivo la
Lactato deshidrogenasa para convertir el piruvato endógeno
de la muestra en lactato durante la fase anterior a la
medición.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Cuando se reconstituye según indicaciones, el reactivo para
AST contiene lo siguiente: (la concentración se refiere al
reactivo reconstituido)
2-Oxaglutarato 12nM, L-Aspartato ácido 200nM, NADH
0.19nM, LDH 800U/L, MDH 600 U/L Buffer 100nM, pH 7.8 (+
o -) 0.1 preservativos no reactivantes.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para diagnostico “In Vitro”.
Precaución: Los reactivos para diagnostico in vitro
pueden ser dañinos, manipúlese de acuerdo con
procedimientos de laboratorios adecuados entre lo que
se debe considerar el evitar la ingestión y el contacto
con los ojos y mucosas.
2. Las muestras deben considerarse infecciosas y deben
manipularse debidamente.
3. Use agua destilada o desionizada cuando se indique.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
1. Mantengase en refrigeración entre 2 – 8 C.
INSTRUCCIONES GENERALES
El reactivo para AST está concebido para métodos tanto De corrida a corrida
manuales como automatizados. Valor (UI/L) D.S. C.V.
21.9 2.3 4.8%
PROCEDIMIENTO MANUAL 83.8 3.6 4.4%
1. Reconstituya el reactivo de acuerdo a las
indicaciones. FACTOR DE CONVERSIÓN DE TEMPERATURA (FT)
2. Pipetee 1.0ml de reactivo en un tubo o cubeta de Ensayo ​_ Ft 25 C.Ft 30C. Ft32C. Ft37C
1cm y permita que se equilibre a 37C. 25 C. 1.00 1.37
3. Agregue 0.10ml (100UL) de suero al reactivo y 1.57 1.96
mézclelo bien. 30 C. 0.78 1.00
4. Incúbese a 37C después de 60 Seg. Mida la 1.13 1.43
absorbancia a 340nm. 32 C. 0.65 0.89
5. Tome dos lecturas adicionales de absorbancia en un 1.00 1.27
intervalo de un minuto. Calcule el cambio de 37 C. 0.51 0.70
absorbancia por minuto. 0.73 1.00
6. Lea la absorbancia pasado 60seg. de la primera
lectura. Reste a la absorbancia inicial la segunda Ejemplo: Si la reacción se realizó a 30C. pero se va a
absorbancia obtenida y multipliquese por el factor reportar a 37C, simplemente multiplique el resultado obtenido
1768 para obtener UI/L de actividad de la ALAT. a 30C. por el factor 1.43 para obtener el valor corregido.
7. Muestras con valores de 500 UI/L deben de diluirse
en proporción 1:1 con solución salina y deben ser Nota: puesto que los factores de temperatura solamente
procesadas nuevamente, y el resultado multiplicarlo ofrecen una conversión aproximada, se sugiere que los
por 2. valores sean reportados en la temperatura en que se realizó
la reacción.
NOTAS DE PROCEDIMIENTO
La turbidez o ictericos elevados pueden dar resultados
cuyas absorbancias iniciales excedan la capacidad del
espectrofotómetro utilizando. En esos casos utilice 0.10
ml (100 ul) de muestra en un volumen de 3.0 ml de
reactivo multiplique el resultado por 2.

CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda incluir controles en cada corrida de
muestras. Pueden utilizarse controles comerciales con
valores conocidos de ALAT. El valor teórico del control
debe confirmarse por el método de cálculo de ésta
técnica. Fallos al obtener el rango de valores adecuados
en el control sistemático puede hablar a favor de
deterioro del reactivo, mal funcionamiento instrumental o
errores de técnica.

VALORES ESPERADOS
Hasta 28 UI/L a 30C.
Hasta 40 UI/L a 37C.
Es muy recomendable que cada laboratorio establezca su
propio rango normal.

CARACTERISTICA DE LA PRUEBA
1. Linearidad: hasta 500 UI/L.
2. Comparación: un estudio de comparación entre este
método y otro similar realizado con 25 sueros frescos
con valores entre 12UI/L, arrojaron un coeficiente de
0.98 y una ecuación de regresión de Y = 1.04 x –
1.25.
3. Sensibilidad: realizada en una resolución
instrumental de A = 0-001, dio una sensibilidad de 2
UI/L.
4. Estudios de la Presición:

Dentro de la corrida
Valor (UI/L) D.S. C.V.
22.3 1.1 4.8%
88.1 5.1 5.7%
Precisión de corrida a corrida (reductibilidad): se ensayaron
dos sueros controles comerciales que fueron analizados por
cinco días consecutivos (realizados por triplicado), se obtuvo
la siguiente precisión:

JUEGO DE REACTIVOS PARA PROTEÍNAS TOTALES
Para la Determinación cuantitativa de la concentración en
suero de proteínas totales.
INTRODUCCIÓN
Por medio de la presión osmótica, las proteínas séricas
mantienen la distribución normal del agua entre la sangre
y los tejidos. Las diversas fracciones de las proteínas
varían independientemente y ampliamente en los
procesos patológicos. Las proteínas bajas son causadas
principalmente por la mala nutrición, mala síntesis,
perdidas (por hemorragias), o catabolismo excesivo de las
proteínas. Los niveles elevados de proteínas son
principalmente causados por la deshidratación.
La determinación de las proteínas totales en suero por
medio de la reacción del color Biuret se utiliza desde
1978. En el pasado se dificulto estabilizar los iones
cúpricos en medios alcalinos con la adición de tartrato
sódico potásico. El presente método para la determinación
cuantitativa de las proteínas totales en suero se basa en el
método propuesto por la asociación americana de química
clínica (AACC) y el comité nacional de patronos para
laboratorios clínicos (NCCLS).
PRINCIPIOS
La reacción enzimática secuencial en el desarrollo de las
proteínas totales es la siguiente:
PH
Proteína + CU
CU-complejo proteína
Alcalino
Las proteínas séricas forman un complejo coloreado azúl
cuando reaccionan con los iones cúpricos en medio
alcalino. La intensidad del color violeta es proporcional a
la concentración de proteína conocida.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
El reactivo para proteínas totales contiene lo siguiente:
Hidróxido de sodio 600 nM, sulfato de cobre 12nM, tartrato
sódico potásico 32 nM, Yoduro de potasio 30M e
ingredientes no reactivos.
Estándar de proteínas totales; Albúmina bóvina Fr. Con
preservativo en concentración de 5.0 g/dl.
MATERIALES
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES. PROVISTOS
1. Solo para uso en diagnostico in vitro. 1.
PRECAUCIÓN: los reactivo para diagnostico in vitro 2.
puede ser dañinos. Manipúlese de acuerdo a un 3.
buen procedimiento de laboratorio de laboratorio y 4.
evítese la ingestión y el contacto con piel y ojos.
2. Las muestras deben considerarse infecciosas y INTRUCCIONES GENERALES
manipuladas adecuadamente.
3. Evite la ingestión. No lo pipetee con la boca.
Juego de Reactivos para
Proteínas Totales (Biuret)
4. El reactivo contiene hidróxido de sodio el
cual es corrosivo. En caso de contacto con la piel
enjuague con abundante agua, y si hay contacto con
los ojos busque atención médica.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacene el reactivo a temperatura ambiente (18-25
C).
Almacene el patrón en refrigeración.
DETERIORO DEL REACTIVO
El reactivo debe desecharse si:
Presenta turbidez o presencia de un precipitado negro
indica deterioro y no debe utilizarse. El reactivo debe
ser claro en una solución azul claro.
RECOLECCIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Las muestras deben ser suero libre de
hemólisis.
2. Hemólisis pronunciada provocarán niveles
elevados de proteína tanto por el aporte de la
hemoglobina como por el aumento de color.
3. Los sueros lipémicos pueden dar resultados
altos y deberán realizarse con blanco de muestra.
♦ Agregue 3.0 ml de salina al 0.9% en un tubo.
♦ Agregue 0.05ml (50ul) de muestra.
♦ Ajuste el espectrofotómetro a cero con salina al
0.9%.
♦ Lea y anote la absorbancia del blanco de
muestra.
♦ Reste la absorbancia del blanco a la
absorbancia del examen.
♦ Calcúlese de costumbre.
4. Muestras de suero con Bromosulftaleína
darán falsos resultados elevados. Las proteínas del
suero son estables por una semana a temperatura
ambiente (18 – 25 C) y por lo menos un mes en
refrigeración (2 – 8 C. si se evita la evaporación.
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN
Young y colaboradores revisaron determinados
números de drogas y sustancias que puede afectar la
concentración de las proteínas.
REQUERIDOS PERO NO
Pipetas de precisión.
Reloj.
Portatubos.
Espectofotómetro.
 El reactivo para proteínas totales se utiliza tanto paraCARACTERISTICAS DEL EXÁMEN
un método automatizado como para el método 1. Linealidad; de 1.0 a 15 gr/dl.
manual con espectrofotómetro. 2. Comparación: UN estudio de comparación
desarrollado entre este y otro basado en el miasma
PROCEDIMIENTO MANUAL principia dio como resultado un coeficiente de
1. Rotule tubos: blanco, estándar, controles, pacientes, correlación de 0.95 con una ecuación de regresión
etc. de Y=0.86 + 1.02.
2. Pipetee 3.0 ml de reactivo a cada tubo. 3. Estudios de la presición:
3. Agregue 0.05ml (50ul) de estándar y de paciente a
los tubos respectivos y mézclelos por inversión. DENTRO DE LA CORRIDA
4. Deje incubar a temperatura ambiente por 10 minutos. Valor(gr/dl) D.S. C.V.%
5. Ajuste el espectrofotómetro a cero con blanco de 6.8 0.12 1.8
reactivo y a 540 nm. 3.7 0.08 2.1
6. Lea y anote las absorbancias de cada tubo.
DE CORRIDA A CORRIDA
NOTA: Valor(gr/dl) D.S. C.V.%
1. El color final es estable por 60 minutos a temperatura 6.8 0.17 2.4
ambiente. 3.7 0.14 3.7
2. Los sueros con valores por encima de 60 gr/dl.
deben diluirse en 1:1 con 0.9% de salina y vueltos
analizar y los valores multiplicarlos por 2.
3. Volúmenes alternativos: se puede utilizar 20ul de
muestra y 1.0 ml de reactivo. calcúlese de la misma
manera.

LIMITES DE PROCEDIMIENTO
El reactivo es lineal hasta 15.0 gr/dl.
1. Muestre con valores por encima de los 15 gr/dl
deben diluirse en 1:1 con salina y vueltos analizar,
los valores multiplicarlos por 2.
2. El método de Biuret no es sensible en el rango
menor de 1 gr/dl no lo utilice para orina o líquido
cefalorraquídeo.

CALCULOS

Abs. de la muestra x conc. del estd. = proteínas totales

Abs. del estándar.

Ejemplo:

Absorbancia de la muestra = 0.350

Absorbancia del estándar = 0.400
Concentración del estándar = 5.0gr/dl

0.350 x 5 = 4.37 gr/dl.

0.400

CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda que se incluyan controles en cada corrida
de exámenes. Pueden utilizarse controles comerciales de
valores conocidos para el control de calidad. El valor de
los controles debe confirmarse con éste método. Si falla
al obtenerse el rango debido de valores eso indica
deterioro del reactivo, mal funcionamiento instrumental o
errores de técnica.

VALORES ESPERADOS
De 6.2 a 8.6 gr/dl.
1. Los efectos de la postura cuando se extrae la sangre
varia con el individuo pero los valores en posición
decúbito usualmente son inferiores a los otros en
diferencia de hasta 1.2 gr/dl.
2. Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango normal.
JUEGO DE REACTIVOS PARA ALBUMINA
Para la determinación cuantitativa de la concentración de
albúmina en suero.
INTRODUCCION
La albúmina es la más abundante de las proteínas
constituyentes del suero. Se sintetiza en el hígado y se
caracteriza por su habilidad para cambiar su configuración.
Esta afinidad esférica permite a la molécula de albúmina
servir como portador de muchas sustancias tales como
bilirrubina, ácidos grasos, varias drogas, así como
antibióticos. La albúmina también realiza funciones de
mantener la presión osmótica.
Los niveles elevados de albúmina se asocian a la
deshidratación. Los niveles bajos de albúmina son
indicadores potenciales de mala nutrición, enfermedad
hepática, desordenes renales y artritis reumatoidea.
Los antiguos métodos de funcionamiento para la
determinación de albúmina sérica eran muy laboriosos y
han sido remplazados por métodos de desarrollo de color.
El uso del verde debromocresol en la reacción se ha
convertido en el método preferido por su alta especificidad
por la albúmina y no es interferido por la hemólisis, la
bilirrubina y los salicilatos.
PRINCIPIO
La albúmina sérica se combina selectivamente al verde de
bromocresol a un pH de 4.2. El aumento de absorbancia del
complejo de color resultante, leído a 630 nm, es
proporcional a la concentración de albúmina.
COMPOSICION DEL REACTIVO
1. Verde bromocresol (BCG) 0.25 mM, buffer pH 4.0 más
o menos 0.1, ingredientes no reactivos y estabilizadores.
2. Estándar: Fracción V de albúmina bovina con
estabilizador.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para diagnóstico “In Vitro”.
PRECAUCION: Los reactivos para diagnóstico “In
vitro” pueden ser peligrosos.
Manipúlese de acuerdo a un buen procedimiento de
laboratorio que evite la ingestión y el contacto con ojos y
piel.
El reactivo es una solución ácida. Enjuague con
abundante agua si existe el contacto.
2. Las muestras de suero deben considerarse infecciosas y
deben manipularse adecuadamente.
3. Evite la ingestión.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
1. Almacénese el reactivo a temperatura ambiente (18 –
30°C).
2. Refrigérese el estándar de albúmina. (2 – 8°C).
DETERIORO DEL REACTIVO
El reactivo debe ser claro, de color verde amarillento. Si ha
ocurrido turbidez o precipitación, debe desecharse.
RECOLECCION DE LA MUESTRA
1. Las muestras deben ser sueros y libres de hemólisis.
2. Evite la hemólisis excesiva, pues 100 mg/dl de
hemoglobina equivalen a 100 mg/dl de albúmina.
3. La albúmina en el suero es estable por una semana a
temperatura ambiente (18 – 30°C) y aproximadamente
un mes cuando se refrigera entre 2 y 8°C protegido de la
evaporación.
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN
La ampicilina y otros medicamentos afectan seriamente las
propiedades de desarrollo de color de la albúmina. También
se recomienda que solo se utilicen estándares y controles de
albúmina humana con este procedimiento. Las propiedades
de desarrollar color de las albúminas de diferentes especias
varían mucho.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO
PROVISTOS
1. Pipetas de precisión.
2. Porta tubos.
3. Reloj.
4. Espectrofotómetro.
INSTRUCCIONES GENERALES
El reactivo para albúmina puede usarse tanto en métodos
manuales como automatizados.
PROCEDIMIENTO MANUAL
1. Rotule tubos: Blanco, estándar, control, pacientes, etc.
2. Pipetee 1.5 ml de reactivo a cada tubo.
3. Agregue 0.01 ml (10 ul) de muestra a los tubos
respectivos, mezcle, y déjelos a una temperatura
ambiente durante 5 min.
4. Ajuste a cero el espectrofotómetro con el blanco a 630
nm. (Rango de Longitud de onda)
5. Lea y anote las absorbancias de todos los tubos.
● VOLUMENES ALTERNATIVOS: 0.02 ml de
muestra a 3.0 ml de reactivo.
● SE PUEDE USAR CALIBRADOR TC-MULTI
PROPOSITO PARA REMPLAZAR AL
ESTÁNDAR
LIMITES DEL PROCEDIMIENTO
1. Las propiedades de generar color de la albúmina, otra
que no sea humana, difiere entre las especies.
2. Las muestras con valores por encima de 8.0 g/dl deben
diluirse con salina 0.9% en dilución 1:1 y multiplicar los
 resultados por dos. Muestras con resultados por debajo
de 0.5 g/dl deben realizarse electroforéticamente.
3. Los sueros severamente lipémicos deben realizarse con
blanco de muestra.
A. Agregue 0.02 ml (20 ul) de muestra a 3.0 ml de
agua destilada y lea la absorbancia contra el agua
destilada a 630 nm.
B. Reste la absorbancia del blanco de suero del test de
absorbancia y use la absorbancia corregida para los
cálculos.

CALCULOS
Abs.= Absorbancia

Abs. de la muestra x Conc. del estándar = Albúmina en

g/dl
Abs. del estándar

Ejemplo: Si la absorbancia de la muestra = 0.455 y la

absorbancia del estándar es 0.705 y la concentración del
Estándar = 5.0, tendremos:

0.455 x 5.0 = 3.23 g/dl

0.705
E CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda que se incluyan controles en cada corrida de
muestras. Se pueden utilizar patrones comerciales con
valores conocidos. El valor consignado del control debe
confirmarse con el método utilizado. Si falla la obtención
de rango de valores en el desarrollo del examen habrán
indicios de deterioro del reactivo, fallo instrumental, o
procedimiento de técnica indebido.

VALORES ESPERADOS
Entre 3.5 – 5.3 g/dl

Se recomienda mucho que cada laboratorio establezca su

propio rango normal.

CARACTERISTICAS
1. Linealidad: De 0.5 – 8.0 g/dl.
2. Sensibilidad: Basada en una resolución instrumental de
A=0.001 el método presente tiene una sensibilidad de
0.005 g/dl.
3. Comparación: Un estudio comparativo entre éste método
y otro similar arrojó un coeficiente de correlación de 0.99
con una regresión de y= 0.96 + 0.1.

Precisión:

Dentro de la corrida
(repetibilidad)
Valor (mg/dl) D.S. C.V.%
3.3 0.07 2.1
2.7 0.07 2.4

De corrida a corrida
Valor (mg/dl) D.S. C.V.%
3.3 0.06 1.8
2.7 0.08 2.9