Efecto de varias citoquininas en la micropropagación de

Arbutus × andrachnoides

Enlace

K.F. Bertsouklis y M. Papafotiou

Laboratorio de Floricultura y Paisajismo

Departamento de Ciencias de Cultivos

Universidad Agrícola de Atenas

Iera Odos 75, 118 55 Atenas

Grecia

Palabras clave: aclimatación, Ericaceae, in vitro, planta nativa, enraizamiento, multiplicación de

brotes,zeatina

Resumen

Arbutus × andrachnoides Link. (A. unedo × A. andrachne) es uno de los dos híbridos entre especies
del género Arbutus que se encuentran en la zona de la Macchia mediterránea.

Se trata de un arbusto perenne tolerante a la sequía o de un pequeño árbol con un follaje verde
oscuro brillante y una corteza de color canela que se divide en tiras que revelan el interior verdoso.
La planta es particularmente atractiva durante el período invernal, cuando se fructifica con
pequeños frutos,

frutas rojas-anaranjadas similares a las fresas. Estas características confieren al Arbutus ×

andrachnoides el potencial de ser introducido para su uso en el paisaje urbano y suburbano, así
como para la reforestación a medida que rebrota después de un incendio. En este estudio se
investigó la micropropagación de la planta. Para la iniciación del cultivo in vitro, se utilizaron
segmentos del tallo nodal como explantes extraídos en mayo de plantas adultas cultivadas en
estado silvestre cerca de Kalamos (Attiki, Grecia). Los explantes se cultivaron en sales medias de
plantas leñosas sólidas (agar de 8 g/l) con 3% de sacarosa, 100 mg/l de mio-inositol, 1 mg/l de
tiamina, 0.5 mg/l de ácido nicotínico y 0.5 mg/l de piridoxina (WPM), complementadas con 2.5 mg/l
de benciladenina.

(BA), kinetina (KIN), 2-isopentenil adenina (2iP) o zeatina (ΖΕΑΤ). El 70% de los explantes cultivados
en el medio ZEAT produjeron brotes, mientras que los de las otras citoquininas produjeron brotes
en porcentajes inferiores al 50%, con un mínimo del 25% en KIN. El número de brotes producidos
por explante no se vio afectado por el tipo de citoquinina, pero la longitud del brote y el número de
nudos por brote fueron de dos a tres veces mayores en ZEAT en comparación con BA y 2iP, mientras
que en KIN los brotes no se alargaron. En la subcultura, la ZEAT fue mucho más efectiva para la
multiplicación de brotes que la 2iP, lo que da una tasa de multiplicación cuatro veces mayor,
mientras que los medios complementados con BA o KIN no produjeron ningún brote. Por lo tanto,
la ZEAT demostró ser la citoquinina más efectiva para el inicio del cultivo y la multiplicación de A. ×
andracnoides. 95% de los microbrotes enraizados in vitro sobre WPM(medio de cultivo de plantas
leñosas) con 1 mg/L IBA (acido indolbutirico familia de las auxinas)y el 80% de las microplantas se
establecieron con éxito ex vitro en 1 perlita:1 compost para plantas ericáceas
(v/v).

INTRODUCCIÓN

El género Arbutus pertenece a la subfamilia Vaccinioideae (o Arbutoideae,según el autor), que

incluye taxones leñosos de arbustos perennes con forma de laurel. y hojas esclerófilas de la familia
Ericaceae (Torres et al., 2002). Hay 12-20 spp. según el autor, en los territorios americanos, mientras
que en el Mediterráneo En la zona de la Macchia sólo hay cuatro especies y dos híbridos: Arbutus
unedo L., A. andrachne L. (región del Mediterráneo oriental) A. pavarii Pampanini (costa de Libia),
A. canariensis Veill. (Islas Canarias), Α × andrachnoides Link. (A. unedo × A. andrachne en la región
del Mediterráneo oriental) y A. × androsterilis Salas, Acebes

y Arco (A. unedo × A. canariensis, en las Islas Canarias) (Torres et al., 2002).

En Grecia se encontraron A. unedo y A. andrachne (fresa y oriental,griego o chipriota,

respectivamente), así como su híbrido Α. × andracnoides. Algunas plantas con flores rojas (var.
rubra) se reportan como follaje menor. (The European Garden Flora, 1997).

Α. × andrachnoides es un arbusto de hoja perenne tolerante a la sequía o un pequeño árbol con un

aspecto brillante. follaje verde oscuro y una corteza de color rojo canela que se divide en tiras que
revelan el color verdoso interior. La planta es particularmente atractiva durante el período invernal,
cuando se fructifica con pequeñas, como fresas, de color naranja-rojo. Estas características le dan a
Αrbutus × andrachnoides el potencial para ser introducido para su uso en el paisaje urbano y
suburbano, así como para la reforestación a medida que rebrota después de un incendio.

Α. × andrachnoides está incluida en una lista de especies vegetales protegidas en Croacia (Baricevic
et al., 2002). Se informa (desconocido, 2003) que una pareja de Α × andracnoides se encuentran en
algunas islas croatas y son un poco misteriosos, ya que sólo uno de ellos la especie de los padres (A.
unedo) crece de forma silvestre en Croacia. Algunos botánicos yugoslavos consideran que el
yugoslavo A. andrachne es, de hecho, Α. × andrachnoides Link. (Bačic et al., 1992).

La micropropagación es un método sugerido para la propagación de especies raras. Informes sobre

la micropropagación de Α × andrachnoides, aunque hay informes sobre la micropropagación de su
especie parental A. andrachne (Bertsouklis y Papafotiou, 2009).

y A. unedo (Gonçalves y Roseiro, 1994; Mereti y otros, 2002; Gomes y Canhoto, 2009).

El propósito de este estudio fue desarrollar un protocolo eficiente para la propagación in vitro de
Α × andrachnoides, como primer paso para su introducción como planta ornamental.
MATERIALES Y MÉTODOS

Para la iniciación del cultivo in vitro, se utilizaron segmentos del tallo nodal como explantes,
extirpados finales de mayo a partir del crecimiento joven de una planta adulta que crece en estado
silvestre cerca de Kalamos (Attiki, Grecia). Después de la escisión, todos los explantes se lavaron
bien con un grifo de agua corriente. agua. Los explantes fueron esterilizados en la superficie con
30% (v/v) de blanqueador comercial (4.6% w/v hipoclorito de sodio) con 0,1% de Tween 20, durante
10 min, seguido de cuatro enjuagues de 3 min. con agua destilada estéril y sus bases recortadas
antes de colocarlas verticalmente en tubos de ensayo (25×100 mm, un explante por tubo) con un
medio de 10 ml. Los tubos de ensayo estaban cubiertos con película plástica transparente.

El medio de cultivo consistía en el medio de la planta leñosa (WPM) sales basales (McCown y Lloyd,
1981), 100 mg/L de mio-inositol, vitaminas Mullin (1 mg/L) Tiamina, 0.5 mg/L de ácido nicotínico y
0.5 mg/L de piridoxina) (Mullin et al., 1974), 3%. (p/v) sacarosa y 0,8% (p/v) agar. El efecto de 4
citoquininas a 2.5 mg/L cada una fue en comparación: benciladenina (BA), kinetina (KIN), 2-
isopentenil adenina (2iP) o zeatina (ΖΕΑΤ).

Los explantes de 0,8-1,0 cm de largo, que incluían 1-2 yemas, se extirparon de toda la longitud de
los brotes jóvenes, excluyendo la punta del brote. Se utilizaron 48 explantes por tratamiento.
Después de 45 días en cultivo, se registraron los datos evaluando brotes de más de 3 mm, y se realizó
un subcultivo utilizando los medios del cultivo inicial.

Para los subcultivos subsiguientes, el mismo tipo de explantes mencionado anteriormente se

transfirió a recipientes Sigma de 100 ml cubiertos por tapas Magenta B (Sigma-Aldrich Inc.). Se
utilizaron dieciséis explantes, repetidos 4 veces por tratamiento. Los microproyectos se basaron en
WPM con IBA de 1 mg/L.

Los cultivos se incubaron a 25°C, fotoperíodo de 16 h bajo 37,5 μmol m-2 s-1 luz fluorescente. El pH
del medio se ajustó a 5,6-5,7 antes de esterilizar en autoclave a 121°C durante 20 min. Para la
aclimatación ex vitro se transfirieron microbrotes bien enraizados a recipientes de plástico
transparente de 500 ml, que contenían 1 parte de perlita y 1 parte de compost (v/v). para plantas
Ericaceous (Max, Ericaceous Compost, Klanmann-Deilmann, GmbH, Geeste, Alemania), inicialmente
recubiertas de película transparente, bajo la niebla, en enero, con fotoperíodo de 16 horas (luz
natural de día extendida con luz incandescente). Se utilizó el diseño completamente aleatorio. La
importancia de los resultados fue probada por ANOVA y los medios fueron comparados por la t de
Student a P=0.05.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El setenta por ciento de los explantes puestos en cultivo en mayo en el medio con 2.5 mg/L ZEAT
produjo brotes alargados, mientras que los de las otras citoquininas produjeron brotes con
porcentajes inferiores al 50%, con un mínimo del 25% en el medio con215 2.5 mg/L KIN (Fig. 1a). La
longitud de los brotes fue mayor (1,9 cm) con ZEAT, en comparación con medios con BA, KIN o 2iP
(0,8, 0,3 o 0,7, respectivamente) (Figs. 1b y 2).

En los materiales con KIN o 2iP sólo se produjo un brote por explante, mientras que en los materiales
con ZEAT o BA, la producción fue de 1,3 o 1,4, respectivamente (Fig. 1c). La ZEAT fue muy efectiva
en el número de nodos producidos por brote (11,4 nodos por explosión), mientras que en los medios
con BA, KIN o 2iP por sesión fueron sólo 3,8, 1,0 y 2,6, respectivamente (Fig. 1d).

En la subcultura, la ZEAT fue mucho más efectiva para la multiplicación de brotes que la 2iP (Figs. 1
y 3) dando un índice de multiplicación 5 veces mayor (formación de brotes (%) × media) número de
brotes × longitud media de brotes) (Fig. 4), mientras que los medios complementados con BA o KIN

no produjo ningún brote. Por lo tanto, la ZEAT a 2.5 mg/L demostró ser la más efectiva citoquinina
para el inicio del cultivo y la multiplicación de A. × andrachnoides. Resultados similares sobre la
eficacia de varias citoquininas en la producción de brotes. reportado para A. andrachne (Bertsouklis
y Papafotiou, 2009). Se ha informado de que en las plantas de la familia Ericaceae, los compuestos
naturales zeatina y iP son más eficaces que el otras citoquininas para la proliferación de brotes
(George et al., 2008). Ostrolucká y otros (2002) estudió la influencia de la zeatina en la propagación
microclonal del Vaccinium corymbosum (Ericaceae) y reportó que la capacidad de regeneración de
los brotes depende en gran medida del cultivar y tipo y concentración de citoquinina.

El enraizamiento es esencial para el éxito de la micropropagación. Sin un sistema radicular eficaz, la

aclimatación de las plantas será difícil y la tasa de propagación de las plantas puede verse
gravemente afectada (Gonçalves et al., 1998). Noventa y cinco de los microbrotes fueron enraizados
in vitro en WPM con 1 mg/L IBA y el 80% de las microplantas establecidas con éxito ex vitro en 1
perlita:1 compost para plantas ericáceas (v/v). Enraizamiento in vitro y ex vitro fueron similares a
las de A. andrachne (Bertsouklis y Papafotiou, 2009). Del mismo modo, las plántulas de A. unedo
obtenidas in vitro se aclimataron fácilmente (Gonçalves y Roseiro, 1994; Mereti et al., 2002; Gomes
y Canhoto, 2009) y lo mismo es cierto para otros miembros de la familia de las Ericaceae, como
varias especies de Vaccinium (Isutsa et al. al., 1994).

Se continúa el estudio para comparar las vías de cultivo in vitro. de estos atractivos miembros del
género Arbutus encontrados en Grecia.
Fig. 1. Efecto de varias citoquininas a 2.5 mg/L en (a) formación de brotes (%), (b) longitud del brote,
(c) número de brotes y (d) número de nudos por brote. Comparación media con la t de Student,
P=0.05
Fig. 2. Cultivo inicial de nódulos en WPM con 2.5 mg/L BA, KIN, ZEAT o 2iP.

Fig. 3. Subcultivo en WPM con 2.5 mg/L ZEAT y 2iP.

Fig. 4. Efecto de varias citoquininas a una concentración de 2.5 mg/L en la tasa de multiplicación
(formación de brotes (%) x número medio de brotes × longitud media de los mismos).