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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES

ESCUELA DE INGENIERIA FORESTAL

PRACTICAS N° 07

TITULO : “OBSERVACION MICROSCOPICA DE HONGOS EN MEDIOS DE

CULTIVO”

CURSO : PATOLOGIA FORESTAL

DOCENTE : ing. ARTURO MACEDO BARDALES

ALUMNOS : RUIZ SOTO HENRY

IQUITOS-PERU

2018
 INTRODUCCION

Luego de realizar los medios de cultivo y hacer el sembrío respectivo de órganos

de plantas en tales cultivos, se procede a la observación microscópica de los
hongos que se desarrollaron en los medios de cultivos. Sabiendo que estos
hongos presentan diferentes características microscópicas, las que sirven para
determinar e identificar a cada especie. Presentan diferentes colores, formas,
tamaños de hifas, micelio, esporas, etc., las cuales desarrollan mejor en su
respectivo medio de cultivo.

Realizar estas observaciones acerca de su estructura y características facilita al

investigador a resolver más fácilmente los problemas fitopatológicos que se
presentan en las plantaciones forestales. El conocimiento de estos ayuda a
comprender mejor a cada una de las especies de hongos que intervienen en la
formación de signos y síntomas de enfermedades de especies forestales y de
las plantas en general. La práctica titulada “Observación Microscópica De
Hongos En Medios De Cultivo”, la misma que se realizó en las instalaciones de
la facultad de ciencias forestales – Prto. Almendras.

MARCO TEORICO

HONGOS

Grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se alimentan

mediante la absorción directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven mediante
enzimas que secretan los hongos; después se absorben a través de la fina pared
de la célula y se distribuyen por difusión simple en el protoplasma. Junto con las
bacterias, los hongos son los causantes de la putrefacción y descomposición de
toda la materia orgánica. Hay hongos en cualquier parte en que existan otras formas
de vida. Algunos son parásitos de organismos vivos y producen graves
enfermedades en plantas y animales. La disciplina científica que estudia los hongos
se llama micología.

ESTRUCTURA

La mayoría de los hongos están constituidos por finas fibras que contienen
protoplasma, llamadas hifas. Éstas a menudo están divididas por tabiques llamados
septos. En cada hifa hay uno o dos núcleos y el protoplasma se mueve a través de
un diminuto poro que ostenta el centro de cada septo. No obstante, hay un filo de
hongos, que se asemejan a algas, cuyas hifas generalmente no tienen septos y los
numerosos núcleos están esparcidos por todo el protoplasma. Las hifas crecen por
alargamiento de las puntas y también por ramificación. La proliferación de hifas,
resultante de este crecimiento, se llama micelio. Cuando el micelio se desarrolla
puede llegar a formar grandes cuerpos fructíferos, tales como las setas y los pedos
o cuescos de lobo. Otros tipos de enormes estructuras de hifas permiten a algunos
hongos sobrevivir en condiciones difíciles o ampliar sus fuentes nutricionales. Las
fibras, a modo de cuerdas, del micelio de la armilaria color de miel (Armilaria mellea),
facilitan la propagación de esta especie de un árbol a otro. Ciertos hongos forman
masas de micelio resistentes, con forma más o menos esférica, llamadas
esclerocios. Éstos pueden ser pequeños como granos de arena, o grandes como
melones.

MICOSIS

Enfermedades producidas por la invasión de micro micetos, en los tejidos, es

decir las infecciones causadas por hongos.

HIFAS

son elementos filamentosos cilíndricos característicos de la mayoría de los hongos.

Están constituidos por una fila de células alargadas envueltas por la pared celular
que, reunidas, forman el micelio poseen un tubo de longitud variable formado por
una pared celular rígida, en la que fluye protoplasma. En los hongos verdaderos
(reino Fungí) la pared está hecha de quitina. Las células de la hifa pueden formar
un citoplasma continuo (un sincitio), en cuyo caso se habla también de hifas
sifonales (hongos inferiores), o aparecer separadas por tabiques o septos (hongos
superiores), y entonces diremos que son hifas septadas.

LEVADURA:

Las levaduras se han definido como hongos microscópicos, unicelulares, la mayoría

se multiplican por gemación y algunas por escisión. Históricamente, los estudios
sobre microbiología enológica se han centrado en las levaduras pertenecientes al
género Saccharomyces, que son las responsables de la fermentación alcohólica.
Las levaduras son los agentes de la fermentación y se encuentran naturalmente en
la superficie de las plantas, el suelo es su principal hábitat.

•MICELIO:

Sistema de hifas que constituye el talo de un hongo. Conjunto o masa de hifas que
constituyen el cuerpo de un hongo. Es la fase vegetativa, perenne e hipogea del
hongo. Talo de los hongos formado por células sin clorofilallamadas hifas.

•MICROCONIDIAS:
Esporas unicelulares, sin septas, hialinas, elipsoidales acilíndricas, rectas o
curvadas; se forman sobre fiálides laterales, cortas, simples o sobre conidióforos
poco ramificados. Las microconidias tienen 5-12micras de largo por 2.5-3.5 micras
de ancho.

•HONGO FILAMENTOSO:

Son Hongos Pluricelulares, formados por estructuras tubulares denominadas Hifas;

las que se desarrollan, ramifican y entrelazan conformando una estructura llamada
micelio. Producen colonias algodonosas o pulverulentas que son muy
características. Al microscopio óptico, los hongos filamentosos presentan unas
estructuras tubulares, formadas por múltiples células, que se denominan hifas.

•HONGO LEVADURIFORME:

Producen colonias lisas que recuerdan a las bacterianas en medios de cultivo

sólidos. Dichas colonias están formadas por agregados de células individuales
denominadas levaduras

•HONGO DIMORFICO:

Algunos hongos y especialmente, las especies patógenas, muestran dimorfismo, es

decir, dos formas de crecimiento. Estos hongos pueden crecer como moho o como
levadura. A menudo, este dimorfismo depende de la temperatura de incubación: a
37ºC el hongo es levaduriforme mientras que a 25ºC es filamentoso.

•TUBO GERMINAL:

Un tubo germinal se define como una extensión filamentosa de una célula

levaduriforme sin estrechamiento en su origen, cuyo ancho suele ser la mitad de la
célula progenitora y su longitud tres o cuatro veces mayor que la célula madre.

MEDIOS DE CULTIVO
La mayoría de los hongos son nutricionalmente poco exigentes y desarrollan en
medios sencillos que contengan medios sencillos que contengan hidratos de
carbono como fuente de carbono (glucosa, maltosa, sacarosa, almidón, celulosa),
sales de nitrógeno inorgánico o peptonas, como fuente de nitrógeno y pequeñas
cantidades de oligoelementos (Fe, Mg, P, K Zn,Cu, Mn y Mo).
Hay tres tipos generales de medios de cultivo para hongos:
1. Medios Naturales: Trozos o infusiones de frutas, vegetales, granos de cereales
o tejidos animales. Varían mucho en su composición y no son reproducibles.
Tampoco son de amplio uso.

2. Medios Semisintéticos: Extractos de plantas, peptonas, agar y otros

compuestos son de amplio uso.
3. Medios Sintéticos: Composición química definida. Tal vez el más conocido y
utilizado de estos medios es el Agar Sabouraud cuya descripción se realiza a
continuación.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Esta técnica se utiliza para detectar el tipo de forma reproductiva (esporas),

observando al microscopio: forma, tamaño, agrupamiento, color, etc. También se
describirán las características de las hifas: presencia o ausencia de tabiques,
grosor, hifas en raqueta, hifas en espiral.
Tal observación puede realizarse a partir de los cultivos en placa, mediante una lupa
o con el objetivo seco débil del microscopio, empezando desde el fondo hasta la
parte superior de la colonia. Luego se hacen observaciones posteriores tomando,
con un gancho, una pequeña muestra del micelio en desarrollo, la que se coloca en
una gota de lactofenol (Fenol cristalizado, 20g; Ácido láctico, 20g; Glicerina, 40g;
Azul cotton, 0,05g o Tinta Parker diluida al 40%, Agua destilada c.s.p. 20 ml.) u otro
líquido de montaje (lugol, azul de metileno) que colorea las estructuras y favorece
el contraste. El preparado se observa en microscopio óptico con aumento de 10x y
40x. Una manipulación de este tipo rompe y desorganiza las estructuras del
organismo, pues la disposición característica de la que depende la identificación se
pierde y no es posible clasificarlo, por ello el método recomendado por examinar los
hongos es la técnica de cultivo en portaobjetos o microcultivo, ya que permite
manejar y observar la especie sin modificar su desarrollo, y el arreglo y acomodo de
sus partes permanecen intactas.
CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS
Las características microscópicas observadas a partir de una suspensión en agua
o solución fisiológica de la levadura en estudio, preparado directo, o tinciones
ordinarias usadas para bacterias (por ejemplo, Gram) puede describirse la
morfología de las células y también puede observarse la presencia de elementos en
gemación. Estas tinciones enmascaran el contenido celular que puede evidenciarse
por coloraciones específicas como, por ejemplo: hematoxilina férrica (observación
del núcleo), sudán III (glóbulos de grasa), rojo neutro (gránulos metacromáticos y
vacuolas), azul de metileno (nucleoproteínas), IK (gránulos de almidón y
glucógeno). Se utiliza la tinción negativa, realizada con tinta china para la
visualización de elementos capsulados, resulta de particular importancia en la
identificación de un hongo levaduriforme de importancia clínica denominado
Criptococcus neoformans. Una prueba de utilidad es el tubo germintivo, que es una
extensión filamentosa de la levadura, si estrechamiento en su origen, cuyo ancho
suele ser lamida dela célula progenitora y su longitud tres o cuatro veces mayor que
la célula madre.
Prueba de tubo germinativo: es una determinación de gran utilidad en el laboratorio
clínico para la identificación de Cándida albicans, una levadura que produce más
del 75% de las infecciones causadas por hongos. Esta levadura cultivada en suero
produce al cabo de 3 hs una protuberancia denominada tubo germinativo.
OBJETIVOS.

- Conocer las características microscópicas que presentan los hongos

en un medio de cultivo
- Conocer las características microscópicas de los hongos en un medio
de cultivo

MATERIALES.

- Microscopio binocular
- Placas petric con el sembrío respectivo.
- Guía de practica
- Laminas portaobjetos
- Laminas cubre objetos
- Reactivos
- Muestras de cepas de hongos
- Guantes
- Mascarilla
- Mandil
- Fosforo
- Azul de metileno
- Mechero de alcohol

METODOS.

OBSERVACION MICROSCOPICA

Se procede a sacar una muestra de la colonia de hongos de la placa Petri, con la

ayuda del aza bacteriológica.

Se coloca una gota de azul de metileno en la lámina porta objeto.

Se coloca la muestra de hongo en la gota de metileno, se cubre con la muestra con

la lámina cubre objeto. Se procede a observar las muestras des laminas en el
microscopio.

- En una lámina porta objeto colocar una gota de azul de algodón o

metileno, con la ayuda de un gotero

- Con la ayuda de un asa bacteriológica se extrae una pequeña muestra

del hongo en estudio de la placa Petri y se lo coloca en la lámina
portaobjeto, diseminándolo en la gota de azul de algodón o metileno.
- Se cubre luego la gota con una lámina cubre objeto

- Se observa al microscopio con objetivo de 10 X

- Se ubica la parte de interés y se observa la muestra con objetivo de

40 X y se anota las características que presenta:

a) Color de la Hifa:
 Transparente (se presenta de color azul
 Marrón

b) Segmentación de la Hifa:
 Septada (segmentada)
 No septada (lisa)

c) Tipo de Espora.

d) Forma de la Espora:
 Redonda
 Elíptica
 Oval
 Lisa
 Estrellada, etc.

e) Color de la Espora:
 Blanco
 Marrón
 Amarillo
 Negro
 Verde, etc.

f) Cantidad de esporas:
 Abundante
 Escaso
g) Otras características.
Al término de la práctica se deberá lavar las láminas y demás materiales y secarlas.

RESULTADO Y DISCUSIONES

Solo se observaron en el microscopio dos tipos de hongos fusonium enfermedad

chupadera fungosa
 RECOMENDACIÓN

Mayor orden a la hora de utilizar los materiales.