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Indirect Immunofluorescence / IF

1. Prepare tissue or culture cells


2. Prepare tissue section or cells coverlip
3. Wash samples two times with PBS
4. Fix amples with 4% paraformaldehye in PBS for 15 min at room temperature(Note: Paraformaldehye is toxic,
use only in fume hood)
5. Aspirate fixative, rinse two times in PBS for 5 min each
6. Permeabilize samples with 0.1-0.5% triton x-100 in PBS for 10 min(Note: Permeabilization is only required
when the antibody needs access to the inside of the cells to detect the protein. These include intracellular proteins
and transmembrane proteins whose epitopes are in the cytoplasmic region.
7. Aspirate triton x-100, rinse two times in PBS for 5 min each
8. Incubate samplels in 10% normal goat serum in PBS for 30 min at room temperature
9. Aspirate goat serum, incubate sections with primary antibody at appropriate dilution in PBS overnight at 4°C
or 1 hour at 37°C(optimal condition should be confirmed in different laboratory)
10. Rinse three times in PBS for 5 min each
11. Incubate samplels with fluorochrome-conjugated secondary antibody at appropriate dilution in PBS for 1
hour at 37°C in dark(optimal condition should be confirmed in different l aboratory)
12. Rinse three times in PBS for 5 min each in dark
13. Incubate samples with 1 μg/ml DAPI
14. Mount samples with a drop of mounting medium

Immunofluorescence indirecte / IF

1. Préparer des cellules de tissu ou de culture


2. Préparer une lamelle de tissu ou des cellules
3. Laver les échantillons deux fois avec du PBS
4. Fixer les exemples avec 4% de paraformaldehye dans du PBS pendant 15 min à température ambiante
(Remarque: Paraformaldehye est toxique, utilisez-le uniquement dans une hotte aspirante).
5. Aspirer le fixatif, rincer deux fois dans du PBS pendant 5 min chaque
6. Perméabiliser les échantillons contenant 0,1-0,5% de triton x-100 dans du PBS pendant 10 min (Remarque: la
perméabilisation n'est nécessaire que lorsque l'anticorps doit pouvoir accéder à l'intérieur des cellules pour
détecter la protéine, notamment les protéines intracellulaires et les protéines transmembranaires dont les épitopes
sont dans la région cytoplasmique.
7. Aspirer le triton x-100, rincer deux fois dans du PBS pendant 5 min chaque
8. Incuber les échantillons dans du sérum de chèvre normal à 10% dans du PBS pendant 30 min à température
ambiante
9. Aspirer le sérum de chèvre, incuber les coupes avec l'anticorps primaire à une dilution appropriée dans du
PBS pendant une nuit à 4 ° C ou 1 heure à 37 ° C (les conditions optimales doivent être confirmées par différents
laboratoires)
10. Rincer trois fois dans du PBS pendant 5 min chacun
11. Incuber les échantillons avec l'anticorps secondaire conjugué au fluorochrome à une dilution appropriée dans
du PBS pendant 1 heure à 37 ° C dans l'obscurité (la condition optimale doit être confirmée à différents
endroits).
12. Rincer trois fois dans du PBS pendant 5 min à l’obscurité
13. Incuber les échantillons avec 1 μg / ml de DAPI
14. Monter les échantillons avec une goutte de milieu de montage

Direct Immunofluorescence / IF

1. Prepare tissue or culture cells


2. Prepare tissue section or cells coverlip
3. Wash samples two times with PBS
4. Fix amples with 4% paraformaldehye in PBS for 15 min at room temperature(Note: Paraformaldehye is toxic,
use only in fume hood)
5. Aspirate fixative, rinse two times in PBS for 5 min each
6. Permeabilize samples with 0.1-0.5% triton x-100 in PBS for 10 min(Note: Permeabilization is only required
when the antibody needs access to the inside of the cells to detect the protein. These include intracellular proteins
and transmembrane proteins whose epitopes are in the cytoplasmic region.
7. Aspirate triton x-100, rinse two times in PBS for 5 min each
8. Incubate samplels in 10% normal goat serum in PBS for 30 min at room temperature
9. Aspirate goat serum, incubate sections with fluorochrome- conjugated primary antibody at appropriate
dilution in PBS overnight at 4°C or 1 hour at 37°C(optimal condition should be confirmed in different
laboratory)
10. Rinse three times in PBS for 5 min each in dark
11. Incubate samples with 1 μg/ml DAPI
12. Mount samples with a drop of mounting medium

Immunofluorescence directe / IF

1. Préparer des cellules de tissu ou de culture


2. Préparer une lamelle de tissu ou des cellules
3. Laver les échantillons deux fois avec du PBS
4. Fixer les exemples avec 4% de paraformaldehye dans du PBS pendant 15 min à température ambiante
(Remarque: Paraformaldehye est toxique, utilisez-le uniquement dans une hotte aspirante).
5. Aspirer le fixatif, rincer deux fois dans du PBS pendant 5 min chaque
6. Perméabiliser les échantillons contenant 0,1-0,5% de triton x-100 dans du PBS pendant 10 min (Remarque: la
perméabilisation n'est nécessaire que lorsque l'anticorps doit pouvoir accéder à l'intérieur des cellules pour
détecter la protéine, notamment les protéines intracellulaires et les protéines transmembranaires dont les épitopes
sont dans la région cytoplasmique.
7. Aspirer le triton x-100, rincer deux fois dans du PBS pendant 5 min chaque
8. Incuber les échantillons dans du sérum de chèvre normal à 10% dans du PBS pendant 30 min à température
ambiante
9. Aspirer le sérum de chèvre, incuber les coupes avec un anticorps primaire conjugué au fluorochrome à une
dilution appropriée dans du PBS pendant une nuit à 4 ° C ou 1 heure à 37 ° C (les conditions optimales doivent
être confirmées par différents laboratoires)
10. Rincer trois fois dans du PBS pendant 5 min à l’obscurité
11. Incuber les échantillons avec 1 μg / ml de DAPI
12. Monter les échantillons avec une goutte de milieu de montage