BREVE HISTORIA of Enzymology

El Período Temprano
Enzimología es una ciencia de origen relativamente reciente, sin embargo el ritmo al que
se está expandiendo es un poco sorprendente. Procedentes de las ciencias básicas como la
química,
la física y la biología, ahora se ha convertido en una ciencia independiente y ha tocado
casi todas las ramas incluyendo los más recientes Ciencias Aplicadas incluidos
la biotecnología, el diagnóstico y la tecnología de fermentación.
El estudio de la historia y el desarrollo de la enzimología hace una interesante
leyendo. Varios científicos de áreas aparentemente no relacionadas han desarrollado
genio
enfoques e ideas que han contribuido en gran medida a nuestra actual comprensión
Del sujeto.
La breve revisión de la obra de diferentes científicos que han ayudado en
la comprensión de las diversas facetas de lo que las enzimas son, cómo funcionan y su
explotación comercial se discute aquí.
La mayoría de los autores modernos aceptan que el origen de la enzimología se remonta a
principios
19 ª siglo. Dubrunfaut en 1830 preparó un extracto de malta de cebada en germinación
semillas. Este extracto tenía el poder para formar el azúcar de almidón.
A Payen y J .F.Persoz en 1833 encontró que un precipitado alcohol de la malta
extracto contenía una sustancia lábil termo que convierte el almidón en azúcar. Ellos
nombrado como diastasa de la palabra diastasis, lo que significa separación. Se separó
dextrinas solubles de los sobres insolubles de granos de almidón.
En 1836, durante la investigación de los procesos digestivos, el fisiólogo alemán Theodor
Schwann aisló una sustancia responsable de la digestión en el estómago albuminosa
Theodor Schwann fue el fundador de la teoría moderna de la histología, la definición de
la
célula como la unidad básica de la estructura animal. En el momento en que era un
asistente en la
Anatomisch-Zootonischen Institut de Berlín. Tres años más tarde se convirtió en profesor
de anatomía en la Universidad Católica de Lovaina, en 1848 profesor de fisiología
y anatomía comparada en Lieja, y en 1880 se retiró de la enseñanza.
Berzillius JJ en 1837 postuló la naturaleza catalítica de la fermentación. en 1839
el eminente químico alemán Jutus von Liebig desarrolló una explicación mecanicista de
el papel de la levadura en el proceso de fermentación. Él veía la levadura presente en el
mezcla de fermentación como una cuestión de descomposición que emitía ciertas
vibraciones, la
átomos de azúcar sufren un desplazamiento; se reordenan de tal manera que se forme
alcohol un .. 'dióxido 1.d carbono.
Por otro lado, la fermentación alcohólica se considera un ser espontáneo
reacción hasta 1858, cuando el' químico y biólogo francés Louis Pasteur demostró en una
serie de publicaciones que la fermentación se produce sólo en presencia de células vivas -
una
fenómeno correlacionado con la vida - un acto fisiológico, como él la llamaba. Esta
divergencia en
la comprensión de la naturaleza de la levadura en el proceso de fermentación causada
climatizada
debate entre Liebig y Pasteur.
En el año 1877, FWKuhne acuñó el término enzima y los distinguía
a partir de bacterias. Mientras que en el año 1893, Ostwald demostró que las enzimas son
catalizadores.
Emil Fischer en 1894 demostró la especificidad de las enzimas y propuso la cerradura
y la hipótesis clave. Fue un brillante intento de explicar el mecanismo de la enzima
acción.
El año 1897 vio a los aportes de Bertrand, que acuñaron término-
"Coenzima", mientras que H. Buchner y E. Buchner mostraron que los extractos libres de
células de levadura puede
fermentar los azúcares, para formar dióxido de carbono y etanol.
Durante estos primeros años, muchos científicos encontraron similitud entre la acción de
enzimas y la de la levadura en fermentaciones. Las enzimas fueron así nombrados como
fermentos, una
nombre que es todavía en uso en Alemania.
Louis Pasteur: (1822-1895) Su escolarización hasta Ph.D tuvo lugar en París después de
lo cual
se convirtió en profesor adjunto en Química por Strasborough en 1849. Desarrolló
Las vacunas contra el ántrax anclrabies. El Instituto Pasteur fue inaugurado por los
franceses
Gobierno en 1888 para el tratamiento de casos de rabia. También es conocido por la
pasteurización
proceso que ahora es utilizado de forma rutinaria en la conservación de la leche y de los
vinos.
Murió en el año 1895.
Pasteur durante su trabajo en la fermentación se desarrolló una creencia firme de que los
procesos
como fermentación eran inseparables de células. Sólo las células intactas tenían el poder
para llevar
acerca de tales procesos. Los puntos de vista no fueron aceptadas por la otra escuela de
científicos
dirigido por J.Liebig, que sostenían que los procesos de fermentación y la respiración se
debieron a
la acción de los productos químicos. El uso de los términos como fermentos organizados y
no organizados
fermentos se hizo para denotar Las células y los extractos libres de células,
respectivamente.
Liebig murió en 1873 y Pasteur en 1895, sin el debate se llegó a la conclusión.
Posteriormente, sin embargo, los químicos alemanes Eduard Buchner y Hans Buchner
descubierto en 1897 que un extracto libre de células de la levadura podría causar la
fermentación alcohólica.
El antiguo rompecabezas fue resuelto; la célula de levadura produce la enzima, y la enzima
y Eduard Buchner, quien demostró que el extracto de levadura libre de células podría
convertir la glucosa
en etanol y dióxido de carbono al igual que las células de levadura viables. En otras
palabras, la conversión
no era atribuible a las células de levadura como tal, sino a sus enzimas no viables.
20 ª Siglo
En el año 1902, Emil Fischer y Hofmeister demostraron que las proteínas son
Polipéptidos.
[Fischer fue el primero en determinar las estructuras moleculares de glucosa (o de uva
azúcar) y fructosa y sintetizarlos a partir de glicerol en 1890.]
El año 1905 vio algunas de las contribuciones más interesantes, Knoop deduce Beta
ácidos offatty oxidación, mientras que Harden y joven mostraron el requisito de fosfato en
la fermentación alcohólica y aislado el primero coenzima, cozymase ahora conocidos como
NAD.
S. Sorenson en 1909, mostró el efecto del pH sobre la acción de la enzima. Él ideó una
escala de pH,
que es ahora universalmente aceptado y utilizado.
Batelli y Stern en 1912, descubrieron deshidrogenasas, en el mismo año, Carl
Neuberg propuso una ruta química para la fermentación mientras Warburg postuló la
enzima respiratoria para la activación de oxígeno, mostró el requisito de hierro en
la respiración y la inhibición de cianuro demostrado.
Wieland (1912-1922) mostró la activación de hidrógeno en deshidrogenación
Reacciones.
la cinética de enzimas fundamentales se remonta a 1903. En ese momento Victor Henri
concluyó en París que una enzima se combina con su sustrato para formar una enzima
complejo sustrato como un paso esencial en la catálisis enzimática. Sobre la base de esta
idea, el
general de la teoría de la acción de la enzima se expresa matemáticamente por Leonor
Michaelis de
Alemania y Maud Lenora Menten de Canadá en 1913. Se postuló que la enzima
E primero combina con su sustrato S para formar un ES complejo enzima-sustrato en una
relativamente rápida reacción reversible: E + S = ES. El último complejo se descompone en
una
segundo, la reacción más lenta reversible para producir el producto de reacción P y la
enzima libre:
ES = P + E.
En el año 1922, Otto Warburg ideó métodos Mano métricas para estudiar
metabolismo de las células vivas. Briggs y Haldane en 1925, hicieron mejoras importantes
en
la teoría de Michaelis Menten y.
Theodore Svedberg [1925-1930] contribuyó al desarrollo de ultracentrífuga
y su uso para estimar el peso molecular de la hemoglobina.
J Ames Sumner [1926] cristales primera obtenidos de una enzima, la ureasa de canavalia
y lo demostró ser una proteína.
James Sumner: James Batcheller Sumner nació el 19 de noviembre 1887 en Cantón.
Se graduó de la Universidad de Harvard en 1910 en Química. Estudió Bioquímica
con el Prof. Otto Folin [1912-1914] en la que obtuvo su Ph.D. Se unió a Cornell
Escuela de Medicina en 1914 y permaneció allí hasta 1929.He cristalizó ureasa, la
primera enzima que se va a cristalizar, en el año 1926. Recibió el Premio Nobel en 1946.
Murió el 12 de agosto 1955 el cáncer.
el trabajo de investigación de Sumner en Cornell centra en primer lugar en los métodos de
análisis, pero a pesar de
su trabajo duro que no pudo obtener ningún resultado interesantes. Entonces decidio sino
un tipo de investigación adecuado para su aparato escasa y personal de laboratorio magro.
En
en particular, trabajó con la ureasa. se da Su método para el aislamiento de la enzima
aún más en el libro.
-
Durante muchos años su trabajo no tuvo éxito, pero a pesar del desánimo
de colegas que dudoso que una enzima jamás se pudo aislar en forma pura se
continuado. En 1921, cuando su investigación estaba todavía en sus primeras etapas, que
había sido concedida
una beca americana-belga y decidió ir a Bruselas para trabajar con Jean Effront,
quien había escrito varios libros sobre las enzimas.
El plan fracasó, sin embargo, porque pensó Effront idea de Sumner de aislar
ureasa era ridícula. De vuelta en Ithaca, reanudó su trabajo hasta que finalmente, en 1926,
se
tenido éxito. Su aislamiento y la cristalización de la ureasa se reunieron con una respuesta
mixta; era
ignorado o no creyeron por la mayoría de los bioquímicos, pero le trajo una cátedra
completa en
1929 y el Premio Nobel de Química en 1946.
En el mismo año, K. Linderstr0m-Lang investigado muchas e importantes detallada
propiedades químicas de proteínas en el Laboratorio Carlsberg en Copenhague. el 1924
publicación de la ionización de proteínas establece un formalismo básico para la
producción de
Enzimas La teoría de Lang sigue siendo la primera aproximación y permanece en uso
durante muchos
problemas en los que la estructura molecular no se conoce. Warburg en 1928-1933
deducido
el hierro - porfirina naturaleza de la enzima respiratoria. Alrededor del mismo período de
aislamiento
y cristalización de la tripsina y pepsina hecho por John Northrop, quien también resultó
su naturaleza proteica.
John Northrop: John Howard Northrop nació en Nueva York el 5 º julio de 1891. Se
entró en la Universidad de Columbia en 1908 para estudiar Zoología y Química, se graduó
en
1912, Maestría en Artes en 1913 y recibió un Ph.D. en Química en 1915. Se unió
el Instituto Rockefeller en 1915, donde permaneció hasta 1949, cuando estaba
nombrado Profesor de Bacteriología, Universidad de California, y más tarde como profesor
de Biofísica. Se aisló la pepsina cristalina en 1929 y con la misma técnica
aislados otras proteasas. Murió en 1987.
Warburg y Christian descubrieron la "enzima amarilla" una proteína flavo. 1933 fue
un año más, que vio enzimología creciendo a pasos agigantados. Estos fueron el
días en que las vías metabólicas fueron elaborados, descubrimientos y contribuciones
importantes
fueron realizados por HAKrebs & Kurt Hanseleit [descubrimiento del ciclo de la urea],
G.Embden y
Otto Meyerhoff [intermedios de la glucólisis y la fermentación propuesto.] En la misma
años Tiselius introdujo electroforesis para la separación de proteínas en solución. H.Krebs
en 1937 postulado el ciclo del ácido cítrico mientras que las reacciones de transaminación
se estudiaron en
el año 1938 por Kritzman et.al
George Beadle y Edward Tatum en 1940 propusieron el gen - una enzima
hipótesis. C.Cori y F.Cori en 1941 dilucidado el ciclo de Cori para el ácido láctico. El
siguiente
año, 1942, D.Mac limpia y IMRowlands descubrieron hialuronidasa de mamíferos
espermatozoides. Chance en 1943, aplicado técnicas espectroscópicas sensibles, a la
enzima -
Interacciones sustrato. En el mismo año Leloir y Munoz demostraron oxidación de ácidos
grasos
en sistemas libres de células, mientras que Lehninger mostró la estequiometría de
oxidación de ácidos grasos
y el requisito de ATP para ello.
1950-1960: Esta década fue el comienzo de un período de oro para el desarrollo
de enzimología, las contribuciones de varios científicos en los campos de coenzimas,
metabólicas técnicas bioquímicas etc. fueron hechos por muchos trabajadores inteligentes
y vale la pena mencionar
son nombres que incluyen, Linus Pauling, Richard Corey, [a- hélice y beta plisada
estructuras de las proteínas], Zamecnik et al [ribonucleoproteínas y la síntesis de
proteínas]
Horecker, Dickens y Racker [dilucidado la vía phoshogluconate] Krebs y
Kornberg HL [descubierto derivación glioxalato] mientras Arthur Kornberg descubrió
DNA
Polimerasa.
1960 - 1970: La estructura 3D de la proteína mioglobina fue descrito por John
cachalote C Kendrew.from, mientras que la secuencia de aminoácidos de la ribonucleasa
era
determinado por W.Moore y S.Stein. La estructura 3-D de la lisozima fue presentado por
Phillips et.al mientras Temin, Dulbecco y Baltimore dilucidado transcripción inversa en
1970. Werner Arber introdujo de corte de ADN por enzimas. El primer gran avance
para las enzimas microbianas en la industria alimentaria llegó a principios de 1960 con el
lanzamiento de
aglucoamylase oftransglucosidase libre. Se permitió que el almidón que se descompone en
glucosa.
Desde entonces, casi toda la producción de glucosa ha cambiado de hidrólisis ácida
tradicional
a la hidrólisis enzimática. A modo de ejemplo, en comparación con el proceso de ácido de
edad la
proceso de licuefacción enzimática a reducir los costos de vapor en un 30%, ceniza de un
50% y subproductos
por 90%.
Desde 1973, cuando Termamyl se introdujo para el almidón continuo
proceso de licuefacción, la industria de procesamiento de almidón se ha convertido en el
mercado más grande
para las enzimas después de la industria de los detergentes. En una solución concentrada
de almidón, la hidrólisis
resultados en la reducción de la viscosidad rápido. Termamyl es, por consiguiente refiere a
menudo como la
licuefacción de amilasa.
La hidrólisis enzimática se utiliza para formar jarabes través de licuefacción, sacarificación
y los pasos de isomerización. 1974 vio el lanzamiento de la glucosa isomerasa
inmovilizada
Sweetzyme, señalando de esta forma otro avance éxito en la industria del almidón.
Sweetzyme es una de las pocas enzimas a ser producido por fermentación continua.
Vester años: la tecnología del ADN recombinante ha dado lugar a una revolución en
el desarrollo de nuevas enzimas.
.
A pesar de los avances recientes han sido más en el campo de la recombinante
la tecnología del ADN, o la biotecnología, enzimología ha estado haciendo su contribución
en su
desarrollo. Algunos de los temas importantes que han atraído la atención de la
comunidad científica incluyen enzimas de restricción [Hamilton Smith, Daniel Nathans]
Las ribozimas [Sidney Altman & Thomas Cech en 1982] de reacción en cadena de
polimerasa [Kary
Mullis en 1985].
En 1995, la introducción de técnicas más sofisticadas permitió al equipo
modelado científicos Novozymes para combinar el conocimiento molecular de la enzima
3D
estructuras con conocimiento de la secuencia de ADN y los utilizan juntos como la base
para hacer
nuevas variantes a través de sitio-dirigidas ingeniería de proteínas. El primer producto
para el cual
mutagénesis dirigida se utilizó fue la enzima estable frente al blanqueador Everlase ™.
Las enzimas se han dado otras propiedades útiles utilizando esta técnica, por ejemplo,
mejoró
estabilidad, una mayor actividad a bajas temperaturas y la reducción de la dependencia de
los cofactores calentar
tales como el calcio. Un ejemplo es Termamyl SC para la industria del almidón y de
biocombustibles. En
A finales de los años 90 un considerable esfuerzo se invirtió en el desarrollo de una nueva
expresión de hongos
sistema para la producción a gran escala de enzimas. En 2000 se le dio el Novozymes
luz verde de las autoridades reguladoras para producir enzimas en Fusarium venenatum
tiene Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis como sus principales huéspedes bacterianos
y Aspergillus
niger y Aspergillus oryzae, junto con Fusarium venenatum, como su principal hongos
producción de enzimas.
El futuro de la Enzimología
Como se puede observar, con el aumento de los enfoques interdisciplinarios y
la comprensión de que ahora se puede decir que enzimología tiene un gran futuro por
delante. Tomará
un lugar central en todas las áreas, ya que puede contribuir sólidamente en:
* Diagnóstico: Alteración de la actividad enzimática enzimática o iso ha sido
convenientemente utilizado para el diagnóstico y el diagnóstico diferencial. Tomemos por
ejemplo el lactato
Deshidrogenasa. Hay 5 isoenzimas de LDH, a saber, H4, M3H, M2H2, H3M y M4.
Cada uno de estos está presente en tejidos específicos y la alteración de su actividad como
se observa
en el patrón gráfica es una indicación de la posible tejido dañado. O el ácido
fosfatasa está presente como la próstata y las fracciones no prostáticos.
Algunos de los ensayos enzimáticos clínicamente importantes empleados comúnmente se
tabulan
como,

* Fermentaciones industriales: La inmovilización de enzimas se ha abierto una

nueva era en las áreas de fermentaciones industriales. Productos Lácteos, panaderías y
proteína unicelular
producción son algunas de las zonas de destino donde los avances en enzimología han
Celulasas, glucanasas, amilasas, proteasas
Amiloglucosidasa
pectinasas
Enzyme Biología 27
Para la licuefacción, la clarificación y malta
procesos en la fabricación de cerveza
La producción de azúcar a partir de almidón de
la producción de sustrato en alcohol
fabricación
La clarificación de jugo de fruta en el vino
industria
ficina bromelina, papaína
remover la mancha de cerveza
naringinasa
La eliminación del sabor amargo
... Procesamiento de alimentos: Las enzimas se utilizan para una creciente gama de
aplicaciones:
panadería, fabricación de queso, procesamiento de almidón y la producción de zumos de
frutas y otras bebidas.
Aquí se puede mejorar la textura, apariencia y valor nutricional y pueden generar
sabores y aromas deseables. Actualmente las enzimas alimentarias utilizadas a veces se
originan en
animales y plantas [por ejemplo, un almidón digestivo enzima, amilasa, puede obtenerse
la germinación de semillas de cebada] pero la mayoría venir de una variedad de microbios
beneficiosos.

a producción de residuos y por lo tanto la contaminación en el mismo tiempo los

productos que genera
de mayor pureza y calidad
3. Permiten algunos procesos que se llevan a cabo, que de otro modo sería
imposible. [Por ejemplo la producción de jugo de manzana concentrado que clara
usos pectinasa para reducir la turbidez del producto final.]
Algunos usos de las enzimas en los procesos comerciales se dan a continuación,
" La industria lechera: enzimas han sido ampliamente utilizados en la industria lechera
Algunos de.
las enzimas y sus usos se tabulan a continuación

Lixiviación Bio: Originalmente biolixiviación se basó en el uso de cepas microbianas

que tenían una capacidad de digerir impurezas particulares o purificar comercialmente
importante
minerales. Hoy en día sin embargo, las enzimas inmovilizadas han hecho más fácil para
procesar la
minerales.
'" Forense: Las enzimas se utilizan para el tratamiento de las huellas dactilares latentes
para la sensibilidad
* Biotecnología: enzimas de la restricción, ligasas y enzimas utilizados en el
reacción en cadena de la polimerasa son los requisitos básicos fundamentales de la
biotecnología, una
campo que tiene un futuro prometedor. eugenesia de plantas y animales deberán conducir
a una mejor cosecha,
mejores ganado y una mejor capacidad de supervivencia.
* Los usos terapéuticos de inhibidores de la enzima: La comprensión de la inhibiti', n
de varias enzimas por los productos químicos específicos llamados como inhibidores ha
dado lugar a un nuevo
posibilidad de su uso como fármacos potenciales para el control de enfermedades
metabólicas. algunos tales
Los ejemplos incluyen, uso de zidovudina como inhibidor de la transcriptasa inversa del
VIH, a
control del SIDA, alopurinol en casos de gota como inhibidor de la xantina oxidasa,
sorbimil como
inhibidor de la aldosa reductasa en la retinopatía diabética.
Y todos estos procesos y ramas que nuestra imaginación se permitan y
límite. No es muy apropiado decir que el futuro de la humanidad dependerá de la
uso inteligente y la reutilización de las enzimas.
Los términos utilizados en Enzimología
1. Enzima
La definición más completa de la enzima se puede escribir como "un catalizador bio,
en su mayoría de naturaleza proteica, lo que provoca transformaciones biológicas dentro de una
especificada
gama de parámetros fisicoquímicos y con especificidad de acción.
Es inicialmente se dijo que" todas las enzimas son proteínas en la naturaleza, pero todas las proteínas son
no enzimas", pero esto se modificó con el descubrimiento de ribozimas [ARN como enzima]
en la década de 1980 por Thomas Cech y col
Las enzimas son generalmente grandes moléculas con alto peso molecular y toman parte
en las reacciones mediante la formación de un complejo ES.
2. Holoenzima
Una enzima holo = apo enzima + coenzima + cofactor. Cuando la enzima holo
representa una enzima totalmente activa, ejemplo incluye la glucoquinasa, que convierte la glucosa
en glucosa - 6 - fosfato.
Kulkarni, N .S., Y MS Deshpande. Enzimología general, editado por N .S. Kulkarni, y MS Deshpande,
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CAPÍTULO 14 - 1 General Enzimología
apoenzima
coenzima
~
~ '.

LJL + Sabt t
nos e ra
holoenzima
)
Complejo ES
La Fig 1.3 Holoenzima. La coenzima Y ES Complejo
3. Apo Enzima
Se define como la parte proteica de la enzima que puede combinar con específica
coenzimas y / o cofactores para actividad catalítica.
4. sustrato
Un sustrato se define como una sustancia sobre la que la enzima actúa específicamente,
para convertirla en producto / [s]. Por ejemplo, la glucosa es el sustrato para la hexoquinasa o
glucoquinasa.
5. ES Complex
En contraste con los catalizadores químicos, las enzimas participan en la reacción a través de
formación de un complejo de transición llamado como el complejo ES. El complejo está en equilibrio
con conexión E y S y poco a poco se desarrolla en dirección hacia adelante para producir los productos.
6. Producto
La sustancia [s] formado después el complejo se disocia ES se llama como producto [s].
7. La coenzima
Se se define como una sustancia que es esencial para la actividad de enzimas específicas. que es
un pequeño compuesto orgánico separable de enzima por diálisis, en ausencia de los cuales
la actividad de la enzima es ya sea suelto o marcadamente reducida. Los ejemplos de coenzimas incluyen
ATP, NADH, FAD, TPP etc.
8. cofactor
Un cofactor es una pequeña molécula inorgánica o ion que se requiere, además de la
coenzima de muchas enzimas para su acción. Muchos autores utilizan los términos como sinónimos
pero pueden ser diferenciados en función de su naturaleza y tamaño. Considere la reacción
de hexoquinasa:
Glucosa + ATP + Mg ++
) Glucosa-6-fosfato + ADP
Aquí la glucosa es el sustrato, ATP es una coenzima, y de iones Mg es un cofactor.
9. Activador
Ciertas enzimas requieren activación antes de su actividad y esto se lleva
sobre por moduladores que pueden ser los sustratos sí mismos o de otros pequeños orgánica
moléculas o iones. Tales moléculas o iones se denominan como activadores. Cloruro actúa como una
activador para la enzima amilasa.
Kulkarni, N .S., Y MS Deshpande. Enzimología general, editado por N .S. Kulkarni, y MS Deshpande,
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Biología Enzyme 15
10. Inhibidores
Cualquier sustancia que afecta negativamente a la actividad enzimática por drásticamente
la reducción de la velocidad de catálisis o detener por completo la reacción, se llama como un inhibidor.
Son ampliamente de dos tipos a saber. Los inhibidores irreversibles y reversibles.
11. inhibidores irreversibles
También se les llama como venenos enzimáticos. Se unen a los residuos del sitio activo
formar enlaces covalentes estables que disminuyen completamente e irreversiblemente la tasa de
reacción. Ejemplos de la inhibición irreversible incluyen acción de cianuro en xantina
Oxidasa [1.2.3.2] y gas nervioso en la colinesterasa [3.1.1.7 3.1.1.8].
12. Los inhibidores reversibles
Son sustancias que se unen reversiblemente a la enzima libre, ES complejo o ambos
lo que reduce temporalmente la velocidad de la enzima catalizada de reacción. Este tipo de
inhibición se caracteriza por las modificaciones observadas en las parcelas de Lineweaver Burke
que muestran cambios característicos de acuerdo con el tipo de inhibición.
inhibiciones reversibles son de tres tipos a saber .: competitiva, no competitiva y
La inhibición no competitiva.
13. inhibición competitiva
Es es la inhibición causada por una sustancia que es un análogo de sustrato, que compite
con el sustrato por el sitio activo de la enzima. Se forma un improductivo, reversible
EI complejo. Afecta a la altura del Km sola y sus efectos se puede superar mediante el aumento de la
concentración de sustrato. El ejemplo de la inhibición competitiva es la acción de malonato en
succinato deshidrogenasa.
La inhibición no competitiva 14.
Es una sustancia que no compite con el sustrato, pero se une en algún
se forma otro sitio con la enzima libre o complejo ES y por lo general compleja EIS que
pausas en la tasa mismo como complejo ES. La característica de diagnóstico de este tipo de inhibidor
es que Km no cambia sin embargo el Vmax se altera [reduce]. Aumentar el
concentración de sustrato no elimina el efecto del inhibidor. Los ejemplos de
inhibidores no competitivos incluyen agentes quelantes que bloquean los iones metálicos que son
requerido por enzimas para su actividad.
[EOTA bloques Me ++ y por lo tanto esas enzimas que les obligan].
15. Inhibidor no competitiva
El inhibidor no competitivo d ~ S ~ se une a la enzima libre o sustrato libre
pero se une a sólo el complejo ES, fo. g del complejo de ESI. La característica de diagnóstico de
este tipo de inhibidor es que altera te Km y Vmax tanto por el mismo factor. En el
Lineweaver - Burke traza líneas paralelas · th la misma pendiente se obtienen con el aumento
[YO]. Un ejemplo clásico es la de ción inhib de la acetilcolinesterasa por Pi.
16. constante de Michaelis (Km)
De los estudios de Michaelis y Menten la curva obtenida por el efecto de
Se encontró la concentración de sustrato en la velocidad de reacción a ser una hipérbola rectangular.
La expresión matemática viene dada por la expresión:
Kulkarni, N .S., Y MS Deshpande. Enzimología general, editado por N .S. Kulkarni, y MS Deshpande,
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CAPÍTULO 16 - 1 General Enzimología
v -. VMA, JS]
(L -
Km + [S]
Donde, V
O
= Velocidad inicial, V max = velocidad máxima, [S] = sustrato conc. Y
Km = constante de Michaelis
De la observación experimental se ha demostrado que Km representa [S] en
velocidad media-ma.'Cimal. En otras palabras Km = Max / 2 y es característico de una determinada
enzima - sustrato par e indica la afinidad entre ellos. Más del Km, menos es
la afinidad y menor la Km más es la afinidad entre la enzima y el sustrato.
Y
yo
Vmax
VO ~ -----, ____ - ____ = __
Vmax / 2
Km
~ (S)
x
Fig1.4: MM Parcela V 0 Versus (S)
Un gráfico típico Michaelis Menten obtiene cuando la velocidad inicial se representa frente
la concentración de sustrato, se obtiene una hipérbola rectangular de la que Vmax y
Km se puede det'ermined.
17. V Max o máxima velocidad
I T indica la velocidad máxima de la reacción a la saturación completa de la enzima
sitios activos. Se es una constante para un sustrato de enzima dada.
18. Sitio Activo
Es es la estructura tridimensional donde el
sustrato se une y la transformación se lleva a cabo. Debería
Debe entenderse que los aminoácidos que contribuyen no podría
ser secuencial como por la secuencia primaria, pero los que son
muy lejos unos de otros en la secuencia primaria. Es también
llamado como sitio catalítico o sitio de unión del sustrato. El amino real
cadenas laterales de ácido dentro del sitio activo que están involucrados en
crear el dominio de unión a sustrato y la actividad catalítica
comprender el centro activo.
19. Actividad de la enzima
Fig: 1,5 sitio activo de
una Enzima
Se se expresa en unidades / ml o IV [unidades internacionales] o katals. Una unidad de enzima
actividad se define como la cantidad que catalizará la transformación de un micromol
de sustrato por minuto en condiciones definidas, [temp = 25 °, pH, [S], [E], etc. son
Óptimo A katal se define como la cantidad de enzima que convierte 1 mol de sustrato
por segundo.
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Enzyme Biología 17
20. Actividad específica
La actividad específica se expresa como unidades de enzima / mg de proteína. los
determinación de la actividad específica de la enzima pura implica la medición de
La velocidad inicial y también la cantidad de enzima [mg de proteína / ml] que produce este
velocidad de reacción.
21. Actividad Molecular
Se define como el número de moléculas de sustrato transformado por minuto
por molécula de enzima. También se le llama como número de recambio.
22. Enzima Especificidad
La capacidad de una enzima para reaccionar con uno o sustratos determina su especificidad.
Generalmente tres tipos se definen, a saber. absoluta, grupo y amplia especificidad.
23. La especificidad absoluta
La capacidad de una enzima para reaccionar con solamente un único sustrato se llama como absoluta
Especificidad. El ejemplo clásico es de glucoquinasa, que puede reaccionar con la glucosa solamente
como su sustrato. No reacciona con ninguna otra hexosa.
24. Grupo Especificidad
Ciertas enzimas pueden reaccionar con una gama de compuestos relacionados y esta capacidad es
llamado como especificidad de grupo. El mejor ejemplo es el de la hexoquinasa, lo que puede provocar
la fosforilación de hexosas ,. Otro ejemplo es de L - oxidasas de aminoácidos con
muchos aminoácidos de la configuración L-.
25. amplia especificidad
Algunas enzimas pueden reaccionar con aparentemente distintos sustratos. Tales enzimas son
dice que tiene una amplia especificidad. El ejemplo es de la tripsina y la quimotripsina, que puede
reaccionar
con proteínas, péptidos más cortos y ésteres etc.
26. Multi Enzyme Complejos
Ciertos vías metabólicas son catalizadas por un grupo de enzimas y coenzimas
que están ligados o unidos entre sí para formar un agregado complejo físicamente. Tal
complejo es conocido como un complejo enzimático de múltiples. Los ejemplos incluyen piruvato y alfa
cetoglutarato deshidrogenasa complejos y complejo sintetasa de acilo graso.
27. Marcador de enzimas
Debido a la compartimentación de las células, ciertos enzimas se encuentran unido o
situado en ciertos orgánulos celulares o fracciones durante la centrifugación diferencial. Estas
se denominan como enzimas marcadoras ya que su presencia y la actividad se utiliza como un marcador
para
aislar el orgánulo específico durante el fraccionamiento celular. Los ejemplos incluyen, succinato
deshidrogenasa para mitocondrias y glucosa 6 fosfatasa para la fracción microsomal.
28. inducibles Enzimas
Ciertas enzimas no están presentes dentro de las células en todo momento, pero se sintetizan
después de la aparición de sólo su respectivo sustrato. Tales enzimas se denominan como
las enzimas inducibles. Por lo general, sufren degradación después de su uso ha terminado. Ejemplo
incluye las enzimas de degradación de la lactosa en E. coli.
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CAPÍTULO 18 - 1 General Enzimología
29. Inductor
Una sustancia que es responsable de la síntesis de una enzima inducible en particular
se llama como inductor. Por ejemplo lactosa actúa como inductor para una enzima b- galactosidasa.
30. represor
Se trata de una sustancia que impide la formación de enzima. Que es muchas veces
estructuralmente relacionada con el producto o el producto en sí mismo formado en el extremo deEl
reacción.
Los ejemplos incluyen la represión de argininosuccinato liasa por arginina, o aspartato quinasa
por 1- lisina.
31. Las enzimas constitutivas
Ciertas enzimas están siempre presentes en las células, es decir, que no son sintetizados
después de la aparición de sus sustratos, pero están regulados por la activación - desactivación
fenómenos. Tales enzimas se denominan como enzimas constitutivas. Ejemplos incluyen
enzimas del ciclo del TCA.
32. Enzima desnaturalización
La pérdida de la estructura tridimensional de la enzima debido a la acción de física
o agentes químicos que se conoce como la desnaturalización de la enzima. Esto usualmente resulta en
parcial o
pérdida completa de la actividad de la enzima. Algunos de los agentes que la enzima causa
desnaturalización incluyen urea 8 M, temperatura, pH, y enlace covalente formando modificar
Agentes.
~ Dena ,,,,;! De
~
renaturalización SH
SH
Fig 1.6: desnaturalización de la enzima
33. La renaturalización de las enzimas
Tras la eliminación de las condiciones desnaturalizantes, algunas enzimas pueden recuperar su
, Conformación activa nativa. Este fenómeno se conoce como la renaturalización de las enzimas.
34. Las enzimas intracelulares
Las enzimas situadas dentro de las células se llaman enzimas intracelulares. Por lo general
secretada en la forma activa. Son difíciles de aislar y purificar que extracelular
Enzimas Pueden estar presentes en el citosol o los orgánulos intracelulares y por lo tanto
a menudo llamado como enzimas endo. Los ejemplos incluyen enzimas de la glucólisis, HMP derivación
FAS
etc. compleja
35. Las enzimas extracelulares
Son secretadas fuera de las células donde se sintetizan y por lo general su
sitio de acción es lejos de su lugar de síntesis. Se sintetizan y secretan como
precursores inactivos y son fáciles de aislar y purificar. También se les llama como enzimas exo.
Los ejemplos incluyen enzimas digestivos como la pepsina, tripsina, etc.
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Enzyme Biología 19
36. Zylflogens
Ellos son precursores inactivos de las enzimas y por lo general contienen muchos aminoácidos
más de la forma activa. También se les llama como enzimas pro y necesitan estar c
37.lsozymes
Existen ciertas enzimas en diferentes tejidos y difieren ligeramente entre sí en
contenido de aminoácidos y actividad. Tales enzimas se denominan como isoenzimas. Ejemplo
incluye isoenzimas de LDH, amilasa etc. isoenzimas se utilizan a menudo como una ayuda de diagnóstico
para el diagnóstico diferencial.
H = corazón, M = rnuscle
(BX8)
<.BXB) Pure H Tetrarner
~
<BitDH3 M1 Tetrarner
rjj; 'J H2 M2 Tetrarner
D H1 M3 Tetrarner
Pura M Tetrarner
Fig 1. 7 Diferentes formas de lactato
isoenzimas deshidrogenasa.
38. Las enzimas alostéricos

Alostérico

sitio o
mi
8 Sitio Activo

o
Regulador
Sustrato
sitio o
Sitio de unión
modulador del sitio
Fig 1.8 alostérica y Active
sitios de enzima.
Las enzimas que contienen el otro sitio [allos = otro, estéreos = sitio] para positivo o
modulación negativa se denominan como enzimas alostéricos. Por lo general son de regulador
la naturaleza y muestran una cinética sigmoidal. Ellos forman parte de unidades secundarias.
39. Las enzimas oligoméricas
Las enzimas que tienen las estructuras de la unidad secundaria y que muestran positivo y negativo
cooperatividad se llaman enzimas meric oligo. La mayoría deEl enzimas alostéricos son oligomérica
en la naturaleza es decir, contienen más de un polipéptido en su estructura. Ejemplos
incluir aspartato transcarbamilasa [ATCasa].
40. Número CE IUB
Con el descubrimiento de miles de enzimas, se hizo necesario tener una
sistema universalmente aceptable de la clasificación y la nomenclatura de enzimas. En 1956
la Unión Internacional de Bioquímicos creó una comisión para formular la enzima
reglas para el mismo. La comisión dio entonces un sistema de numeración de cuatro dígitos para el
clasificación de las enzimas.
Ejemplo de un número de 4 dígitos es 1.1.1.1 para alcohol deshidrogenasa, [alcohol: NAD
oxidorreductasa].
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CAPÍTULO 20 - 1 General Enzimología
41. grupo prostético
Es un no proteico parte ftrmly atado y constituyente integral, presente en algunos
Enzimas Se no se puede dializar o fácilmente separada de la cadena polipeptídica que es
asociado con. Los ejemplos incluyen FAD en dihidro lipoil deshidrogenasa, y biotina en
piruvato carboxilasa]
42. Anti Enzimas
Los anticuerpos producidos después de la inyección de enzimas en la sangre de los animales son
llamado como enzimas contra. Ellos son herramientas importantes para el estudio de las diferencias entre
las enzimas
obtenido a partir de diferentes fuentes.
43. Las enzimas metalo
Son complejos de metales con las enzimas de enzimas .Muchos llevan iones metálicos como
integral. componentes en sus estructuras y están bien involucrados en la transferencia de
electrones, reduciendo equivalentes etc. ejemplos incluyen la citocromo oxidasa que lleva
Cu ++.
44. Tiempo de tránsito
En un sistema de enzima múltiple la tasa global de reacción no depende sólo de
las velocidades de las reacciones individuales, sino también en el tiempo necesario para la transferencia
de la
producto de la reacción anterior que actúa como un sustrato para la siguiente enzima. los
tiempo necesario para que esta transferencia se conoce como el tiempo de tránsito. El tiempo de tránsito
es más de
sistemas enzimáticos no organizados que la de los complejos enzimáticos múltiples.
45. enzimas inmovilizadas
Muchas veces las enzimas comercialmente importantes están aislados de su medio natural
fuentes y inmovilizada en una matriz insoluble o perlas para su reutilización eficaz
y la explotación comercial. Tales enzimas se denominan como enzimas inmovilizadas.
46. Reacciones de sustrato Bi
Algunas enzimas requieren más de un sustrato para su actividad. Tales reacciones
puede tener lugar de dos maneras, a saber. desplazamiento simple y doble desplazamiento. los
reacción de desplazamiento son de dos tipos, al azar y ordenado.
47. Solo y gráficos recíprocos dobles
Las parcelas MM clásicos son del tipo hipérbola rectangular y en etapas posteriores
no explican satisfactoriamente la relación de la velocidad de reacción con el sustrato
concentración. Muchos científicos han propuesto transformaciones de la ecuación MM basadas
en que cualquiera solo recíproco [parcela Woolf ex] o doble recíproco [ex - Lineweaver
Se obtienen parcela Burke]. Se emplean con frecuencia para la interpretación de la cinética
datos.
48. Las ribozimas
Las moléculas de ARN que presentan estructura terciaria pueden actuar como enzimas o espectáculo
actividad catalítica specillcally catalizando la transesterillcation y la hidrólisis de
enlaces fosfodiéster en las moléculas de ARN, así como también obedecer Michaelis Menten Cinética
se denominan como ribozimas.
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Enzyme Biología 21
49. Las enzimas bifuncionales
Cuando una enzima tiene dos dominios diferentes que realizan específica y diferente
actividades, la enzima se llama como una enzima bifuncional. Ejemplo de tales enzimas
incluye la enzima de desramificación que cataliza dos tipos de actividades,
[A] Amylo transglucosidasa actividad.
[B] un - 1,6 glucosidasa.
Enzima desramificación
Fig: 1.9 bifuncional Enzyme
50. abzimas
Abzimas se definen como anticuerpos que actúan como enzimas. Los anticuerpos son en su mayoría
proteínas o glicoproteínas y pueden mostrar actividad enzimática.