Trabajo científico

Recogida de muestras para el

laboratorio ¿Qué, cómo, cuál,
cuánto?
Paloma Chaves Sanz
Directora técnica del laboratorio APG
Rodriguez San Pedro 10
28015 Madrid

Obtención
La primera pregunta que nos planteamos cuando te-
nemos que hacer un análisis de sangre es ¿qué tipo de
aguja debo emplear, en que tipo de tubo tengo que reco-
gerlo, qué cantidad de sangre se necesitará?

El uso de palomillas o agujas y el distinto calibre de las

mismas, lo mismo que el volumen de las jeringuillas y la
elección de la vena dependerá en ocasiones del tamaño
del animal al que vamos a extraer la sangre.
Figura 2 ¿Qué tubo elijo?
La cantidad de sangre extraída dependerá también de
las pruebas que solicitemos al laboratorio.

La aguja rosa es de 18G (la más gruesa), la amarilla de

20G, la verde de 21G, la azul de 23G y la naranja de 25G
de insulina (la más fina). (Fig. 1)
Figura 3 Código
Internacional de
colores para recogida
de tubos
(Norma ISO 6740)

Figura 1¿Qué calibre de aguja, que jeringuilla, qué cantidad?

Dependerá del tipo de animal.

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 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Cantidad/ ml
Modo de Color
sangre
Anticoagulante acción Ventajas Inconvenientes Utilización tapón

EDTA Na o K Conserva
Interfiere Hemograma
Quelante 1-2 mg/ml morfología
determinaciones Parásitos LILA
Calcio células
bioquímicas hemáticos
sanguíneas

Inhibe paso Conserva

Heparina Na,K, Desaconsejable Perfiles
protrombina- 20 U/ml pH sanguíneo VERDE
Li, Li,NH4 hematología bioquímicos
trombina

Conserva
Sol. 3,8%:
Quelante factores
1vol.citrato/ 9
Citrato sódico calcio Hemostasia lábiles Coagulación AZUL
vol. sangre
coagulación
algunas horas

Desaconsejable
Fluoruro Inhibe Conservador
en otras Deter. de la
Sódico glucólisis 2-4mg/ml de la GRIS
determinaciones glucosa
glucosa
bioquímicas

Sin
Bioquímica
anticoagulante ROJO
Inmunología

En cuanto a los tubos, existe un Código internacional Hemograma

de colores para recogida de tubos (norma ISO 6740),
(Figura 3).
Dependiendo del color del tapón el anticoagulante será
diferente y se utilizará para distintos fines.
Tubo de tapón lila lleva EDTA sódico o potásico se usa
para la realización de hemogramas y estudio de células
y parásitos hemáticos.
El tapón lila corresponde al anticoagulante EDTA (etilendia-
minotetra-acético) en forma de sales de sodio o potasio (Fig.4).
El EDTA es el anticoagulante que mejor conserva las cé-
lulas sanguíneas.
Actúa como anticoagulante por ser quelante del calcio
de la muestra.

Tubo de tapón verde lleva heparina sodio, potasio, litio
y amonio se utiliza para perfiles bioquímicos.
Tubo de tapón azul lleva citrato sódico y se utiliza para
pruebas de coagulación.
La concentración de la muestra debe ser de 1-2 mgr/ml
de sangre. Esto lo conseguimos añadiendo la cantidad
de sangre que nos indica el tubo.

El tubo de tapón gris lleva fluoruro sódico y se utiliza

para determinación de glucosa.

Tubo de tapón rojo no lleva ningún tipo de anti-

Fig.4
coagulante. Con él obtenemos suero para pruebas de
Tubos de
bioquímica, hormonas e inmunología. EDTA

 
15
Trabajo científico
Excepcionalmente podemos hacer un hemograma en tubos
con otro tipo de anticoagulante como por ejemplo Heparina
litio pero conserva peor la morfología celular y se producen
con más frecuencia todavía agregados plaquetarios.
Métodos
Una vez obtenida la muestra de sangre quitamos la aguja
de la jeringuilla y solo con esta introducimos la sangre en
el tubo correspondiente. (Figuras 5 y 6). Tapamos con el
tapón e invertimos suavemente varias veces (cinco o seis)
para que la sangre se mezcle bien con el anticoagulante.
Nunca bruscamente como si fuera una coctelera.
Figura 5 Figura 6
SI NO
Si añadimos un volumen distinto de sangre al indicado
en el tubo tendremos problemas.
Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coa-
gulará la sangre.
Si el volumen de sangre es menor se nos producirán:
Hemólisis, crenación de los hematíes, falsas disminucio-
nes del hematocrito, VCM y falsos aumentos de CCMH.
Figura 7 El
tubo de la
izquierda
tiene poco
volumen de
sangre y el
de la derecha
demasiada por
lo que se ha
formado un
coágulo.
NO
  • Determinación que se solicita.
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Se puede hacer un hemograma con 0,5 a 1 ml de sangre.
Mirad en el tubo siempre la señal hasta donde hay que
llenarlo de sangre.
En caso de usar tubos Tapval podemos quitar la aguja e
introducir en émbolo por el orificio superior (Fig. 8), es muy có-
modo pero si lo vamos a remitir al laboratorio, la sangre puede
salirse y no os podéis imaginar lo que cunde una gota de sangre
(Fig. 9) en un sobre y no podéis imaginaros como llega el tubo
o tubos que le acompañan al laboratorio pues sigue goteando.
Figura 9
Figura 8
Figura 10
Por favor quitad el tapón, os llevará unos segundos más y
hacedlo como si fuera un tubo de tapón hermético (Fig.10).
Identificación
Es importantísimo identificar los tubos con los datos del ani-
mal al que realizaremos el análisis antes incluso de depositar
la sangre en él. Evitaremos así un posible error preanalítico
que puede complicarse en el laboratorio. (Figura 11)
Si además acompañamos a las muestras identificadas de
un protocolo facilitaremos mucho el trabajo al laborato-
rio, indicando:
• Los datos del animal: Nombre, raza, sexo, edad.
• Datos de la clínica o veterinario que la remite.
• Tipo de muestra.
• Breve historia clínica.
• Tratamientos empleados.
Trabajo científico

La contaminación con un exceso de antiséptico puede

producir hemólisis debido al alcohol.

La extracción de sangre extravasada puede producir he-

mólisis y agregación plaquetaria (Fig. 13 y 14)

Figura 10 Fig.13. Agregados plaquetarios. Fig. 14. Hemólisis

SI NO
La contaminación con el
Conservación: líquido de fluidoterapia
producirá una dilución de
Lo ideal son dos horas desde la obtención de la muestra la muestra e incluso con-
a temperatura ambiente o 24 horas en nevera a 4º C pa- taminación de la misma
ra no alterar los valores del hemograma. si el fluido lleva potasio Fig. 15. Crenación de hematíes
produciendo hiperkalemia
JAMÁS introducir en el congelador. (Fig. 16).
Figura 16
Las plaquetas deben determinarse lo antes posible para
evitar agregados.

Los frotis sanguíneos deben realizarse como máximo

dos horas después de haber obtenido la muestra y fijar-
los en metanol durante dos minutos una vez secos. NO

Hay una serie de factores a considerar

Un animal estresado puede presentar Híperglucemia,

neutrofilia madura y/o linfocitosis.
Produciremos hemólisis si usamos agujas de bajo calibre
y jeringas de alto volumen (Figura 12).
Figura 12
Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coa-
gulará la sangre.
Si el volumen de sangre es menor se nos producirán:
Hemólisis, creación de los hematíes (Fig. 15), falsas dis-
minuciones del hematocrito, VCM y falsos aumentos
de CCMH.

NO
Pruebas de bioquímica

Las podemos hacer prácticamente todas en suero, en

plasma también siempre que el anticoagulante no inter-
fiera en la prueba.

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 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Los tubos de suero no llevan ningún tipo de anticoagu-
lante y el tapón es de color rojo, según las norma ISO
6710 (Fig.17). En el mercado hay tubos sin anticoagu-
lante que no siguen esta norma y hay tapones de todos
los colores. Tenemos que asegurarnos que el tubo ele-
gido para suero no lleve anticoagulante de ningún tipo.
Para inmunología el tubo de elección es el de suero lo
mismo que para la determinación de hormonas.
Lo ideal es separarlos antes de las dos horas de recogida
de la sangre.
Si la sangre la recogemos en tubo de heparina litio po-
demos centrifugarla inmediatamente después para la
obtención del plasma.
Diferencias entre el suero y el plasma

Las pruebas de bioquí- Suero

mica también pueden
hacerse en plasma re-
cogido en un tubo con
heparina litio, tubos
con tapón verde (Fig.
17) pues no interfie-
ren los resultados sin
embrago en EDTA in-
terfieren las pruebas
enzimáticas (fosfatasa
alcalina) y los iones Ca
Fig. 17. Tubos de Heparina Li
y K.
y sin nada
• Riesgo de hemólisis mayor que en suero
• Centrifugación tras coagulación
• Muestra idónea para la mayoría de pruebas: bioquí-
micas e inmunológicas
• No contiene fibrinógeno
Plasma
• Riesgo de hemólisis menor que en suero
• Centrifugación inmediata
• En pruebas bioquímicas posible interferencia con an-
ticoagulante (mínimas con heparina Litio)
• Contiene fibrinógeno

Manejo de las muestras Conservación de suero o plasma

Si recogemos la sangre en tubo de suero, tenemos que Se conserva 3 días a 4º C y congelado a – 20º C durante
dejarlo en posición vertical y a temperatura ambiente mucho tiempo
Fig. (18 y 19). No debemos refrigerarlo antes de su coa-
gulación y retracción del coagulo (de treinta minutos a Conservación de las muestras
una hora después de la recogida) pues produciríamos
hemólisis. Compuesto 20 – 25 º C 4º C -20º C
Albúmina 6 días 6 días Varios meses
ALT (GPT) 1 día 7 días 1 mes
AST (GOT) 3 días 7 días 1 mes
Bilirrubina Solo muestra
- -
total reciente
Calcio 10 días 10 días 8 meses
Colesterol 6 días 6 días 4 meses
Creatinina 1 día 1 día Varios meses
Fosfatasa 10%actividad
7 días 1 mes
alcalina en 7 d.
Fósforo
2 días 7 días Varios meses
Fig. 18 Fig.19 inorgánico
El microtubo de la Fig. 18 se dejó en posición horizontal el de GGT 5 días 10 días 1 mes
la Fig. 19 en posición vertical, en los dos se ve el coagulo y su Glucosa
retracción. 1 día 2 días -
(en FlNa)
Potasio 2 semanas 2 semanas Varios meses
Si la sangre no desuera bien, esto suele ser lo habitual, Proteínas
centrifugaremos a 2.500-3000 rpm durante 5-10 mi- 7 días 1 mes Varios meses
totales
nutos. Urea 1 día 3 días 6 meses

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Trabajo científico
Determinación de glucosa
La sangre la podemos recoger en un tubo de suero, en
cuyo caso la deberemos centrifugar en el momento que
se haya coagulado o en un tubo con Heparina Litio en
cuyo caso deberemos centrifugar inmediatamente o en
un tubo de Fluoruro sódico, tubo de tapón gris (Fig. 20),
que inhibirá las enzimas de la glucólisis y conserva el va-
lor de glucosa durante 24 horas a temperatura ambiente
o 48 horas a 4 º C.
Si no lo hacemos siguiendo
este protocolo no podre-
mos valorar la glucosa pues
se produce un consumo de
esta por parte de los he-
matíes.
Coagulación
La sangre se recogerá en un
Fig. 20 Tubos de fluoruro tubo de citrato sódico, tubo
Na
de tapón azul (Fig. 21).
Las cantidades de sangre se-
rán las correspondientes al
volumen de anticoagulante,
(9 partes de sangre por 1 de
anticoagulante).
Centrifugar antes de los 30
minutos de extracción de la
sangre a 3.000 rpm durante
15 minutos.
Fig. 21 Tubos de Citrato Refrigerar un máximo de 2
sódico horas o congelar a -20 ºC.
Urianálisis
Recomendamos NO USAR frascos de orina para remitir
la muestra al laboratorio, a no ser que sean herméticos
es preferible remitirla en tubos. Durante el transporte
suelen ser frecuentes los accidentes.
Para el urianálisis solo son necesarios 5 ó 10 ml de orina.
Conviene indicar la forma de recogida de la muestra:
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micción espontánea, sonda o cistocentesis y especial-
mente cuando se trate de urocultivos, en cuyo caso el
frasco o tubo deberá ser estéril.
Se conservan perfectamente de 12 a 24 horas a 4 ºC.
Análisis de heces
Lo ideal son los análisis seriados de 3 a 5 días en caso de
diagnóstico de giardias por ejemplo.
Se conservaran a 4ºC excepto la última muestra que se
enviará a temperatura ambiente y lo más fresca posible.
Usar recipientes adecuados NO USAR BOLSAS DE
PLASTICO o PAPEL DE ALUMINIO para remitir las
muestras.
Para coprocultivos los frascos deberán ser estériles.
Líquidos orgánicos
Se remitirán en dos tubos, uno con EDTA para el recuen-
to de células y la citología y otro de suero para pruebas
bioquímicas en caso de que se soliciten.
Para el cultivo bacteriológico se empleará un tubo estéril
o la propia jeringuilla de extracción.
Los portas con las extensiones para las citologías deben
ir fijadas en metanol.
Citologías y biopsias
Citologías
Materiales: Agujas, jeringuillas y portas.
Métodos: Podemos
realizarla de dos for-
mas: Punción con
aguja fina o pun-
ción–aspiración con
aguja fina.
Fig. 22
 Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto? - Chaves P.

Las dos técnicas son Fig. 24

muy similares. La pri-
mera es ideal para
ganglios pues al ser
estos muy frágiles ase-
gura la integridad de
las células y en tejidos
muy vascularizados
Fig. 22 para minimizar la con-
taminación sanguínea. Fig. 25

No tomaremos muestras de zonas ulceradas pues solo Métodos:

reflejara el proceso inflamatorio.
En lesiones de gran tamaño la zona central suele estar
necrosada/inflamada por tanto debemos ir a los bordes.
Introducimos la aguja y aspiramos con una jeringuilla
de 10 ml.
Sacamos la aguja y la volvemos a introducir en otra di-
rección y aspiramos de nuevo.
Una vez realizada la aspiración, separamos la aguja y lle-
namos la jeringuilla de aire.
Ponemos la aguja de nuevo y vaciamos la jeringa en un
porta (Fig. 22).
Hacemos la extensión inmediatamente por el procedi-
miento de squash o aplastamiento (Fig. 23). Es decir,
ponemos sobre el porta que contiene la gota otro porta
formando una cruz con el anterior y lo deslizamos sua-
ve y rápidamente.
Dejamos secar y fijamos con metanol.
Tamaño
El tamaño ideal
de la muestra se-
ria de 1cm x 1cm aproximadamente. En caso de muestras de
mayor tamaño deberemos hacer cortes cada 1,5 cms perpen-
diculares al eje mayor o tomar varias muestras incluyendo los
márgenes de extirpación (Fig. 25).
Fijación
La fijación de las muestras para oncología se hace por méto-
dos químicos (fijadores). El más común es el formol al 10%.
Formol al 10%: Se prepara con 1 parte de formaldehído
al 40%, 9 partes de agua (también puede substituirse el
agua por solución salina fisiológica al 9%). Hay otras fór-
mulas pero esta es la más común.
Recipientes
Existen distintos tipos de recipientes, la única condición es
que sea hermético y adecuado para la muestra (Fig. 26 y 27).

Lo remitimos al laboratorio sin teñir. Se enviarán en Deberá ir perfectamente identificado.

porta- preparaciones de plástico o envueltas en papel ab-
sorbente para acolcharlas.

Si lo visualizamos nosotros se teñirá con técnicas

Romanowsky.

Biopsias

Materiales: Bisturí, tijeras, pinzas, punch, frascos her-

méticos, fijador (Fig.24).
Fig. 26

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Trabajo científico
Fig. 27
Volumen de fijador
Deberá superar el volumen de la muestra en una propor-
ción 20:1 o 40:1
Se debe sumergir el material en el fijador y no a la in-
versa para evitar el contacto de esta con las paredes y el
fondo del recipiente, evitando que se adhiera.
Si la muestra flotara (pulmón) la sumergiremos total-
mente en el fijador.
Duración de la fijación
Generalmente las muestras están fijadas a las 24-36 ho-
ras de haberlas introducido en el fijador.
En formol las muestras no se alteran en semanas o meses.
Protocolo
Las muestras deberán ir acompañadas de un protoco-
lo con:
• Los datos del animal: nombre, raza, sexo, edad.
• Datos de la clínica o veterinario que la remite.
• Historia clínica.
• Localización: Día y hora de la extracción y fijación.
• Tratamientos empleados y respuestas a estos.
• Analíticas si las hubiera.
Por favor recordad que enviáis la muestra a un citólogo o
a un patólogo no a un adivino.
Errores
Figura 28
• No es aconsejable el uso de frascos de cristal pues du-
rante el transporte pueden ocurrir accidentes.
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Figura 28 Figura 29
NO NO
• El volumen del fijador no es el adecuado.
• La muestra no está fileteada en porciones de 1,5 cms,
está entera.
• No está etiquetado o identificado el frasco
Figura 29
• El frasco es de plástico y hermético pero demasiado
pequeño para la muestra.
• La muestra no está fileteada en porciones de 1,5 cm.
• No hay fijador en el frasco, está vacío.
Bibliografía
1. Bush B.M.: Manual del Laboratorio Veterinario de Análisis Clínicos.
Ed. Acribia
2. BE Powers “The Pathology of Neoplasia” Small Animal Clinical
Oncology 2.001-WD Saunders Co
3. Cowell RL,Tayler RD: Diagnostic Cytology of dog and cat. Ed.
American Veterinary publications, Inc 1.989
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tology of the dog and cat. Ed. Mosby 1.999
5. Davidsohn I. Henry J.B.: Diagnóstico clínico por el laboratorio. Ed.
Salvat 6ª edición
6. Martínez de Merlo, E.: Atlas de citología clínica del perro y el gato.
Ed. Servet 2.008
7. Steven E. Weisbrode: “The Histopathology laboratory in Diagnosis
of Neoplasia”