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Respuesta inmunitaria celular adaptativa
Objetivos: Conocer las interacciones celulares y las moléculas y factores solubles
involucrados en la respuesta inmunitaria celular adaptativa. Conocer los mecanismos
inmunitarios conducentes a la eliminación de células infectadas por parásitos intracelulares y
células anormales. Conocer factores que determinan inmunogenicidad o tolerancia, y los
mecanismos involucrados en la tolerancia.
Contenidos: Linfocitos T: Subpoblaciones (LT citotóxicos, LTh0, LTh1, LTh2, LTh17,
LThf Ontogenia, receptores de Ag, localización y función. Citoquinas más importantes.
Respuesta inmunitaria contra bacterias intracelulares y virus. Activación de Macrófagos.
Citotoxicidad (LTc y NK): diferencias y similitudes. Inducción de apoptosis. Factores que
determinan inmunogenicidad o tolerancia. Mecanismos de tolerancia central, periférica y oral.
Inmunoprevención
Objetivo: Conocer los tipos de inmunidad, los objetivos de la inmunoterapia y de la
inmunoprevención, los tipos de vacunas y adyuvantes.
Contenidos: Inmunidad pasiva. Transferencia materno-fetal. Sueroterapia. Sueros inmunes,
producción, efecto, ejemplos. Inmunidad activa. Vacunación. Vacunas: mecanismo de acción.
Fines de la vacunación. Clasificación (estado biológico, relación con el agente etiológico,
variedad de componentes). Adyuvantes: clasificación y función. Vías de administración.
Respuesta a vacunas vivas y muertas. Importancia del sistema inmune común de las mucosas
en la inmunización.
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Regulación de la respuesta inmunitaria
Objetivo: Conocer los principales mecanismos de regulación de la respuesta inmune celular y
humoral.
Contenidos: Interacción entre el sistema inmunitario y otros sistemas. Regulación de la
respuesta inmune por parte del antígeno. Regulación de la respuesta inmune por parte de
anticuerpos. Células T reguladoras.
Trabajos Prácticos:
TP 1: Toma y conservación de muestras. Proteinograma. Serología. Medición de Ig
totales
Objetivos: Conocer las muestras más utilizadas para la detección de anticuerpos y/o antígenos
en el diagnóstico serológico, su obtención, remisión y conservación, y los fundamentos de la
serología. Conocer distintas técnicas para evaluar los niveles de Ig totales.
Contenidos: Venas de elección para la extracción de sangre en las diferentes especies.
Material necesario, modo de obtención. Toma de muestra con y sin anticoagulantes. Remisión
al laboratorio. Separación de plasma y suero. Características de una buena muestra.
Conservación de la muestra (tiempo y temperaturas adecuadas). Toma de otros tipos de
muestra: secreciones (leche, calostro, lágrimas, mucus, secreción vaginal y prepucial, semen y
plama seminal, líquido articular, etc) y tejidos (biopsias). Serología: definición y valor
diagnóstico. Anticuerpos. Fuerzas de unión entre anticuerpos y antígenos.
Observación de diferentes técnicas para evaluar los niveles de Ig totales: Proteinograma
electroforético, precipitación de Ig con sales, coagulación con glutaraldehído y densitometría.
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Contenidos: Pruebas de interacción secundaria. Concepto. Fundamentos, clasificación
(aglutinación en placa, aglutinación en tubo, precipitación, tipos de inmunodifusión).
Fenómeno de prozona. Identificación de diferentes isotipos de Ig.
Organización:
Clases guía: 9
Talleres: 2
Taller de integración: 1
Trabajos Prácticos: 6
Integrantes del curso:
Guillermo Arroyo, M. V. gharroyo@vet.unicen.edu.ar
Silvia Estein, M. V., Dr. silmares@vet.unicen.edu.ar
Analía Etcheverría, M. V., Dr analiain@vet.unicen.edu.ar
Silvina Gutiérrez, M. V., Dr. segutier@vet.unicen.edu.ar
Paula Lucchesi, Ing. Agr., Dr. paulaluc@vet.unicen.edu.ar
Claudia Lützelschwab, M.V., Dr. clutz@vet.unicen.edu.ar
Nora Lía Padola, M. V., Dr. nlpadola@vet.unicen.edu.ar
Marcelo Sanz, M.V., Dr. msanz@vet.unicen.edu.ar
Daniel Fernández, M.V., Dr. dfer_inm@vet.unicen.edu.ar
Vanesa Fernández, M.V. vanesaf@vet.unicen.edu.ar
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Descripción del curso:
El curso provee conocimientos sobre los componentes del sistema inmune y los
mecanismos inmunológicos básicos, cubriendo aspectos importantes para la formación del
profesional veterinario. Estos temas se desarrollarán en las clases guía y luego aspectos de
los mismos se trabajarán durante los talleres. En el taller de integración se realizarán
actividades de autoevaluación con una discusión grupal posterior. Los trabajos prácticos
desarrollarán los fundamentos de las pruebas de diagnóstico con base inmunológica más
importantes para el diagnóstico clínico. Los talleres y los trabajos prácticos son de
asistencia obligatoria.
Objetivos
A-Objetivos del Curso
Los objetivos del curso son:
1. Comprender los conceptos más importantes sobre los que se basa el funcionamiento
del sistema inmune.
2. Conocer las funciones de tejidos, células, proteínas y genes del sistema inmune.
3. Comprender los mecanismos, interacciones y regulación de la respuesta inmune.
4. Conocer el fundamento de los métodos con base inmunológica utilizados para el
diagnóstico veterinario.
B-Objetivos de aprendizaje
Para que el alumno adquiera dominio de la fisiología del sistema inmune debe lograr:
1. Adquirir el vocabulario específico de la materia.
2. Identificar los estímulos capaces de activar al sistema inmune.
3. Comprender las diferencias entre inmunidad innata y adaptativa.
4. Conocer y relacionar los mecanismos humorales y celulares que intervienen en la
inmunidad innata.
5. Conocer y relacionar los mecanismos que intervienen en la respuesta humoral y
celular de la respuesta inmune adaptativa y su regulación.
6. Comprender los principios de la inmunoprofilaxis
7. Comprender los fundamentos de los métodos inmunológicos utilizados para el
diagnóstico veterinario.
Aptitudes que se
Objetivos de Recursos para la
Evaluación pretende
aprendizaje enseñanza
desarrollar
Selección de
conceptos relevantes
Clases teóricas
Comprensión e
guía
Evaluación interrelación de
Talleres
mediante 1 examen componentes y
Taller de
parcial escrito y mecanismos
integración
B1, B2, B3, B4, B5, talleres Comprensión de
Uso de libros de
B6 Evaluación los mecanismos
texto y material
formativa durante el inmunitarios más
seleccionado por los
taller de integración importantes
docentes
Adquisición y
Confección de
desarrollo de una
glosario personal
metodología de
estudio
Evaluación Manejo de
Clases prácticas escrita de trabajos material de
B7
Clases teóricas prácticos laboratorio
guía Examen parcial Comprensión del
6
Taller escrito fundamento de las
Uso de libros de pruebas con base
texto y material inmunitaria.
seleccionado por los
docentes
Bibliografía
• Tizard I.R. 2009. Introducción a la Inmunología Veterinaria: 8va. Ed. Elsevier España
S. L. ISBN 978-84-8086-431-2.
• Tizard I.R. 2012. Veterinary Immunology: 9th. Ed. Elsevier Inc. ISBN 978-1-4557-
0362-3.
• Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pillai, S. 2008. Inmunología Celular y Molecular. 6ta.
Ed. Elsevier. ISBN N° 9788480863117.
• Fainboim, L., Geffner, J. Editores. 2011. Introducción a la Inmunología Humana. 6ª Ed.
Editorial Médica Panamericana. ISBN 978-95-0060-.70-92.
• Pennimpede, E., Gomez, C., Stanchi, N. Editores. 2004. Introducción a la
Inmunobiología. 1º Ed. Edulp. La Plata. Argentina. ISBN 950-34-0259-x.
• Gómez-Lucía, E.; Blanco, M.; Doménech, A. Coordinadoras. 2006. Manual de
Inmunología Veterinaria.: Pearson Educación S.A. ISBN 978-84-8322-358-1.
• Murphy, K.; Travers, P.; Walport, M. 2009. Inmunobiología de Janeway. 7ma. Ed. Mc
Graw Hill. ISBN 13: 978–970–10-7347-6.
• MacPherson, G. y Austyn, J.M. 2013. Inmunología: Conceptos y evidencias. 1º Ed.
McGraw Hill Interamericana Editores SA. ISBN: 978-607-15-0938-3
• Material complementario elegido por los docentes.
• Guía de Trabajos Prácticos. Curso de Inmunología Básica 2016. Disponible en
Fotocopiadora del Centro de Estudiantes y en la página web del curso.
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que contiene los fundamentos teóricos del tema a desarrollar y que cada alumno debe traer
leída al momento del práctico. Se desarrollarán en 4 comisiones de trabajo en los laboratorios
del edificio SAMP e incluirán una explicación introductoria por parte de los docentes, con
participación activa de los alumnos, y luego la realización de tareas de laboratorio, lectura de
pruebas serológicas y actividades de integración de fundamentos teóricos.
Evaluaciones:
-Para poder recuperar, deben tener un mínimo de 4 actividades prácticas aprobadas, dado
que se recupera hasta el 50% de las actividades obligatorias desaprobadas. Los ausentes sin
certificado no se recuperan.
Los certificados médicos se deben traer dentro de las 48 hs de la inasistencia (hasta martes
siguiente inclusive)
Un ausente con certificado a una actividad obligatoria se recupera el viernes siguiente.
Clases de consulta:
Se atenderán consultas, con el fin de aclarar temas puntuales, en la oficina de atención de
alumnos del edificio SAMP, en los horarios que figuren en cartelera.
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TRABAJO PRÁCTICO Nº1
TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRA – PROTEINOGRAMA – SEROLOGÍA -
MEDICIÓN DE Ig TOTALES
Suero
Coágulo
Sangre entera
Plasma
Leucocitos
Glóbulos rojos
Las técnicas de extracción varían de una especie a otra, según el vaso sanguíneo de elección y
el espesor, dureza y capa de la piel.
En los rumiantes y equinos, la sangre se extrae de la vena yugular o bien de la vena caudal
(bovinos). La vena yugular se ingurgita por compresión manual del canal yugular y se
introduce la aguja por encima de este punto. La extracción puede realizarse directamente de la
aguja al tubo o con jeringa llevando el émbolo hacia atrás lentamente. También puede
utilizarse el sistema de tubos al vacío (tipo vacutainer), que presentan mayor facilidad de uso
y garantía en cuanto a la asepsia y preservación de las muestras. Este sistema manejado en
forma adecuada presenta un menor riesgo de hemólisis de las muestras con respecto al
sistema de extracción con jeringa. Si la extracción se practica sin jeringa, para que no se
genere turbulencia y se produzca la hemólisis, se saca la aguja y se deja que la sangre fluya
lentamente por las paredes del tubo. Cuando la extracción se realiza a partir de la vena caudal,
se levanta la cola y se introduce la aguja a 15 cm de la base de la cola en la línea media hasta
que penetre en el vaso.
En cerdos la muestra se obtiene a partir de la punción de la vena de la oreja.
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En perros y gatos la muestra se extrae de la vena cefálica antebraquial o de la vena safena.
En las aves se realiza por punción de la vena radial (alar).
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Muestras de tejidos:
Las muestras tomadas se procesan hasta obtener el preparado histológico en el portaobjetos.
Éste puede utilizarse para la detección de Ag o Ac en pruebas de inmunofluorescencia o
inmunohistoquímica. Estas pruebas también pueden desarrollarse sobre frotis o improntas.
PROTEINOGRAMA ELECTROFORÉTICO
El proteinograma electroforético (o electroforesis de proteínas del suero) es una técnica
simple de laboratorio que permite separar las proteínas séricas en distintas fracciones por
medio de la aplicación de un campo eléctrico.
Esta prueba es muy usada para evaluar y monitorear distintos cuadros clínicos así como
también de gran ayuda en el diagnóstico de distintas enfermedades asociadas a desórdenes
proteicos.
Fundamento:
El plasma contiene muchas proteínas (proteínas transportadoras, enzimas, anticuerpos, etc.).
Tanto la carga eléctrica que poseen las proteínas, dada por los aminoácidos que la componen,
como su peso molecular afectan su movimiento sobre un soporte cuando se aplica un campo
eléctrico. Es decir, pequeñas proteínas altamente cargadas migran más rápido que grandes
proteínas, lo que permite que se separen durante la corrida electroforética.
La distinta velocidad de migración permite la formación de varias bandas o fracciones en el
gel de electroforesis, formadas por grupos de proteínas de tamaño y carga similar.
Procedimiento:
Se coloca una pequeña muestra de suero en un soporte, que puede ser de distintos tipos:
- Soportes tipo 1: acetato de celulosa gelificado o agarosa, donde se observan 5-6 bandas de
proteínas plasmáticas (la migración es según relación carga-masa de cada proteína)
- Soportes tipo 2: almidón o poliacrilamida, donde se observan 25 o más bandas (la
migración es según la relación carga-masa y tamaño).
En los laboratorios se usa habitualmente los soportes tipo 1 ya que son más fáciles de
interpretar.
Se coloca el soporte en la cuba de electroforesis con un buffer de corrida de pH y fuerza
iónica determinados tal que las proteínas posean carga eléctrica negativa y migren hacia el
ánodo (polo +) cuando se aplica voltaje.
Luego de terminada la corrida se retira el soporte y se deja evaporar el solvente. Se fijan las
bandas y se colorean con algún colorante para proteínas (según el soporte usado):
- Rojo Ponceau (acetato).
- Negro Amido (agarosa), etc.
Las bandas pueden mirarse a simple vista o leerse con un densitómetro (aparato que permite
cuantificar la intensidad y el ancho de cada banda para conocer el porcentaje de cada fracción
proteica). Si por otro método se determina la concentración de las proteínas totales del suero,
es posible calcular el contenido de cada fracción.
Albúmina
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Fig.1 Gel de un proteinograma de suero normal, y su lectura en densitómetro.
Como se observa en la Fig.1, las proteínas se separan normalmente en 5 fracciones:
albúmina, y , 2, y globulinas
Albúmina: es una proteína que se sintetiza en el hígado, y es la de mayor concentración en el
suero. Además de su función de transportadora de algunas sustancias endógenas y exógenas,
es de gran importancia en el mantenimiento de la presión coloidosmótica y reservorio móvil
de aminoácidos.
globulinas: incluye varias proteínas, algunas se mencionan a continuación:
globulina: incluye principalmente a la -antitripsina, una proteína de fase aguda.
globulina: en esta fracción se encuentra la haptoglobina, una proteína que une
hemoglobina intravascular evitando su excreción por el hígado. También se encuentran
macroglobulina y ceruloplasmina.
En general, los niveles de las proteínas de las fracciones y globulina se incrementan en
inflamación.
globulinas: incluye proteínas de baja densidad involucradas en el transporte lipídico
(lipoproteínas), de hierro (transferrina) y factores del complemento (C3 y C4).
globulinas: en esta fracción están incluidos los Ac del isotipo IgG.
Es importante aclarar que no todos los anticuerpos migran electroforéticamente con las -
globulinas, sino que algunos de ellos lo hacen con las y globulinas. (ver fig.2)
Fig. 2
22
2222
2
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En algunos casos, puede ser necesario evaluar el contenido en Ig del calostro, para saber si es
inmunológicamente adecuado o no. En otros, puede interesarnos conocer el nivel de Ig en
suero del recién nacido o de un animal cualquiera, independientemente de su edad.
En ambos casos, estamos buscando evaluar los niveles de Ig totales.
Para ello se cuenta con diferentes técnicas:
Fundamento:
Se utilizan sales de metales pesados como el sulfato de zinc (Zn SO4) o sulfito de sodio
(Na2 SO3) que en determinada concentración pueden unirse al Fc (fracción cristalizable) de las
Ig produciendo un fino precipitado. Se denominan también pruebas turbidimétricas porque la
precipitación enturbia la mezcla (mayor turbidez corresponde a una mayor concentración de
Ig).
DENSITOMETRIA
El calostro es rico en Ig. Dentro de las fracciones proteicas del calostro, las Ig son las que
sufren mayor variación cuantitativa. Por lo tanto, la densidad del calostro varía más en
función del contenido en Ig que por otros factores. Midiendo la densidad del calostro, se
puede tener una idea aproximada de su contenido en Ig. La densidad puede estimarse
fácilmente mediante el uso de un calostrómetro.
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concentración en
inmunoglobulinas
(g/l)
80
60
40
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SEROLOGÍA
La serología es la ciencia que estudia la detección de anticuerpos (Ac) en los distintos
líquidos corporales tales como lágrimas, secreciones bronquiales, líquido sinovial, leche,
calostro, plasma seminal, moco vaginal, suero sanguíneo, plasma, etc.
Aunque la palabra "serología" se refiere al suero (y más precisamente, al suero sanguíneo), se
utiliza en un sentido amplio abarcando todas las técnicas empleadas para identificar Ac en
cualquier humor o tejido del organismo. Por ej., en el diagnóstico de algunas enfermedades,
resulta importante detectar Ac en plasma seminal, en moco vaginal, en leche o suero lácteo.
Los Ac son elaborados por las células plasmáticas en respuesta a la estimulación producida
por una molécula extraña para el organismo llamada Ag. Estos Ag se hallan en las bacterias,
los virus, parásitos, hongos, partículas del polvo ambiental, células eucarióticas, etc. Los Ag
poseen sitios de unión (epitopes o determinantes antigénicos) a los cuales se unen los Ac en
forma específica. El número de epitopes constituye la valencia del Ag. Estos pueden ser
iguales o diferentes entre sí, pueden estar repetidos en un mismo Ag (Figura 2).
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- tiempo de incubación
- agitación
- concentraciones relativas de Ag-Ac
- concentración de electrolitos
Anticuerpo Antígeno
H
O O
Enlace de
hidrógeno N N
H
Enlace - +
electrostático
- +
Fuerzas de - + - +
van der Waals
+ - + -
Fuerzas
hidrofóbicas
agua excluida
Figura 4. Fuerzas de interacción atractivas. Extraído de: Regueiro J.R., López Larrea C.
“Inmunología. Biología y Patología del sistema inmune”. Editorial Médica Panamericana.
1996.
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TRABAJO PRÁCTICO Nº2
PRUEBAS DE INTERACCION PRIMARIA: FUNDAMENTOS
Título de un suero
El título es una forma de expresar la potencia de un suero inmune. Si en una prueba se
enfrenta al Ag con distintas diluciones del suero a analizar, se puede determinar el título del
suero. El título se expresa como la inversa de la máxima dilución del suero que dio reacción
positiva.
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Las sustancias marcadoras más comúnmente utilizadas para la fabricación de conjugados son
isótopos radiactivos, enzimas o colorantes fluorescentes; siendo la señal emitida detectada
mediante contadores de radiactividad, a simple vista y/o con espectrofotómetros,
fluorocitómetro y/o microscopio de fluorescencia, respectivamente.
En algunas de estas pruebas se utilizan los anticuerpos anti-inmunoglobulinas. ¿Cómo se
obtienen estos reactivos?: cuando inmunoglobulinas (Ig) purificadas provenientes de una
determinada especie animal (ej. bovino) se inyectan en un animal de otra especie (ej. conejo),
éstas se comportan como Ag (son reconocidas como extrañas). En este caso, el sistema
inmune del conejo reacciona formando anticuerpos (anti-inmunoglobulinas) contra las Ig
bovinas, los cuales se purifican para utilizarlos como reactivo en el laboratorio.
INMUNOFLUORESCENCIA
Es una técnica utilizada para la detección de moléculas (tanto Ag como Ac, dependiendo del
diseño) usando reactivos con colorantes fluorescentes, como el isotiocianato de fluoresceína
(FITC), la rhodamina o la ficoeritrina (PE). Estas sustancias al ser excitadas con luz de
longitud de onda del rango ultravioleta (190-380 nm), emiten luz visible de longitud de onda
mayor que se observa como una fluorescencia amarillo-verdosa (FITC, 495 nm) o anaranjado-
rojiza (PE y rhodamina, 480-565 nm).
Existen dos variantes de esta técnica: la IF directa y la IF indirecta.
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Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
Esta variante de la IF utiliza como conjugado un Ac anti-Ig marcado con sustancias
fluorescentes, para detectar la unión entre un Ac no marcado con su Ag específico (ver Fig
1B)
El procedimiento es similar al de IFD, excepto que al corte de tejido (o a las células) fijado al
portaobjetos conteniendo un Ag determinado (microorganismo, receptores, etc), se le agrega
una muestra problema (conteniendo potencialmente Ac que reconocerán al Ag). Los
inmunocomplejos formados luego de la incubación de estos dos componentes serán
detectados por la adición del conjugado (la anti-Ig marcada). Luego de los lavados necesarios
para la eliminación del conjugado libre, la muestra se observa con microscopio de
fluorescencia.
RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
El RIA es una prueba de interacción primaria que utiliza un radioisótopo como marcador del
conjugado. El más común es el 125I. Esta prueba es muy sensible y permite cuantificar
concentraciones muy pequeñas de una sustancia (hasta el orden de pg/ml), Los
radioinmunoensayos pueden realizarse en fases fluidas (RIA) o sólidas. Por ejemplo, en
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endocrinología permite la cuantificación de hormonas mientras que en clínica se usa para el
diagnóstico de enfermedades atópicas detectando la presencia de IgE y alergenos (RIST y
RAST).
Estas pruebas deben ser ejecutadas por personal autorizado y experimentado, debido a los
potenciales peligros para la salud y la contaminación ambiental que supone el manipuleo de
sustancias radiactivas.
ENZIMOINMUNOENSAYO (EIA)
El enzimoinmunoensayo es una técnica versátil y muy sensible, que puede utilizarse para
detectar y medir en una muestra tanto Ag como Ac. Los conjugados que se emplean tienen
como marcadores a diversas enzimas. Las enzimas más utilizadas son la peroxidasa, la
fosfatasa alcalina y la ß-galactosidasa.
Esta técnica recibe diferentes nombres de acuerdo al soporte sobre el que se realiza: cuando es
en placa, se denomina ELISA; sobre tejidos, inmunohistoquímica y sobre células, inmuno-
citoquímica.
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Inmunohistoquímica (IHQ) e inmunocitoquímica (ICQ)
Cuando el enzimoinmunoensayo se realiza sobre tejidos o células, hablamos de
inmunohistoquímica e inmunocitoquímica, respectivamente. Estas pruebas se realizan
sobre cortes de tejido de un modo similar a las IF, pudiendo ser directas o indirectas. En este
caso, el conjugado es una inmunoglobulina marcada con una enzima que al actuar sobre su
sustrato, lo modifica, y este producto induce un cambio en el cromógeno, convirtiéndolo en
un producto de reacción coloreado. Esta prueba se lee con microscopio de luz observándose
una reacción positiva como un precipitado de color sobre las estructuras histológicas o las
células que contengan el Ag buscado (Fig. 4).
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Esta prueba puede ser utilizada también para la detección de Acs. En este caso, el conjugado
es el Ag específico marcado. En la zona de detección está fijado un Ac anti-Ig (dependiendo
de la especie en la cual se buscan los Acs), el cual capturará los complejos inmunes formados
si la muestra posee Acs específicos. En la zona de control un Ac específico para el conjugado
(en este caso el Ag marcado) captura el exceso de Ag solubilizado por la muestra.
Aplicaciones:
En medicina humana se utiliza este test para detectar la gonadotrofina coriónica (test de
embarazo).
En medicina veterinaria se utiliza para detectar antígenos (Virus de la leucemia felina, parvo y
rotavirus, parásitos como Dirofilaria inmitis, y bacterias) o anticuerpos (anticuerpos anti-
virus de la inmunodeficiencia felina).
Marcador del
Técnica Lectura de la prueba
conjugado
Inmunofluorescencia Fluorocromo Microscopio de fluorescencia
Lector de
Polarización de luz fluorescente Fluorocromo
polarización de fluorescencia
Radioinmunoensayo Radioisótopo Contador de radiactividad
ELISA Espectrofotómetro o a simple vista
EIA Inmunohistoquímica Enzima Microscopio óptico
Inmunocitoquímica Microscopio óptico
Nanopartículas
Inmunocromatografía A simple vista
coloreadas
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Fig 3. Enzimo inmuno ensayo (ELISA) indirecto
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24
25
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TP3: PRUEBAS DE INTERACCIÓN PRIMARIA:
ELISA E INMUNOCROMATOGRAFÍA
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F1 Ctrl. negativo
G1 MP 1:25
H1 MP 1:25
A2 MP 1:50
B2 MP 1:50
C2 MP 1:100
D2 MP 1:100
E2 MP 1:200
F2 MP 1:200
G2 MP 1:400
H2 MP 1:400
Objetivos:
Conocer las etapas de una prueba de inmunocromatografía e interpretar los resultados.
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TRABAJO PRÁCTICO Nº 4
PRUEBAS DE INTERACCION SECUNDARIA: FUNDAMENTOS
Estas pruebas comprenden dos etapas. En la primera se forman rápidamente los complejos
Ag-Ac (complejos primarios), los cuales no pueden observarse directamente. Luego, en la
segunda etapa o reacción secundaria, los complejos se van agregando hasta hacerse visibles
como precipitado o aglutinado. La temperatura acelera esta segunda etapa, que además es
dependiente de la concentración de electrolitos (generalmente la reacción se realiza en
solución fisiológica).
Las uniones entre los complejos primarios dan origen a estructuras tridimensionales en forma
de red (enrejado de Marrack). La formación de estos agregados es una consecuencia de la
multivalencia de los Ac y los Ag, ya que si no se cumplen estos requisitos, la red no puede
formarse. Además, los reactivos deben estar en proporciones óptimas, dado que la
concentración en exceso tanto del Ag como del Ac origina complejos solubles (Fig. 1).
Si a la preparación antigénica se le agrega un exceso de Ac no se produce reacción. Este
fenómeno se denomina prozona.
0,3 1 1,5
Antígeno (mg)
Figura 1: Curva de precipitación cuantitativa.
Modificado de Tizard, I. Inmunología Veterinaria. Ed. Interamericana, Méjico. 1995.
PRUEBAS DE AGLUTINACION
Se pueden leer a simple vista o bajo aumento (microscopio óptico o lupa).
La reacción positiva (presencia de aglutinado o grumos) indica que Ag y Ac están presentes
en la reacción (y en proporciones óptimas).
En la figura 2 se muestra un esquema de los resultados obtenidos en dos pruebas de
aglutinación en tubo. La primera (Fig. 2a) se realizó con suero del primer muestreo de un
animal, ensayando las diluciones 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640. Se ve que la reacción
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es positiva sólo en los 2 primeros tubos (1/20 y 1/40). La segunda prueba (Fig. 2b), realizada
con suero de un muestreo del mismo animal a los 40 días del primero, muestra reacción
positiva hasta una dilución 1/320. Esto indica que hubo seroconversión (conversión
serológica), ya que el título del suero en el primer muestreo fue 40 y en el segundo fue 320.
el soporte, en:
-en placa (corresponde a las pruebas rápidas).
- en tubo (corresponde a las pruebas lentas).
Aplicaciones:
- Diagnóstico serológico de enfermedades infecciosas.
- Identificación de serotipos bacterianos.
- Tipificaciones de sueros sanguíneos (para determinación de grupos sanguíneos).
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- Identificación del isotipo de Ig (IgG o IgM) al que pertenecen los Ac presentes en el suero:
mediante el tratamiento previo del suero con -mercaptoetanol se despolimeriza la IgM,
perdiendo su capacidad de aglutinar. Este procedimiento permite conocer en qué etapa de la
respuesta inmune del animal se obtuvo la muestra.
- Valoración de anticuerpos “incompletos” o bloqueantes (prueba de Coombs): ciertos Ac
(monovalentes desde el punto de vista funcional), al estar en presencia de las partículas
correspondientes, se unen a ellas pero no las aglutinan. Esta unión bloquea a las partículas,
impidiendo la aglutinación por Ac específicos bivalentes.
Para valorar estos Ac bloqueantes, luego de que éstos se han unido a las partículas, se agrega
una antiglobulina la cual producirá la aglutinación por unión a los Ac bloqueantes.
Esta prueba permite detectar la presencia de anticuerpos en suero que reaccionan con
antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos como ocurre en la isoeritrolisis
neonatal del potrillo.
PRUEBAS DE PRECIPITACIÓN
Se utilizan para detectar tanto Ag como Ac, en forma cuali o cuantitativa. Pueden realizarse
en medio líquido (en tubos) o en medio semisólido (en tubos, placas, portaobjetos).
Cuando se realizan en medio semisólido (gel de agar o agarosa) reciben el nombre de
inmunodifusión. Al difundir y ponerse en contacto el Ag con el Ac, precipitarán formando
una banda o halo cuando estén en la relación óptima. El número de bandas de precipitación
indica la cantidad mínima de sistemas reaccionantes presentes. Es decir que, si las soluciones
contienen varios Ag y Ac diferentes, se producirá una línea de precipitación separada para
cada grupo interactuante de Ag y Ac.
En las pruebas de inmunodifusión se preparan, por ejemplo, placas de Petri con una capa de
gel de agar o agarosa donde se realizan pequeños orificios.
En la inmunodifusión radial (Fig. 3) uno de los reactivos (por ejemplo, el Ac) se añade al
gel antes de preparar la placa, y en los orificios se siembra el otro reactivo a analizar (por
ejemplo, muestras conteniendo o no al Ag), colocando siempre controles positivos. Al
difundir en forma radial y enfrentarse el Ag con el Ac correspondiente, se formará un halo o
anillo de precipitación alrededor del orificio.
La lectura se realiza midiendo el área del anillo de precipitación, y comparándola con los
valores de una curva estándar, siendo el diámetro del halo proporcional a la cantidad de
reactivo sembrado en el pocillo (Fig. 4).
anticuerpos disueltos en el
gel
antígeno en los
pocillos
Figura. 3: Inmunodifusión radial
31
Figura 4. Curva estándar para determinación de la concentración de Ig mediante
inmunodifusión radial
En la inmunodifusión doble bidimensional (prueba de Ouchterlony) ambos reactivos (Ag y
Ac) son sembrados en orificios enfrentados y los dos difunden en el gel. La presencia de una
banda de precipitación entre los dos orificios, indica una reacción positiva (Fig. 5).
Pocillos 2, 4 y 6:
controles
sueros 6 2
positivos.
Pocillos 1, 3 y 5:
problema
sueros
a. Ag
Pocillo central: Ag
5 3
Agantígeno.
De acuerdo a las leyes de la difusión, la distancia a la que una sustancia difunde está en
relación directa con su concentración y en relación inversa con su peso molecular. Es decir
que, si uno de los reactivos está en exceso, la banda se formará cerca del pocillo del reactivo
presente en menor concentración (Fig. 6, reactivo a) y si uno de los reactivos tiene moléculas
de distinto peso molecular, éstas difundirán con distinta velocidad, dando lugar a la formación
de más de una banda (Fig. 7).
a b c d
Figura 6 Figura 7
32
Aplicaciones:
- Las reacciones en medio líquido se aplican al diagnóstico e identificación de distintas
proteínas animales en productos alimenticios (análisis bromatológicos) o en medicina forense.
- Las pruebas de inmunodifusión se aplican en el diagnóstico de enfermedades infecciosas y
para la determinación de Ig, C3, transferrina y otras proteínas. También se utilizan para el
análisis de la pureza de una preparación antigénica y de las reacciones cruzadas entre distintos
Ag.
En esta última aplicación se investiga el grado de identidad que presentan dos Ag entre sí,
enfrentándolos con un suero específico para uno de ellos. Pueden obtenerse distintos
resultados:
Ag x Ag x Ag x Ag x-y Ag x Ag y
Ac x Ac x + Ac y Ac x + Ac y
La identidad total indica que ambos Ag son idénticos, es decir, no pueden ser diferenciados
entre sí por el antisuero utilizado. Las bandas de precipitación se funden en una sola línea
(Fig. 8 a).
La identidad parcial indica que existe una cierta relación entre los Ag, pero que uno de ellos
(Ag x-y) presenta componentes antigénicos (epitopes) no compartidos con el otro. Las bandas
de precipitación se funden parcialmente en una línea, apareciendo una prolongación o espolón
(Fig. 8 b).
La no identidad expresa que no hay ninguna característica compartida entre ambos Ag. Cada
sistema reacciona independientemente, originando bandas de precipitación que se cruzan (Fig.
8 c).
1) ¿Cuáles son las condiciones necesarias para que ocurra una reacción de aglutinación? ¿Y
una de precipitación?
3) Esquematice una reacción de aglutinación con IgG, otra con IgM. ¿Qué ocurre en ambos
casos si el suero se trata con -mercaptoetanol?
33
TRABAJO PRÁCTICO Nº5
PRUEBAS DE INTERACCIÓN SECUNDARIA: AGLUTINACIÓN Y
PRECIPITACIÓN
PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN:
Objetivo: realizar pruebas de aglutinación en placa (rápidas) y observar resultados de pruebas
de aglutinación en tubo (lentas). Realizar reacciones de aglutinación cualitativas y
semicuantitativas (empleando distintas diluciones de un suero para determinar el título del
mismo). Identificar el isotipo responsable de la aglutinación, comparando los resultados de la
prueba en presencia y ausencia de -mercaptoetanol. Explicar el fenómeno de prozona.
Materiales:
Sueros
Suspensiones de antígenos
Tubos
Pipetas
Pro-pipetas
Solución fisiológica
Aglutinoscopio
Procedimiento/Protocolo:
Aglutinación en placa:
1) Colocar sobre el vidrio 30 l de la suspensión antigénica y un volumen igual del suero sin
que se mezcle con la suspensión.
Repetir el procedimiento utilizando 30 l de solución fisiológica en vez de suero (control
negativo).
Mezclar el suero con el antígeno, y por otro lado, la solución fisiológica con el antígeno.
El resultado se expresa como positivo (+) cuando se forma un aglutinado o negativo (-)
cuando esto no ocurre. Esta es entonces una reacción cualitativa.
Describa cómo observa una reacción positiva y una negativa.
2) Emplear el suero puro y también realizar las siguientes diluciones, empleando solución
fisiológica como diluyente:
Diluciones
puro 1/2 1/4 1/8 1/16
Soluc. fisiol.: 40l 40l 40l 40l
Suero: 80l 40l
Aglutinación en tubo:
Esta prueba es lenta, ya que luego de mezclar en el tubo la suspensión del antígeno con el
suero, debe incubarse en estufa a 37ºC durante 48 h. Por lo tanto observaremos el resultado de
pruebas realizadas con anterioridad.
Considerar que todos los tubos tienen el mismo volumen de antígeno y que las diluciones del
suero son: 1/25, 1/50, 1/100, 1200 (Esta es una reacción semicuantitativa).
Observar aglutinado en el fondo del tubo y líquido claro (reacción positiva). Diferenciar con
botón y líquido turbio (reacción negativa).
34
1) ¿Cuál sería el resultado si ocurre el fenómeno de prozona con un determinado suero?
2) Sobre una placa conteniendo un gel de agarosa, sembrar 5 l de la solución del antígeno en
el pocillo central y 5 l de cada suero en los demás pocillos. Haga además un esquema de
resultados a obtener si algunos de los sueros contienen anticuerpos específicos contra ese
antígeno.
35
TRABAJO PRÁCTICO Nº6
CARACTERÍSTICAS DE LAS PRUEBAS SEROLÓGICAS. INTEGRACIÓN DE TP
El suero es una fuente heterogénea de Ac producto del contacto con diferentes antígenos
(Ag). Si deseamos investigar la presencia de Ac específicos contra un Ag determinado
debemos utilizar una prueba serológica adecuada (por ejemplo alguna de las vistas en los TP
precedentes). El resultado de la prueba nos permitirá establecer si el animal tuvo contacto
con el Ag en cuestión. La presencia de Ac para un determinado Ag no implica que el animal
esté enfermo.
Para determinar si ocurre una evolución de la respuesta inmunitaria (humoral), deben
compararse los títulos de dos muestras de suero tomadas con un intervalo de 3 semanas, y si
el título de la segunda muestra es mayor (mínimo 4 veces) que la primera se dice que ocurrió
seroconversión o conversión serológica. También se habla de seroconversión cuando la
muestra tomada en primera instancia es negativa, y la segunda muestra, obtenida
posteriormente, da resultado positivo, independientemente del título del suero.
Por lo anteriormente expuesto se dice que la serología cumple un papel complementario en la
confirmación de un diagnóstico.
La respuesta del sistema inmune a cualquier antígeno, aún el más simple, es policlonal. Esto
significa que el sistema fabrica anticuerpos contra un gran rango de epitopes del Ag. Los
sueros policlonales obtenidos luego de la inoculación de un Ag en un animal, son
comúnmente utilizados como herramientas en serología, diagnóstico e investigación.
Los anticuerpos monoclonales (ANEXO 1) son anticuerpos idénticos de especificidad única
sintetizados por un único clon de células plasmáticas modificadas artificialmente para que
pueda hacérselos crecer indefinidamente. Los Ac monoclonales son hoy ampliamente usados
como reactivos de diagnóstico e investigación.
Ac Ac
Figura 5.
36
Avidez Avidez es la medida de la fuerza total de unión de Ac multivalentes con un Ag que
presenta varios determinantes antigénicos (Figura 6).
Por lo tanto, la afinidad se refiere a la fuerza de unión de un solo determinante antigénico y un
sitio de combinación para el Ag en un anticuerpo individual, mientras que la avidez se refiere
a la fuerza de unión total entre varios antígenos y anticuerpos polivalentes.
La avidez es influenciada por las valencias del anticuerpo y del antígeno.
Reacción cruzada
Ac Ac
Ac Anti-A Anti-A
Anti-A
Ag A Ag B Ag C
Epitope compartido Epitope similar
Figura 7
37
Pruebas Valores Ac (mg/ml)
Pruebas de unión primaria
Radioinmunoensayo competitivo 0,00005
ELISA 0,0005
1) Para cada uno de los siguientes objetivos, elija una prueba serológica y describa cómo la
realizaría para:
a) determinar si en las muestras de suero de 3 animales hay Ac contra cierta bacteria
b) conocer cuál es el título de esos sueros
c) determinar el isotipo de esos Ac (si son IgM o IgG)
d) detectar la presencia de una bacteria en un tejido
e) conocer en qué células de un tejido está presente determinada proteína
f) cuantificar IgM total en un suero canino
g) determinar si un animal está respondiendo a un determinado Ag
h) detectar la presencia de Ac incompletos o monovalentes
2) En una prueba de interacción secundaria, ¿en qué situaciones puede haber formación de
complejos inmunitarios sin formación de la red de Marrack? ¿Cómo se podrían confirmar las
distintas hipótesis?
38
ANEXO 1
ANTICUERPOS MONOCLONALES
39
Antígeno
Aislar
células
del bazo Fusión Selección
Suero
Ac4
Ac1
Ac1 Ac1 Ac2 Ac3 Ac4
Ac3
Ac2
Ac3
Ac2
Ac4
*Sin embargo, cada uno de los Ac presentes en el suero reconoce un único epitope.
Bibliografía:
- Kuby, J. 1997. Immunology. 3rd. ed. W. H. Freeman and Company, New York. p. 131-135.
- Campbell, A. M. 1984. Monoclonal antibody technology. 1st. ed. Elsevier Science Publishers B.V.,
Amsterdam. p. 1-30.
40
ANEXO 2
Pruebas de interacción primaria
Enzimo Inmuno Ensayo
Dentro de las pruebas de interacción primaria, las pruebas de ELISA han sido de las más
difundidas. Pueden utilizarse para detectar o cuantificar tanto antígenos como anticuerpos,
pueden aplicarse fácilmente a diversos fluidos como leche u orina, requieren pequeños
volúmenes de muestra y son relativamente rápidas. Otra propiedad importante es que la señal
(color) puede ser cuantificada por aparatos específicos (espectrofotómetro) dando un
resultado objetivo que puede ser fácilmente automatizado.
En el desarrollo de los TP Nº3 y 4, se discutió el ejemplo de prueba de ELISA llamado
ELISA indirecto. Dependiendo de la secuencia en que se empleen los diferentes reactivos
(anticuerpos, antígeno y conjugado), podemos generar gran cantidad de variantes de esta
prueba. A continuación se describen algunas de ellas, como son el ELISA de captura o
sandwich y el ELISA competitivo (fig. 1 y 2)
41
Este tipo de ELISA puede utilizarse tanto para la detección de Ag como la de Ac. En este
ejemplo se utiliza para la detección de un AgX en una muestra compuesta por diferentes
proteínas. Los Ac del isotipo.
42
Veamos algunos de los reactivos que se utilizan en las pruebas de interacción primaria:
Anticuerpos policlonales, obtenidos a partir del suero de animales inmunizados con el
antígeno de interés.
Anticuerpos monoclonales, es decir, producidos por un único clon de células plasmáticas, por
lo tanto con única especificidad. Investigue en la bibliografía como se obtienen los
anticuerpos monoclonales.
Anticuerpos anti-inmunoglobulina, obtenidos por inmunización con inmunoglobulinas de una
especie determinada en un animal de otra especie. Por ejemplo: anticuerpos generados en
conejo anti-IgG bovina (conejo anti IgG bovina)
Por su practicidad y relativo bajo costo, las pruebas de ELISA son de fácil implementación en
programas de control y erradicación de enfermedades infecciosas y en relevamientos
serológicos.
infecciosas.
43
Hormonas Enf. Inmunoglobulinas Bromatología
Autoinmunes
Insulina Ac anti IgG especie de origen
tiroglobulina de las carnes
Estrógenos Ac anti IgA
eritrocitos
Progesterona Complejos IgE
inmunes
Hormonas Ac anti ADN IgM
tiroideas
Cuadro 2: Otras aplicaciones de la técnica de ELISA.
Radioinmunoanálisis (RIA)
El RIA es una prueba de interacción primaria que utiliza un radioisótopo como marcador. El
más común es el 125I. Esta prueba es muy sensible y permite cuantificar concentraciones muy
pequeñas de una sustancia (hasta el orden de pg/ml), por ejemplo, en endocrinología permite
la cuantificación de hormonas (Fig 3).
En clínica se usa para el diagnóstico de enfermedades atópicas detectando la presencia de IgE
total y específica para un determinado antígeno (RIST y RAST, respectivamente). El soporte
sólido utilizado en ambos casos es un disco de celulosa.
RIST (radioinmunosorbent test) es un RIA competitivo en el cual se detecta la cantidad total
de IgE del suero de un paciente alérgico sin importar su especificidad. Los niveles séricos de
IgE son generalmente bajos. Una respuesta de Ac en la que se elevan significativamente las
concentraciones séricas de IgE sugiere una predisposición genética a padecer alergia, pero no
aporta datos sobre el Ag que provoca esa respuesta. Se detectan asimismo niveles aumentados
de IgE en animales parasitados.
RAST (radio allergo sorbent test) es un radioinmunoensayo donde se detecta IgE específica
para un determinado Ag o alergeno.
Estas pruebas deben ser ejecutadas por personal autorizado y experimentado, debido a los
potenciales peligros para la salud y la contaminación ambiental que supone el manipuleo de
sustancias radioactivas.
44
Fig. 3 Radioinmunoensayo competitivo
Western Blot
Mientras que el ELISA detecta los anticuerpos contra un determinado Ag presentes en
líquidos biológicos, dando resultados negativos, positivos o indeterminados, el Western Blot
es un test más específico. Esta técnica permite identificar un Ag o Ac determinado en una
muestra de composición heterogénea. Por ejemplo, se pueden identificar los Acs generados
contra diferentes fracciones de un patógeno, que componen una respuesta policlonal contra el
mismo. El Western Blot combina la separación de proteínas de una mezcla de acuerdo a su
peso molecular, con la detección inmunológica de Ag individuales mediante el uso de Ac
específicos para esos Ag. (Fig. 4).
45
Dada su alta especificidad, el Western Blot se utiliza en muchos casos como prueba
confirmatoria (p.e.: SIDA) y ha probado ser una herramienta muy útil para identificar los Ag
más importantes en microorganismos complejos y parásitos.
46
FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) o Citometría de flujo
Fluorescence activated cell sorting (FACS o Citometría de flujo) es una técnica que permite
analizar ciertas propiedades físicas y químicas de células o partículas a las que se les ha unido uno
o mas Ac monoclonales marcados con colorantes fluorescentes, capaces de reconocer epitopes
sobre antígenos de superficie celular (por ejemplo CD4, CD8 y CD3). (Fig. 5). Estas células o
partículas se encuentran en suspensión y fluyen, una a una, frente a un rayo láser. A su paso frente
al rayo, la luz es desviada en un ángulo determinado, el cual es proporcional al tamaño de esa
célula. A su vez, los fluorocromos (colorantes fluorescentes) de los anticuerpos unidos a la célula
son activados por la luz del rayo láser, emitiendo fluorescencia, que es colectada por sensores,
filtrada y almacenada en una computadora.
PE (CD8)
Doble positivo
CD4-CD8+ (CD4+CD8+)
1000
100
CD4-CD8- CD4+CD8-
10
1
1 10 100 1000
FITC fluoresc. (CD4)
48
Preguntas sobre temas de clases
49
INTRODUCCIÓN AL SISTEMA INMUNITARIO
1. ¿Qué es el sistema inmune?¿Qué ocurre en ausencia de un sistema inmunitario funcional?
2. ¿La vigilancia inmunitaria se cumple sólo frente a agentes externos al organismo?
3. Indique las barreras naturales que posee un animal, clasificándolas en físicas, químicas y
biológicas. Identifique algunos factores que puedan alterarlas.
4. Frente a las siguiente situaciones, indique en qué caso espera obtener mayor respuesta inmune
del animal inyectado y justifique su respuesta.
I Un bovino al que se le inyecta:
a) Una proteína de ratón
b) Una proteína de ovino
II Un bovino al que se le inyecta :
a) Una proteína de 200 KDa
b) Un pequeño péptido, proveniente de la digestión de esta proteína.
III Un bovino al que se le inyecta :
a) Una proteína
b) Un lípido
5. ¿Cuáles células del sistema inmune derivan de la línea mieloide y cuáles de la línea linfoide?
Para cada uno de los tipos celulares mencionados, indique la función y la principal localización.
6. ¿Qué diferencias existen en el reconocimiento de material por parte de la inmunidad innata y la
inmunidad adaptativa. ¿Qué estructuras son reconocidas por la inmunidad innata? Indique los
receptores que las reconocen y su localización.
7. Realice un esquema de los pasos del proceso de fagocitosis. Indique las células y moléculas
involucradas.
8. ¿Cuáles son las diferencias entre la actividad fagocítica de los macrófagos y de los neutrófilos?
9. Indique cuáles son los mecanismos bactericidas más importantes que se desencadenan tras la
fagocitosis.
10. ¿En qué tipo de infecciones participan las células NK?
Glosario
Dar una definición de los siguientes términos. Puede incluir en la lista otros términos nuevos para
su vocabulario.
Antígeno Microorganismos comensales
Epitope Epitope
Inmunógeno Epitope secuencial y conformacional
Hapteno Opsoninas
Barreras naturales Quimioquinas
Paratope
Bibliografía :
Escriba los datos del /los libros o material utilizado citando: Autor/es del capítulo si corresponde
(apellido e iniciales de cada uno separados por “;”). Año de publicación. Nº de Capítulo. Título
completo del capítulo. Página inicial y final. Editor/es o autor del libro (apellido e iniciales ). Título
completo del libro. Nº de Edición. Editorial, lugar de publicación.
Ejemplo: Coffin, J.M. (1996). Capítulo 26. Retroviridae: the viruses and their replication, pp 763-
843. En: B.N. Fields; D.M. Knipe; P.M. Howley; et al. Fundamental Virology. 3ra edición.
Lippincott – Raven Publishers, Philadelphia.
En el caso de ser material encontrado en Internet citar: Nombre del sitio. Año de actualización.
Título del artículo. Dirección completa del sitio.Ejemplo: ONUSIDA-OPS. 2004.
Vigilancia del SIDA en las Américas. Disponible en http://www.unaids.org.
50
COMPONENTES HUMORALES DE LA INMUNIDAD INNATA
1) Complete el siguiente cuadro sobre el sistema del complemento:
a)……………………………………………………………………………………
Vías de
b)……………………………………………………………………………………..
Activación
c)……………………………………………………………………………………….
d) ……………………………………./…………………………………………
2) Teniendo en cuenta las distintas funciones del complemento, esquematice las células y
moléculas que intervienen en los siguientes mecanismos:
a) fagocitosis
b) inflamación
3) Complete el siguiente cuadro teniendo en cuenta solo los interferones relacionados con la
inmunidad innata:
Tipo de Nombre Principal célula que lo Función
interferón produce
4) ¿A qué se llama respuesta de fase aguda? ¿Qué componentes y mecanismos intervienen? ¿qué
signos y síntomas se presentan a nivel sistémico?
5) ¿Cuál es la función de la respuesta inflamatoria? ¿Por qué se desencadena esta respuesta?
¿Cómo se relaciona con otros componentes de la respuesta inmunitaria?
6) ¿Cuáles son los signos característicos de la inflamación local y qué los provoca?
7) Indique cuáles son las citoquinas proinflamatorias. ¿Qué células las producen? ¿Sobre qué
tejidos/órganos actúan y qué efecto tienen sobre los mismos?
Glosario
Respuesta de fase aguda Virus Proteínas de fase aguda
Interferones de tipo I Inflamación
Interleuquinas proinflamatorias
Bibliografía utilizada:
51
ORGANIZACIÓN DEL SISTEMA INMUNITARIO. CÉLULAS DE LA INMUNIDAD
ADAPTATIVA.
1) Describa la organización celular del tejido linfoide en el ganglio linfático ¿Cómo circulan los linfocitos
en este órgano?
2) Qué procesos se llevan a cabo en :
a. zona paracortical del ganglio
b. folículo secundario
c. centro germinativo
d. médula
e. vénula de endotelio alto
3) ¿Qué rol tiene la bolsa de Fabricio y cuál es su equivalente en otras especies?
4) Complete el siguiente cuadro:
Propiedad Linfocitos B Linfocitos T
Órgano donde madura
Distribución
Circulación
Receptores de Ag
Tipo de Ag que reconocen
Células diferenciadas
Productos secretados
5) Ordene en una lista las siguientes células en relación con el desarrollo. Identifique al lado de cada célula
el órgano en el cual se las encuentra y además si en el mismo hay contacto con antígeno o no.
a. Linfocito B virgen
b. Progenitor linfoide común
c. Linfocito T citotóxico
d. Plasmocito
e. Célula troncal pluripotente
f. Linfocito T virgen.
6) a)¿Qué componentes del sistema inmunitario se verán afectados en un animal cuya médula ósea es
destruída por irradiación?
b)¿Cuál sería el efecto de una timectomía (extirpación del timo) en un animal recién nacido?
7) Realice un esquema de los mecanismos que se llevan a cabo en el timo indicando las células y moléculas
de superficie involucradas más importantes. ¿Cuál es la consecuencia de la falla de estos procesos?
8) Indique que tipo de selección interviene y su consecuencia sobre los LT inmaduros en los siguientes
casos:
a. No hay TCR
b. TCR + MHC+ autoantígeno
c. TCR + MHC de diferente haplotipo
d. TCR + MHC +Ag X extraño
Glosario
Antígeno
Hapteno
Repertorio
TCR
BCR
CMH
Restricción del CMH
Coestimulación
Especificidad
Diversidad
Bibliografía utilizada:
53
RESPUESTA INMUNITARIA HUMORAL
3) ¿Qué características tienen los antígenos T-independientes (TI)? Dé ejemplos. Esquematice cómo
interacciona un antígeno TI con las células que intervienen y las características de la respuesta humoral
que éste genera. Realice un cuadro señalando las diferencias con la respuesta humoral que genera un
antígeno T-dependiente.
4) Identifique los mecanismos en los que los anticuerpos intervienen para eliminar o limitar la acción de
un agente patógeno. Realice esquemas en los que se representen estas funciones biológicas de los
anticuerpos.
Glosario
Antígenos T dependientes
Antígenos T independientes
Maduración (aumento) de la afinidad
Procesamiento de Ag
Inmunidad humoral
Centro germinal
Cooperación celular
Cambio isotópico
Selección clonal
Clase o isotipo de Ig
Moléculas coestimulatorias
Bibliografia utilizada:
54
RESPUESTA INMUNITARIA CELULAR
3) Identifique los elementos celulares y humorales que intervienen en la respuesta inmune frente a un
antígeno que es procesado por la vía citosólica
a. Describa el mecanismo de presentación del antígeno, indicando las moléculas de membrana
que intervienen.
b. ¿Cuáles son los requerimientos para la activación de la célula efectora?
c. ¿Cuáles son las consecuencias de la activación de la célula efectora? ¿Cómo lleva a cabo la
eliminación del antígeno?
4) Elabore un cuadro comparando las vías de activación y mecanismo de citotoxicidad de los linfocitos T
citotóxicos y de las células NK (naturales asesinas).
5) ¿Cómo se diferencian la vía de citotoxicidad mediada por FAS de la mediada por perforinas?
6) ¿Qué mecanismos llevan a la activación de los macrófagos? ¿Cuáles son las consecuencias de su
activación?
Glosario
Linfocitos Th1
Linfocitos Th2
Linfocitos Th0
Apoptosis
FAS/ ligando de FAS
Perforinas
Citotoxicidad
INF
Macrófago activado
citotoxinas
Células naturales asesinas o NK
Bibliografia utilizada
55
RESPUESTA INMUNE EN ACCIÓN
Vía de procesamiento
principal del Ag
Principal subpoblación
de LT colaborador que
actúa
Mec. Solubles
efectores de
la IA Celulares
Glosario:
Virus
Endotoxina
Endotoxina
respuesta protectora
mecanismos de evasión de la respuesta inmune
Bibliografía utilizada:
56
INMUNOPREVENCIÓN
2) Indique en el siguiente cuadro las ventajas y desventajas del uso de vacunas convencionales vivas y
muertas.
Tipo de vacunas Ventajas Desventajas/riesgos
Vivas/ atenuadas
Muertas/inactivadas/inertes
3) ¿En qué tipo de vacunas deben usarse adyuvantes? ¿Cómo actúan estas sustancias sobre el sistema
inmunitario? Cite los adyuvantes de mayor empleo en medicina veterinaria.
5) ¿Con qué propósito vacunaría una hembra gestante? ¿Qué tipo de vacuna utilizaría y en qué momento
antes del parto lo haría? Fundamente sus respuestas.
7) Ud. recibirá en clase un frasco de vacuna. En base al estudio del mismo complete este informe:
Se trata de una vacuna: combinada o mixta
monovalente / polivalente
viva / inerte
liofilizada / en suspensión o solución
57
REGULACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNITARIA
1) Describa en qué se fundamenta la tolerancia hacia los propios tejidos.
2) ¿Por qué están regulados los mecanismos de la inmunidad innata?
3) ¿Por qué la respuesta inmunitaria frente a un Ag determinado no aumenta indefinidamente? Explique.
4) Identificar los procesos (incluidos los de regulación) que ocurren en cada etapa de la respuesta inmune
humoral (1-2-3).
1 3
5) ¿Por qué 2 animales pueden desarrollar una respuesta inmunitaria diferente frente a una misma
vacuna?
6) Compare las siguientes curvas de respuesta frente a vacunas atenuadas (vivas) e inactivadas (muertas).
¿A qué se debe la diferencia? Relacione con las funciones de los adyuvantes.
Glosario:
Bibiografía utilizada:
58