1

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 4

TEMA: HETERÓTROFOS.

NOMBRES: Ivonne Rivera CÓDIGOS: 007

Gabriela Perez 138
Lesly Pilataxi 028
Daniela Nuñez 008
Hermant Ortega 031
Erika Paredes 012
Jennifer Moyano 009

CURSO: Tercero “A”

FECHA DE REALIZACIÓN: 18/12/2018 FECHA DE ENTREGA: 04/01/2019

1. OBJETIVOS

Objetivo General:

• Determinar la presencia de microorganismos heterótrofos en una muestra de suelo.

Objetivos Específicos

• Efectuar los métodos de: siembra por extensión en placa y vertido en placa, usando
diluciones seriadas.

• Conocer el número de organismos heterotróficos viables que contiene una muestra

de suelo.
 2

2. MARCO TEÓRICO
HETEROTROFOS

Los heterótrofos sintetizan sus propias sustancias a partir de elementos inorgánicos, tales
como luz, minerales del suelo, dióxido de carbono (CO2), agua (H2O), de ahí que no
dependan de otros organismos para su nutrición.

Los organismos heterótrofos (del griego hetero, otro, desigual, que se alimenta), en contraste
con los organismos autótrofos, son aquellos que deben alimentarse con las sustancias
orgánicas sintetizadas por otros organismos, bien autótrofos o heterótrofos a su vez. A este
grupo pertenecen todos los integrantes del reino animal, los hongos, gran parte de
las bacterias y de las arqueas.

SABOURAUD

Es un medio selectivo para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas y no

clínicas. Se han añadido agentes selectivos para inhibir las bacterias. El cloranfenicol es un
antibiótico de amplio espectro que inhibe una amplia variedad de bacterias gram negativas y
gram positivas, pero puede tener un efecto inhibidor en numerosos hongos patógenos.

Se ha demostrado que los antimicrobianos como la penicilina, la gentamicina y la

estreptomicina, o una combinación de las mismas, son eficaces en la inhibición de bacterias
sin afectar el crecimiento fúngico. Estos medios se utilizan para el aislamiento de hongos a
partir de muestras clínicas o materiales en los que se sospeche la presencia de contaminantes
bacterianos. Sabouraud Glucosa Agar es uno de los medios utilizados en las pruebas de
límites microbianos en USP y EP. (Gagneten et al., n.d.)

TSB

El TSB Agar es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de

microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias.
Permite visualizar reacciones hemolíticas que producen muchas especies bacterianas.

Tiene por base una fuente proteica (digeridos trípticos, digeridos proteicos de soja) con una
pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sódico y 5% de sangre. Es un
medio recomendado para la detección y recuento de una amplia gama de microorganismos.
 3

La presencia de Lectina y Tween permite neutralizar la actividad antibacteriana, facilitando

la investigación de los gérmenes en productos o superficies que contengan: Aldehídos,
derivados fenólicos, o amonio cuaternario.

La aportación de caseína y peptonas de soja al Agar de Tripticasa-soja hace el medio muy

nutritivo por el suministro de nitrógeno orgánico, particularmente aminoácidos y péptidos de
cadena más larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran
variedad de gérmenes aerobios y anaerobios que crecen rápidamente, así como los del género
Candida. También permite el crecimiento de algunos gérmenes exigentes como
estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix

3. MATERIALES Y EQUIPOS

CANTIDAD EQUIPOS
CANTIDAD MATERILAES
1 Balanza
1 Erlenmeyer de
250 ml 1 Incubadora

5 Tubos de 1 Autoclave
Ensayo
6 Pipeta de 10ml
1 Pipeta de 1 ml
1 Pera de Succión
1 Gradilla SUSTANCIAS
1 Reverbero Agar TSA
1 Lámpara de Agar Saborund
Alcohol
10g de suelo
6 Cajas Petri

4. PROCEDIMIENTO
1.- Con ayuda de una
espátula tomar una
muestra de suelo de
10g.
4.- Pipetear 1ml de
5.- Repetir este proceso
dilución 10-2 de la
muestra y colocar en el
tubo 10-3 .
7.- Utilizar placas
previamente preparadas
con el medio de cultivo
solidificado.
10.- Incubar las placas
a 35°C por 48 horas.
Figura 1.- Diluciones seriadas (Ver anexo I)
2.- Verter la muestra de
suelo en el Erlenmeyer
que contiene 90 ml de
agua de peptona y
homogenizar.
hasta llegar a la
dilución de 10-6.
8.- Depositar en la
superficie del agar 0.1
mL de la muestra o de
cada dilución.
4
3.- Pipetear 1ml de
dilución 10-1 de la
muestra y colocar en el
tubo 10-2 de Agua de
Peptona, homogenizar,
6.- Realizar la siembra
en superficie y vertido
en placa de las
diluciones en Agar PDA
9.- Extender la muestra
sobre toda la superficie
con la técnica de
siembra por extensión
en placa
 5

5. RESULTADOS
MORFOLOGÍA COLONIAL

Figura 2.- Diluciones seriadas (Ver anexo II)

• Siembra por extensión (Sabouraud)

La siembra por extensión con Sabouraud presenta dos formas de colonias una puntiforme
con borde ondulado y una elevación convexa, la otra forma de las colonias es circular con
borde entero y una elevación convexa.
Tabla 1 Colonias Puntiformes
Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Cremosa Blanquinoso - Opaca - Opaca

Tabla 2 Colonias Circulares

Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Cremosa - Blanquinoso - Translucida • Brillante
- Amarillento

• Siembra por extensión (TSB)

La siembra por extensión con TSB presenta una forma de colonias circular con borde
ondulado y una elevación convexa.
Tabla 3 Colonias Circulares
Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Cremosa - Blanquinoso - Translucidas - Brillantes
- Amarillento (Amarillentas)

- Transparente
(blanquinosas)
 6

• Vertido en placa (Sabouraud)

La siembra de vertido en placa con Sabouraud presenta dos formas de colonias una forma es
de forma circular con borde ondulado y de elevación elevada, y las otras colonias son de
forma puntiforme con borde ondulado y de elevación convexa.
Tabla 4 Colonias Circulares
Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Cremosa Blanquinoso - Translucida - Brillante

Tabla 5 Colonias puntiformes

Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Membranosa Blanquinoso - Opaca - Opaca

• Vertido en placa (TSB)

La siembra de vertido en placa con TSB presenta dos formas de colonias, una forma de
colonias circulares con el borde entero y una elevación convexa y las otras colonias de forma
irregular con el borde ondulado y una elevación plana.
Tabla 6 Colonias Circulares
Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Rugosa - Membranosa Amarillento - Opaca - Brillante

Tabla 7 Colonias irregulares

Consistencia Características ópticas
Superficie (se prueba con el Color
Luz transmitida Luz reflejada
asa)
- Lisa - Membranosa Blanquinoso - Transparente - Opaca
 7

RECUENTO MICROBIANO

Siembra por extensión (Sabouraud)

1
𝐔𝐅𝐂 = 50 UFC x x 1 ml = 5𝑥107 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
10−6

Siembra por extensión (TSB)

No cuantificable, prueba fallida.

Vertido en placa (Sabouraud)

1
𝐔𝐅𝐂 = 48 UFC x x 1 ml = 4,8𝑥107 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
10−6

Vertido en placa (TSB)

1
𝐔𝐅𝐂 = 3 UFC x x 1 ml = 3𝑥106 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
10−6

6. CONCLUCIONES

• Se pudo concluir que los microorganismos heterótrofos necesitan de un medio de

cultivo enriquecido ya que estos toman los nutrientes para su crecimiento del mismo,
en la muestra de suelo tomada no se encontró gran variabilidad microbiana puesto
que el crecimiento de colonias no fue muy variado y un poco escaso.

• Fue necesario que la muestra de las diluciones se encuentre muy bien expandida o
vertida sobre la placa ya que esto ayudaría a que las colonias microbianas estuvieran
muy separadas y puedan ser cuantificadas.
 8

7. RECOMENDACIONES

- Realizar correctamente la esterilización de los materiales.

- Los materiales una vez esterilizados manejar con el mayor cuidado para prevenir la
contaminación.
- Aplicar la técnica de flameo en todos los procesos.
- Desinfectar el área de trabajo, para que haya la menor carga microbiana.
- Colocar la cantidad correcta de agar al momento de plaquear las cajas Petri.
- En el vertido en placa abrir lo menos posible la caja petri para evitar cualquier
infección de microorganismos que haya al contorno.
- En siembra por extensión evitar que la boca de la pipeta realice un rasgado en el agar.
- La muestra siempre se debe expandir correctamente.

8. BIBLIOGRAFIA
• Aquiahuatl Ramos, M., P, & Perez Chabela, M. (2004). Laboratorio de
Microbiología General. Obtenido de Uamenlinea:
http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_
RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf
• Rojas Tribiño, A. (2011). Conceptos de Microbiología General. Obtenido de Unirvesidad
Nacional de Colombia:
http://bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdfArthur Gathen. (2017).
TSA. Retrieved from
http://www.laanunciataikerketa.com/trabajos/fregasuelos/medios.pdf
• Gagneten, A. M., Imhof, A., María, /, Rocío, D., Juan, M. /, Zabala, M., … Ojea, N.
(n.d.). Unidad 3. Metabolismo. Retrieved from
http://www.unl.edu.ar/ingreso/cursos/biologia/wp-
content/uploads/sites/9/2016/11/BIO_03.pdf.pdf
• W.A. Dorland. (2005). Dorland: Diccionario Enciclopédico Ilustrado De Medicina.
Retrieved from
https://www.researchgate.net/publication/44331936_Dorland_Diccionario_Enciclop
 9

edico_Ilustrado_De_Medicina.
• PRESCOTT et al. “Microbiología. 5ª Edición. Editorial Mc. Graw Hill
Interamericana. 2004.
• INGRAHAM AND INGRAHAM. “Introducción a la Microbiología”. Editorial
Reverté. 1998.
• SCHLEGEL, H.G. “Microbiología general”. Ediciones Omega,S.A. 1997
• JIMENEZ SANCHEZ Y GUERRERO. “Genética molecular bacteriana”. Editorial
Reverté.
TAMARIN R.H. “Principios de Genética”. Editorial Reverté.

-
 10

9. ANEXOS

ANEXO
I

A)

NOTAS: CATEGORIA ESCUELA SUPERIOR TEMA:

DE POLITECNICA DE HETERÓTROFOS
L DIAGRAMA:
CHIMBORAZO
a. Esquema gráfico de Aprobado Preliminar FACULTAD DE
diluciones hasta la -5 y LÁM: ESC: FECHA:
Certificado  Por aprobar CIENCIAS ESCUELA DE
la intensidad de colonias
en las respectivas Información  Por calificar CIENCIAS QUÍMICAS
1 1:1 2019/01/02
diluciones
ELABORADO POR:
Nuñez Aliaaon
 11

ANEXO II

A) D)

C) B)

NOTAS: CATEGORIA DEL ESCUELA SUPERIOR TEMA:

DIAGRAMA: POLITECNICA DE HETERÓTROFOS

A) Siembra de Sabouraud por estrías con CHIMBORAZO

Aprobado Preliminar
colonias circulares y con elevaciones planas FACULTAD DE
y convexa Certificado  Por aprobar LÁM: ESC: FECHA:
CIENCIAS ESCUELA DE
Información  Por calificar
B) siembra de vertido en placa con agar CIENCIAS QUÍMICAS
2 1:1 2019/01/02
Sabouraud con una única colonia
ELABORADO POR:
C) Siembra por extensión de TSB, con
Nuñez Alisson
colonias irregulares, con bordes lobulados y
traslucidas

D)Siembra por vertido e placa con TSB, las

colonias son escasas