UNIDAD 2.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

CARRILLO LOPEZ TANIA MONSERRAT

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PRECAUCIONE
MEDIO DE INTERPRETACIÓ
PRUEBA S/
PRINCIPIO OBJETIVO BIOQUÍMICA CULTIVO/REACTIVOS N DE
BIOQUÍMICA INTERFERENCI
EMPLEADOS RESULTADOS
AS
MALONATO Esta prueba Que la bacteria El Malonato es MEDIO: PRUEBA Sembrar solo
determina la utilice el malonato inhibidor Caldo Malonato; POSITIVA: cepas en tubos
capacidad que de sodio como enzimático que (de Ewing Modificado) es para el color azul de caldo de
tiene una única fuente de inhibe la acción diferenciación de coliformes y claro a azul de malonato por
bacteria de carbono con la catalítica de la otros microorganismos en Prusia intenso asa suspendida
desaminar la consiguiente succinato especial Enterobacter y Escheric en todo el e incubar los
fenilalanina y alcalinidad. deshidrogenasa hia coli,basándose en el medio es debido tubos a 37 °C
de utilizar el El ácido consumo de malonato. a la utilización durante 48
Malonato como malonico del malonato horas.
única fuente de inactiva la REACTIVOS: como única
carbono. enzima por un Extracto de levadura fuente de
proceso Sulfato de amonio carbono
denominado Fosfato de amonio PRUEBA
inhibición Fostafo monopotásico NEGATIVA: el
competitiva. El Cloruro de sodio medio
ácido malonico Malato de sodio permanece
es Glucosa verde porque no
estructuralment Azul de bromotimol se utilizó el
e análogo al Ph final 6.7. malonato o
acido succínico y cambia a
compiten por el amarillo porque
lugar de la hubo
enzima. fermentación de
glucosa.

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Tiene como Hay bacterias que El almidón es MEDIO: POSITIVO: Esta prueba no
principio la utilizan los producido por El medio de agar-almidón es Se muestra un es una reacción
producción de alimentos plantas utilizado en la selección de área clara química ya que
exoenzimas macromoleculares superiores, está microorganismos productores alrededor del no se producen
HIDROLISIS alpha-amilasa y los hidrolicen compuesto de de amilasas y también en los cultivo sustancias
DE ALMIDON para su amilasa y cultivos de hongos. Negativo: color nuevas. Es
aprovechamiento amilopectina. REACTIVOS: negro alrededor importante
usando enzimas Diversas enzimas Agar de almidón del cultivo usar reactivo
extracelulares amiloliticas Sustrato: almidón (polímero de para identificar
como la amilasa hidrolizan glucosa) el almidón se
esta prueba tiene almidón y sus Enzima: Amilasa una solución de
como propósito el productos. Glucosa lugol, con yodo
aislado de tales Lugol y yoduro de
microorganismos. El lugol con el almidón forman potasio
un complejo café- purpura que
desaparece cuando el almidón
ha sido degradado.
LIA Esta prueba se medio de cultivo Las peptonas y el MEDIO: 1.- Producción El Agar Lisina-
hace para ampliamente extracto de Características del medio de H2S Hierro (L.I.A.)
determinar si el utilizado para la levadura aportan Medio preparado: color Resultado es un medio de
microorganism diferenciación de aminoácidos y violeta. positivo: el cultivo
o es capaz de bacilos Gram nutrientes Almacenamiento desarrollo diferencial, por
descarboxilar el negativos esenciales, la Medio deshidratado: a 10-35 microbiano lo que su uso
amino acido entéricos, dextrosa ºC. produce está
lisina por medio especialmente constituye una Medio preparado: a 2-8 ºC. coloración negra recomendado
de la enzima la miembros del fuente de REACTIVOS en el medio de para la
lisina género Salmonella energía. El Extracto de levadura 3.00 cultivo en todo taxonomia
descarboxilasa, con capacidad de citrato de Digesto pancreático de gelatina: el tubo. bacteriana
y a la vez fermentación de amonio ferrico y 5.00 Dextrosa 1.00 L-lisina HCL Resultado basada en
producirH2S,po lactosa, sobre la el tiosulfato de 10.00 Citrato de Amonio negativo: pruebas
r medio de la base de la sodio actúan Ferrico: 0.50 Tiosulfato de ausencia de bioquímicas.
enzima producción de H2S como sodio: 0.04 Púrpura de coloración No se

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tiosulfato y la actividad de la marcadores de la Bromocresol: 0.02 Agar negra. 2.- Lisina recomienda su
reductasa. enzima Lisina producción de Bacteriológico 13.50 pH final decarboxilasa: uso para
decarboxilasa.. H2S, en este medio de cultivo listo para el Resultado aislamiento
caso se observa uso: 6.5 +/- 0.2 positivo: se general o
el desarrollo de verifica como selectivo, ni
sulfuro de hierro alcalinización (K) para
negro en el del medio de manutención
tubo.. El agar cultivo con un de cepas. Los
actúa como viraje hacia el resultados
agente púrpura en todo obtenidos
gelificante Los el tubo, o como deben
cambios en el pH medio de cultivo complementars
se verifican neutro. e con otras
gracias al Resultado pruebas
contenido de negativo: se bioquímicas
púrpura de observa para obtener la
bromocresol: la acidificación (A) identificación
producción de con viraje hacia de especie
ácido se ve como el amarillo en la bacteriana.
cambio del color columna del
a amarillo con tubo, y
valores de pH alcalinización
inferiores a 5.2, (color púrpura)
en tanto que la en la zona
alcalinización inclinada. 3.-
como cambio del Lisina
indicador hacia deaminasa:
el púrpura con Resultado
valores de pH positivo:
sobre 6.8. La producción de
actividad de la color rojo
lisina granate (R) en la

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descarboxilasa superficie
se observa como inclinada.
un viraje hacia el Resultado
color púrpura en negativo:
todo el medio de ausencia de
cultivo, o bien color rojo
como medio de granate.
cultivo sin
cambio (neutro)
en la columna de
agar, en tanto
que la ausencia
de la enzima
produce un
viraje hacia el
color amarillo en
la columna y
neutro en la
zona inclinada.
LICUEFACCIO La prueba de Determinar la La gelatina es MEDIO: POSITIVO: Observar si hay
N DE LA licuefacción de capacidad de un una proteína que Gelatina nutritiva sólida a) Medio licuado crecimiento
GELATINA gelatina se organismo de tiene la REACTIVOS b) Tubo control: (turbiedad) y
utiliza como producir enzimas capacidad de Gelatina Nutritiva Sustrato: medio sólido licuefacción. Al
medio de de tipo gelificar, cuando Gelatina (proteína). Enzima: NEGATIVO: término de
cultivo gelatina proteolítico es hidrolizada Gelatinasa (Proteasa, a) El medio se cada periodo
nutritiva, en (gelatinasas) que por la gelatinasa exoenzima). Producto: mantiene sólido de 24 h,
esta prueba se lisan la gelatina en los Aminoácidos. Revelador: No , volver a colocar los
pretende aminoácidos que requiere o puede emplearse el incubar durante tubos en un
determinar la la componen carbón activado en polvo. un periodo baño de hielo
capacidad de pierde su Agua destilada adicional durante un
un característica de Peptonas b) Tubo control: periodo de 2
microorganism gelificar. Se medio sólido horas, para

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o de producir pueden emplear determinar si

enzimas de tipo varios medios se ha
proteolíticas que permiten la producido o no
(gelatinasas) visualización la digestión de
que macroscópica la gelatina
licuan/hidroliza como la gelatina (licuefacción)
n la gelatina o adherida a Controlar los
muestran carbón activado tubos
cambios diariamente,
característicos hasta 2
debido a los semanas a
productos de menos que la
degradación. licuefacción
suceda antes
de tiempo.

PROTOLOLIS Se utiliza para Permite Las proteasas REACTIVOS POSITIVA: Si no existe

DE LECHE la demostración diferenciar son excretadas al Agar Leche Descremada Presenta halos proteinasas no
de la hidrolisis organismos sobre medio para la Sustrato: Caseína (proteína). transparentes se presenta
de la caseína la base de sus degradación de Enzima: Casinas (Proteasa, alrededor de las crecimiento
por múltiples proteínas, la exoenzima). Producto: colonias bacteriano
microrganismo reacciones caseína es la Aminoácidos. Revelador: No NEGATIVO: no Ayuda a la
aerobios. La metabólicas en un proteína de la requiere. presenta color ni diferenciación
caseína medio lácteo leche que le cambios de de especies
proteasa es como la confiere el color color o pH. sobre todo del
excretada al fermentación de la blanco, cuando genero
medio para la lactosa, caseolisis la caseína es Clostridium
degradación de y la coagulación de hidrolizada
proteínas es la la caseína desaparece el

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que le color blanco

proporciona el alrededor del
color blanco a crecimiento
la leche y microbiano
cuando se
hidroliza
desaparece el
color blanco
alrededor del
crecimiento
bacteriano.
HEMOLISIS Medio de Identificar a los Se siembra por MEDIOS: Observado los La reacción de
AGAR cultivo general, microorganismos agotamiento en Combinación de un agar base halos hemólisis junto
SANGRE diferencial y de hemolíticos que estría en placas (agar nutritivo) con el agregado hemolíticos con otra de las
enriquecimient liberan enzimas de agar sangre y de 5 % de sangre ovina, alrededor de las características
o con la adición (hemolisinas) al se incuba. también puede usarse sangre colonias se fisiológicas es
de sangre, las medio que Hemólisis alfa. humana, para cultivos en determina el suficiente para
bacterias que destruyen los Hemólisis beta. una placa de Agar. tipo de una
producen glóbulos rojos Hemólisis REACTIVOS: hemolisis que identificación
hemolisinas apareciendo halos gamma. La Base de Agar sangre posee: clínica
presentan un de hemólisis. hemólisis alfa se generalmente suplementada Hemolisis de presuntiva.
halo refiere a una lisis con sangre de carnero, conejo o streptococcus Entre otras
transparente parcial de caballo al 5-10% spp. Halos bacterias que
alrededor de las eritrocitos que Infusión de musculo de corazón verdosos en pueden tener
colonias a produce una Peptona de caseína hemolisis parcial hemolisinas se
consecuencia coloración verde Levaduras Hemolisis total: incluye
de la lisis de los que se observa Cloruro de sodio halos incoloros Streptococcus
hematíes alrededor de las Agar solidificante . Sin hemolisis salivaris,
específica para colonias (debido inexistencia de Micrococcus
Staphylococcus. a la liberación de halos luteus, Bacillus
un producto de cereus, E.coli,
degradación de Klebsiella

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la hemoglobina pneumoniae,
llamado Pseudomonas
biliverdina); la aeruginosa.
hemólisis beta se
refiere a un halo
de hemólisis
completamente
claro y la
hemólisis gama
se refiere a la
ausencia de
hemólisis. Los
estreptococos
del grupo A y B
son beta
hemolíticos,
mientras que D
es generalmente
alfa o gamma.

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OXIDASA Esta prueba Esta prueba está El oxígeno actúa MEDIOS: Colonias bacterianas Se toma con un No considerar
sirve para basada en por tanto como crecidas en medio de cultivo palillo grueso de un resultado
determinar la la identificación aceptor final de sólidos. madera una positivo
presencia de de una enzima electrones en la REACTIVOS muestra después de 30
enzimas bacteriana llama cadena Utilizamos tiras de papel bacteriana a seg ya que el
oxidasas. La da citocromoC transportadora impregnadas con el reactivo partir de una oxígeno
reacción de la oxidasa y para de electrones. para-amino-N-dimetil-anilina, colonia aislada molecular del
oxidasa se debe reducir el nombre Por lo general, el que se oxida por la citocromo- proveniente de ambiente oxida
a la presencia se le dice oxidasa. sistema oxidasa. El procedimiento un cultivo de al reactivo.
de un sistema citocromooxidas consiste en impregnar la zona 24h. No usar asa
citocromooxida a sólo se coloreada de la tira reactiva con La muestra se bacteriológica
sa que activa la encuentra en los una masa de bacterias. pone en metálica ya que
oxidación del organismos contacto con la la mayoría de
citocromo que aerobios, tira o disco estas con
es reducido por algunos impregnado. tienen hierro y
el oxígeno anaerobios Se debe este es capaz
molecular que facultativos y, observar una de oxidar el
produce agua o excepcionalment coloración reactivo dando
peróxido de e, en algún morada en un nos falsos
hidrógeno microaerófilo, lapso no mayor positivos.
según la pero los a 30segundos No realizar la
especie anaerobios para que sea prueba de
bacteriana estrictos carecen POSITIVO, de lo bacterias que
de actividad contrario el provienen de
oxidasa. resultado es colonias
Se investiga la NEGATIVO. obtenidas de
presencia del POSITIVA: medios de
enzima coloración cultivos que
citocromo- morada contienen
oxidasa en la NEGATIVA: sin glucosa u otro
bacteria en coloración. carbohidrato
estudio. ya que la

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fermentación
del
carbohidrato
inhibe a la
oxidasa dando
como resultado
falsos
negativos en la
prueba.

REDUCCION Permite Esta prueba se El sistema MEDIOS: POSITIVA: color Otros

DE LECHE diferenciar utiliza para citocromo Medio liquido en tubos de incoloro porque microorganism
CON AZUL organismos por diferenciar los oxidasa activa la ensayo. presenta os además de
DE su capacidad de enterococos de oxidación del REACTIVOS: reducción los enterococos
METILENO reducir el azul otros miembros citrocromo Medio de cultivo con azul de NEGATIVA: pueden reducir
de metileno en del género reducido por el metileno presenta color el azul de
un medio con streptococcus . oxígeno Leche descremada azul no hay metileno se
leche. molecular que a deshidratada reducción debe
su ve actúa Agua destilada diferenciar muy
como un aceptor Indicador azul de metileno. bien el género
de electrones en antes de
el periodo utilizar esta
terminal del prueba
sistema de El tiempo
transferencia de requerido para
electrones. la reducción de
Cuando existen azul de
condiciones metileno se
aerobias el relaciona de
oxígeno es el modo directo
aceptor final de con la cantidad
hidrógeno de bacterias

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produciendo presentes
agua o peróxido cuanto más
de hidrógeno denso más
según la especie inóculo del
bacteriana. microorganism
os positivos
más corto es el
tiempo de
reducción
SOLUBILIDAD Probar la Utilizando Sales biliares son MEDIOS: SOLUBLE EN Nunca se
EN BILIS capacidad de específicamente sales de sodios Crecen en medios sólidos BILIS: solución utilizan las
las células para diferenciar de los acidos suplementados con 5-10 % de que se aclara en palabras
bacterianas de entre biliares que en sangre de carnero. un tiempo de 3 positivo o
sufrir un Streptococucus su totalidad son REACTIVOS horas negativo para
proceso de lisis pneumoniae sintetizados a Desoxicoloto de sodio o INSOLUBLE EN esta prueba
en presencia de soluble en bilis y partir de un taurocolato de sodio 10% BILIS : la Esta prueba se
sales biliares en otras especies de compuesto Sales biliares comerciales solución usa para
un tiempo y Streotococcus común, el neutras permanece diferenciar
una insolubles en billis colesterol Indicador de PH rojo fenol turbia especies
temperatura Puede ayudar en Las sales biliares Hidroxido de sodio 10 N 40% Streptococcus
especifica. la diferenciación que carecen de NaCl de
de especies de grupos hidroxilo Strotococcus
Haemophilus son inactivas, alpha-
influenzae y mientras que las hemoliticos
Haemophilus sales del ácido Si se utiliza en
aegytius. desoxicólico son cultivo de caldo
activas en acidos con buffer para
trihidroxilados. la prueba de
solubilidad en
bilis, evitar un
cultivo denso

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PRUEBA DE La prueba de Esta prueba es La vía de MEDIOS: POSITIVA: La prueba de

NIACINA niacina detecta básica para hacer degradación del Cultivo de micobacterias Si se detectan niacina
niacina (ácido la diferenciación dinucleótido de en medio sólido de Löwenstein- cantidades normalmente
nicotínico) en de M. tuberculosis nicotinamida Jensen excesivas de solo se realiza
extractos y M. bovis de otras adenina (NAD +) REACTIVOS niacina, el en colonias
acuosos de un micobacterias así en M. La tira de prueba de niacina se líquido dentro granuladas de
cultivo. como su tuberculosis compone típicamente de del tubo se color tostado,
diagnóstico y tiene un bloqueo tiocianato de potasio, pondrá amarillo, de crecimiento
prevención que la vía de cloramina-T, ácido cítrico y una prueba lento, ya que
barrido produce ácido 4-aminosalicílico. positiva. estas son las
un exceso de En presencia de ácido cítrico, la NEGATIVA: características
niacina que no cloramina-T y el tiocianato de Si el líquido en el morfológicas
puede ser potasio reaccionarán para tubo es de M.
procesado por el formar cloruro de cianógeno. transparente, no tuberculosis en
organismo. Este producto químico romperá hay cantidades una placa de
Debido a esta el anillo de piridina de niacina excesivas de agar.
abundancia, M. para producir aldehído y- niacina y la Todas las
tuberculosis carboxi glutacónico y se unirá a prueba es pruebas de
junto con una amina aromática para negativa. niacina deben
Mycobacterium formar un color amarillo. realizarse en un
canetti y tipos gabinete de
variados de bioseguridad
Mycobacterium con una bata
africanum completa,
liberan el exceso respirador,
de niacina en su guantes y un
ambiente laboratorio
exterior, en este sellado para
caso, la placa de garantizar la
agar u otro seguridad del
medio. La técnico de
niacina es laboratorio que

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soluble en agua, realiza la

por lo que los prueba.
medios de
cultivo pueden
analizarse para
detectar la
presencia de
niacina para
determinar si un
aislado de
Mycobacterium
es una de las tres
especies
mencionadas.
MIO Es un medio de Medio utilizado La Tripteína MEDIOS: Solamente para
cultivo para la aporta gran Medio de cultivo deshidratado: MOVILIDAD uso de
altamente identificación de cantidad de color beige claro, homogeno POSITIVA: diagnóstico in
nutritivo por la miembros de la triptófano, libre deslizamiento. presencia de vitro
presencia de familia sustrato de la Medio de cultivo preparado: turbidez o No utilizar el
extracto de Enterobacteriacea enzima color purpura ligeramente crecimiento más producto si
levadura, e en base a la triptofanasa a opalescente. allá de la línea existen signos
peptona y movilidad, partir de la cual REACTIVOS de siembra de
tripteina. producción de se forma indol Glucosa NEGATIVA: contaminación
indol y actividad que puede ser Extracto de levadura crecimiento o fecha de
enzimática revelado con el Peptona solamente en la vencimiento
ornitina reactivo de Tripteina línea de siembra Considerar
descarboxilasa. Ehrlich por la Clorhidrato de L-Ornitina ORNITINA muestras
formación de un Purpura de bromocresol DESCARBOXILAS potencialment
compuesto color Agar A: e infecciosas y
rojo. PH final 6.5 -0.2 POSITIVO: color manipularlas
La glucosa es el purpura apropiadament
hidrato de NEGATIVO: e siguiendo

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carbono Color amarillo normas de

fermentable, la bioseguridad.
ornitina es el
sustrato para la
detección de la
enzima ornitina
descarboxilasa el
purpura de
bromocresol es
el indicador de
pH. Medio
semisólido ideal
para detectar la
movilidad que
evidencia por el
enturbiamiento
del medio.

BIBLIOGRAFIAS
ANDINAMEDICA.COM.PE. (2018) [ONLINE]
Available at: http://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/Medio-LIA.pdf [Accessed 4 Sep. 2018].

BACTERIOLOGIA CLINICA TAXONOMIA BASICA www.qualitat.cc.

http://www.qualitat.cc/sitebuildercontent/sitebuilderfiles/Taxonomia_basica.pdf

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA

By Jean F. MacFaddin
https://books.google.com.mx/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA30&lpg=PA30&dq=solubilidad+en+bilis&source=bl&ots=ROMMMeJc

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