LINFOCITOS

• Los linfocitos son un tipo de leucocito (glóbulo blanco)

comprendidos dentro de los agranulocitos.
• Son los leucocitos de menor tamaño (entre 7 y 15 μm), y
representan del 24 a 32% del total en la sangre periférica.
• Presentan un gran núcleo esférico que se tiñe de violeta-azul y en
su citoplasma frecuentemente se observa como un anillo
periférico de color azul.
• Poseen un borde delgado de citoplasma que contienen algunas
mitocondrias, ribosomas libres y un pequeño aparato de Golgi.
• Los linfocitos son células de alta jerarquía en el sistema
inmunitario, principalmente encargadas de la inmunidad
específica o adquirida.
• Estas células se localizan fundamentalmente en los órganos
linfoides. Tienen receptores para antígenos específicos y, por
tanto, pueden reconocer y responder al que se les presente.
• Los linfocitos se encargan de la producción de anticuerpos y de la
destrucción de células anormales. Estas respuestas ocurren en el
interior de los órganos linfoides, los cuales, para tal propósito,
deben suministrar un entorno que permita la interacción eficiente
entre linfocitos, macrófagos y antígeno extraño.
 CULTIVO DE LINFOCITOS
1. El cultivo de linfocitos un método rápido que provee el número adecuado de células en división. El método es
relativamente simple, consiste en obtener una muestra de sangre heparinizada, para evitar la coagulación de
la sangre.
2. Para la proliferación de los linfocitos es necesario cultivarlos en un medio de cultivo especial a base de suero
fetal bovino (ternera) y estimuladas mediante la adición de un agente mitogénico como la fitohemaglutinina,
la cual va inducir la división celular.
• Suero fetal bovino es la fracción líquida de la sangre coagulada, sin células, fibrina o factores de coagulación,
pero que contiene un gran número de factores macromoleculares y nutricionales esenciales para el
crecimiento celular.
• Fitohemaglutinina (PHA) esta formada por dos polipéptidos (L=leucocito y E=hematíe). Las subunidades E son
responsables de la eritroaglutinación, pero muestran poca o ninguna actividad mitogénica, mientras que las
subunidades L confieren propiedades leucoaglutinantes a la proteína nativa y tienen la máxima actividad
estimulante de la mitosis.
• HEPES es la solución tamponadora de elección para células de crecimiento rápìdo por su elevada capacidad
tamponadora en el rango 7.2 a 7.6, y se emplea en concentraciones de 10 a 20 mM.
• L-glutamina son los bloques de construcción de las proteínas, y por ende son ingredientes obligatorios de
todos los medios de cultivo conocidos. Son requeridos para la proliferación celular y su concentración
determina la máxima densidad celular alcanzable. La L-glutamina provee nitrógeno para el NAD, el NADPH y
los nucleótidos y sirve como una fuente de energía secundaria para el metabolismo.
3. Para detener la división celular y obtener la mayor cantidad de metafases, se utiliza colchicina, que es un
agente que evita la polimerización del huso mitótico. Las preparaciones deben de tener una adecuada
dispersión de los cromosomas, los cuales no deben de aparecer encimados, para esto, se agrega un solución
hipotónica de Cloruro de Potasio (KCl) Esta solución hace que las células se expandan, de modo que los
cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente.
El tiempo que se exponen las células a la solución hipotónica es crucial. Las muestras son fijadas con
solución Carnoy (metanol-ácido acético, a una proporción de 3:1) para posteriormente la muestra sea
goteada sobre un portaobjetos y se tiñen con Giemsa.