Introducción

Los virus son elementos genéticos que no pueden replicarse independientemente,

necesitan de una célula viva llamada célula hospedadora. Por lo tanto, los virus son
parásitos intracelulares obligados que tienen que infectar a una célula viva
adecuada para llevar a cabo su ciclo de replicación.

Existen virus que infectan exclusivamente a las bacterias y son llamados

bacteriófagos cuya estructura consta de proteínas dispuestas en una
nucleocapside, una vaina (esta puede ser contráctil o no) y pueden o no tener cola.
El material genético que contienen puede ser DNA o RNA.

Los tamaños de estos virus van de los 20nm a los 200nm. Los bacteriófagos son
inertes metabólicamente fuera de la bacteria, sin embargo, hay bacteriófagos que
contienen enzimas importantes para la infección, por ejemplo, la lisozima que
funciona para hacer un pequeño orificio en la pared celular bacteriana, esto permite
la entrada del DNA o RNA a la célula hospedadora. La lisozima también es
producida en etapas posteriores a la infección, esto para producir lisis en la bacteria
hospedadora.

La replicación es un paso vital para cualquier virus y se realiza con el fin de producir
más viriones. La replicación consta de cinco etapas:

1) Unión (adsorción) del virión; se une a la célula hospedadora susceptible, es

importante mencionar que esta unión es muy específica (receptores
específicos).
2) Penetración (entrada o inyección) del material genético del virus a la célula.
3) Síntesis del ácido nucleico y las proteínas del virus por el metabolismo celular
redirigido por el virus.
4) El ensamble de las cápsides (y los componentes de la membrana en los virus
recubiertos) empaquetamiento de los genomas víricos en nuevos viriones.
Este proceso, en conjunto se llama maduración.
5) Liberación de los viriones maduros de la célula.

Es importante mencionar que tras la infección el virus sufre lo que se conoce como
periodo de eclipse, en el cual las partículas infecciosas no pueden ser detectadas
en un medio de cultivo, el eclipse empieza tan pronto las partículas víricas
desaparecen del entorno por adsorción a las células hospedadoras. No obstante,
las partículas víricas no pueden detectarse a menos que las células sean lisadas
artificialmente para liberarlas. Puesto que los nuevos viriones sintetizados aún no
se encuentran en el exterior de la célula, los periodos de eclipse y maduración
reciben el nombre de periodo de latencia.
El número de viriones liberado se conoce como “tamaño de estallido” y varía en
función del virus y la célula hospedadora concretos y puede ir de unos pocos hasta
varios miles. El tiempo de replicación varía entre 20 y 60 minutos en la mayoría de
los virus bacterianos.

El ciclo de replicación es otro aspecto muy estudiado, pues así se pueden clasificar
los virus en virulentos y temperados los cuales tienen ciclos de replicación
diferentes; para los virulentos el ciclo de replicación consta de todas las etapas
anteriormente mencionadas y la lisis de la célula hospedadora.

Para los virus temperados el ciclo de replicación cambia pues ahora se integra DNA
del fago al cromosoma bacteriano convirtiéndose en profago y la célula
hospedadora en un lisógeno, lo importante de este ciclo es que el fago puede
cambiar el ciclo a lítico para replicarse dentro de la bacteria, esto ocurre la mayoría
de las veces por situaciones de estrés por radiación UV, altas temperaturas, falta
de factores de crecimiento (vitaminas, aminoácidos, dNTPs).

Objetivos

 Conocer algunos aspectos de la metodología empleada en el trabajo con

bacteriófagos.

 Establecer algunas de las propiedades de las partículas fágicas que permiten

su identificación.

 Aislar bacteriófagos a partir de muestras de aguas negras.

 Determinar la cantidad y ciclo de multiplicación de los fagos aislados con

base en su morfología de placa.

Resultados

Tabla 1. Prueba de gota del lisado fágico obtenido de la muestra de aguas negras
y títulos de fagos para las pruebas positivas.

Número
Resultado Título de Descripción de la
Cepa de
Equipo de prueba Dilución bacteriófagos morfología de
indicadora placas
de gota UFP/mL placa lítica
líticas
No se observaron
7 100 0 <10
Escherichia coli placas
B 837 No se observaron
8 100 0 <10
placas
 Clara, circular 3
9 100 6 60
mm diámetro
No se observaron
10 100 0 <10
placas.
No se observaron
11 100 0 <10
placas
No se observaron
12 100 0 <10
placas.
7 100 19 190 Placas claras
Placas
8 100 65 650 claras,3mm,
circulares.
Clara, circular
9 100 4 40
5mm diámetro
No se observaron
10 100 0 <10
placas.
Escherichia coli
TG1 Placas
transparentes
circulares de
bordes
11 100 28 2.8X10 2

irregulares
aproximadamente
de 0.1 cm de
diámetro
12 100 1 <10 Puntiforme.
No se observaron
7 100 0 <10
placas
No se observaron
8 100 0 <10
placas.
No se observaron
9 100 0 <10
Bacillus subtilis placas.
SB19 No se observaron
10 100 0 <10
placas.
No se observaron
11 100 0 <10
placas
No se observaron
12 100 0 <10
placas
No se observaron
7 100 0 <10
Salmonella placas
typhimurium No se observaron
8 100 0 <10
LT2 placas.
9 100
 No se observaron
10 100 0 <10
placas.
No se observaron
11 100 0 <10
placas
12 100 1 <10 Puntiforme.
No se observaron
7 100 0 <10
placas
No se observaron
8 100 0 <10
placas.
No se observaron
9 Staphylococcus 100 0 <10
placas.
aureus
No se observaron
10 100 0 <10
placas.
11 100
No se observaron
12 100 0 <10
placas
No se observaron
7 100 0 <10
placas
8 100 7 70 placas turbias.
No se observaron
9 Klebsiella 100 0 <10
placas.
pneumoniae
No se observaron
10 100 0 <10
placas.
11 100
12 100 2 <10 Puntiforme.
Placas claras con
7 100 9 90
microcolonias
60 Placas claras,
8 100 6
4mm, circulares.
No se observaron
9 100 0 <10
placas.
Placas claras,
10 100 7 70
redondas, 4mm.
Silvestre
Placas opacas
circulares de bordes
irregulares
11 100 3 30
aproximadamente
de 0.7 cm de
diámetro
No se observaron
12 100 0 <10
placas.
Tabla 2. Descripción de los lugares donde se obtuvieron las muestras de aguas
negras de la sección 2

Equipo. Características del Descripción del lugar Localización del lugar

agua negra donde se obtuvo la de la toma de muestra
muestra
7 Color café claro, olor Río de aguas Colonias los pinos,
fétido, no contenía municipales, que Naucalpan, Edo Mex
lodo, piedras y atraviesa por varias
ramas. colonias.
8 Color negro, olor - -
fétido.
9 Color marrón- Río que atraviesa Río Mixcoac, Del.
verdoso, olor fétido, zona urbana y es Álvaro Obregón. Toma
sedimento negro. usado como drenaje y de muestra el 11 de
tiradero de desechos. octubre del 2018 a las
9:03 am.
10 Color marrón, olor Coladera del Plan de Agua Prieta
fétido. pocos alcantarillado público #97. col. Plutarco Elias
residuos sólidos. Calles. Alc. Miguel
Hidalgo
11 Color negro, con un Se tomó del canal de Planta Dulces
olor fuerte a caño. entrada a 1 m de Nombres, N.L.
profundidad Monterrey
10 de octubre del 2018
1:00 p.m
12 Marrón arena, con Se tomó el agua de la Canal de la compañía.
aroma poco ribera, de agua Estado de México.
perceptible. superficial. 09 de octubre del
2018.
12:00 hrs.

Tabla 3. Amplitud de huésped de los fagos T4, M13 y λ.

Eq. Fago Cepa indicadora
E. coli W3110 E. E. B. S. S. aureus
(Silvestre) coli coli subtilis typhimurium pn
B837 TG1 SB19 LT2

7 T4 + - - - - -
8 + - - - - -
9 λ - + - - + -
10 - - - - - -
 11 M13 - - + - - -
12 - - + - - -
Tabla 4. Características generales de los bacteriófagos T4, M13 y λ y de las placas que formas.
Fago Rasgo Característica Característica de placa
Cápside alargada icosaédrica, vaina
contráctil, placa base hexagonal con cola
Virión con fimbrias.
posee DNA de cadena lineal y de doble
T4 Ácido nucleico cadena de aproximadamente 170 Kpb
Receptor Lipopolisacárido. Porina OmpC Placas claras
Ciclo explicativo Lítico
Huésped Escherichia coli
Periodo de latencia 23 minutos
Virión Filamentoso
Ácido nucleico DNA de cadena sencilla, circular de 6,407 pb
Receptor Pili F
M13
Ciclo replicativo No lítico Placas turbias homogéneas
Huésped Escherichia coli
Periodo de latencia 30 minutos
Virión Cabeza eicosaédrica y cola
Ácido nucleico DNA de doble cadena, lineal de 48,502 pb
Placas turbias con zonas claras
Receptor Proteínas transportadoras de maltosa LamB
λ y microcolonias en el
Ciclo replicativo Lítico y lisogénico centro
Huésped Escherichia coli
Periodo de latencia 35 minutos

Discusión de Resultados
Se realizó el aislamiento de bacteriófagos a partir de diferentes muestras de aguas
negras las cuales fueron colectadas de distintos lugares. En la tabla 2 se describen
las características particulares de cada sitio de muestreo, lo que permite plantear
una hipótesis sobre el tipo de bacterias que hay y el tipo de fagos que pueden
encontrarse en cada una de las muestras.

Amplitud de huésped

En la tabla 3 se encuentran los resultados para amplitud de huésped.

El fago T4 va a reconocer como su receptor a las porinas Omp C de la membrana

de las bacterias. Se esperaría que solo en aquellas que no presentaran estas
estructuras no hubiera infección, como en el caso de B. subtilis y S. aureus ya que
las porinas Omp C se encuentran en la membrana externa de las bacterias gram -
y de algunas gram + que pertenecen al grupo Mycolata. Para el caso de K.
pneumoniae (gram -) ocurre una excepción ya que posee porinas de tipo Omp K.
Sin embargo, hay resultados negativos en aquellas bacterias donde debía ocurrir lo
contrario. Esto puede deberse a que las colisiones entre el fago y el receptor de la
bacteria son altamente específicas. Debido a esta especificidad, el fago tiene que
estar en la orientación correcta para permitir la unión con la célula y que haya una
colisión efectiva. De no ser así, no ocurre la infección y, por lo tanto, se obtienen
falsos negativos.

El fago λ reconoce a la proteína LamB, una proteína transportadora de maltosa que

se encuentra presente en la membrana de externa de las gram (-). Tanto E. coli
como S. typhimurium dan positivo, pero en K. pneumonie no es así. Probablemente
debido a que su cápsula impide que el fago llegue hasta la membrana de la bacteria.

El fago M13 infecta al linaje K de E. coli debido a que tienen una secuencia similar
en el material genético. El resto de las bacterias no serán afectadas.
Su modo de adsorción es reconociendo a la pilina, proteína que se encuentra en el
pili, es decir, en las bacterias donadoras del factor F. Por ello puede infectar a E.
coli TG1 (F’) que pertenece al linaje K. El resultado negativo será tanto para la cepa
B837 como para la cepa W3110, es F-. La primera pertenece al linaje B y la segunda
es una célula receptora (F-).

Conclusiones

- Los bacteriófagos presentan un alto grado de especificidad entre sus

estructuras de adsorción y el receptor de la célula hospedera.

Referencias

- Yu-Kuo Tsai, Chang-Phone Fung, Jung-Chung Lin, (et. al.), (2011).

Klebsiella pneumoniae Outer Membrane Porins OmpK35 and OmpK36 Play
Roles in both Antimicrobial Resistance and Virulence. Disponible en:
“https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3067157/”
(Consulta:22/2018).