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UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
MINISTERIO DE EDUCACIÓN NACIONAL
NIT:891.190.346-1

BIOQUIMICA EXPERIMENTAL

PRACTICA DE LABORATORIO No 2
REACCIONES GENERALES DE LAS PROTEINAS

1. OBJETIVOS

1.1. Observar el efecto que tiene el pH y la temperatura en las propiedades de las proteínas.
1.2. Diferenciar el efecto que tienen algunos agentes precipitantes sobre la estructura
tridimensional de las proteínas.

2. FUNDAMENTO DE LA PRACTICA

En las proteínas además de los enlaces covalentes que unen entre sí a los aminoácidos, existen
otros enlaces débiles que mantienen la configuración tridimensional de la molécula. Estos
enlaces son sensibles a la acción de agentes precipitantes.
Las reacciones de precipitación de las proteínas pueden ser reversibles e irreversibles
dependiendo del agente químico que las ocasione.

Precipitaciones reversibles: (Precipitados solubles en agua)

- Por medio de alcohol (reversible sólo al principio).
- Por medio de soluciones concentradas de sales neutras.
Precipitaciones irreversibles: (Precipitados insolubles en agua)
- Por calor y pH extremos.
- Por ácidos minerales fuertes.
- Por metales pesados.
- Por reactivos acídicos.

En la práctica se utilizarán varias proteínas para verificar la acción precipitante de estos agentes.

3. MATERIALES

10 tubos de ensayo
1 gradilla
3 pipetas (10 ml,5 ml,1 ml)
2 vasos de precipitado (400 ml)
1 Termómetro
1 Balanza mecánica
Papel tornasol- papel filtro- indicador

4. REACTIVOS

Proteínas (albúmina, caseína y gelatina a 5.5. g/L). La caseína se disuelve en NaOH (al 0,85%) y
las otras proteínas en solución salina.

Ácido clorhídrico 1M
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Hidróxido de sodio 1 M
Ácido nítrico concentrado
Metales pesados (sulfato de cobre, acetato de plomo, sulfato de zinc y nitrato de mercurio 0.1
M).
Ácido tricloroacético 20%.
Ácido pícrico 30%
Reactivo de Biuret.

5. MATERIAL DE PRUEBA

Proteínas en solución

6. PROCEDIMIENTO

Reacción de Biuret
En un tubo de ensayo limpio y seco, coloque 1 g de urea, caliente directo a la llama con cuidado
hasta cuando se funda, pruebe los vapores que se desprenden con papel tornasol rojo
humedecido y continúe calentando el líquido hasta su solidificación. Enfríe el residuo, agregue
5 mL de agua destilada, caliente, disuelva y filtre.

En un tubo de ensayo vierta 2 mL de filtrado, en otro tubo de ensayo agregue 2 mL de solución

de albúmina y solución de caseína en otro tubo de ensayo. Agregue a cada uno de los tubos 2
mL de solución de NaOH al 10% y gotas de CuSO4 al 0.5% con agitación constante hasta
obtener una coloración permanente: anotar los resultados, describa el experimento efectuado
sobre la urea.

Desnaturalización de las proteínas por acción del calor y el pH extremos

En tres tubos de ensayo coloque 5 ml de albúmina, caseina y gelatina respectivamente; luego
agregue 5 ml de HCL 1M al primero, 0.5 ml de NaOH 0.1M al segundo y 0.5 mL de agua
destilada al tercero. Coloque los tres tubos en baño de agua hirviendo durante 10 minutos y
enfríe a temperatura ambiente, ajuste los tubos ácidos y alcalinos hasta la neutralidad, describa
las observaciones.

Precipitación de proteínas por metales pesados

Tome 2 mL de una de las siguientes soluciones: albúmina, caseina, gelatina; agregue 1 ml
cualquiera de los siguientes metales pesados: sulfato de cobre, acetato de plomo, nitrato de
mercurio. Observe los resultados ¿que ocurre cuando se añade exceso del reactivo?

Precipitación de las proteínas por acción de aniones

Reparta 6 mL de proteína en dos tubos de ensayo, a cada uno agregue: 5 gotas de ácido
tricloroacético y 5 gotas de ácido pícrico, observe los resultados. ¿Qué sucede cuando agrega
un exceso de reactivo a uno de ellos’? A dos de los tubos que no se les haya agregado exceso de
reactivo, agréguele lentamente NaOH 1M ¿ Que ocurre a medida que el pH se va haciendo más
básico? ¿Cual es la razón?

7. RESULTADOS Y CONSULTA

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7.1. Completar la siguiente tabla de desnaturalización de las proteínas por calor y pH

extremos.

TABLA No 1. Resultados de la práctica de desnaturalización por calor y pH extremos

PROTEINA MEDIO ACIDO MEDIO BASICO AGUA NEUTRO

ALBUMINA
CASEINA
GELATINA

7.2. Comparar los resultados obtenidos en la tabla anterior y sacar conclusiones.

7.3. Utilizando los siguientes símbolos: (++) = precipita; ( +) = poco precipita y (-) = no
precipita, completar la siguiente tabla.

TABLA No 2. Resultados de la práctica de desnaturalización por metales pesados

REACTIVO ALBUMINA CASEINA GELATINA

Sulfato de cobre
Acetato de plomo

Nitrato de mercurio

TABLA No 3. Resultados de la práctica de desnaturalización por reactivos acídicos

Reactivo Albumina Caseína Gelatina

Acido Pícrico
Acido Tricloroacético

7.4. Analizar los datos en el cuadro anterior y sacar conclusiones.

7.5. Consultar la composición de aminoácidos de la proteína Insulina. Describa su
importancia desde el punto de vista biomédico.
7.6. Consultar en qué consiste la desnaturalización de las proteínas.
7.7. Escribir los factores de los cuales depende la solubilidad de las proteínas.

8. BIBLIOGRAFIA
ALEMANY, M. Y FONT. S. Prácticas de Bioquímica. España: Alhambra, 1983.

CONN, Eric. Et al. Bioquímica Fundamental. 5 ed. México: Limusa, 1994.

CLARK, J,M, Bioquímca Experimental. España: Acribia, 1996.

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