El uso sostenible de los recursos por naturaleza para sintetizar los productos requeridos en el lugar

correcto, cuando se necesitan, continúa siendo el modelo a seguir para la síntesis total y la
producción en general. La combinación de ciencia y tecnología molecular y de ingeniería en el
enfoque biotecnológico no necesita grupos protectores en absoluto y, por lo tanto, se ha
establecido para numerosas rutas a gran escala de productos naturales y sintéticos en la industria.
El uso de materias primas de origen biológico para la síntesis química y la economía de
transformaciones moleculares como la economía atómica y la economía escalonada son cada vez
más importantes. Dado que las cuestiones de seguridad, salud y medioambientales son factores
clave para la mejora de los procesos en la industria química, el desarrollo de reacciones biocatalíticas
o vías de sustitución de reactivos peligrosos es un objetivo importante. La integración de la reacción
biocatalítica y el procesamiento posterior con el aislamiento del producto ha llevado a una variedad
de técnicas de recuperación de producto in situ y ha encontrado numerosas aplicaciones exitosas.
Con la creciente colección de reacciones biocatalíticas, el pensamiento retrosintético puede
aplicarse también a la biocatálisis. La introducción de reacciones biocatalíticas es especialmente
adecuada para la reducción de costos y productos de mayor calidad, así como para procesos más
sostenibles. La transferencia de los principios simples y robustos de detección y control de Nature,
así como su organización de reacción y separación en sistemas técnicos útiles, puede aplicarse a
diferentes fermentaciones, biotransformaciones y procesos posteriores. El descubrimiento y
desarrollo de biocatalizadores y vías es la clave para nuevas transformaciones sintéticas en la
biotecnología industrial.

Introducción

La evolución de la tecnología de base biológica ha sido una fuerza impulsora constante para el
desarrollo sostenible en la historia humana durante miles de años. La preparación y estabilización
de alimentos y bebidas se desarrolló mucho antes de la industrialización y sin los conceptos
modernos de biotecnología y química. La industrialización del siglo XIX, con la iniciativa
concomitante en investigación fundamental y aplicada, ilustró no solo los posibles problemas clave
del uso de biotransformaciones para transformaciones químicas, sino también las dificultades y
obstáculos para avanzar sin una comprensión de las enzimas y reactivos que determinan el
resultado de una reacción química. La creación del concepto de catálisis y catalizadores por el
químico sueco Berzelius [1] y el descubrimiento por Liebig y Wo¨hler de que la emulsión de extracto
de almendra fue capaz de dividir la amígdala en glucosa, benzaldehído y cianuro, despertó un interés
temprano en los procesos biocatalíticos [2 ] Con el progreso fundamental que proviene del concepto
químico de una velocidad de reacción y estudios sobre procesos catalíticos [3] con tiempos de
reacción mensurables, la naturaleza de los catalizadores se buscó en la aceleración de una reacción
[4]. La fundación y el crecimiento de muchas industrias en los siglos XIX y XX y la vida moderna han
sido influenciadas de muchas maneras por el desarrollo de procesos catalíticos. La producción de
químicos, combustibles, productos farmacéuticos, sabores y fragancias hoy en día se realiza
rutinariamente con herramientas catalíticas tales como enzimas, catalizadores orgánicos e
inorgánicos [5], por lo que en reacciones técnicas la reacción de moléculas con superficies sólidas
es a menudo decisiva [6] . Aunque el campo de la síntesis orgánica ha logrado un éxito sobresaliente
en la síntesis total de moléculas complejas desde la síntesis de urea de Wo¨hler, los procesos
actuales de vanguardia para la síntesis de productos químicos se consideran altamente ineficientes
por Li y Trost [7]. ] La acumulación exacta de grupos funcionales dentro de una molécula compleja
todavía representa un desafío y bloqueo para acceder a estructuras complejas sin utilizar auxiliares,
activando y protegiendo grupos que aumentan estequiométricamente la cantidad de residuos por
unidad de producto, el factor E [8 ] Aunque el primer objetivo en la síntesis total es encontrar una
forma de construir la molécula objetivo en la calidad requerida, el segundo objetivo de diseñar una
ruta sintética con un factor E bajo depende en gran medida de las selectividades de las reacciones
utilizables. La inspiración de las rutas biosintéticas y la reactividad natural de los grupos funcionales
dentro de una configuración compleja se han utilizado constructivamente en los nuevos enfoques
de la síntesis química de productos naturales marinos sin proteger a los grupos [9]. Si bien este
enfoque para ciertas clases de moléculas siempre puede requerir algún nivel de protección debido
a la falta de selectividad de reacción y cuestiones prácticas de purificación y caracterización [9], el
enfoque biotecnológico no necesita grupos de protección en absoluto y por lo tanto ha
proporcionado numerosas rutas a gran escala para productos naturales y sintéticos en la industria.
El uso económico de materias primas por parte de la Naturaleza para sintetizar sus productos
requeridos mediante transformaciones biocatalíticas sigue siendo el modelo a seguir para la síntesis
total.

Materias primas de base biológica

Las sociedades industrializadas de hoy en día dependen en gran medida de las materias primas
fósiles no renovables para proporcionar energía para la calefacción, el transporte y la electricidad,
así como materias primas químicas para diversas industrias. Con el crecimiento económico de los
países recientemente industrializados, el objetivo clave es utilizar los recursos no más rápido de lo
que pueden regenerarse y liberar contaminantes en mayor medida que los recursos naturales
pueden asimilarlos [10]. El agotamiento actual de la energía fósil, las emisiones de dióxido de
carbono y la reducción de la biodiversidad constituyen condiciones de frontera difíciles para la
sostenibilidad global. Por lo tanto, la investigación de nuestra biodiversidad, la utilización de dióxido
de carbono y el almacenamiento de energía serán clave para la innovación necesaria sobre cómo
cambiar estas tendencias y cómo sustituir las materias primas fósiles no renovables con biomasa
renovable. Dos bloqueos y desafíos serios para el lado de la energía son a) la producción de
suficiente combustible derivado de la biomasa para reemplazar una fracción significativa de los ~ 10
TW de energía que se generan hoy de los combustibles fósiles yb) la producción de energía sin daños
graves a el medio ambiente y la cadena mundial de suministro de alimentos [11]. La clave de nuestro
balance mundial de dióxido de carbono es la conversión de energía solar, por ejemplo, mediante
microorganismos fotosintéticos, que no requieren tierra cultivable y capturan la luz solar, el dióxido
de carbono y el agua. Otro desafío importante y bloqueo es la conversión económica de biomasa
renovable en combustibles útiles [12-15] y materias primas [16-18].

En la actualidad, la mayoría de las materias primas de base biológica son grasas y aceites o
carbohidratos, pero otros productos naturales [19-20] y el uso de materias primas de origen
biológico para la síntesis química, minimizando el número de pasos de reacción, son de creciente
importancia [21]. La identificación de la biomasa más adecuada, un mejor uso de la biomasa en el
proceso de conversión, así como la identificación de las moléculas óptimas para la generación de
energía pueden conducir a importantes mejoras.

Las materias primas para transformaciones y procesos posteriores son áreas clave para el avance
de procesos biológicos que serán muy diferentes de los procesos actuales basados en materias
primas fósiles [22-23]. Nuevos bioprocesos incluso pueden ser de interés en la utilización de ciertas
materias primas fósiles. Se ha propuesto la interacción estrecha de procesos catalíticos
biocatalíticos y heterogéneos como el mejor concepto para la utilización de materias primas
renovables [24]. El valor global de las materias primas renovables proporcionadas anualmente por
toda la biosfera, que se ha estimado en solo un tercio del valor correspondiente para el tratamiento
de residuos [25], podría aumentar enormemente, si las nuevas materias primas de la biodiversidad
mundial se descubren antes de que la especie se extinga.

El cambio de una cadena de suministro basada en fósiles a una cadena de suministro de materia
prima basada en biocombustibles que se muestra en la Figura 1 requerirá trabajo en los dominios
de procesos biosintéticos y fotosintéticos, procesos de aislamiento, conversión y purificación, así
como procesos de biodegradación. Los nuevos procesos y aplicaciones para las materias primas
renovables existentes, así como la conversión de residuos en materias primas como en ecosferas
autosuficientes serán de gran interés. Una fracción sustancial de los productos farmacéuticos que
se utilizan actualmente para los tratamientos clínicos son de origen natural, con un número
significativo producido por microbios [26]. Las estructuras tridimensionales complejas del proceso
de selección de Nature para una actividad optimizada hacia un objetivo biológico podrían ser un
suministro económico de materias primas para la semisíntesis de nuevos medicamentos.

Diseño de bioprocesos

Los bioprocesos industriales son de gran interés en la actualidad a nivel mundial y el número y tipo
de biotransformaciones están creciendo a pesar de la utilización aún limitada a gran escala [27-35].
El diseño exitoso a escala industrial de etapas de reacción biocatalíticas únicas usando enzimas
aisladas o células completas requiere bases de datos de reacción o plataformas de reacción
rápidamente accesibles para utilizar las transformaciones conocidas de producto a producto en la
planificación retrosintética. La selección de ruta decisiva depende, además de las perspectivas
científicas y tecnológicas, de otros temas como la disponibilidad de materiales de partida,
compuestos auxiliares y biocatalizadores, aspectos económicos y derechos de propiedad
intelectual, seguridad, salud y compatibilidad ambiental. En el caso de las bioconversiones de etapas
múltiples con enzimas aisladas en un proceso de una sola etapa, el medio y la ingeniería de reacción
hacia condiciones óptimas y la selección / optimización de las enzimas son desafíos importantes. En
un enfoque de células completas, la fisiología microbiana, la ingeniería metabólica y de vías, la
biología sintética, la biosíntesis dirigida a precursores y la activación de genes silenciosos son de
gran interés para proporcionar productos naturales altamente complejos, que aún permanecen
entre los líderes más exitosos para nuevos productos farmacéuticos eficientes, maravillosos sabores
y fragancias, ingredientes alimentarios beneficiosos e importantes metabolitos.

La clave para el diseño de un proceso es la disponibilidad de una clase o vía de reacción biocatalítica
o, si este no es el caso, metodologías para el desarrollo rápido de la bioconversión deseada [36].
Dado que los problemas de seguridad, salud y medioambientales son factores clave para la mejora
de los procesos en la industria química, el desarrollo de reacciones biocatalíticas o vías de
sustitución de reactivos peligrosos es un objetivo importante [37]. Tanto los aspectos anteriores
como posteriores son importantes en las primeras etapas para la optimización de la bioconversión.
La biología de sistemas se ha aplicado con éxito para el desarrollo de bioprocesos [38]. Los
programas de mejora de la tensión han reducido enormemente los costos al aumentar la
productividad para el producto objetivo y eliminar los productos secundarios indeseables o los
análogos [39].

El desarrollo de etapas biocatalíticas industriales apunta a un alto rendimiento espacio-tiempo para

los productos, lo que requerirá también altas concentraciones de sustrato, cualquiera de los cuales
puede inhibir una reacción o ser tóxico para el biocatalizador. Para superar estas limitaciones, se
han utilizado enfoques de ingeniería molecular y bioquímica. Las propiedades de las enzimas hacia
las concentraciones inhibidoras de sustrato y producto se han mejorado mediante la ingeniería de
proteínas. Para diseñar el proceso con una enzima dada, se han desarrollado herramientas de
separación tales como membranas y fases auxiliares tales como extractores o adsorbentes [40].

Un concepto de proceso para crear un espacio de reacción que sea efectivo tanto para un alto
rendimiento de espacio-tiempo como para un aislamiento y purificación robustos y rápidos del
producto es el confinamiento de la enzima. La inmovilización de la enzima [41] y los reactantes de
membrana [42] han sido útiles en la resolución biocatalítica de compuestos racémicos, el uso de
enzimas preciosas y las incompatibilidades de solubilidad de sustrato y producto con la enzima. El
concepto inverso al confinamiento de la enzima es el confinamiento del sustrato y el producto. Esto
en el pasado se ha enfocado principalmente en la perspectiva del producto, ya que la inhibición del
producto y la inestabilidad del producto son limitaciones comunes en muchos bioprocesos. La
integración de la reacción biocatalítica y el procesamiento posterior con el aislamiento del producto
ha llevado a una variedad de técnicas de recuperación de producto in situ y ha encontrado
numerosas aplicaciones exitosas [43-45]. Como los disolventes orgánicos han sido las herramientas
más comunes para extraer el producto de la mezcla de reacción biocatalítica, la influencia de los
disolventes orgánicos no solo en la extracción sino también en la conversión biocatalítica en sí
misma ha sido de interés fundamental y práctico [46-48]. ] Este tipo de proceso integrado se llamó
bioconversión extractiva [49-50]. Los medios no acuosos como los disolventes orgánicos también
son de gran interés como medio de reacción, porque los equilibrios termodinámicos favorecen la
síntesis sobre la hidrólisis y las reacciones secundarias dependientes del agua pueden suprimirse
[51-53]. Otros diseños de procesos incluyeron el uso de sistemas acuosos de dos fases y reactores
de membrana [54] en bioconversiones extractivas. El uso de adsorbedores sólidos en lugar de
extractantes líquidos ya se utilizó en diferentes reducciones biocatalíticas. Sin embargo, ha sido
difícil diseñar nuevas reacciones biocatalíticas con la elección del mejor adsorbedor para una
reacción dada. La alimentación del substrato in situ y la recuperación del producto (SFPR), donde se
usa la enzima libre y el sustrato y el producto unidos a un adsorbedor, han demostrado su potencial
en oxidaciones asimétricas biocatalíticas [55-58]. La separación de mezclas estereoisoméricas se
puede facilitar en gran medida mediante un paso biocatalítico precedente.

La síntesis lineal o convergente de compuestos orgánicos complejos depende de una secuencia de

varios pasos sintéticos, generalmente con etapas de aislamiento y purificación después de cada
reacción. La simplificación de estos pasos de aislamiento y purificación puede ser visualizada por
una organización espacial de los pasos de reacción o por una organización temporal de los pasos de
reacción selectiva en una síntesis de un solo recipiente. El primer método de integración ha
encontrado mucho interés en el uso de cartuchos [59] y microrreactores. El segundo método avanza
a lo largo de la utilización de dos o más enzimas aisladas en un recipiente de reacción o la utilización
de biocatalizadores de células completas que tienen todos los genes requeridos para la expresión
de la ruta biosintética desde el material de partida hasta el producto. Si la flexibilidad de la
maquinaria biosintética de la cepa microbiana natural es suficiente para las transformaciones
deseadas, se pueden emplear precursores tanto naturales como no naturales en la biocástasis de
células enteras, la biosíntesis o la fermentación, dependiendo del número de etapas involucradas.

La ingeniería de las redes regulatorias, metabólicas y otras redes celulares de forma integrada y la
consideración de la fermentación y el procesamiento posterior en etapas tempranas son
prometedoras para el desarrollo de bioprocesos y cepas [63]. La reducción y la paralelización de la
tecnología y el equipo de proceso en combinación con tecnología analítica de proceso
miniaturizada, como sensores y actuadores, abren nuevas y fascinantes oportunidades para
establecer y mejorar procesos industriales mediante la investigación y desarrollo de bioprocesos a
microescala [64- 66].

Interconectando reacciones orgánicas sintéticas con reacciones biocatalíticas

Entre los dos extremos de una síntesis total sin ninguna reacción biocatalítica y una cascada de
reacción biocatalítica o fermentación sin ninguna reacción orgánica sintética, se producen todo tipo
de combinaciones de reacciones. La síntesis histórica de vitamina C a partir de D - (+) - glucosa por
la vía Reichstein-Grußner de 6 pasos hace uso de un solo paso biocatalítico logrando la importante
oxidación selectiva de D-sorbitol a L-sorbosa [67]. Muchos ejemplos exitosos de pasos únicos de
reacción biocatalítica, como un reemplazo de reacciones químicas problemáticas o como la única
forma práctica para una reacción prevista, se han establecido en la industria a gran escala [68]. El
ritmo de nuevas y altamente eficientes secuencias de reacciones en síntesis a gran escala, por
ejemplo, de ingredientes farmacéuticos activos, ha ido en aumento debido a la interacción entre la
investigación química y biocatalítica que ya se encuentra en la fase de planificación [69-72]. Si el
énfasis está más en el lado de la reacción química o biocatalítica, ilustrado por las interacciones
esquemáticas y las interfaces en la Figura 3, bien puede depender de la historia de investigación y
desarrollo o de las reacciones biocatalíticas de la plataforma establecida en las secuencias de
reacción orgánicas sintéticas. para reducir los costos y mejorar la calidad, y ofrece oportunidades
para que los procesos farmacéuticos sean más sostenibles [74].

Tecnología analítica de proceso

El bloqueo y desafío en el análisis y control de bioprocesos es la transferencia de los principios

simples y robustos de detección y control de Nature a sistemas técnicos útiles que pueden aplicarse
al análisis y control de diferentes fermentaciones, biotransformaciones y procesos posteriores [75].
La continua miniaturización y automatización del equipo preparativo y analítico permite nuevos
enfoques para un desarrollo de procesos más rápido con menos material de partida y más
información analítica. Aunque los parámetros físicos pueden analizarse rutinariamente mediante
sensores en tiempo real sin muestreo, la gama de sensores para parámetros químicos, bioquímicos
y biológicos es más limitada, y la mayoría de las veces se requiere muestreo y análisis fuera de línea
[76]. Independientemente de si el análisis se realiza en línea o fuera de línea, el requisito clave es
que el tiempo de respuesta analítica sea compatible con la escala de tiempo del bioproceso de
interés. Las diferentes escalas de tiempo biológicas de los organismos vivos, desde la respuesta
fisiológica sobre el desarrollo hasta la evolución, tienen diferentes requisitos para la tecnología
analítica utilizada.

El objetivo de la tecnología analítica de procesos (PAT) definida por la Administración de Alimentos

y Medicamentos (FDA) es garantizar la calidad final del producto mediante mediciones oportunas
de calidad crucial y parámetros de rendimiento [77]. Incluso si la industria no adopta fácilmente
nuevas tecnologías analíticas, maximizar el valor de los analizadores existentes puede conducir a
mejoras significativas [78]. Hacer uso de la tecnología analítica establecida puede conducir a
mejores rendimientos, mayor calidad e incluso nuevos bioprocesos industriales [79]. La
fermentación y el procesamiento posterior pueden guiarse por instrumentos analíticos adaptados
al tamaño, como el monitoreo del crecimiento mediante sensores ópticos para oxígeno disuelto y
pH [80] o la toma de decisiones sobre el agrupamiento en cromatografía por HPLC [81].

Muchas aplicaciones de química analítica son de interés potencial para procesar la tecnología
analítica [82], pero la tecnología de separación acoplada a la espectroscopia de EM y la identificación
por espectroscopía de RMN se puede aplicar más ampliamente que los sensores específicos. La
electroforesis capilar, HPLC o GC junto con la espectrometría de masas de alta sensibilidad combinan
la velocidad con una alta sensibilidad y resolución [83]. La combinación de separaciones
cromatográficas de alto rendimiento con la alta sensibilidad de la espectrometría de masas y las
técnicas de infusión directa permite investigar la influencia de los parámetros de reacción en los
bioprocesos en productos naturales complejos [84]. Los métodos de espectrometría de masa directa
sin ningún paso de preparación de muestras se han desarrollado rápidamente desde la introducción
de la ionización por electrospray de desorción (DESI) [85] y el análisis directo en tiempo real (DART)
[86]. La RMN ha proporcionado información estructural rica, es particularmente sensible a
compuestos que son menos detectables por espectrometría de masas y permite la identificación de
nuevas entidades moleculares sin la necesidad de derivatización [87]. Si bien el análisis de procesos
en términos de equilibrio y cinética se ha utilizado ampliamente en biotecnología, las mediciones
de la termodinámica de los procesos biotecnológicos han sido poco frecuentes, pero ofrecen
puentes a los procesos químicos y oportunidades para optimizaciones exhaustivas [88].

Tecnología de purificación de productos

El éxito en bioprocesos ha llevado a desafíos y bloqueos en el lado de procesamiento y purificación

de productos, mostrado esquemáticamente en la Figura 4, donde generalmente la mayoría de los
esfuerzos en producción son necesarios y, por lo tanto, las innovaciones tecnológicas tienen un
impacto económico sustancial. La centrifugación y la tecnología de membranas constituyen los
principales pasos de recuperación primaria [89], si la biomasa y los medios líquidos deben separarse.
Se han establecido técnicas de microescala para la microfiltración automatizada de alto rendimiento
de corrientes de alimentación biológicas complejas, que permiten una evaluación rápida de la
influencia de parámetros tales como el tiempo de cosecha, los tampones y los componentes de los
medios [90]. Dependiendo de la localización de los productos deseados en la membrana
intracelular, la pared celular o el espacio extracelular, se utilizan diferentes partes de recuperación,
por ejemplo, sedimento / retenido o sobrenadante / filtrado, para la purificación adicional. Si el
producto deseado se produce en forma de partículas, como cristal o cuerpo de inclusión, la
recolección selectiva de partículas es una forma atractiva de recuperación [91]. En el área de
biotransformaciones, el tamizado de partículas de alto rendimiento ha tenido éxito en la separación
partícula-partícula de adsorbedores y células en la tecnología SFPR [57].

La extensión y el tipo de separación primaria sólido-líquido pueden afectar el rendimiento de los

pasos posteriores, como lo demuestra el impacto de la clarificación en la cromatografía de
interacción hidrófoba [92]. El número y el tipo de procesos de purificación adicionales dependen no
solo de las propiedades del producto y la impureza, como el tamaño, la carga y la solubilidad, sino
también de los requisitos de calidad y los factores económicos, como el valor del producto. Además
de la adsorción, otras etapas preferidas de aislamiento del producto primario son la extracción con
disolvente, la cristalización, la precipitación o la ultrafiltración. La evaluación rápida de separaciones
a gran escala mediante HPLC a microescala [93] y el cribado de alto rendimiento de la cromatografía
de intercambio iónico

[94] proporcionan una tecnología general, rápida y relativamente barata para muchas purificaciones
que de otro modo serían difíciles. La cromatografía simulada en lecho móvil, como operación de
unidad separada para la purificación y en combinación con un paso de biotransformación, es una
opción muy atractiva para las puricaciones de alto rendimiento con un uso reducido de disolvente
[95-96].

Como la purificación del producto es una parte esencial del bioproceso, también es evidente que el
desarrollo y la optimización de esta parte deben realizarse de manera integral junto con otros
elementos clave como la biotransformación, la fermentación o el desarrollo de biocatalizadores. Los
cambios en el bioproceso mismo o en las condiciones de reacción como el pH, la temperatura y el
disolvente pueden tener una influencia decisiva en la cristalización, separación de fases, extracción
o comportamiento de adsorción del producto y las impurezas [45,97-101]. La combinación de
fermentación / biotransformación con técnicas de recuperación in situ continúa siendo de gran
importancia [44- 45, 102-103]. Los separadores de contacto centrífugos de mesa han demostrado
ser altamente ventajosos para la esterificación catalizada por lipasa del ácido oleico con 1-butanol
[104]. La producción de fenol aumentó más de 4 veces utilizando resinas como herramientas de
recuperación de productos in situ [105]. El carbón activado podría usarse como un adsorbedor
eficiente en un proceso integrado para la producción de surfactina [106].

El paso final para obtener el producto correcto en la calidad requerida consiste en pulir los pasos
hacia la forma sólida o líquida correcta del producto. La definición de la calidad del producto final
requiere, además de los métodos de control de calidad estándar, el desarrollo de métodos analíticos
para probar los parámetros responsables de la idoneidad funcional máxima en la aplicación del
producto.

Desarrollo de biocatalizador

Se han descubierto muchos biocatalizadores nuevos para la producción a gran escala de sustancias
químicas mediante el cribado extensivo y persistente de un gran número de microorganismos de la
Naturaleza [107-108]. En vista de la importancia mundial de las cuestiones de seguridad, salud y
medio ambiente, el descubrimiento y desarrollo de biocatalizadores y vías es clave para el desarrollo
de nuevas transformaciones sintéticas en la biotecnología industrial.
Aunque el enriquecimiento microbiano clásico y la cultura de aclimatación junto con el cribado han
dado lugar a muchos biocatalizadores industriales establecidos, el desarrollo de chips de cultivo
microbiológico desechables miniaturizados [109-110] en combinación con sustratos de enzimas
fluorogénicas altamente sensibles o la detección fluorescente de la acción enzimática mejoras clave
para la automatización total y la multiplexación de cultivos microbianos, cribado, conteo y selección
en un modo de alto rendimiento. Las tecnologías de ensayo de actividad generalizadas, rápidas,
selectivas y sensibles [111] son las claves para el descubrimiento y la optimización de nuevos
biocatalizadores, así como para la identificación de los sustratos de enzimas fisiológicas para
proteínas con funciones desconocidas.

El perfil de proteínas basado en la actividad (ABPP) ha sido útil para la asignación de funciones a las
enzimas [112]. Las estrategias de evolución dirigidas para la optimización de las propiedades
enzimáticas como la enantioselectividad han llevado a mejoras impresionantes [113- 115]. Se ha
logrado un progreso excelente en la comprensión mecanística de las reacciones enzimáticas [116] y
en el diseño de catalizadores de eliminación de Kemp mediante una combinación de cálculo con
evolución dirigida [117].

Sin embargo, el descubrimiento de funciones enzimáticas verdaderamente novedosas sigue siendo

un desafío y un bloqueo, y los descubrimientos de enzimas juzgadas como novedosas por un nuevo
número EC en las últimas décadas se muestran en la Figura 5. El diseño de novo de biocatalizadores
con un número mínimo de los bloques de construcción de aminoácidos, la ingeniería racional de
una enzima para mejorar la actividad o la estereoselectividad [118], así como la selección y
evolución de las enzimas de un esqueleto no catalítico [119] ofrecen enfoques interesantes. Debido
a que solo una minoría de microorganismos es cultivable, el aislamiento y la clonación de genomas
microbianos completos en un ambiente particular, el metagenoma, amplía el acceso a los hábitats
del universo microbiano global, ya sea que los microbios sean cultivables o no cultivables [120- 124].
Los tremendos recursos genéticos para los biocatalizadores son ilustrados por las expediciones de
investigación en ambientes marinos [125,126].

Del lado de los genomas completamente secuenciados (www.geno- mesonline.org) la gran fracción
de genes que codifican enzimas de función bioquímica desconocida ha despertado un interés en el
acoplamiento de la genómica y la enzimología. La función de una enzima de actividad desconocida
ha sido predicha con éxito a partir de la estructura acoplando formas intermedias de alta energía de
miles de metabolitos candidatos, la función es una S-Adenosilhomocisteína deaminasa, con tres
análogos de adenina aceptados como sustratos [127]. .

A medida que el sustrato endógeno de una reacción enzimática se convierte en su producto, que a
su vez es un sustrato para la siguiente enzima en una ruta, los enfoques de metabolómica global se
han vuelto atractivos para el descubrimiento de enzimas [128-131]. Aunque una cantidad sustancial
de sustratos endógenos están disponibles para tales estudios, la síntesis de sustratos enzimáticos
que tienen la estereoquímica correcta continúa siendo una piedra angular importante para el
ensayo de las funciones enzimáticas sin importar cómo se haya preparado la nueva enzima. El
desarrollo de nuevas aplicaciones de biocatalizadores existentes y mejorados siguiendo las rutas
metabólicas pero empujando hacia la finalización de las reacciones es por lo tanto de mucho interés
para la producción de tales sustratos, especialmente cuando los métodos clásicos de química
orgánica son desafiantes [132-134]. .
panorama

La seguridad, la salud, los recursos renovables, la conservación de la energía y la minimización de

residuos son cuestiones que preocupan tanto a nivel mundial como local. Por lo tanto, no sorprende
que hayan aparecido iniciativas para mejorar los procesos en diferentes disciplinas científicas, áreas
geográficas y actividades industriales. En química, los objetivos de la química verde o sostenible se
han establecido. En biotecnología, la creación de la noción de biotecnología blanca o industrial se
ha establecido más adelante, pero goza de una gran aceptación.

Los avances científicos y tecnológicos en las áreas de desarrollo de biocatalizadores, diseño de

bioprocesos e interacción con reacciones orgánicas, análisis de procesos y tecnología de purificación
de productos han creado la mentalidad adecuada hoy en día para un futuro brillante para la
biotecnología industrial. La investigación y el desarrollo de metodologías de reacción biocatalítica
no solo son clave para la biotecnología industrial, sino también de interés científico fundamental en
nuestra comprensión de las diversas proteínas sin funciones conocidas y la regulación de estas
funciones. El desarrollo adicional de pasos de reacción biocatalíticos modulares y escalables [135]
es compatible con el desarrollo de reacciones químicas. Las secuencias de reacción de múltiples
etapas son de gran interés fundamental para superar las limitaciones en una etapa de reacción y
evitar la purificación intermedia del producto, por analogía con las rutas metabólicas celulares.

Se ha estimado que la producción de productos químicos a granel utilizando biotecnología industrial

contribuye significativamente a resolver dos de los problemas ambientales más urgentes, el cambio
climático y el agotamiento de la energía fósil [136]. El progreso científico y tecnológico de la
biotecnología industrial ofrecerá, por lo tanto, excelentes oportunidades para la cooperación
científica mundial para armonizar la economía y la ecología y para realizar contribuciones
fundamentales y sustanciales en la creación de valor real sostenible.