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Sesiones Teóricas:
Sesiones Prácticas:
1. Pre-tratamiento de muestra.
2. Obtención de cortes ultrafinos para Microscopía Electrónica de Transmisión.
3. Observación de muestras a Microscopio Electrónico de Transmisión.
1.1. Fundamentos de la microscopía óptica y electrónica.
Analogías y diferencias entre
microscopio óptico y electrónico
1.2. Tipos de microscopios electrónicos.
Pared celular
nucleolo
citosol
TRANSMISIÓN
Membrana nuclear
núcleo
BARRIDO
Esquema y foto de un MET
Esquema y foto
de un MEB
1.3. Breve historia de la Microscopía Electrónica.
1897 J. J. Thompson (P. N. Fisica 1906) anuncia la existencia de partículas cargadas negativamente, denominadas luego electrones.
1924 Louis-Victor de Broglie (P.N. Fisica 1930) propone que los electrones en movimiento tienen propiedades ondulatorias.
1926 Busch prueba que es posible enfocar un haz de electrones con una lente magnética cilíndrica, estableciendo las bases de la óptica electrónica.
1931 Ernst Ruska (P.N. Fisica 1986) y colegas construyen el primer microscopio electrónico de transmisión.
1932 A.C. Van Dorsten (Philips Research Laboratories) comienza a estudiar las lentes magnéticas.
1935 Max Knoll demuestra la factibilidad del microscopio electrónico de barrido; tres años después Von Ardenne construye un instrumento prototipo.
1939 Siemens produce el primer microscopio electrónico de transmisión comercial.
1942 Microscopio Electrónico de Transmisión de 400 kV desarrollado por Philips Research Laboratories.
1944 William and Wyckoff introducen la técnica de sombreado metalico.
1945 Porter (P.N. Fisiologia y Medicina 1972), Claude (P.N. Fisiologia y Medicina 1974) y Fullam utilizaron el microscopio electrónico para examinar células
en cultivo de tejidos luego de fijarlas y teñirlas con tetróxido de osmio.
1946 Philips introduce su primer prototipo de microscopio electrónico comercial en Oxford.
1948 Pease y Baker preparan confiablemente secciones finas (0,1 a 0,2 µm de grosor) de material biológico.
1950 H. Latta y J. F. Hartman introducen la cuchilla de vidrio para ultramicrotomía.
1952 Palade (P. N. Fisiología y Medicina 1975) , Porter (P.N. Fisiología y Medicina 1972), y Sjöstrand desarrollan métodos de fijación y seccionamiento fino
que permitieron ver por vez primera muchas estructuras intracelulares. En una de las primeras aplicaciones de estas técnicas, H. E. Huxley demostró que
los músculos esqueléticos contienen un arreglo solapado de filamentos proteínicos, apoyando la hipótesis de los filamentos deslizantes de la contracción
muscular.
1956 Glauert y asociados demuestran que la resina epóxica Araldita era un agente de embebimiento altamente efectivo para microscopía electrónica.
1959 Singer utiliza anticuerpos acoplados a ferritina para detectar moléculas en las células utilizando el microscopio electrónico.
1959 Brenner y Horne ampliaron la técnica de tinción negativa, inventada cuatro años antes por Hall, a una técnica de uso general para la visualización de
virus, bacterias y filamentos proteínicos.
1961 Luft introdujo la resina de embebimiento Epón.
1963 Sabatini, Bensch y Barrnett introducen el glutaraldehido (usualmente seguido por tetróxido de osmio) como un fijador para la microscopía electrónica.
1965 Cambridge Instruments produce el primer microscopio electrónico de barrido comercial.
1966 Branton demuestra que la crio-fractura permite visualizar el interior de las membranas.
1968 de Rosier y Aaron Klug (P.N. Química 1982) describen las técnicas para la reconstrucción tridimensional de estructuras a partir de micrografías
electrónicas.
1975 Henderson y Unwin determinan la primera estructura de una proteína de membrana mediante reconstrucción computacional de micrografías
electrónicas de muestras no teñidas.
1993 Se logra la resolución de 1 Å en un Philips CM-200/300 en la Universidad de Tübingen.
1.4. Aplicaciones.
Diatomea
Torno de dentista
Velcro
1.4. Aplicaciones.
1.- Fijación.
2.- Deshidratación (punto crítico).
3.- Metalización (ion sputtering).
2. Tratamiento de muestra para Microscopía electrónica.
1.- Fijación.
2.- Post-fijación.
3.- Deshidratación
4.- Inclusión en resina (polimerización)
5.- Corte (ultramicrotomo)
6.- Tinción con metales.
Microscopios disponibles en la
Universidad de Huelva
Microscopio electrónico de transmisión (TEM): TEM JEOL modelo JEM 1011.
Voltaje de aceleración de 40 Kv a 100 Kv.
Resolución en imagen puntual de 0,4 nm.
Resolución en imagen estructural de 0,2 nm.
Rango de aumentos hasta 600.000 X.
Equipado con cámara digital MEGAVIEW III y software de análisis de imagen.
Aplicaciones
Ciencias Biológicas y en el campo de la Cristalografía.
Ciencias de los Materiales.