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Recuperación y purificación de ácido glutámico

Terminado el proceso fermentativo se fijó el pH de los fermentos en 9.5 con la adición de


NaOH en granallas. Posteriormente se centrifugó a 10.000 rpm por 10 minas para separar
el material celular del sobrenadante; este último se decoloró con carbón activado, se filtró
y se acidificó con HCI 4N hasta alcanzar el punto isoeléctrico del ácido glutámico (3.1)
medido con un pH- metro Metrohm 691
A continuación, se concentró la fase líquida a una temperatura de 70°C hasta alcanzar la
quinta parte del volumen inicial y se dejó precipitar a temperatura ambiente formando
cristales, los cuales se aislaron por filtración a gravedad, se secaron a 60°C y finalmente
se pesaron para determinar el rendimiento del proceso. Para asegurar su pureza, se
realizaron varias recristalizaciones con una mezcla etanol-agua en relación 0,7:2.
Finalmente, para verificar la pureza de los cristales obtenidos, se utilizó cromatografía en
capa delgada con placas de sílica gel como fase estacionaria, una mezcla de solventes n-
butanol/ácido acético/agua en relación 8:2:2 (v/v) como fase móvil y reactivo de
ninhidrina como reveladora.

1. VIJAYALAKSHMI, Payala y SARVAMANGALA, Dhurjeti. Production of L-Glutamic acid


by Corynebacterium glutamicum DSM 20300T and Arthrobacter globiformis MTCC
4299 using fruits of Muntingia catabura Linn. En: Int. Res. J. Microbiol. Vol. 4 (2011)
p. 116-121
Técnicas para purificación:
La capacidad, en el modelo simple que se muestra, se refiere a la cantidad de proteína
cargada durante la purificación.
La velocidad es de la mayor importancia al comienzo de una purificación donde los
contaminantes como las proteasas deben eliminarse lo más rápido posible.
La recuperación se vuelve cada vez más importante a medida que avanza la purificación
debido al aumento del valor del producto purificado. La recuperación está influenciada
por procesos destructivos en la muestra y condiciones desfavorables en la columna.
La resolución se logra mediante la selectividad de la técnica y la eficiencia de la matriz
cromatográfica para producir picos estrechos.

 Cada técnica ofrece un balance entre resolución, velocidad, capacidad y


recuperación y deben ser seleccionadas en función de los objetivos de cada paso
de la purificación.
 En general, la optimización de cualquiera de estos parámetros puede obtenerse
solamente a costas de los otros de forma que cada paso de la purificación debe ser
seriamente evaluado.
 La importancia de cada parámetro variará dependiendo si el paso de purificación
está dirigido a capturar, si es intermedio o si es de refinado.

Propiedad fisicoquímica Técnica recomendada


Carga Intercambio iónico
Talla Permeación en gel
Hidrofobicidad Interacción hidrofóbica, fase
reversa
Especificidad Afinidad