MÉTODOS GENERALES DE CONSERVACIÓN DE
MICROORGANISMOS
1.Métodos de conservación a largo plazo: Garantizan al máximo la
estabilidad genética, al evitar la aparición de generaciones sucesivas. Se
utilizan más en microorganismos que han sido sujetos a manipulaciones
genéticas.
Por congelación: Se congelan las células en
suspensión en un líquido con un agente crioprotector
y se guardan a temperaturas inferiorer a 0°C, con lo
que el agua se congela. Al no disponer las células de
agua en forma líquida, no hay crecimiento.
Factores que influyen en la viablidad y
estabilidad de las células en este método:
*Edad de las células: Conviene utilizar células
*Velocidad en la congelación y descongelación: Se *Temperatura de almacenamiento: Debe ser lo más bajo
maduras del inicio de la fase estacionaria de la curva
recomienda que las variaciones de la temperatura posible.Lo mejor es guardar en tubos cerrados cerrados o
de crecimiento.
sean rápidas. Al descongelar conviene poner las sellados las células y éstos sumergirlos en nitrógeno líquido a
células a 37°C. una temperatura de -195°C; en fase gaseosa el nitrógeno
líquido debe tener una temperatura de -140°C.
*Empleo de agentes crioprotectores: Sustancias que protegen a
las células del daño que podría causar el proceso de
congelación. Los agentes crioprotectores más usados son: El
glicerol de 15 al 20% de concentración, el dimetilsulfóxido, la
leche descremada y carbohidratos.
Por liofilización: Consiste en la eliminación del agua de una sustancia
congelada por sublimación del hielo bajo vacío. Es un método muy
recomendado por su comodidad para el almacenamiento y el envío de
las cepas, ya que los liófilos pueden almacenarse a una temperatura
ambiente de 18°C- 20°C. Este proceso consta de tres etapas:
1. Precongelación del producto, para asegurar una estructura del todo
congelada.
2. Secado primario, en donde se elimina la mayor parte del agua.
3. Secado secundario, se remueve el agua que queda ligada.
El éxito de la liofilización no sólo depende
cómo se efectúe la técnica, sino también
Características fisico-químicas del El tipo de El estado fisiológico del Las condiciones del
medio de suspensión. microorganismo. cultivo. cultivo.
2.Métodos de conservación a corto plazo: Elegidos cuando no 3.Métodos alternativos de conservación: Son
se pueden utilizar los métodos de elección; ya sea por la falta necesarios recurrir a la hora de conservar grupos de
de los equipos necesarios, porque la cepa microbiana no microorganismos muy determinados que no resisten
resiste los tratamientos de conservación o porque existe el bien la liofilización o la congelación. Ejemplo:
riesgo de que estas pierdan elementos fundamentales de su Sporilum, Rhodospirillum.
material genético.
Desecación sobre sustratos inertes: Se emplea Desecación en papel de filtro: Se Desecación en suelo, arena, silicagel, Desecación en bolitas de alginato: Las células se Desecación en sal gorda para halobacterias: Se
Por transferencia periódica o subcultivo: La cepa Por suspensión en agua destilada o en agua de mar particularmente para hongos y bacterias. utiliza un papel muy absorbente etc.: Se añaden las células a estos encuentran en una matriz de alginato y la eliminación de mezclan las células con sal y se dejan desecar
microbiana se guarda en forma de cultivo activo en el estéril: Consiste suspender en agua estéril unas Consiste en la separación del agua y la (Whatmann n°3) que se sustratos que las protegerán al desecar. agua se hace por tratamiento con soluciones hipertónicas espontáneamente. La desecación no es total, pero las
medio de cultivo en el que ha crecido, consiste en la cuantas células del cultivo que se pretende prevención de la rehidratación. Para la impregna con una solución muy Los microorganismos productores de sucesivas y posterior desecación al aire hasta que se células dejan de multiplicarse por ser insuficiente el
transferencia del cultivo a un medio de cultivo fresco a conservar. Se pueden preparar en criotubos (la desecación, se utilizan sustratos inertes: densa de células y se deja secar esporas se pueden conservar por pierde un 70% de su contenido en agua. nivel de agua disponible.
intervalos que aseguren la viabilidad del mismo. Este concentración celular no debe ser superior a Arena, tierra, zeolita, sílica, gel, tapones de al aire (en condiciones estériles). mucho tiempo.
método es muy simple, se puede mantener la viabilidad de 104-105 células/ml, en el caso de bacterias). La algodón, porcelana, etc.
algunos microorganismos por muchos años, y la estabilidad para caracteres morfológicos y
recuperación de los cultivos activos es fácil.
La concentración de los
microorganismos.