INSTITUTO POLITÉCNICO

NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE METODOS DE ANALISIS

PRACTICA: ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICA DE
UN SISTEMA MÚLTIPLE.
ALUMNO: SALVADOR HERNANDEZ JUAN

GRUPO: 4IM2 SECCION: 3

PROFESOR: FRANCISCO CARMELO FERNÁNDEZ LÓPEZ

OBJETIVOS
 Realizar un espectro de absorción para determinar la longitud de onda de
trabajo.
 Determinar la absortividad a partir de curvas de calibración.
 Comprobar la ley de aditividad de un sistema múltiple.
Conocer la concentración de un problema mediante la ley de aditividad.}
FUNDAMENTOS
El análisis espectrofotmetrico de una mezcla de varias especies presentes en una
muestra se puede realizar sin separar necesariamente los analitos, ya que cada
analito presenta espectros de absorción diferentes. En el análisis simultáneo se
aplica el principio de aditividad de las absorbancias.
La absorbancia total de una solución a una longitud de onda dada, es igual a la
suma de las absorbancias de los componentes individuales en la solución. Esta
relación hace posible en principio determinar las concentraciones de los
constituyentes individuales de una mezcla, incluso si su espectro se superpone por
completo.
La absortividad molar a cada longitud de onda se obtiene a partir de las curvas de
calibración como valor de pendientes preparadas con patrones de cada
componente o de las curvas espectrales y Ca y Cb resultan las incógnitas. Para
manejar un sistema múltiple hay que considerar que los componentes no deben
presentar interacciones químicas entre sí ni con el solvente comportándose cada
mezcla o analito como independiente, además para poder escoger longitudes de
onda donde se considera que una absorba más a una longitud y menos en la otra y
viceversa para que pueda cumplirse la ley de la aditividad.

RESULTADOS
Determinación de longitudes de onda de trabajo.
Longitud de A K2Cr2O7 A KMnO4 Longitud A A KMnO4
onda de onda K2Cr2O7
340 2.69 0.431 480 0.366 0.260
350 2.679 0.398 490 0.268 0.382
360 2.636 0.334 500 0.185 0.506
370 2.107 0.249 510 0.114 0.610
380 1.832 0.157 520 0.065 0.728
390 1.308 0.077 530 0.034 0.757
400 0.855 0.030 540 0.016 0.807
410 0.620 0.008 550 0.007 0.719
420 0.562 0.004 560 0.001 0.478
430 0.586 0.006 570 -0.004 0.475
440 0.614 0.029 580 -0.005 0.270
450 0.596 0.057 590 -0.005 0.135
 460 0.567 0.128 600 -0.005 0.106
470 0.462 0.174

Espectros de absorcion.
Absorbancia

2.5

1.5
K2Cr2O7
1 KMnO4

0.5

0
λ (nm)
330 380 430 480 530 580

a)
Compuesto ʎmáx
K2Cr2O7 380
KMnO4 510

b) ¿Por qué se eligen estas longitudes de onda y no otras?

Porque a estas longitudes de onda hay señal de absorbancia en ambas muestras y
además es posible distinguir la absorbancia de cada una.
Obtención de las absortividades molares.
Calculo de la concentración:
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2

𝐶1 𝑉1
= 𝐶2
𝑉2
K2Cr2O7
C1 0.0016 M
V1 1.0 mL.
V2 7.0 mL.
 0.0016 𝑀 × 1.0 𝑚𝐿
𝐶2 = = 2.28 × 10−4 𝑀
7.0 𝑚𝐿
KMnO4
C1 0.0004 M
V1 1.0 mL.
V2 7.0 mL.

0.0004𝑀 × 1.0 𝑚𝐿
𝐶2 = = 5.71 × 10−5 𝑀
7.0 𝑚𝐿
Compuesto Concentración A380 A510 Compuesto Concentración A380 A500
molar molar
K2Cr2O7 0.000228 0.279 0.016 KMnO4 0.0000571 0.019 0.085
0.000266 0.300 0.015 0.0000666 0.019 0.097
0.00032 0.389 0.026 0.00008 0.039 0.134
0.0004 0.491 0.028 0.0001 0.033 0.149
0.000535 0.647 0.033 0.000133 0.055 0.200
0.0008 0.981 0.056 0.0002 0.081 0.310

Curva de calibración K2Cr2O7

Absorbancia

1.2
y = 1242.1x - 0.0132
R² = 0.9987
1

0.8

0.6

0.4

0.2 y = 68.685x - 0.0002

R² = 0.9623

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006 0.0007 0.0008 0.0009
A380
Concentracion (M)
A510
 Curva de calibración KMnO4
Absorbancia
0.35
y = 1552x - 0.0022
0.3 R² = 0.9942

0.25

0.2

0.15
y = 434.63x - 0.0051
R² = 0.9485
0.1

0.05

0
0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025
A380
Concentracion (M)
A510

Longitud de onda (nm) Absortividad (a)

K2Cr2O7 KMnO4
380 1242.1 434.63
510 68.685 1552

Comprobación de la ley de la aditividad en un sistema múltiple.

Calculo de la concentración:
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
K2Cr2O7
C1 0.0016 M
V1 5.0 mL.
V2 10.0 mL.
𝐶1 𝑉1
= 𝐶2
𝑉2
(0.0016 𝑀)(5.0 𝑚𝐿)
𝐶2 = = 8.4 × 10−4 𝑀
10 𝑚𝐿
 KMnO4
C1 0.0004 M
V1 1.0 mL.
V2 10.0 mL.

(0.0004 𝑀)(1.0 𝑚𝐿)

𝐶2 = = 4 × 10−5 𝑀
10 𝑚𝐿

Mezcla Cm K2Cr2O7 Cm KMnO4 A observada

ʎ1 ʎ2
1 8x10-4 4x10-5 0.476 0.107
2 4x10-4 1x10-4 0.536 0.161
3 1.6x10-4 2x10-4 0.229 0.298

De acuerdo con la ley de la aditividad:

𝐴ʎ380 = 𝐴𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝐴𝐾𝑀𝑛𝑂4
𝐴ʎ500 = 𝐴𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝐴𝐾𝑀𝑛𝑂4
Expresado con la ley de Bouger-Beer:
𝐴ʎ380 = 𝑎𝑏𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑏𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
𝐴ʎ500 = 𝑎𝑏𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑏𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
Como el paso de luz (b) es el mismo en todos los casos (1 cm):
𝐴ʎ380 = 𝑎𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
𝐴ʎ510 = 𝑎𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
Sustituyendo con los valores de absortividad y concentración ya determinados.
Para la mezcla 1:
𝐴ʎ380 = (1242.1)(8x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (434.63)(4x10 − 5)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 1.011
𝐴ʎ510 = (68.685)(8x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (1552)(4x10 − 5)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 0.1170
Para la mezcla 2:
𝐴ʎ380 = (1242.1)(4x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (434.63)(1x10 − 4)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 0.540
𝐴ʎ510 = (68.685)(4x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (1552)(1x10 − 4)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 0.182
Para la mezcla 3:
𝐴ʎ380 = (1242.1)(1.6x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (434.63)(2x10 − 4)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 0.285
𝐴ʎ510 = (68.685)(1.6x10 − 4)𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + (1552)(2x10 − 4)𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 0.321

Mezcla A observada A calculada

ʎ1o ʎ2o ʎ1c ʎ2c
1 0.476 0.107 1.011 01170
2 0.536 0.161 0.540 0.182
3 0.229 0.298 0.285 0.321

Comprobación ley de aditividad ʎ1

A. observada

1.2

1 y = 1.0171x - 0.0421
R² = 0.9954
0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
A. calculada

Comprobación ley de aditividad ʎ2

A. observada

0.35

0.3
y = 0.9441x - 0.0064
0.25 R² = 0.9985
0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
A. calculada
 ʎ1 ʎ2
r 0.9976 0.9992
R2 0.9954 0.9985

Determinación de la concentración de K2Cr2O7 y KMnO4 en la solución problema.

Problema Aʎ1 Aʎ2
3 0.284 0.321

De acuerdo con la ley de la aditividad:

𝐴ʎ380 = 𝑎𝑏𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑏𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
𝐴ʎ510 = 𝑎𝑏𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 𝑎𝑏𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
Sustituyendo los valores de absortividad obtenidos, así como los de las
absorbancias observadas y considerando que b=1 cm para todos los casos:
0.284 = 1242.1𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 434.63𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
0.321 = 68.685𝑐𝐾2𝐶𝑟2𝑂7 + 1552𝑐𝐾𝑀𝑛𝑂4
Al resolver el sistema obtenemos los siguientes resultados:
Problema Cm K2Cr2O7 Cm KMnO4
3 1.5873 × 10−4 M 1.9980 × 10−4 M

DISCUSIONES
Para poder comprobar la ley de la aditividad que es el principal objetivo de la
práctica, fue necesario llevar a cabo un barrido espectral de las dos muestras a
analizar, para determinar la longitud de onda de trabajo, como ya se mencionó en
los resultados, estas longitudes de onda se escogieron porque para ambas
muestras hay una señal de absorbancia diferente de cero y además es posible
distinguir una de la otra.
Una vez determinadas las longitudes de onda de trabajo, se realizó la curva de
calibración para ambos analitos a las dos longitudes.
Se obtuvieron las pendientes a partir de las ecuaciones de las 4 rectas, que
representan la absortividad y se comprobó la ley de Bouger- Beer pues los valores
de los coeficientes de correlación son cercanos a uno.
Para comprobar la ley de aditividad se calcularon las absorbancias y se compararon
con las obtenidas experimentalmente mediante una gráfica y como puede
observarse en los resultados, los coeficientes de correlación, así como r 2 son
cercanos a 1, lo que demuestra que ésta se cumple.
Comprobada la ley de la aditividad fue posible calcular la concentración de los
analitos en un problema.
CONCLUSIONES
 La ley de aditividad nos sirve para realizar análisis cuantitativos simultáneos:
determinar la concentración de dos o más analitos.
 Las condiciones para que se cumplan la ley de aditividad es que la mezcla
contenga analitos no reactivos entre ellos y que presenten absorción en el
mismo rango de longitudes de onda pero que sea posible distinguir los picos
de absorción.
 Las concentraciones del problema 3 fueron 1.5873 × 10−4 M y 1.9980 × 10−4
M para K2Cr2O7 y KMnO4 respectivamente.
Bibliografia
 Harris D. C. 2001. Análisis Químico Cuantitativo 2a ed. Ed. Reverté
 Skoog, D. A.; Holler, F. J. (2008). Principios de análisis instrumental. 6a ed., CENGAGE
Learning. (Archivo pdf)
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Apuntes2_18590.pdf