Fig. 1.

Efecto de los nuevos compuestos de CB en la acumulación de cAMP en comparación con los dos derivados
anteriores 9 y 10, y el agonista de referencia WIN 55,212-2 en células CHO transfectadas con CB2. Los valores se
informan como porcentaje de aumento de la producción de AMPc estimulada por forskolina y se expresan como
media ± SEM de tres experimentos independientes realizados por duplicado.

entre TM3 y TM4 a-helixes, rodeado por L3.26 (190), F3.27 (191) y L4.61 (252) con las que
establece van der Waals. contactos, mientras que la cadena n-pentilo apunta hacia TM6 que
interactúa principalmente con V6.59 (367). El andamio central y el adamantilo. El anillo del
ligando se coloca principalmente en el bolsillo hidrófobo. constituido por L3.29 (193), T3.33
(197), I4.56 (247), A4.57 (248), P4.60 (251), y W5.43 (279), formando así interacciones
lipofílicas. Con estos residuos. Debido a su disposición en el receptor CB1 el El ligando no solo
carece de las fuertes interacciones de van der Waals con el residuo 5.46 (que es V282 en lugar
de F197, como en CB2) pero no es incluso capaz de formar cualquier enlace H con T3.33 (197)
a través de su núcleo de triazolopirimidina.
Estas dos diferencias, junto con la menos contactos hidrofóbicos establecidos dentro del
receptor CB1, podría ser el principal responsable de la selectividad para CB2 versus CB1
Receptor mostrado por el compuesto 28 y, en general, para esta serie de ligandos.
Ligandos como el compuesto 18, que no tienen sustituyentes o solo un grupo metilo en la
posición 2 del andamio central, muestran un general afinidad CB2 disminuida con respecto a
los ligandos que presentan fenilo o Grupos arilo en las mismas posiciones. El complejo de
energía minimizada del compuesto 18 en el receptor CB2 (Fig. 4A) muestra una muy similar
Modo de enlace para este ligando con respecto al previsto para compuesto 28. Los dos
ligandos comparten una disposición casi idéntica de sus cadenas n-pentilo y anillo de
adamantilo, que así toman Van der Waals contacta con los mismos residuos. De todos modos,
compuesto 18 no es capaz de llenar la pequeña cavidad lipofílica principalmente delimitada
por F2.57 (87), I3.29 (110), L6.54 (264) y F7.35 (281), mostrando solo contactos limitados con
I3.29 (110) y L6.64 (264).

Esto podría estar en La base de la afinidad reducida por el receptor CB2 demostrada por este
El ligando y sus análogos carecen de sustituyentes más grandes en C-2 posición. Compuesto
18 comparte con compuesto 28 también un similar postura de unión en el receptor CB1 (Fig.
4B). De todos modos, el C-2 más pequeño. sustituyente de este ligando le permite adoptar una
forma ligeramente diferente Orientación donde el grupo metilo apunta hacia la cadena lateral
de L4.61 (252) y el anillo de triazol del andamio central está más cerca de P4.60 (251). En esta
disposición, el ligando es capaz de formar un enlace H con T3.33 (197) a través del oxígeno
carbonilo de su andamio central; esta interacción podría constituir la razón de la más alta
afinidad de este compuesto para el receptor CB1 con respecto a lo observado para compuesto
28 y en general para todos aquellos ligandos que llevan sustituyentes C2 más voluminosos que
no permitirían tal disposición debido a la presencia de estérico. protuberancias con cadenas
laterales F3.27 (191) y L4.61 (252). Compuesto 39, con un grupo N-bencil-N-metilo en la
posición 2 de la central El andamio mostró una fuerte afinidad por el receptor CB2 y la más alta
Selectividad frente al receptor CB1 entre esta serie de compuestos.
Fig. 2. Antagonismo de los nuevos ligandos de CB que evalúan su capacidad para contrarrestar el efecto inhibitorio
de WIN 55,212-2 (20 nM) sobre la producción de AMPc estimulada por forskoline en CB2- Células CHO
transfectadas. Los valores se expresan como media ± SEM de tres experimentos independientes realizados por
duplicado

FigA, el ligando adopta un modo de unión diferente en Receptor CB2 con respecto a los
ligandos previamente analizados, debido a la forma y el volumen del sustituyente C-2 que no
se puede colocar en el pequeño bolsillo hidrófobo formado por F2.57 (87), I3.29 (110), L6.54
(264) y F7.35 (281). Sin embargo, el compuesto todavía es capaz. establecer las interacciones
fuertes de van der Waals con F5.46 (197) a través de su anillo de adamantilo, que muestra la
misma ubicación dentro de el receptor como para los compuestos 18 y 28. Además, el ligando
forma un enlace H con T3.33 (114) a través del oxígeno carbonilo de su resto amida,
manteniendo así las interacciones que son Se cree que es responsable de la selectividad CB2
versus CB1 de estos ligandos Finalmente, el sustituyente C-2 del compuesto es eficientemente
posicionado en el canal hidrofóbico principalmente delimitado por L3.26 (107), L3.27 (108),
L4.61 (169) e Y5.39 (190), formando interacciones lipofílicas con todos estos residuos y, en
particular, una fuerte Apilamiento de pep con Y5.39 (190). El complejo de energía minimizada
de el compuesto 39 acoplado en el modelo del receptor CB1 (Fig. 5B) muestra que El ligando
no interactúa como en el modelo del receptor CB2. Los compuesto muestra un modo de unión
similar al observado para 28 y 18 en el modelo de receptor CB1, con una ligera rotación de la
Núcleo central para colocar el resto bencilo voluminoso entre TM3 y TM4 a-hélices.
Adoptando esta disposición el ligando no es capaz. para formar cualquier enlace H con T3.33
(197) y aunque mantiene un buena interacción con F3.27 (191) a través del grupo bencilo,
muestra contactos reducidos con L3.26 (190) y V6.59 (367), así como interacciones hidrófobas
más débiles con T3.33 (197), A3.34 (198) y I4.65 (247) a través del anillo de adamantilo, con
respecto a los compuestos 28 y 18. Esto podría explicar la baja afinidad de CB1 del compuesto
39 y por lo tanto su fuerte selectividad CB2 versus CB1 interacciones hidrófobas más débiles
con T3.33 (197), A3.34 (198) y I4.65 (247) a través del anillo de adamantilo, con respecto a los
compuestos 28 y 18. Esto podría explicar la baja afinidad de CB1 del compuesto 39 y por lo
tanto su fuerte selectividad CB2 versus CB1.
Fig. 4. Complejo de compuesto 18 minimizado de energía acoplado a los receptores CB2 (A) y CB1 (B).

Fig. 5. Complejo de compuesto 39 minimizado de energía acoplado a los receptores CB2 (A) y CB1 (B).

6. Conclusiones
Para progresar la afinidad y selectividad del receptor CB2 y Desarrollar relación estructura-
actividad para la serie de triazolo. [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida, sintetizamos y evaluamos
Veintisiete nuevos derivados pertenecientes a esta clase química.
Las modificaciones estructurales alrededor del andamio central, especialmente en las
posiciones C2 y C-6, nos llevaron a lograr una mayor selectividad, con Respecto a los
compuestos parentales 9 y 10. Los mejores valores de afinidad. Asociados con alta selectividad
se obtuvieron con compuestos 23. (KiCB2 ¼ 11.3 nM; KiCB1 / KiCB2 ¼ 462) y 39 (KiCB2 ¼ 21
nM; KiCB1 / KiCB2> 476) que tiene un resto adamantan-1-ilo en la función carboxamida y
 un 4-Cl-fenilo o N-bencil-N-metilamina residuos en C-2, respectivamente. Experimentos de
cAMP en receptores CB2 expresado en células CHO sorprendentemente reveló un
comportamiento diferente, Basándose en las sustituciones en C-2. Compuesto 16 como su
padre 9 que carece del sustituyente en la posición C-2 de la triazolepirimidina El núcleo
mostraba actividades agonistas parciales. Derivados 2-sustituidos Proporcionó un
comportamiento de agonismo inverso, con altos niveles de eficacia.
Del 152% al 246% de incremento en la producción de cAMP. Por lo tanto, esta nueva serie de
compuestos propone un atractivo punto de partida para una mayor optimización, que
representa nuevas herramientas farmacológicas para evaluar el potencial terapéutico de los
agonistas inversos CB2 en diversos entornos de enfermedades.

7. química
7.1. materiales y métodos
Los espectros de masas de ionización por electropulverización de iones positivos (ESI) fueron
realizado con un modelo Agilent 1100 Series LC / MSD. Todo derretido Los puntos no están
corregidos y fueron asignados por un Buchi-Tottoli. aparato. La resonancia magnética nuclear
del protón (1 H NMR) los espectros se registraron en un Bruker AC 200 (200 MHz) o en un
Espectrómetro Varian Mercury Plus 400 (400 MHz). Turnos químicos se reportan en valores d
(partes por millón), usando Disolventes deuterados (DMSO-d6 y CDCl3). La pureza de los
compuestos ensayados se determinó por combustión.
Análisis elementales realizados por el Laboratorio de Microanálisis de El Departamento de
Química de la Universidad de Ferrara con un Yanagimoto MT-5 analizador elemental CHN.
Todo probado compuestos obtenidos datos consistentes con una pureza de al menos el 95%
como En comparación con los valores teóricos.
Las reacciones se monitorizaron por TLC (cromatografía de capa fina) en gel de sílice (placas
Merck F254 prerrevestidas), y la visualización de los compuestos se realizó mediante luz UV. La
cromatografía flash fue logrado utilizando gel de sílice de malla 230e400 y una mezcla de etilo
acetato y éter de petróleo o acetato de etilo y metanol en Diferentes ratios según la fase de
elución. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio anhidro (Na2SO4). Todos los
materiales de partida, reactivos. y los solventes se obtuvieron de Sigma-Aldrich o Alfa Aesar.

7.1.1. Procedimiento general A para la síntesis de compuestos 11ceh. Una solución de sal de
hemisulfato de S-metilisotiourea (22 mmol), la hidracida apropiada (22 mmol) y el agua (35 ml)
se sometieron a reflujo Durante 6 h. El disolvente se concentró a presión reducida y El residuo
se lavó con etanol (3 10 ml). La resultante El sólido se vertió en 10 ml de NaOH al 10% y se
calentó a reflujo durante 6 h adicionales. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y
Ajustado a pH 5 usando HCl 1N. El precipitado se filtró, se lavó. Con agua fría y seca.