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Departamento de Biotecnología
Licenciatura
Ingeniería Bioquímica Industrial
Depto. Biotecnología
Prólogo del Manual
Introducción:
El manual de prácticas del laboratorio es un apoyo didáctico para la UEA Optativa
Ingeniería Enzimática de la licenciatura de Ingeniería Bioquímica Industrial.
Objetivo:
El objetivo general del laboratorio es que el alumno aplique y asimile los fundamentos
cinéticos de reacciones enzimáticas mediante la determinación de datos experimentales
obtenidos en laboratorios virtuales utilizando el software comercial “Laboratorio de
Enzimas” Ver. 6.12S. (Newbyte Educational Software), y el software “EnzymeLab”, este
último de acceso gratuito para fines didácticos.
Nota: Las prácticas aquí mostradas han sido adaptadas del manual del software
“Laboratorio de Enzimas” Ver. 6.12S. (Newbyte Educational Software) a los
requerimientos de la UEA “Ingeniería Enzimática”
PRÁCTICA No. 1
La pepsina y la tripsina son enzimas proteasas, lo que indica que descomponen las
moléculas de las proteínas como parte del proceso digestivo.
Proteína
Péptidos
Proteasa
Objetivo:
Procedimiento:
Tabla 1
a) Diagrama a continuación los datos producto (Gráfico 1) de la Tabla 1 para cada una de
las proteasas y calcule la velocidad inicial de la reacción, mediante la determinación de
la tangente a la curva de progreso al inicio de la reacción (la parte lineal).
Producto vs tiempo
100
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30
Michaelis y Menten en 1913, para explicar la relación observada entre la velocidad inicial y
la concentración inicial de sustrato propusieron que las reacciones catalizadas
enzimáticamente presentan el siguiente mecanismo:
k1
k 1
Vmax S
v
K M S
Objetivo:
Procedimiento:
Resultados:
Tabla 1.
Concentración Velocidad
de sustrato inicial de
(Unidades) reacción
(Unidades)
Diagrame a continuación los datos de la Tabla 1 (Gráfico 1), determine manera gráfica y
con un método de regresión lineal el valor de Vmax y KM.
Grafico 1.
Objetivo:
Procedimiento:
1. Escoja la enzima con la que deseas trabajar, anota los datos que se te dan.
2. En el primer día de trabajo determina la cinética tipo Michaelis-Menten en ausencia del
inhibidor. Al final del día realiza el análisis cinético y anota lo valores de K M y Vmax
que obtiene el programa con regresión no-lineal.
3. En el segundo día de trabajo realiza el mismo procedimiento agregando una cierta
concentración de inhibidor y mantenla constante durante los ensayos. Al final del día
realiza el análisis cinético y anota los valores de K M' y V max
'
que obtiene el programa
con regresión no-lineal.
4. Compara los parámetros obtenidos en ausencia y presencia del inhibidor para
determinar el tipo de inhibidor.
5. Calcula la(s) constante(s) de inhibición ( K I ).
PRÁCTICA No. 4
El pH del medio ocasiona protonación o desprotonación de los aminoácidos del sitio activo
provocando cambios en la tasa de reacción. Cada enzima tiene un pH óptimo, el cual está
entre pH 6 - 8 para la mayoría de las enzimas.
Objetivo:
Procedimiento:
1. Escoge la enzima con la que deseas trabajar, anota los datos que se te dan.
2. En el primer día de trabajo determina la cinética tipo Michaelis-Menten al pH que
indica la ficha técnica. Al final del día realiza el análisis cinético y anota lo valores
de K M y Vmax que obtiene el programa con regresión no-lineal.
3. Calcula la concentración de sustrato a condiciones de saturación, [S] = 25 KM.
4. En el segundo día de trabajo realiza experimentos a una concentración de sustrato
de [S] = 25 KM a diferentes pH iniciales.
5. Registre las velocidades de reacción a diferentes pH.
6. Lleva los datos a un gráfico y con la metodología vista en clase determina los pK’s
más importantes del sitio activo y discuta los resultados observados.
PRÁCTICA No. 5
Maltosa maltasa
Glucosa
Objetivo:
Procedimiento:
Resultados:
Gráfico 1.