UNIDAD ACADEMICA DE MEDICINA VETERINARIA Y

ZOOTECNIA

DOCTORA: MARIA GUADALUPE OROZCO BENITEZ

INTEGRANTES: Luis Ricardo, Dayana Rosa Isela, Julio Cesar Camacho,
Laura Arely Cierra Hernandez

BACTERIOLOGIA
PRACTICA # 1 SIEMBRA DE BACTERIAS
REPORTE
Compostela, Nayarit a 10 de diciembre del 2018
1C
PRACTICA # 1 SIEMBRA DE BACTERIAS
ESTERILIZACIÓN

Objetivo
Siembra de microorganismos:
Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las técnicas de aislamiento
en placa de Petri, con el uso de medios selectivos para poder diferenciar dos
microorganismos de acuerdo con sus características que presentan en el cultivo
La presencia de microorganismos en todos los medios ambientales hace
imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea necesario destruir
todas aquellas que pudieran encontrarse contaminando los medios o los
instrumentos de trabajo. Esto se consigue mediante la esterilización, consistente en
la destrucción de todo microorganismo.
En estas prácticas vamos a utilizar especialmente el calor como método de
esterilización rutinario, aunque tal y como se ha explicado en clase existen otras
posibilidades. Los medios con contenido acuoso han de ser esterilizados en el
autoclave mediante calor

Por lo tanto, una vez preparados los medios de cultivo hay que proceder a su
esterilización en autoclave, realizada habitualmente a 1 atm de sobrepresión
(121ºC) durante 15 ó 20 min., salvo en el caso de medios cuyos componentes sufran
alteraciones tales que los hagan inadecuados para el crecimiento. Este es el caso
de los azúcares utilizados en los ensayos de fermentación, que se suelen esterilzar
a menor presión [0.5 atm. de sobrepresión (111ºC)] para evitar su "caramelización"
, una modificación consistente en su oxidación y consecuente conversión en formas
tóxicas para el metabolismo de las bacterias, o en el caso de la urea, que conviene
esterilizarla independientemente por filtración.

Diferentes Métodos de Siembra:

Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para
promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación. El resultado de
una siembra se llama: Cultivo
Las siembras pueden ser:
1.- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez.
2.- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria.
1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa
cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
- Medio de cultivo: Liquido
- Instrumento: Asa
- Finalidad: poner la bacteria en el medio

Siembra por estría por agotamiento: Con este procedimiento se puede conseguir
una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el
medio de cultivo, se vuelca en la caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa
previamente esterilizada se toma material de un cultivo y se descarga sobre la
superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el
material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una
estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el
asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas.
- Medio de cultivo: solido en placa de Petri
- Instrumento. Asa
- Finalidad. Obtener colonias aisladas
Para esta practica contábamos con difentes muestras como: Excremento de vaca,
Excremeto de chivo, queso fresco, leche bronca y jamon

(anexar foto de leche y jamón)

Tipos de agar.

Mac Conkey.
El agar Mac Conkey II es una medio selectivo y diferencial para la detección de
organismos coliformes y patógenos entéricos. Actualmente existen una gran
cantidad de medios diseñados para el aislamiento, cultivo e identificación de
bacterias entéricas.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que
inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación
con otros medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el
crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y entero
cocos.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Sembrar en superficie
Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.
Incubación
Durante 18 -48 horas, a 35- 37 ºC, en atmósfera aeróbic
MC
Para el agar de MC todo el equipo decidió sembrar la muestra de la leche bronca,
para realizar la siembra es importante tener todo cerca del mechero. Desde tu medio
una vez que lo abras, el asa, hasta tu muestra, pues si esto no se hace existe la
posibilidad que se contamine.

1.- antes de abrir o hacer cualquier cosa de debe esterilizar el asa con la que se va
a tomar la muestra

2.- Abrimos nuestra muestra cerca del mechero y nuestra caja de Petri con el medio
previamente ya listo y comenzamos a sembrar.

3.- para sembrar se realizará un estriado que es la manera correcta de hacerlo para
la bacteria nazca de manera adecuada.
4.- Una vez hecho el estriado debemos colocarle cinta alrededor para que no se
abran, colocarle nuestros nombres y el nombre del medio que es o que sembramos.
5.- Una vez hecho esto se procede a llevar a la estufa donde se encontrarán a una
temperatura adecuada para su crecimiento y solo es cuestión de esperar de 18 a
48 horas para poder ver los resultados y ver si nuestra muestra se dio o no.
siembra
DAYANA

LUIS

JULIO: No creció
ARELY
Los resultados de esa siembra nos dieron buenos resultados quedando
Luis Ricardo 3/3
Dayana 3/3
Julio 2/3
Arely 3/3
Al ver los resultados, la doctora nos dijo que el siguiente paso era el de la resiembra
de los que nos habían crecido, así que procedimos a volver a sembrar en un nuevo
medio las bacterias que nos habían salido. Esto es para aislar a la bacteria pues así
nos aseguramos de solo sembrar solo esa bacteria y no arriesgarnos a que haya
alguna otra con ella por haberse contaminado a la hora de hacer la siembra.
1.- se toma alguna caja de Petri que si haya crecido y se repite lo del al principio.
Se esteriliza el asa, se toma una muestra de nuestra bacteria cerca del mechero y
se coloca en la caja Petri en forma de estriado.

2.- Una vez hecho eso con las 3 cajas o las que te hayan crecido, se vuelve a colocar
cinta, poner tu nombre y nuevamente se coloca en la estufa a una temperatura
adecuada para ellas.
3.- en 18 a 48 horas se tendrán que ver resultados
Resultados
MC
Resiembra
Luis: si creció, pero no hay foto
Dayana

Escherichia coli

Julio: No creció
Arely

Proteus mirabilis
E.M.B. Agar.

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de

rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de entero bacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces
de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está
dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto
inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia
coli y Citrobacter spp. Presentan un característico brillo metálico. Las cepas que
utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras
que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de
Cándida spp. Como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad
permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. Crece en
este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter
spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto
puede ocurrir, aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al
0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En
este medio se obtiene, además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.
Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias
aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubación
De 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis
1.- Para este medio todo el equipo utilizo la muestra del excremento de vaca
2.-Como en los pasos anteriores de igual manera se realiza todo cerca del mechero
para prevenir alguna contaminación

3.- se esteriliza el asa para poder tomar la muestra de excremento

4.- se toma la muestra (todo cerca del mechero) y se coloca en la caja Petri
5.- Una vez hecho esto se lleva a la estufa en donde estará de 18 a 48 horas para
ver resultado
siembra
Luis

(UNICA FOTO, ES LA CAJA DE ABAJO, SI CRECIO)

Dayana:

Julio: No hay foto, pero si creció.

Arely

Resiembra: E- coli
Luis: No hay foto, pero si creció
Dayana

Julio

ARELY
Medio 110

FUNDAMENTO

Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación

alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos
selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-
05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06). En el medio de cultivo, el extracto
de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el
manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio se encuentra
en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto
Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos
microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados
anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación
presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol
e hidrólisis de la gelatina.
Siembra
Directa, en superficie, por estriado o por extensión.

Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Siembra
Luis

Dayana

Julio: No hay foto, pero si crecieron

Arely
Resiembra

Luis: No hay foto, pero si crecieron

Dayana

Julio

Arely
OBSERVACION DE LAS BACTERIAS
Observación macroscópica.

El tamaño de las bacterias impide verlas a simple vista. Sin embargo, las colonias
que forman sobre medios sólidos sí son visibles, y en ellas se puede estudiar una
serie de características que nos ayudan a su identificación. A nivel morfológico,
podemos estudiar la forma de las colonias, su tamaño, aspecto del borde (liso,
rugoso, ondulado, ramificado, etc.), presencia de brillo, color, etc. Incluso sobre
medio líquido las bacterias producen modificaciones de interés para su clasificación
y que tienen que ver esencialmente con las características de su metabolismo. Así
se observa si la turbidez es uniforme, si crecen en el fondo, si lo hacen en la zona
superficial, si producen pigmentos, etc.
Todas estas características de las bacterias nos hacen darnos una idea de cual
bacteria pudo crecer en nuestro medio

110:
Luis: Staphylococcus
Dayana: Staphylococcus
Julio: Staphylococcus
Arely: Staphylococcus

EMB
Luis: Escherichia coli
Dayana: Escherichia coli
Julio: Escherichia coli
Arely: Escherichia coli
En base a las características que podemos observar a simple vista podemos darnos
una idea de que clase de bacterias estamos tratando, por ejemplo en el medio EMB
nos creció Escherichia coli podemos observar en la imagen que las colonias tienen
en demasía una coloración verde-metálico, lo cual es característico de E. coli, y en
el medio 110 podemos observar que es una coloración beige a casi incolora