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ZOOTECNIA
BACTERIOLOGIA
PRACTICA # 1 SIEMBRA DE BACTERIAS
REPORTE
Compostela, Nayarit a 10 de diciembre del 2018
1C
PRACTICA # 1 SIEMBRA DE BACTERIAS
ESTERILIZACIÓN
Objetivo
Siembra de microorganismos:
Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las técnicas de aislamiento
en placa de Petri, con el uso de medios selectivos para poder diferenciar dos
microorganismos de acuerdo con sus características que presentan en el cultivo
La presencia de microorganismos en todos los medios ambientales hace
imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea necesario destruir
todas aquellas que pudieran encontrarse contaminando los medios o los
instrumentos de trabajo. Esto se consigue mediante la esterilización, consistente en
la destrucción de todo microorganismo.
En estas prácticas vamos a utilizar especialmente el calor como método de
esterilización rutinario, aunque tal y como se ha explicado en clase existen otras
posibilidades. Los medios con contenido acuoso han de ser esterilizados en el
autoclave mediante calor
Por lo tanto, una vez preparados los medios de cultivo hay que proceder a su
esterilización en autoclave, realizada habitualmente a 1 atm de sobrepresión
(121ºC) durante 15 ó 20 min., salvo en el caso de medios cuyos componentes sufran
alteraciones tales que los hagan inadecuados para el crecimiento. Este es el caso
de los azúcares utilizados en los ensayos de fermentación, que se suelen esterilzar
a menor presión [0.5 atm. de sobrepresión (111ºC)] para evitar su "caramelización"
, una modificación consistente en su oxidación y consecuente conversión en formas
tóxicas para el metabolismo de las bacterias, o en el caso de la urea, que conviene
esterilizarla independientemente por filtración.
Siembra por estría por agotamiento: Con este procedimiento se puede conseguir
una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el
medio de cultivo, se vuelca en la caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa
previamente esterilizada se toma material de un cultivo y se descarga sobre la
superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el
material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una
estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el
asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas.
- Medio de cultivo: solido en placa de Petri
- Instrumento. Asa
- Finalidad. Obtener colonias aisladas
Para esta practica contábamos con difentes muestras como: Excremento de vaca,
Excremeto de chivo, queso fresco, leche bronca y jamon
Mac Conkey.
El agar Mac Conkey II es una medio selectivo y diferencial para la detección de
organismos coliformes y patógenos entéricos. Actualmente existen una gran
cantidad de medios diseñados para el aislamiento, cultivo e identificación de
bacterias entéricas.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que
inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación
con otros medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el
crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y entero
cocos.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Sembrar en superficie
Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.
Incubación
Durante 18 -48 horas, a 35- 37 ºC, en atmósfera aeróbic
MC
Para el agar de MC todo el equipo decidió sembrar la muestra de la leche bronca,
para realizar la siembra es importante tener todo cerca del mechero. Desde tu medio
una vez que lo abras, el asa, hasta tu muestra, pues si esto no se hace existe la
posibilidad que se contamine.
1.- antes de abrir o hacer cualquier cosa de debe esterilizar el asa con la que se va
a tomar la muestra
2.- Abrimos nuestra muestra cerca del mechero y nuestra caja de Petri con el medio
previamente ya listo y comenzamos a sembrar.
3.- para sembrar se realizará un estriado que es la manera correcta de hacerlo para
la bacteria nazca de manera adecuada.
4.- Una vez hecho el estriado debemos colocarle cinta alrededor para que no se
abran, colocarle nuestros nombres y el nombre del medio que es o que sembramos.
5.- Una vez hecho esto se procede a llevar a la estufa donde se encontrarán a una
temperatura adecuada para su crecimiento y solo es cuestión de esperar de 18 a
48 horas para poder ver los resultados y ver si nuestra muestra se dio o no.
siembra
DAYANA
LUIS
JULIO: No creció
ARELY
Los resultados de esa siembra nos dieron buenos resultados quedando
Luis Ricardo 3/3
Dayana 3/3
Julio 2/3
Arely 3/3
Al ver los resultados, la doctora nos dijo que el siguiente paso era el de la resiembra
de los que nos habían crecido, así que procedimos a volver a sembrar en un nuevo
medio las bacterias que nos habían salido. Esto es para aislar a la bacteria pues así
nos aseguramos de solo sembrar solo esa bacteria y no arriesgarnos a que haya
alguna otra con ella por haberse contaminado a la hora de hacer la siembra.
1.- se toma alguna caja de Petri que si haya crecido y se repite lo del al principio.
Se esteriliza el asa, se toma una muestra de nuestra bacteria cerca del mechero y
se coloca en la caja Petri en forma de estriado.
2.- Una vez hecho eso con las 3 cajas o las que te hayan crecido, se vuelve a colocar
cinta, poner tu nombre y nuevamente se coloca en la estufa a una temperatura
adecuada para ellas.
3.- en 18 a 48 horas se tendrán que ver resultados
Resultados
MC
Resiembra
Luis: si creció, pero no hay foto
Dayana
Escherichia coli
Julio: No creció
Arely
Proteus mirabilis
E.M.B. Agar.
4.- se toma la muestra (todo cerca del mechero) y se coloca en la caja Petri
5.- Una vez hecho esto se lleva a la estufa en donde estará de 18 a 48 horas para
ver resultado
siembra
Luis
Resiembra: E- coli
Luis: No hay foto, pero si creció
Dayana
Julio
ARELY
Medio 110
FUNDAMENTO
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Siembra
Luis
Dayana
Dayana
Julio
Arely
OBSERVACION DE LAS BACTERIAS
Observación macroscópica.
El tamaño de las bacterias impide verlas a simple vista. Sin embargo, las colonias
que forman sobre medios sólidos sí son visibles, y en ellas se puede estudiar una
serie de características que nos ayudan a su identificación. A nivel morfológico,
podemos estudiar la forma de las colonias, su tamaño, aspecto del borde (liso,
rugoso, ondulado, ramificado, etc.), presencia de brillo, color, etc. Incluso sobre
medio líquido las bacterias producen modificaciones de interés para su clasificación
y que tienen que ver esencialmente con las características de su metabolismo. Así
se observa si la turbidez es uniforme, si crecen en el fondo, si lo hacen en la zona
superficial, si producen pigmentos, etc.
Todas estas características de las bacterias nos hacen darnos una idea de cual
bacteria pudo crecer en nuestro medio
110:
Luis: Staphylococcus
Dayana: Staphylococcus
Julio: Staphylococcus
Arely: Staphylococcus
EMB
Luis: Escherichia coli
Dayana: Escherichia coli
Julio: Escherichia coli
Arely: Escherichia coli
En base a las características que podemos observar a simple vista podemos darnos
una idea de que clase de bacterias estamos tratando, por ejemplo en el medio EMB
nos creció Escherichia coli podemos observar en la imagen que las colonias tienen
en demasía una coloración verde-metálico, lo cual es característico de E. coli, y en
el medio 110 podemos observar que es una coloración beige a casi incolora