Metodos No Convencionales de Identificacion y Diagnostico Microbiano

METODOS NO CONVENCIONALES
DE IDENTIFICACION Y
DIAGNOSTICO MICROBIANO
METODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO MICROBIANO
CONTENIDO
1.Introduccion
2.Metodos convencionales de Identificación y diagnostico microbiano.
2.1. Métodos convencionales de identificación microbiano.
2.1.1. Clasificación de Métodos convencionales de identificación microbiano.
2.2. Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.
2.2.1. Clasificación de Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.
2.3. Automatización de métodos convencionales de identificación y diagnostico

microbiano.
2.4. Ventajas y Desventajas.
3.Metodos no convencionales de identificación y diagnostico microbiano.
3.1. Métodos no convencionales de identificación microbiano.
3.1.1. Métodos de identificación según el tiempo empleado.
3.1.1.1. Métodos muy rápidos.
3.1.1.2. Métodos Rápidos
3.1.1.2.1. Sistemas miniaturizados.
3.1.1.2.2. Sistemas automatizados.
3.2. Métodos no convencionales de diagnóstico microbiano.
3.3. Ventajas y Desventajas.
4.Inovacion.
5.Vocabulario.
6.Webgrafia-Bibliografia.
ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

1
MARIA ANGELICA SUAREZ
1.INTRODUCCION
One of the fundamental tasks of the microbiology laboratory is the application of a precise
methodology that allows the identification of the microorganisms involved in clinical
processes associated with infections or those that are related to man. In order to identify the
etiological agent responsible for the infectious process and to know the pathogenic
implications.
2.METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO

MICROBIANA
2.1 METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION MICROBIANA
Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos convencionales,

basados en las características fenotípicas, puesto que su realización y coste los hace más
asequibles. Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en
las características observables de las bacterias como su morfología, desarrollo,
propiedades bioquímicas y metabólicas.
De manera rutinaria los laboratorios de microbiología aplican técnicas fenotípicas que

permiten lograr los objetivos expuestos. Estos métodos están consolidados en los
laboratorios de microbiología, muestra algunas limitaciones que se observan de manera
específica y más evidente para algún tipo de microorganismo.
Estos métodos se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:
 En el área clínica.
 En la industria farmacéutica, cosmética y de alimentos.
 En investigación de nuevos microorganismos.
2.1.1. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA
 Métodos basados en criterios morfológicos:

Los rasgos morfológicos (estructurales), han ayudado a los taxonomistas por
muchos años a clasificar organismos.
 Métodos basados en pruebas bioquímicas:
Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de
fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la
producción de compuestos coloreados, etc.
 Métodos basados en tipificación con fagos:

La interacción entre un virus bacteriano (fago) y su célula bacteriana sensible es
sumamente específica, ya que el proceso de adsorción se encuentra mediado por
receptores específicos tanto en el virus como en la célula bacteriana.

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 Métodos basados en pruebas serológicas:

Implican la utilización de preparaciones de inmunoglobulinas específicas
provenientes del suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad en la
identificación microbiana.
 Métodos basados en tinción diferencial:

Un examen microscópico de una lámina teñida por medio de gram o de una tinción
diferencial es útil para obtener una información rápida sobre la calidad de un
ambiente clínico.
2.2. METODOS CONVENCINALES DE DIAGNOSTICO MICROBIANO
El diagnóstico microbiológico es el conjunto de procedimientos y técnicas complementarias

empleadas para establecer la etiología del agente responsable de una enfermedad
infecciosa.
2.2.1. CLASIFICACION DE LOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIANO
 DIRECTOS:
Implica la demostración del agente, sus metabolitos o componentes antigénicos en
los fluidos orgánicos.
• Examen microscópico.
• Crecimientos en cultivos e identificación.
• Inmunofluorescencia directa (ID).
 INDIRECTOS:
Implica la demostración de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el
sistema inmunocompetente.
• ELISA indirecta
• WESTERN BLOT (WB)
2.3. AUTOMATIZACION DE METODOS CONVENCIONALES
Reducir el gasto de material Aumentan el número de muestras a analizar, sin embargo, no

disminuye el tiempo necesario para completar cada ensayo El principal factor de elección
será el número habitual de muestras a procesar.
 Espectrometría de masas (MALDI-TOF):

Más laboratorios están implementando esta tecnología de espectrometría que,
mediante el análisis proteómico de cepas bacterianas y fúngicas, permite su
identificación microbiana en pocos minutos.
2.4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS CONVENCIONALES.
Ventajas:
 Sensibilidad
 Bajo costo

3
 Facilidad de interpretación
Desventajas:
 Laboriosidad
 Grandes cantidades de medios de cultivo
 Demora en la obtención de datos
3. MÉTODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO

MICROBIANO
3.1. METODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACIO MICROBIANA
Estos métodos son destinados a la detección, recuento, caracterización y su tipificación de

microorganismos, mediante los cuales se obtienen resultados de manera sencilla, fiable y
en menor tiempo que los métodos convencionales algunos de estos son de un mayor costo
que los convencionales, aunque estos permiten muchas veces tener una mejor
estandarización y agilidad a la hora de establecer diagnósticos más eficaces y oportunos.
3.1.1. METODOS DE IDENTIFICACION SEGÚN EL TIEMPO EMPLEADO.
3.1.1.1METODOS MUY RAPIDOS: Permiten obtener resultados incluso en menos de una

hora.
 INMUNOLÓGICOS: Los métodos inmunológicos o inmunoensayos son métodos

analíticos basado en la reacción Antígeno- Anticuerpo (Ag-Ac), los métodos
inmunológicos son ampliamente utilizados en la detección de patógenos en áreas
clínicas, agrícolas y ambientales.
 Inmunoensayos Directos.
 Inmunoensayos con Reactivos Marcados o Indirectos.
 GENÉTICOS: Son métodos de detección directa de microorganismos en muestras

clínicas se da la Identifican un fragmento específico del genoma del microbio,
también se da Identificación de microorganismos tras su aislamiento por métodos
convencionales.
Se dirigen a la detección de características celulares mucho más estables contenida
en los ácidos nucleicos.
 Técnicas de hibridación.
 Técnicas de amplificación.
 RIBOTIPADO: El Ribotipado es un método que permite identificar y clasificar

bacterias en función de los genes del RNA ribosomal, los genes del rRNA se
encuentran dentro de las regiones mejor conservadas del genoma bacteriano.

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3.1.1.2. METODOS RAPIDOS: Disminuyen uno o varios días frente a los protocolos
tradicionales, permiten obtener resultados en 6-12 horas actúan amplificando los efectos
del crecimiento activo de los microorganismos. Utilización de un equipo que realiza una o
varias tareas que habitualmente realiza un profesional.
3.1.1.2.1. SISTEMAS MINIATURIZADOS:
 SISTEMA API:
Los sistemas miniaturizados API son métodos rápidos que permiten la identificación
de microorganismos a través de la realización de diferentes pruebas bioquímicas.
 BBL Enterotube II: Es un sistema de identificación listo para usar que se emplea en la
identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos gram negativos con resultado
negativo a la oxidasa.
 BBL Crystal: El sistema BBL Crystal para la identificación (ID) de bacterias gram-
positivas (GP) es un método de identificación en miniatura que utiliza substratos
convencionales, fluorogénicos y cromogénicos modificados. Se ha diseñado para la
identificación de bacterias aerobias gram-positivas aisladas frecuentemente de
muestras clínicas.
 RapID ™ System: Son una línea completa de paneles de identificación manual

rentables para un amplio espectro de microorganismos, se pueden identificar
microorganismos anaerobios, bacilos gram-positivos, corineformes, entéricos, no
fermentadores, estreptococos y levaduras todo en 4 horas.
3.1.1.2.2. SISTEMAS AUTOMATIZADOS
 FENOTIFICAS: Resultados a partir de 4 horas, Combinan reacciones enzimáticas

y bioquímicas.
• VITEK: Incluye una extensa base de datos de identificación que le permite

detectar un amplio rango de microorganismos. Todas las etapas de
identificación, desde las lecturas hasta los registros están automatizados,
optimizando el flujo de trabajo. Como el sistema opera con tarjetas con
códigos de barras podemos garantizar una trazabilidad completa y se
minimiza el riesgo de errores de transcripción.
• BIOLOG: Permite la prueba e identificación de bacterias aerobias Gram-

negativas y Gram-positivas en el mismo panel de prueba.
Se usa un protocolo simple de instalación de un minuto para cada muestra.
• PHOENIX: identificación de bacterias gram-positivas y gram-negativas,

unos de los mas completo.s
 GENOTIPICAS: Secuenciación del ARN 16 S

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 MicroSEQ: es el componente de secuenciación del sistema de

identificación bacteriano MicroSEQ® 500 16S rDNA, que proporciona un
método fácil de usar basado en secuencias de ADN para identificar la
mayoría de las bacterias.
2.2 METODOS NO CONVENCIONALES DE DIAGNOSTICO
 TÉCNICA ELISA:
ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de
forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como
enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una
enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-
anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la
adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color
observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o
un colorímetro.
Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:
 Anticuerpos marcados:
 ELISA Directo
 ELISA Indirecto
 ELISA sándwich
 Antígeno marcado
 ELISA competitivo
 BIOLUMINISCENCIA
Mide niveles de ATP lo relaciona con niveles de contaminación, la bioluminiscencia es una
tecnología basada en la detección del ATP (adenosintrifosfato), molécula energética de
todos los organismos vivos, este sistema indica el nivel de limpieza en toda la extensión de
la superficie por medida del ATP de orígenes diversos
 SEPARACIÓN INMUNOMAGNÉTICA
Estas técnicas se basan en el uso de anticuerpos unidos a la superficie de unas esferas
formadas por un material supe paramagnético (es decir, que sólo son magnéticas en
presencia de un campo magnético) recubierto de un polímero. Los anticuerpos se unen de
manera específica a un antígeno presente en la superficie de un tipo celular concreto y,
mediante un simple imán, se pueden separar las células que se han unido a los anticuerpos
de las demás, existen en el mercado dos sistemas de separación de células basados en el
uso de esferas supe paramagnéticas unidas a anticuerpos
 TÉCNICA ELFA (ENZYME LINKED FLUORESCENT ASSAY)

Unida a técnicas de inmuno-detección, inmunoconcentración y a captura específica
mediante fagos La interacción entre virus bacteriano (fago) y su célula la bacteria sensible
es sumamente específica, ya que el proceso de absorción se encuentra mediado por
receptores específicos tanto en el virus como en la célula bacteriana, se le añade una

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alícuota de un fago especifico, este puede ocasionar la lisis de las bacterias. El uso de fagos
específicos permite identificar y subclasificar bacterias dentro de una misma especie
2.3 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS NO CONVENCINALES.
Ventajas
 Rapidez
 procesar elevado número de muestras / tiempo
 facilidad de uso
 límites de detección bajos
 precisión (sensibilidad y especificidad)
Desventajas
 inversión inicial (equipamientos)

 a veces, necesidad de confirmación.
 a veces, difícil traducción cuantitativa de resultados.
4. INNOVACION
Investigadores de EE.UU. desarrollan un nuevo método para la detección rápida de

patógenos en los alimentos.
La detección rápida de patógenos en los alimentos Se trata de un test formado por un

sensor con un microscopio artificial capaz de detectar bacterias nocivas en ocho minutos
Un equipo de investigadores del Departamento de Ciencia y Tecnología de los Alimentos

de la Universidad de Cornell, en Nueva York, ha desarrollado un nuevo método que permite
detectar la presencia de patógenos, como la EscherichiaColi, en los alimentos en tan sólo
unos minutos.
Se trata de un test, denominado "Biosensor para la detención rápida del EscherichiaColi

O157:H7", que está formado por un sensor con un microscopio artificial capaz de detectar
éste y otros patógenos en los alimentos en sólo ocho minutos. Richard A. Durst, director
del estudio y profesor de química de la CornellUniversity, asegura que su funcionamiento
es similar al del test de embarazo.
Hasta ahora, la detección de bacterias nocivas para la salud en los productos era posible
tras un largo proceso que solía durar unas horas. Sin embargo, ahora es posible detectarlas
en sólo unos minutos. La base del nuevo test para detectar la presencia de E.coli es el
liposoma, que en medicina se suele usar para transportar fármacos terapéuticos en las
células enfermas. Los liposomas contienen una sustancia fluorescente y visible que, cuando
se detecta el patógeno, ataca los anticuerpos.
Cuando el patógeno es detectado, el test cambia de color. El cambio es casi al instante, por
lo que la detección requiere sólo de algunos minutos. Los investigadores están trabajando

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también en una nueva tecnología para detectar el CryptosporidiumParvum, un parásito

intestinal que suele encontrarse en el agua de abastecimiento y que suele causar diarrea.
5. VOCABULARIO
Bacteria bacterium
Patogeno pathogen
Anticuerpos Antibodies
convencional conventional
diagnostico diagnosis
ensayo test
Identificación identification
Métodos methods
microorganismos microorganisms
reacción reaction
técnica technique
6. WEBGRAFIA-BIBLIOGRAFIA
 www.academia.edu/5397941/microbiologia-de-alimentos.pdf
 http://www.elika.eus/datos/otros_docs_nan/Archivo242/detecci%C3%B3n%20pat%C
3%B3genos2.pdf
 http://media.axon.es/pdf/65248.pdf
 http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/diagnostico%20microbiologico.html
 http://confia.com.co/index.php/tecnologia/microbiologia
 http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-30032013000100009
 https://books.google.com.co/books?id=xzLQnBU6DOkC&pg=PA372&lpg=PA372&dq
=metodos+ribotipados&source=bl&ots=Kfk2DoTIec&sig=ygiVSgG4jk_NBAA51gyQo
O5xx6A&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjom4z0oJbbAhWNy1MKHbB0AMQQ6AEIZTAJ
#v=onepage&q=metodos%20ribotipados&f=false

8
 https://es.scribd.com/document/337668114/Clase-9-Metodos-de-Analisis-
Microbiologico-en-Alimentos.
 https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4346480
 http://www.microbiosymas.com/ewExternalFiles/MDM%202018Info%20e-mail.pdf
 http://www.plancalidadproductospesqueros.es/uploads/ponencias3/controlmicrobiolo
gico.pdf

9

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METODOS NO CONVENCIONALES

2.Metodos convencionales de Identificación y diagnostico microbiano.

2.1. Métodos convencionales de identificación microbiano.

2.1.1. Clasificación de Métodos convencionales de identificación microbiano.

2.2. Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.

2.2.1. Clasificación de Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.

2.3. Automatización de métodos convencionales de identificación y diagnostico

2.4. Ventajas y Desventajas.

3.Metodos no convencionales de identificación y diagnostico microbiano.

3.1. Métodos no convencionales de identificación microbiano.

3.1.1. Métodos de identificación según el tiempo empleado.

3.1.1.1. Métodos muy rápidos.

3.1.1.2. Métodos Rápidos

3.1.1.2.1. Sistemas miniaturizados.

3.1.1.2.2. Sistemas automatizados.

3.2. Métodos no convencionales de diagnóstico microbiano.

3.3. Ventajas y Desventajas.

ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

2.METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO

2.1 METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION MICROBIANA

Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos convencionales,

De manera rutinaria los laboratorios de microbiología aplican técnicas fenotípicas que

Estos métodos se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:

2.1.1. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA

 Métodos basados en criterios morfológicos:

 Métodos basados en tipificación con fagos:

ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

 Métodos basados en pruebas serológicas:

 Métodos basados en tinción diferencial:

2.2. METODOS CONVENCINALES DE DIAGNOSTICO MICROBIANO

El diagnóstico microbiológico es el conjunto de procedimientos y técnicas complementarias

2.2.1. CLASIFICACION DE LOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIANO

• WESTERN BLOT (WB)

2.3. AUTOMATIZACION DE METODOS CONVENCIONALES

Reducir el gasto de material Aumentan el número de muestras a analizar, sin embargo, no

 Espectrometría de masas (MALDI-TOF):

2.4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS CONVENCIONALES.

ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

3. MÉTODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO

3.1. METODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACIO MICROBIANA

Estos métodos son destinados a la detección, recuento, caracterización y su tipificación de

3.1.1. METODOS DE IDENTIFICACION SEGÚN EL TIEMPO EMPLEADO.

3.1.1.1METODOS MUY RAPIDOS: Permiten obtener resultados incluso en menos de una

 INMUNOLÓGICOS: Los métodos inmunológicos o inmunoensayos son métodos

 GENÉTICOS: Son métodos de detección directa de microorganismos en muestras

 RIBOTIPADO: El Ribotipado es un método que permite identificar y clasificar

ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

3.1.1.2.1. SISTEMAS MINIATURIZADOS:

 RapID ™ System: Son una línea completa de paneles de identificación manual

3.1.1.2.2. SISTEMAS AUTOMATIZADOS

 FENOTIFICAS: Resultados a partir de 4 horas, Combinan reacciones enzimáticas

• VITEK: Incluye una extensa base de datos de identificación que le permite

• BIOLOG: Permite la prueba e identificación de bacterias aerobias Gram-

• PHOENIX: identificación de bacterias gram-positivas y gram-negativas,

 GENOTIPICAS: Secuenciación del ARN 16 S

 MicroSEQ: es el componente de secuenciación del sistema de

2.2 METODOS NO CONVENCIONALES DE DIAGNOSTICO

 TÉCNICA ELFA (ENZYME LINKED FLUORESCENT ASSAY)

ESTUDIANTES DE INGENIERIA DE ALIMENTOS: ELVIS ROSA VERGARA RAMOS

2.3 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS NO CONVENCINALES.

 inversión inicial (equipamientos)

Investigadores de EE.UU. desarrollan un nuevo método para la detección rápida de

La detección rápida de patógenos en los alimentos Se trata de un test formado por un