CURVA TIPO DE AZÚCARES REDUCTORES
Introducción​: Para poder medir la actividad
de una enzima se necesita tener un tejido o
material que la contenga. Se rompen las
células del tejido en un medio líquido, entre 0
y 4°C con el objetivo de no desnaturalizar las
proteínas. A este proceso se le llama
homogeneización. La actividad de las enzimas
se puede medir por varios factores como la
concentración del sustrato, la concentración
de la enzima, el efecto del pH y el efecto de la
temperatura.
Objetivos
● Se analizó algunos factores que
modifican la velocidad de la reacción
catalizada por la invertasa y
caracterizar de esta manera a dicha
enzima.
Resultados​:
Absorbancia Azúcar reductor
(umoles)/2.0mL
0.000* 0 protona el oxígeno del grupo funcional cetona,
0.083 1 protonado, donde hay dos formas canónicas,
0.230 2
0.425 4 y el carbono 3, la desprotonación sucederá en
0.798 8 impedimento estérico. Entonces se forma un
1.023 10
Tabla 1.- Resultados para la curva tipo de
azúcares reductores.
*Tubo testigo.
Discusiones​: Este experimento se realizó con
el objetivo de obtener una curva de calibración
para las pruebas siguientes de la actividad de
la enzima invertasa en la sacarosa de acuerdo
a los factores que pueden afectar a la misma.
A partir de una curva de calibración es posible
conocer el valor de concentración de una
muestra, midiendo su valor de absorbancia e
interpolando en la gráfica.
El valor de absorbancia aumenta de acuerdo a
la concentración de los productos que se
obtienen en la reacción, cuando la sacarosa
se hidroliza, sus productos son glucosa y
fructosa, con el 3,5-DNS (3,5-dinitro salicilato)
la glucosa se oxida y el 3,5-DNS se reduce,
pero el anterior reactivo presenta una
coloración de color rojo en presencia de
azúcares reductores.
El 3,5-DNS no reacciona con la sacarosa
debido a que es un disacárido no reductor,
debido a que no se oxida fácilmente debido a
que entre sus carbonos anoméricos existe un
enlace glicosídico.
Aunque la glucosa sea el azúcar reductor que
reaccione con el 3,5-DNS, la curva recibe el
nombre de “azúcares reductores” debido a
que el 3,5-DNS reacciona también con la
fructosa, pero no con esa estructura
propiamente. La fructosa presentan
tautomería ceto enol. Los tautómeros son
isómeros que difieren en la posición de un
hidrógeno, puede ser catalizada en un medio
ácido o básico, en nuestro caso fue catalizada
en un medio ácido gracias al 3,5-DNS. Como
la fructosa tiene un grupo ceto el medio ácido
el intermediario de reacción es un carbonilo
en la cual se desprotona el carbono alfa. La
sacarosa tiene dos carbono alfa, el carbono 1
el carbono 1 debido a que existe menor
enlace doble entre el carbono 1 y el carbonilo,
que ahora tiene un grupo hidroxilo, donde la
base conjugada del ácido desprotona al grupo
hidroxilo que se encuentra en el carbono 1, el
oxígeno toma su par de electrones y forma un
doble enlace entre él mismo y el carbono 1,
que se convierte en el carbono carbonílico
debido a que el aldehído que se está
formando es el grupo funcional más alto en
jerarquía. El par de electrones del doble
enlace entre ambos carbonos se introduce en
el carbono 2 (antes el carbonilo de cetona) el
cual desprotona al ácido debido a que los
carbaniones son las bases conjugadas más
reactivas al tener un ácido muy débil. Así se
obtiene la glucosa. Como no se sabe cuál
molécula de los productos está reaccionando
 CURVA TIPO DE AZÚCARES REDUCTORES

con el 3,5-DNS para dar la coloración, se le

llama curva tipo de azúcares reductores.

Conclusiones

● El 3,5-DNS reacciona con la glucosa y

sacarosa debido a que los tubos
presentaron coloración roja después
de incubar.
● El valor de absorbancia aumenta
conforme hay más concentración de
glucosa y fructosa.