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Ciclo de citrato (cítrico) o ciclo de Krebs

Krebs denomino ciclo del acido cítrico, y hoy se conoce también como ciclo de Krebs, a
la ruta metabólica a través de la cual el acido acético unido a la coenzima-A va a completar
su oxidación en la matriz mitocondrial.

• Este ciclo, no solo va a ser la última etapa de la degradación de los azucares, otros
compuestos orgánicos (los ácidos grasos y determinados aminoácidos) van a ser también
degradados a acetil-CoA (ACA) e integrados en el ciclo de Krebs.

• El ciclo de Krebs es, por lo tanto, la via fundamental para la degradación de la mayoría
de los compuestos orgánicos y para la obtención coenzimas reductoras. Es la vía más
importante para el catabolismo de las sustancias orgánicas.

Formación de Acetil-CoA

El Acetil-CoA es el intermediario comun formado por la mayoria de los combustibles


metabolicos. A partir de este compuesto se producira el ingreso al ciclo de Krebs del grupo
acetilo, que se oxidara para dar dos moleculas de CO2. La coenzima A (ver anexo I)
funciona como un transportador del grupo acetilo, mediante la formacion de un enlace
tioester de alta energia. La formacion de una union tioester en un compuesto metabolico
intermediario, conserva una porcion de la energia libre de su oxidacion.

Desde la glucolisis la sintesis del Acetil-CoA se produce mediante la descarboxilacion


oxidativa del piruvato. Primero el Piruvato debe atravesar la membrana mitocondrial
externa (la cual es permeable) y la interna, a traves de un transportador simporte con H+,
piruvato translocasa. En la matriz mitocondrial se produce la descaboxilacion del piruvato,
con formacion de una molecula de NADH, por accion del complejo enzimatico piruvato
deshidrogenasa. Este complejo multienzimatico se halla constituido por 3 enzimas que
catalizan 5 reacciones, y cuyas coenzimas y grupos prosteticos son: Tiamina pirofosfato
(TPP), Flavina Adenina Dinucleotido (FAD), Nicotinamida Adenina Dinucleotido (NAD+)
y lipoamida.

La piruvato deshidrogenada regula el ingreso de las unidades de acetilo derivadas de los


carbohidratos, por lo que su regulacion es muy importante. La regulacion es bastante
simple, se halla regulada negativamente por sus productos, NADH y Acetil-CoA que
compiten con NAD+ y CoA por los sitios de union.

Tambien la piruvato deshidrogenasa se halla regulada mediante modificación covalente


(fosforilacion/desfosforilacion) que es inducida por un segundo mensajero, Ca2+.
Producción de Acetil-CoA a partir
de Piruvato.

Etapas del ciclo de Krebs

El ciclo consiste en una serie de 8 reacciones, donde se oxidan el grupo acetilo, de Acetil-
CoA a dos moléculas de CO2. De las 8 reacciones, 4 son oxidaciones, en las cuales la
energía es eficientemente conservada, en forma de coenzimas reducidas, NADH Y FADH2,
para usarla a posteriori en la producción de ATP. Durante el ciclo hay 8 enzimas
involucradas y al final por cada molécula de Acetil-CoA se generan 3 moléculas de NADH,
una de FADH2 y una de GTP.

Ciclo del Acido Cítrico (también


conocido como ciclo de Krebs)
Reacción 1: Citrato Sintasa (de Oxalacetato o Citrato)

La primera reacción del ciclo es


la condensación del Acetil-
CoA con Oxalacetato (4
Carbonos) por acción del
citrato sintasa para producir
Citrato (6 Carbonos). En esta
etapa el grupo metilo del
Acetil-CoA se une al carbonilo del Oxalacetado (C2), formando el intermediario Citril-
CoA, que inmediatamente se hidroliza para dar Citrato y CoA libre (que pueda formar más
Acetil-CoA). La hidrolisis del enlace tioester de alta energía, es fuertemente exergonica,
por lo tanto esta reacción es irreversible. Que esta reacción posea un ΔG muy negativo (o
sea, que sea altamente favorable e irreversible) es de suma importancia para el
funcionamiento del ciclo, como veremos más adelante, ya que mantiene bajos los niveles
de Oxalacetato.

Reacción 2: Aconitasa (de Citrato a Isocitrato)


Los siguientes dos
pasos del ciclo
implican reestructurar
el citrato a un isómero
que se oxide con
mayor facilidad. La
aconitasa convierte el
alcohol terciario en
uno secundario (oxidable), para ello, primero se deshidrata generando un doble enlace cis y
luego de hidrata con un grupo alcohol en el carbono 2.

Reacción 3: Isocitrato deshidrogenasa (de Isocitrato a Oxoglutarato)


En esta
primera
oxidacion
del isocitrato
(recordar que
posee 6
Carbonos) se
genera la
primera molécula CO2 y α-cetoglutarato (que posee 5 Carbonos) por acción de la
isocitrato deshidrogenasa. Esta enzima tiene como cofactor a NAD+ que actúa como
aceptor de los electrones de alta energía generados en esta etapa para dar NADH. Esta es la
Segunda reacción irreversible del ciclo y la principal reguladora del mismo.

Reacción 4: α-Cetoglutarato deshidrogenasa (oxoglutarato a Succinil-CoA)


A través del complejo
enzimatico α-cetoglutarato
deshidrogenasa (formada por 3
enzimas análogas a las del
complejo enzimático piruvato
deshidrogenasa, y que requieren
los mismos cofactores TTP,
NAD+, FAD, acido lipoico y
Co-A), se produce la segunda
descarboxilacion del α
cetoglutarato para dar succinil-
CoA (el succinato posee 4 Carbonos) con la formación de una nueva molécula de NADH a
partir de NAD+. Al igual que en el Acetil-CoA, en el succinil-CoA el enlace tioester
formado es de alta energía.

Reacción 5: Formación de GTP a partir de Succinil-CoA

En esta etapa la energía del enlace


tioester del Succinil-CoA se
aprovecha para llevar a cabo la
fosforilacion a nivel de sustrato de
GDP y generar GTP, Succinato y
regenerar la Coenzima A. La enzima
que actúa en esta etapa es la Succinil-
CoA Sintetasa. De aqui en mas no se
produciran mas descarboxilacion,
solo resta oxidar el succinato hasta oxalacetato y reiniciar el ciclo.
Obtener GTP es equivalente a obtener ATP:
Reacción 6: oxidación de succinato a fumarato
La Succinato deshidrogenasa es
la única enzima que no se
encuentra en la matriz
mitocondrial, sino que es una
enzima integral de la membrana
interna de la mitocondria. Esta
forma parte de la cadena de
transporte de electrones. Esta
oxidación implica la formación de
un doble enlace, proceso que genera electrones de alta energía, pero de energía menor que
los que se requieren para reducir al NAD+, por ello esta enzima emplea como cofactor al
FAD para obtener FADH2. Ya que la enzima se halla asociada a la membrana interna
mitocondrial, los electrones obtenidos pasan directamente a la cadena respiratoria, proceso
metabólico que veremos más adelante, para la obtención de ATP.

Como la mayoría de la enzimas, la succinato deshidrogenasa en una enzima


estereoespecifica que solo cataliza la formación del isómero trans (fumarato) y no el cis
(maleato).

Reacción 7: Hidratacio del fumarato


La Fumarasa cataliza
la hidratación del doble
enlace del fumarato
para obtener malato. La
Fumarasa, igual que la
succinato
deshidrogenasa
tambien estereoespecifica, solo cataliza la hidrolisis del fumarato (no maleato) para formar
el isomero L-Malato.

Reacción 8: Oxidación de malato a oxalacetato


Es la última reacción del ciclo
de Krebs e implica la última
oxidación para obtener el
oxalacetato a partir de Malato
con la reducción de una molécula
mas de NAD+ por acción de la
enzima Malato deshidrogenasa.
Aunque la reaccion es poco
favorable, solo exergonica a muy bajas concentraciones de Oxalacetato, recordar que la
siguiente reacción (reaccion 1 del ciclo) es una reaccion irreversible, y muy exergonica, por
lo que el poco oxalacetato que se produce es inmediatamente captado por la citrato sintasa
para producir la condensacion con el Acetil-CoA. De esta forma se mantiene bajas las
concentraciones de oxalacetato (alrededor de 10-6M), la reaccion de deshidrogenacion del
malato se hace termodinamicamente posible y el ciclo avanza.
A lo largo de una vuelta del ciclo de Krebs vemos como el grupo acetilo de dos carbonos
ingresa el ciclo, combinandose con oxalacetato, y como resultado se liberan a lo largo del
ciclo 2 carbonos en forma de CO2. Si embargo, tener en cuenta que estos 2 carbonos que se
liberan no corresponden al acetilo, si no que son los pertenecientes al oxalacetato. Asi los
dos carbonos del acetilo formaran parte de la nueva molecula del oxalacetato generada, que
seran oxidados y liberados en las subsiguientes vueltas del ciclo.
Como balance general del ciclo, tenemos que por cada molecula de Acetil-CoA que ingresa
al ciclo se generan una molécula de GTP, y tres de NADH y una FADH2 que luego en la
cadena respiratoria cederan sus electrones para la formación de más moleculas de ATP.

Regulación del ciclo de Krebs

El ciclo del acido cítrico presenta 3 puntos de regulación, en las enzimas que catalizan las
reacciones irreversibles:
• Citrato sintasa: se encuentra inhibida por su producto, citrato, por otro metabolito
intermediario del ciclo, succinyl-CoA y por los productos del ciclo NADH y ATP.
• Isocitrato deshidrogenasa: esta enzima se encuentra regulada por el estado energético de
la celula, asi cuando la célula presenta un estado de alta energía, o sea que las relaciones
ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas la actividad de la enzima disminuye, mientras que
cuando el estado energético de la célula es bajo, o sea que estas relaciones son bajas, la
enzima se encuentra activada.
• α-cetoglutarato deshidrogenasa: Esta enzima se halla inhibida por su producto, succinil
CoA. También se regula por el estado energético de la célula, por la relación ATP/ADP y
NADH/NAD+, como la Isocitrato deshidrogenasa.
Regulación del ciclo del acido
cítrico.

Importancia
Es un ciclo metabólico de importancia fundamental en todas las células que utilizan
oxigeno durante el proceso de respiración celular. En estos organismos aeróbicos, el ciclo
de Krebs es el anillo de conjunción de las rutas metabólicas responsables de la degradación
y desasimilación de los carbohidratos, las grasas y las proteínas en anhídrido carbónico y
agua, con la formación de energía química.
El ciclo de Krebs es una ruta metabólica anfibolica, ya que participa tanto en procesos
catabólicos como anabólicos. Este ciclo proporciona muchos precursores para la
producción de algunos aminoácidos, como por ejemplo el cetoglutarato y el oxalacetato así
como otras moléculas fundamentales para las células.

Carácter anfibolico del ciclo de Krebs


Como ya se menciono, el ciclo del acido cítrico, a demás de ser una ruta catabolica, aporta
muchos de los intermediarios de diversas rutas biosinteticas, es decir que también es una
via anabólica.
Las reacciones catapleroticas son aquellas que emplean intermediarios del ciclo de Krebs
como precursores biosinteticos. Por ejemplo el α-cetoglutarato y el y el oxalacetato son
precursores de los aminoacidos aspartato y glutamato por simple transaminacion. A partir
de estos dos aminoacidos se generan otros aminoacidos asi como nucleótidos puricos y
pirimidicos. El oxalacetato puede convertirse en glucosa en la gluconeogenesis y el
succinil-CoA es un intermediario en la sintesis del anillo porfirinico del grupo hemo. Asi
como los intermediarios del ciclo son consumidos como precursores biosintenticos de
muchas rutas metabolicas, se requiere su biosintesis para evitar el vaciamiento del ciclo y
mantener el equilibrio. Las reacciones que producen los intermediarios del ciclo de Krebs
se denominan reacciones anapleroticas. A continuación de muestran las reacciones
anapleroticas mas comunes.