Effect of glucose supply strategy on acetate accumulation, growth, and recombinant protein

production by Escherichia coli BL21 (λDE3) and Escherichia coli JM109.

E. coli JM109 [el4- (mcrA), recA1, endAl, gyrA96,thil, hsdR17 (rk-mk-t), supE44, relA1, A (lac-proAB)
[F 'traD36, proAB, lacIqZ A M15] / 24 se transformó con el siguiente plásmido. El gen de la proteasa
del VIH-1 que contiene una secuencia corta de la región flanqueante insertada en los sitios de
restricción Kpnl y Xbal del vector padre PCG807fX (New England Biolabs, MA) que contiene el
esqueleto pBR322 y el promotor lac ". La proteína se expresó después de inducir el cultivo
bacteriano con IPTG 1 mM durante 2 h.

Medios de crecimiento

Se utilizó medio líquido de Luria Broth (LB) que contenía 10 g / L de triptona, 5 g / L de extracto de
levadura, 5 g / L de NaCl y 100 mg / L de ampicilina en forma sólida y líquida. Se usaron placas de
agar LB-amp para propagar colonias de células competentes transformadas. Se usó LB-amp líquido
para la propagación de cultivos iniciadores durante la noche. Se utilizó medio LB modificado para
experimentos de fermentación de alta densidad. Un caldo líquido que contenía 10 g / L de triptona,
5 g / L de extracto de levadura (15 g / L para JM109), 5 g / L de NaCl y 5 g / L de K2HP04 se esterilizó
por calor y se enfrió. Luego 10 mM MgSO4, 1 ml / L de solución de metal traza, 100 pg / ml de
ampicilina y glucosa a una concentración fija para cada experimento (40 g / L para el lote).
experimentos y 2.0 g / L para los experimentos de lotes alimentados) fueron agregados.

Preparación de Cultivos de Arranque.

Células JM109: se inocularon células competentes tratadas con CaC12 congeladas y transformadas
con el plásmido que lleva el gen para la proteasa HIVA10 * en medio líquido LB-amp y se cultivaron
durante la noche a 37 ° C .