DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO EN GRANADILLA (PASSIFLORA

LIGULARIS) EN DOS ESTADOS DE MADURACIÓN (VERDE Y MADURO)

UTILIZANDO EL MÉTODO DICLOROFENOLINDOFENOL (DFIF).

INODUCCIÓN.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Para el análisis de ácido ascórbico o vitamina C se realizó el siguiente
procedimiento:

Preparación de Diclorofenolindofenol (DFIF)

Se tomó 12 mg de 2,6 DFIF, la cantidad de DFIF fue pesado en una balanza

analítica de sensibilidad 0.1 mg en un papel de aluminio con la finalidad de
que el reactivo no reaccione, luego en un vaso de precipitación de 1 L se
colocó los 12 mg de DFIF, a continuación se agregó 380 ml de agua destilada,
se agito constantemente el vaso con la finalidad de lograr diluir el reactivo
por completo, el vaso de precipitación fue colocado en una cocina eléctrica a
temperatura de 250 °C, con la finalidad de hacer hervir la solución durante
20 min, trascurrido el tiempo establecido se agregó agua destilada hasta
alcanzar el volumen de 1 L.

Preparación de ácido oxálico 0.4%.

Para la preparación de la solución con ácido oxálico, primero se determinó la

cantidad de ácido oxálico 0.4% que fue 2 g, esta cantidad de ácido fue colocado
en una fiola de 500 ml, seguidamente se agregó agua destilada hasta alcanzar
el volumen de la fiola anteriormente mencionado, y se agito constantemente
para diluir todo el reactivo.
 Preparación de la solución estándar.

Para la preparación de la solución estándar se utilizó 0.1 g ácido ascórbico, el

ácido se colocó en una fiola de 100 ml, seguidamente se enrazo la fiola a 100
ml con ácido oxálico diluido, y se agito de 2-3 min hasta diluir por completo
el ácido.

Terminada la preparación de reactivos, se procedió a realizar la preparación de los

estándares en fiolas de 25 ml en diferentes concentraciones.

Solución estándar Ácido oxálico 0.4%

0.25 ml 25 ml
0.5 ml 25 ml
0.75 ml 25 ml X3
1 ml 25 ml
1.25 ml 25 ml

Para realizar la lectura, primero se realizó la preparación de los analitos en tubos de

ensayo (L1, L2, L3, L4) en diferentes concentraciones.

L1 Agua destilada.

L2 1 ml de ácido oxálico + 9 ml de DFIF.

L3 1 ml de estándar + 9 ml de agua
destilada.
 L4 1 ml de estándar + 9 ml de DFIF.

Una vez realizado los factores de dilución se midió el espectro de absorción de cada
analito a 480 nm, 520 nm y 540 nm, antes de la lectura se realizó el blanco con agua
destilada, seguidamente se midió la absorbancia en el intervalo de longitudes de
ondas fijados; se repite la operación con las diferentes muestras y se guarda los
datos obtenidos.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA (PULPA DE GRANADILLA).

Para el análisis de ácido ascórbico se utilizo como materia prima la granadilla

(passiflora ligularis) en dos estados de maduración (verde y maduro), 15 granadillas
maduras y 15 Verdes, los frutos maduros fueron obtenidos en el mercado central de
Chota, las granadillas verdes se obtuvo de la comunidad de Santa Rosa. Antes del
pulpeado los frutos fueron lavados con agua para eliminar la suciedad,
seguidamente se eliminó la cascara y se procedió al pulpeado, la pulpa obtenida se
colocó en envases de plástico de un litro y la muestra se sometió a congelación, para
conservar su características físico-químicas y evitar su deterioro.

Para realizar el análisis de ácido ascórbico las muestras fueron descongeladas

mediante la inmersión en agua con la finalidad de acelerar la descongelación.

Las cantidad de muestra y acido utilizado para realizar la elaboración del analito o
solución fueron las siguientes.

MUESTRA ÁCIDO
ml OXÁLICO
Granadilla verde. 1 ml 9 ml
Granadilla madura. 1 ml 9 ml
Estas cantidades se mezclaron y se hicieron filtrar en papel Watman a un matraz de
herlenmeyer de 50 ml, con la finalidad con la finalidad de obtener una solución más
pura y homogénea.

Para realizar la lectura, primero se realizó la preparación de los analitos en tubos

de ensayo con una repetición del L4 (L1, L2, L3, L41, L42) en diferentes
concentraciones, los analitos se elaboraron para los dos estados de maduración con
las siguientes cantidades:

GRANADILLA MADURA Y VERDE.

L1 Agua destilada.

L2 1 ml de ácido oxálico + 9 ml de DFIF.

L3 1 ml de muestra + 9 ml de agua
destilada.

L41 1 ml de muestra + 9 ml de DFIF.

L42 1 ml de muestra + 9 ml de DFIF.

Una vez realizado los factores de dilución se midió el espectro de absorción de cada
analito a 480 nm, 520 nm y 540 nm, antes de la lectura se realizó el blanco con agua
destilada, seguidamente se midió la absorbancia en el intervalo de longitudes de
ondas fijados; se repite la operación con las diferentes muestras y se guarda los
datos obtenidos, finalmente se realizó el análisis de datos, para ellos se debe
interpretar gráficamente el espectro de absorción (absorbancia frente a longitud de
onda).